L’objectif global de cette procédure est de créer un modèle murin reproductible de la plaie de brûlure pleine épaisseur reconstruite avec une greffe allergique de peau. La peau est divisée en deux composants l’épiderme et le derme. Sous le derme se trouve la graisse sous-cutanée, qui recouvre les os, les tendons ou les fascias.
La classification de l’épaisseur des brûlures est souvent utilisée pour définir l’étendue de la profondeur des brûlures. Les brûlures superficielles n’impliquent que l’épiderme, les brûlures partielles superficielles d’épaisseur impliquent l’épiderme et seulement le pilori ou le derme supérieur. Les brûlures profondes d’épaisseur partielle dermique impliquent l’épiderme et le derme, le derme réticulaire contenant des vaisseaux sanguins, des follicules pileux, de l’huile et des glandes sudoripares.
Les brûlures d’épaisseur complète sont caractérisées par la participation évidente de toute l’épaisseur de la peau et peut-être du tissu sous-cutané. Ce type de plaie ne peut guérir que par contraction ou par greffe de peau. L’objectif global de cette procédure était de créer une plaie de brûlure pleine épaisseur et reconstruite avec une greffe de peau pleine épaisseur.
Ceci a été réalisé en mettant un bloc circulaire de laiton préchauffé à 80 degrés Celsius et appliqué sur la peau de bouche pour la durée de 20 secondes. Le tissu nécrotique a été chirurgicalement excisé 24 heures après la blessure de brûlure. Des greffes de peau pleine épaisseur récoltées à partir de la queue d’une souris donneuse ont été déposées sur les brûlures excisées.
Les greffes seront ensuite sécurisées par un adhésif chirurgical. Les animaux donneurs et receveurs proviennent de la même souche consanguie de souris. Les souris biopsies sont utilisées au cours de l’étude.
Cependant, aussi souche de souris peuvent également être utilisés. Cela inclut les souris glaores immunocompétentes, qui sont particulièrement utiles dans les études de cicatrisation des plaies. Comme épilation et inflammation associée un clochard a fait et la repousse des cheveux n’interfère pas avec l’analyse d’image numérique, lorsque les mesures de la zone et d’autres types d’évaluation microscopique des plaies.
Cela est particulièrement vrai dans les modèles d’infection, où notre suspension du bio-organisme et des bactéries est appliquée à ce votre visage de la plaie et le signal bio-organisme est mesurée pour indiquer le taux de croissance bactérienne. Le dispositif de brûlage thermique se compose d’un bloc circulaire en laiton sur mesure mesurant 10 millimètres de diamètre préchauffé à 80 degrés Celsius. La température du bloc de laiton est vérifiée à l’aide d’une caméra thermique infrarouge.
Pour créer une plaie de brûlure pleine épaisseur, le bloc de laiton est appliqué pendant 20 secondes en utilisant une pression constante de 0,15 Newtons qui est surveillé par manomètre numérique. L’analgésie multimodale est la meilleure pratique pour la gestion de la douleur dans les procédures invasives de recherche sur les animaux. Le régime d’administration idéal de l’analgésie comprend une administration analgésique préventive ou pré-procédurale.
Le paracétamol à trois milligrammes par repas a été ajouté à l’eau potable et fourni 12 heures avant et pendant 72 heures après l’intervention. Buprénorphine à 0,05 microgramme par gramme a été administré sous-cutanée 30 minutes avant la procédure et toutes les six heures pendant les 72 premières heures après la procédure. La lidocaïne à cinq milligrammes par kilogramme a été administrée sous-cutanée autour du dorsum de chaque souris 15 minutes avant l’intervention, un volume total de 200 microlitres de solution de sonneries lactées à 5% dextrose a été injecté sous-cutané avant l’intervention, et six heures après la procédure pour prévenir la déshydratation.
Les souris étaient nisertide utilisant une injection intraperitoneal de Xylazine à 10 milligrammes par kilogramme, et kétamine à 100 milligrammes par kilogramme. La profondeur anesthésique peut être évaluée au moyen d’une pincée d’un avant. L’anesthésie abolit le réflexe de clignotement, empêchant le rafraîchissement du film de déchirure nécessaire pour le maintien de l’hydratation cornéenne et l’œil continuellement exposé à l’air devient rapidement déshydraté, un lubrifiant a été appliqué sur les yeux pour maintenir l’hydratation de la cornée.
Le dorsum de chaque souris est coupé et la crème depilating est appliquée pendant une minute pour enlever les cheveux. L’animal nisertide est positionné couché sur une table plate et la brûlure thermique est créée en appliquant un bloc de laiton circulaire préchauffé à 80 degrés Celsius pour une durée de 20 secondes. La souris, est placée de nouveau sur le coussin chauffant pour la garder au chaud et prévenir l’hypothermie, un effet secondaire fréquent des agents anesthésiques.
Une fois récupérée de l’anesthésie, la souris peut être placée dans une cage individuelle. 24 heures après l’induction d’une brûlure. Le tissu nécrotique excite chirurgicalement.
