Notre protocole est un test de vision pour les souris. Il est à la fois robuste et facile à reproduire. Alors que de nombreux tests de vision de souris sont disponibles, l’expérience imminente est l’une des rares méthodes pour tester la voie de formation d’image, qui n’est pas une voie réflexe visuelle.
Alors que beaucoup d’autres tests de comportement visuel nécessitent une formation approfondie en chirurgie animale, la technique imminente nécessite peu de formation expérimentale. Commencez par construire un boîtier rectangulaire à couvercle ouvert à l’aide de charpentes en aluminium et de panneaux de PVC pour loger la souris lors de la présentation des stimuli visuels imminents. Déposer une feuille de papier pour couvrir tout le plancher de l’enceinte afin d’assurer un nettoyage facile entre les essais.
Ensuite, ajoutez un abri opaque dans un coin de l’enceinte avec une entrée face au centre de l’arène pour une entrée et une sortie faciles. Fixez une caméra avec un objectif grand angle sur un support monté sur table adjacent à l’enceinte pour capturer le comportement de la souris. Ensuite, installez un moniteur d’ordinateur au-dessus de l’enceinte.
Préparez un modèle imminent à l’aide d’un logiciel expérimental pour coder un cercle noir en expansion. Réglez le stimulus pour commencer à l’angle visuel de deux degrés et augmenter à 50 degrés sur 250 millisecondes et définir le code pour répéter le stimulus 10 fois avec un intervalle d’une seconde. Commencez par sélectionner une souris pour l’expérience ainsi que trois souris aveugles pour s’assurer que la réponse au stimulus imminent était vraiment un comportement visuellement guidé.
Placez la souris saine dans l’enceinte et laissez-la explorer librement son environnement pendant sept à 15 minutes avant le début du stimulus. 10 secondes avant la stimulation, démarrez la capture vidéo sur la caméra. Une fois que la souris est loin de l’abri et se déplaçant librement dans l’arène ouverte, commencer les stimuli visuels imminentes.
Enfin, transférez la souris dans sa cage d’origine. Nettoyez l’enceinte pour la souris suivante en pulvérisant les murs et le refuge avec 70% d’éthanol et en l’essuyant et en remplaçant le revêtement de sol en papier, s’il est souillé. Repositionnez le refuge au même endroit initial s’il est déplacé pendant le transfert d’animaux et le nettoyage de l’enclos.
À l’ordinateur, enregistrez le clip vidéo pour chaque souris en format AVI sans compression de fichier afin d’assurer aucune perte de données lors du transfert vers le logiciel d’analyse. Ensuite, utilisez un logiciel d’analyse pour suivre le mouvement de l’animal autour de l’arène avant, pendant et après la présentation de stimulus. Calculez la vitesse et la distance de la souris par rapport au refuge.
Si l’image de l’arène est déformée en raison de l’angle vidéo, corrigez la coordination x et y avant le calcul. Enfin, comparez les paramètres avant et après l’apparition imminente du stimulus pour déterminer comment la souris a réagi aux stimuli. Que ce soit en gelant, en fuyant ou en ne démontrant aucun changement de comportement.
Les clips vidéo capturés ont été analysés à l’aide d’un logiciel d’analyse commerciale avec une fonction de suivi manuel. À l’aide de la fonction de suivi, la position de la souris a été identifiée dans chaque image de la vidéo avant, pendant et après les stimuli imminents. Lorsque le vol s’est produit, la vitesse a brusquement augmenté et la distance jusqu’à l’abri a diminué en conséquence.
En revanche, la vitesse était proche de zéro millimètre par seconde lorsque les souris gelaient. La vitesse a été réduite par rapport au contrôle avant de se profiler et la distance au dôme n’a pas changé pendant cette période. Il est important de se rappeler d’obtenir une ligne de base de mouvement avant le début du stimulus ou une réaction quantitative au stimulus ne peut pas être déterminée.
Il est important d’effectuer plusieurs tests pour une évaluation précise de la vision. Le réflexe de lumière de pupille est une méthode couramment utilisée, qui assure que la souris a les yeux sains. Le mécanisme de réponse imminente n’est pas entièrement compris.
Cette technique peut fournir des occasions d’explorer des mécanismes de reconnaissance d’objets en mouvement et de réactions de peur pour les neuroscientifiques.
