Ce modèle murin de l’infraction myocardique permet la surveillance des processus pathologiques se produisant de l’occlusion coronaire à l’insuffisance cardiaque à un stade avancé au tissu cardiaque local et aux niveaux systémiques. Cette méthode est compatible avec toute lecture actuellement utilisée en biologie cardiaque et physiologie. En outre, il bénéficie de l’immense diversité des modèles génétiques murins.
L’acquisition de compétences chirurgicales adéquates peut prendre du temps à maîtriser. Cette procédure est mieux apprise étape par étape avec un chercheur expérimenté. La démonstration visuelle de ce modèle murin permet le partage d’indices qui peuvent aider à la procédure chirurgicale et accélérer le processus d’apprentissage.
Utilisez un rasoir électrique pour raser rapidement une souris anesthésiée de 25 à 30 grammes, mâle, C57-Black/6 sur la gorge et le côté gauche de la cage thoracique. Confirmez un manque de réponse au pincement des pieds. Appliquer de l’onguent sur les yeux de l’animal.
Placez la souris en position supine sur un coussin chauffant et placez une petite compresse de gaze sous la tête pour éviter de surchauffer les yeux. Fixez les membres avec du ruban adhésif. Passez une boucle de suture de soie 5-0 sous les incisives supérieures, et fixez l’extrémité de la boucle sur le coussin chauffant pour garder la bouche ouverte pendant la cannulation.
Appliquer la crème depilatory sur les zones pré-rasées, et masser doucement avec un coton-tige pendant une minute. Retirer l’excès de fourrure et de crème avec de la gaze, et nettoyer la peau exposée avec des gouttes de solution saline de 0,9% et de gaze. Appliquer des morceaux de gaze stérile sur la gorge rasée et le thorax, et tremper la gaze avec de l’iodopovidone.
Réglez le ventilateur à un volume de marée de sept millilitres par kilogramme et à un taux de ventilation de 140 coups par minute. Déplacez la souris sous un microscope stéréo microchirurgie. Tenir la peau au centre de la gorge, faire une incision de 0,5 centimètre le long de la ligne caudale/céphalique, et séparer les lobes de la glande salivaire.
Utilisez des forceps incurvés pour séparer doucement le fascia du muscle sternohyoid jusqu’à ce que le larynx et la trachée soient visibles. Ensuite, fixez les bords de l’ouverture avec des rétracteurs fixés à des bandes élastiques. Ensuite, tirez doucement la langue latéralement, et utilisez des forceps pour insérer l’aiguille intérieure émoussée d’une canule de calibre 16 dans la trachée.
Visualisez une insertion correcte dans la trachée par l’incision de gorge, et reliez la canule au ventilateur. Placez stérile 0,9% saline complétée par de la gaze iodopovidone-trempée sur l’incision pour garder les tissus humides pendant l’opération. Ensuite, placez le tube d’échappement dans l’eau.
La présence de bulles indique une intubation réussie. Pour la ligature de l’artère coronaire descendante antérieure gauche, ou LAD, déplacez soigneusement la souris dans la position de decubitus de côté droit, et resécez le membre antérieur gauche dans la nouvelle position. Identifiez la ligne entre les muscles pectoralis gauches mineurs et majeurs, et faites une incision oblique d’un centimètre de peau le long de la ligne.
À l’aide de micro ciseaux dissecting émoussés, séparez le fascia des muscles pectoralis sans incising les tissus, et utilisez des rétracteurs attachés à des bandes élastiques pour maintenir la séparation. Réglez le ventilateur avec une pression d’expiration positive de trois centimètres d’eau. Utilisez des forceps contondants pour ouvrir la cavité thoracique au troisième espace intercostal entre les troisième et quatrième côtes.
Placez deux rétracteurs dans la cage thoracique, un sur chaque nervure, et utilisez un forceps fin incurvé pour enlever soigneusement le péricarde sans nuire au cœur et aux poumons. Localisez le LAD comme une ligne rouge vif superficielle qui s’enfuit du bord de l’oreillette gauche vers l’apex. Utilisez un porte-aiguille pour passer une suture de soie 7-0 sous le LAD de deux à trois millimètres sous les atrias gauches.
Tirant la soie lentement pour éviter de déchirer le tissu cardiaque, attacher la ligature avec trois noeuds. La partie inférieure gauche du ventricule gauche pâlit instantanément lors de la ligature. Maintenant, relâchez les rétracteurs de nervures, et tenant la troisième côte avec des forceps, faire deux passes avec une suture de soie 6-0 sous les troisième et quatrième côtes.
Placez trois gouttes de solution saline de 37 degrés Celsius à 0,9 % sur l’ouverture et fermez le tube d’échappement d’expiration pendant deux ou trois cycles respiratoires pour gonfler correctement les poumons. Serrez et fixez la suture avec deux lancers, et relâchez les rétractateurs tenant les muscles, aidant les muscles à retourner à leur emplacement anatomique correct. Ensuite, fermez la peau thoracique avec deux points de suture et deux lancers de soie suture 5-0.
Fermez la peau de la gorge avec un point de soie suture 5-0 et deux lancers. À la fin de la procédure, retirez les bandes de ruban des membres, tournez soigneusement l’animal en décubitus ventral sur la compresse et placez une compresse sur le coussin chauffant sur le côté droit de l’animal. Injecter intraperitoneally 0,3 millilitres de 37 degrés Celsius réchauffé 5% solution de glucose.
Arrêtez le ventilateur. Si la souris respire spontanément, retirez prudemment la canule. Injecter sous-cutanément 0,1 milligramme par kilogramme de buprénorphine.
Placez la souris dans une cage de 30 degrés Celsius ventilée avec 100% d’oxygène pendant au moins une heure avec surveillance. Au cours des deux premiers jours suivant la chirurgie, fournir à la souris un régime doux et l’eau ad libitum, le réchauffement de l’animal si nécessaire. Sept jours après la chirurgie, les zones ischémiques restent non tachées par le chlorure de triphenyltetrazolium, tandis que les taches de tissu vivant rouge en raison de la présence de déshydrogénases.
Les zones ischémiques peuvent ensuite être calculées comme le pourcentage de la zone blanche du ventricule gauche dans un logiciel d’imagerie. L’analyse occidentale de tache pour l’actine alpha-lisse de muscle et la phosphorylation de SMAD2, qui sont respectivement des readouts principaux des myofibroblastes et de transformer l’activation bêta de signalisation de facteur de croissance, peut être employée pour déterminer l’ampleur de la fibrose dans le tissu myocardique des coeurs infarctus. L’analyse en temps réel de réaction en chaîne de polymésase de la transformation du facteur bêta de croissance et de son expression cible en aval de l’ARNm peut également être effectuée pour évaluer la présence de fibrose myocardique.
Les voies de signalisation pro-inflammatoires et l’expression des gènes pro-inflammatoires sont généralement activées dans la première semaine suivant l’infarctus du myocarde. L’expression par l’ARNm de gènes pro-inflammatoires et de marqueurs monocytes/macrophages est également observée. La hauteur de ligature influencera de façon critique la survie et devrait être adaptée à chaque souche ou génotype, car la ramification du LAD peut varier.
Les constantes de ligature sont essentielles pour obtenir des résultats reproductibles. Cette procédure peut être couplée avec n’importe quelle méthode analytique et peut être suivie par l’analyse fonctionnelle, la fixation de tissu, la culture cellulaire, ou n’importe quelle technique d’intérêt.
