Ce modèle d’interface sang-cerveau humain est utile pour étudier le transfert de molécules dans le système neuro. Ainsi que pour l’étude des microbes atteindre une tumeur infectée de la douleur cérébrale. L’ajout du mini cerveau à cette barrière cérébrale ou modèle BBB permet l’étude de nos pathogènes et molécules qui provoquent le comportement du BBB dans le cerveau.
Florian Bakao, doctorant pour mon laboratoire, sera à l’avant-garde de la procédure. Pour mettre en place un mini dispositif d’insertion de culture de membrane de polyester de cerveau de BBB, diluez les cellules à cinq fois 10 aux quatrièmes cellules par milieu incomplet de cellule endothéliale de concentration de BBB et ajoutez le volume approprié des cellules à chaque insert de culture de membrane de polyester dans une plaque de puits de 12. Ensuite, placez les inserts et l’incubateur de culture cellulaire jusqu’à ce que les cellules atteignent 100% de confluence.
Tenez une assiette de 12 puits avec un millilitre de poly-D-lysine son puits pendant quatre heures à température ambiante. Suivi d’un millilitre de laminine par puits pendant la nuit. Remplacer la laminine par un millilitre de milieu cellulaire endothélial complété par 5% de sérum bovin fœtal, ou FBS.
Placez l’endroit dans un incubateur pendant une heure. Pour préparer le mini grain essayez doucement trypsinize les astrocytes neurones humains dans CHME cloner cinq cellules. Associez les granulés cellulaires à un milieu cellulaire endothélial complet.
Après avoir compté à 3,6 fois 10 à la cinquième neurones et astrocytes à 0,4 fois 10 à la cinquième clone CHME cinq cellules par puits ont une plaque de puits 12. Et ensemencer la plaque de 12 puits. Pour construire le mini cerveau BBB 24 heures après l’ensemencement remplacer le milieu utilisé par un milieu cellulaire endothélial complet frais et transférer les insertions cérébrales micro vasculaires de la membrane endothéliale des cellules endossées polyester sur les mini cellules du cerveau.
Ensuite, placez le BBB de nombreux périphériques cérébraux dans l’incubateur. Pour valider la mini perméabilité endothéliale du cerveau BBB ajouter 1,5 millilitres de tampon de transport par puits à une nouvelle plaque de 12 puits. Et retournez chaque filtre à l’envers pour enlever soigneusement le milieu sans affecter la barrière cellulaire endothéliale.
Placez chaque filtre dans un puits de la plaque tampon de transport remplie, et ajoutez 0,5 millilitres de jaune Lucifer dans chaque puits. Ensuite, placez la plaque dans l’incubateur pendant 10 minutes avant de transférer les filtres dans un nouveau tampon de transport rempli 12 plaque de puits. Après la mise en place d’un dispositif BBB de nombreux cerveaux comme démontré, ajouter 3500 unités de plate-forme de la souche de virus neurotrophique Français du virus de la fièvre jaune dilué et 50 microlitres de 2%FPS milieu cellulaire endothélial, très soigneusement, sur le dessus du compartiment luminal.
Inoculer le mini cerveau BBB de contrôle avec 50 microlitres de 2%FBS milieu cellulaire endothélial sans virus. Ensuite, placez le virus exposer BBB de nombreux périphériques cérébraux dans l’incubateur pendant 24 heures. Le lendemain, retirez les inserts pour déterminer la perméabilité des cellules endothéliales et un compagnon aussi bien que démontré.
Économisez un millilitre d’échantillon de chaque puits pour déterminer le titer de virus dans le compartiment central. Sous l’insert doucement pour éviter les fuites du compartiment luminal dans les compartiments abluminaux. Pour étudier le transport d’un neurone ciblant la biomoléculaire à travers la barrière céphalo-encéphalique, ajoutez la molécule bio d’intérêt aux inserts et retournez la plaque à l’incubateur de culture cellulaire.
Après 24 heures insère à distance et de déterminer la perméabilité endothéliale. Puis tacher les nombreuses cellules du cerveau avec l’anticorps approprié pour détecter la présence de la molécule bio d’intérêt dans le mini cerveau. Les cellules endothéliales micro vasculaires cérébrales humaines expriment tous les sous-ensembles de rececptors, transporteurs ou transporteurs Efflux qui sont des protéines clés pertinentes pour leurs fonctions biologiques.
Certains Français de virus neurotropiques du virus de la fièvre jaune peuvent traverser la barrière cérébrale à 24 heures. Les virus s’amplifient ensuite pendant les deux prochains jours par la multiplication du virus à l’intérieur des cellules du cerveau. En outre, l’expression de biomarqueurs viraux spécifiques est stimulée lorsque cette population virale neuro invasive est en série passage sur les mini cellules du cerveau et strictement corrélée à la charge virale.
Après avoir été ajouté à la limite de la molécule pénétrante cellulaire compartiment Neuro-Tag Neurovita traverse la barrière cérébrale du sang et est capable de cibler les neurones humains. Molécule pénétrante cellulaire neuro tag Delta neurovita traverse la barrière cellulaire endothéliale, mais cible moins efficacement les neurones humains. Après avoir été ajouté au petit compartiment intermédiaire, la molécule pénétrante cellulaire Neuro-Tag Neurovita traverse la barrière cérébrale du sang et est capable de régénérer les axones des neurones humains, après avoir blessé.
Contrairement à la molécule pénétrante cellulaire Neuro-Tag Neurovita Delta, la forme inactive de Neurovita. Lorsqu’il est appliqué après l’axone grattant la molécule pénétrante de cellules Neuro-Tag Neurovita déclenche la neuroprotection des neurones blessés et la régénération zonale x. Strictement pour le bien des pratiques.
ne pas surutiliser les passages i-cell. Essayez de maintenir un semblant de milieu et de régions et vérifiez l’absence de mycoplasma. Les interactions entre le mini cerveau et les médicaments sont des microbes d’intérêt peuvent être étudiés plus en détail par transcription qui chimiquent cette biologie ou classique appelée techniques.
