Ce protocole est un modèle robuste et reproductible de l’endotoxémie dans lequel les paramètres physiologiques et moléculaires peuvent être évalués à plusieurs reprises. Cette approche peut aider à répondre aux questions de la recherche sur la septicémie. Bien que notre modèle ne remplace pas les expériences sur les animaux, il affine les modèles de septicémie par sédation continue et réduit le nombre d’animaux grâce à des échantillonnages répétés.
Les débutants peuvent avoir du mal à insérer des cathéters artériels et veineux, mais seule une formation limitée est nécessaire pour maîtriser ces techniques. La visualisation de l’ensemble de la configuration expérimentale permet aux chercheurs de mettre en place, ou d’adapter, leurs modèles pour imiter de plus près une situation en soins intensifs. Commencez par transférer l’animal anesthésié sur un tapis chauffant.
Maintenir la température corporelle entre 36,5 et 37 degrés Celsius. Assurez-vous que l’animal respire spontanément en fournissant de l’oxygène avec un cône de nez. Confirmer le niveau d’anesthésie par l’absence du réflexe de pincement de l’orteil avant l’installation de la trachéotomie et des cathéters artériels et veineux.
Utilisez une pommade pour protéger les yeux. Préparez des instruments chirurgicaux stériles et des cathéters ainsi qu’une surveillance de la pression et de la saturation en oxygène pour une oxygénation suffisante. Appliquez un garrot sur la queue proximale du rat pour faciliter l’accès veineux et désinfectez la queue trois fois avec de l’alcool.
Introduisez un cathéter intraveineux de calibre 26 dans l’une des deux veines latérales de la queue en évitant l’injection d’air. Déliez le garrot après avoir placé le cathéter intraveineux et fixez le cathéter intraveineux en place avec du ruban adhésif. Connectez les pompes à seringues avec des robinets d’arrêt à trois voies à l’accès intraveineux pour une application continue de liquide et de médicament.
Commencez la trachéostomie en rasant la région antérieure du cou de l’animal, puis désinfectez la peau rasée trois fois avec une solution d’iode de povidone. Effectuez une incision longitudinale de deux centimètres à l’aide d’une lame de scalpel numéro 10. Rétractez la peau avec 2-0 sutures de soie.
Ensuite, préparez carrément le larynx et la trachée à ouvrir avec des ciseaux chirurgicaux. Insérez une canule trachéale stérile dans la trachée, en veillant à ne pas pénétrer trop profondément afin d’éviter une ventilation unilatérale. Fixez la canule en place à l’aide d’une suture en soie 2O, puis connectez la canule à un ventilateur pour une ventilation à pression ou à volume contrôlé.
Définissez les protocoles de remplacement des fluides, les protocoles d’application des vasoconstricteurs et les critères d’avortement avant de mettre en place l’expérience. Désinfectez la queue du rat trois fois avec une solution d’iode de povidone, puis coupez le cercle cutané d’un centimètre longitudinalement du côté ventral à l’aide d’un scalpel, en prenant soin de ne pas couper trop profondément pour éviter une blessure de l’artère caudale. Utilisez un microscope chirurgical pour exposer l’artère avec soin.
Coupez le fascia entourant l’artère avec des micro-ciseaux chirurgicaux. Ensuite, ligaturez la partie distale de l’artère en effectuant une suture de soie proximale 6-0, mais ne serrez pas la soie. Introduisez un cathéter de calibre 26 dans l’artère entre la suture de soie distale et proximale, puis resserrez la suture de soie proximale pour fixer le cathéter en place.
Connectez le cathéter à un transducteur de pression pour fournir une mesure continue de la pression artérielle. De plus, placez un robinet d’arrêt à trois voies entre le cathéter relié au transducteur de pression et le cathéter de calibre 26 pour le prélèvement sanguin artériel. Une fois que l’animal a atteint un état d’équilibre, induit une septicémie en injectant du LPS et en prélevant des échantillons de sang.
Remplacer la perte de liquide des échantillons de sang par la solution de Ringer dans un rapport de un à quatre, en évitant l’injection d’air en tout temps afin de prévenir l’embolie aérienne. La pression artérielle moyenne reste stable chez les animaux avec et sans stimulation LPS. Les animaux traités au LPS développent des caractéristiques de septicémie, telles qu’un excès de base négatif.
Les animaux traités au LPS ont également développé une forte réaction inflammatoire, qui a été mesurée par des cytokines plasmatiques, telles que la protéine chimioattractante-1, la protéine chimioattractive monocytaire-1 et l’interleukine-6. Lorsque vous tentez ce protocole, n’oubliez pas de prédéfinir les régimes de fluides et de vasopresseurs ainsi que de définir des critères de terminaison afin d’obtenir des données de recherche solides et reproductibles. Ce protocole peut être adapté à d’autres modèles de septicémie.
Ainsi, une question de recherche est répondue avec l’approche la plus appropriée et conformément aux principes de réduction, d’affinement, de remplacement du bien-être animal.