Quatre greffes de peau malades sont récoltées à partir de la queue de souris donneur euthanasier. Bien que d’autres côtés de sorte qu’il ya sous la queue peut également être en utilisant le modèle de souris. Ainsi, le degré de réponse humaine peut varier en fonction de l’origine de la greffe de peau du donneur.
Par exemple, la peau de l’oreille et du dos n’ont plus en vente par rapport à la peau de la queue et provoquent une réponse humaine plus robuste, ce qui peut conduire au rejet de greffe. L’épaisseur des greffes de peau peut également être prise en compte car elle peut jouer un rôle déterminant dans l’engraftment réussi de la greffe de peau prendre. La peau sûre telle que celle du dos a une plus grande probabilité d’échec due aux exigences métaboliques plus élevées du tissu.
Par conséquent, le succès rapporté de l’engraftment allergénique de greffe de peau pour la peau arrière est inférieur au succès rapporté pour la greffe de peau de queue. L’anesthésie a été induite par inhalation de 5% d’Isoflurane dans 100% d’oxygène à un débit de quatre litres par minute, suivie par le maintien de l’anesthésie en utilisant 2%Isoflurane à deux litres par minute pour l’entretien pendant la chirurgie. La buprénorphine a été administrée à l’initiation de la procédure pour fournir l’analgésie postopératoire.
Les brûlures ont été préppées avec povidone-iode, suivie de 70% d’alcool. La brûlure nécrotique est excisée avec des ciseaux pour enlever le défaut circulaire de peau pleine épaisseur, la couche panniculus carnosus de l’hypoderme est enlevée pour créer un lit stable de destinataire de greffe de peau quelques auteurs suggèrent de préserver la couche panniculus de carnosus de l’hypoderme car il est censé être nécessaire pour la revascularisation de la greffe. Toutefois, dans ce cas, la mobilité de cette couche et les forces de cisaillement potentielles qui en résultent entre la greffe et le lit du receveur peuvent devenir problématiques.
L’enlèvement de la couche panniculus de carnosus n’a pas eu d’impact défavorable sur le succès de la procédure de greffe. Les greffons de pleine épaisseur sont récoltés à partir de la queue de souris donneur euthanasié. La queue est incisée longitudinal, ce qui permet à la peau d’être séparée du tissu mou sous-jacent.
La peau de la queue est ensuite étalée sur une boîte de Pétri remplie de solution saline stérile et normale et coupée en plaques circulaires à l’aide d’une règle. Les greffons sont ensuite transférés dans une boîte de Pétri avec une gaze stérile trempée dans la solution saline normale et gardé les quatre degrés jusqu’à ce qu’ils soient prêts à être greffés. Les greffons sont ensuite fixés au lit du receveur avec de la colle chirurgicale.
Les écarts entre la greffe de peau du donneur et le lit de plaie du receveur sont doucement pressés pour aligner les bords de la peau. Les plaies sont habillées dans de la gaze inerte de paraffine et un pansement secondaire adhésif. Des photographies numériques, des blessures greffées ont été prises à un, trois et sept jours après brûlure.
À l’autopsie les brûlures dorsales ont été chirurgicalement excisées au fascia, les blessures ont été coupées en deux avec une moitié fixée dans la formaline tamponnée de 10%, et traitées pour l’histologie et l’immunohistochimie. Les greffes de peau fournissent un système d’échafaudage pour la migration cellulaire. L’intégration réussie de greffe dépend des fibroblastes efficaces et de la migration de kératinocyte de l’offre destinataire dans la greffe de donneur qui est lentement dégradée et remplacée par des cellules capables de produire la matrice extracellulaire.
La section histologique des blessures de masse a été soumise à la coloration d’hématoxyline et d’éosine. Les images représentatives des sections tachées d’hématoxyline et d’éosine des blessures, ont montré que la longueur de l’épiderme proche mis en évidence en jaune est sensiblement augmentée le jour sept, comparé au jour trois après blessure de brûlure. Pour estimer le taux de rééthélisation, la zone de la plaie qui a été couverte d’épiderme proche a été exprimée en pourcentage de la plaie entière.
La matrice extracellulaire est le composant non cellulaire de la peau, qui fournit un échafaudage pour les composants cellulaires. La matrice extracellulaire est composée de protéines fibreux, comme le collagène et la fibronectine. Ces molécules augmentent la maturité des blessures et maintiennent l’intégrité structurale de l’immunohistochimie semiquantitative de peau pour le type de collagène un, et les taches histologiques telles que mason’s trichrome peuvent être employées pour aider l’intégrité extracellulaire de matrice du micrographe de photo.
Des méthodes plus sophistiquées telles que la microscopie de deuxième génération harmonique sont apparues comme un outil puissant pour l’analyse quantitative de la structure du collagène. La greffe de peau murine fournit un excellent modèle préclinique potentiel pour étudier l’intégration des graphiques dans le côté destinataire. Cette étude démontre une méthode fiable pour effectuer avec succès des greffes de peau dans un modèle de souris ainsi que l’évaluation histologique des plaies curatives.
