Ce travail a été financé par des subventions de la SNF [31003A-138528], le Octav et la Fondation Marcella Botnar, la Fondation Novartis et la Fondation Emma Muschamp. Nous remercions Martine Lambelet, et Jean-Christophe Stehle pour leur excellente assistance technique.

Le comité d&#39;éthique de l&#39;Université de Lausanne a approuvé les expériences, qui sont en conformité avec les principes énoncés dans la Déclaration d&#39;Helsinki de 1975, tel que révisé en 1983 pour l&#39;utilisation de tissus humains. 1. Human grande veine saphène récolte <ol><li> Obtenir des segments de surplus de veines saphènes humaines non variqueuses de patients subissant une chirurgie de dérivation membre inférieur de l&#39;ischémie. Dans la salle d&#39;opération, de désinfecter l&#39;ensemble de la jambe avec une solution d&#39;iode et le drapé du patient pour exposer la jambe de l&#39;aine au pied. </li><li> Faire une incision médiane de l&#39;aine au genou (en laissant la partie interrompue de la peau). </li><li> Récolter la grande veine saphène avec un pédicule de ses environs (technique sans contact) de tissu. Sécurisés branches latérales des veines avec 4-0 cravates en soie. Stocker immédiatement d&#39;au moins 9 cm de segments de surplus de temps de la plus grande veine saphène, avec un diamètre externe de 2,5 à 4 mm à 4 ° C dans un milieu RPMI-1640 Glutamax milieu, additionné de 12,5% de sérum de veau foetal et l&#39;amener au laboratoire. </li></ol> 2 EVP Conception <ol><li> Assembler l&#39;équipement général de la figure 1. Autoclave tous les équipements et garder tous les composants dans des conditions stériles. En outre, s&#39;assurer que le système est étanche et ne fuit pas de produits chimiques dans le milieu. Utilisez le polyméthacrylate de méthyle (PMMA-GS) pour la couverture. Acier (X5 Cr Ni 18 10) et de polyoxyméthylène en plastique (POM) et le support de la veine. </li><li> Conception de la chambre de perfusion à la géométrie souhaitée pour permettre le placement de la veine et de sa connexion. Assurez-vous que la profondeur (ou le rayon si vous utilisez construction cylindrique) est d&#39;au moins 2,5 cm de sorte qu&#39;il permet une flexion minimale et dilatation du vaisseau ainsi que la couverture constante par les milieux de culture (Figure 1). L&#39;étanchéité est un problème majeur et c&#39;est la raison rectangulaire construction PMMA-GS est utilisé. </li><li> Concevoir le soutien de la veine à la geometr souhaitéey. Afin d&#39;éviter le vrillage de la veine ou plus de distension, permettre le réglage de la longueur de poussée ou de traction (vis ne peut être utilisé à cet effet, que la veine soit tordu le long de la vis). REMARQUE: Une tige en acier plein relié par 2 pièces coulissantes en forme de L qui prennent en charge les deux cylindres de la veine (5 mm de diamètre pour s&#39;adapter à la cuve) et la veine (figure 1B et figure 2) est utilisé ici. </li><li> Conception de la colonne de pression, de telle sorte que la &quot;pression de repos» appliquée au système est la suivante: p = 0-10 = hx ρ xg, où p = pression (N / m 2, Pa) h = hauteur de la colonne de fluide (m) ρ = masse volumique du liquide (kg / m 3), et g = l&#39;accélération de la pesanteur (9,81 m / s 2). Conception quatre conduits de raccordement, de haut en bas: à appliquer une pression, pour la sortie (de la veine), l&#39;entrée (à la veine) et de permettre changement de milieu. </li><li> Préparer le milieu. Basé sur des études antérieures 5,11-14, choisissez RPMI-1640, complétée par Glutamax, 12,5% De sérum de veau foetal, et une solution d&#39;antibiotique-antimycotique à 1% (10 000 U / ml de pénicilline G, ainsi que 10 mg / ml de sulfate de streptomycine, plus 25 mg / ml d&#39;amphotéricine B, plus 0,5 ug / ml de gentamycine):. La contrainte de cisaillement (SS) est donnée par SS = 4 μQ / π * r 3 Q représente le débit (ml / sec), r le rayon (cm) du segment de veine, et μ est la viscosité du milieu de perfusion. <ol><li> Moduler SS en ajustant la viscosité par addition de 70 kDa dextran. Mesure de la viscosité avec un viscosimètre. Ici, ajouter 8% de dextran 70 kDa pour définir SS à 9-15 dyn / cm 2. </li></ol></li><li> Mettre la pompe à engrenage pour induire un signal cardioïde pulsatile de 60 impulsions / min et amplitude constante à générer un flux unidirectionnel de 150 ± 15 ml / min, indépendante de la pression appliquée dans le système et commandé par un ordinateur. Assurez-vous que le logiciel de pilotage intègre l&#39;acquisition constante et la surveillance des pressions, vitesse d&#39;écoulement, la fréquence du pouls, et le signal. Si vous le souhaitez, utiliser une deuxième pompe (non synchronisationhronized) pour produire un non-laminaire, l&#39;écoulement turbulent. </li></ol> 3. Assemblée EVP (Figure 1) <ol><li> Avant de commencer, assurez-vous que tout le matériel est stérile. Effectuez toutes les étapes suivantes sous asepsie dans une hotte à flux laminaire. </li><li> Placez la veine dans une boîte de Pétri remplie avec le milieu. Utilisez une lame chirurgicale et diviser la veine en 3 segments égaux. </li><li> Rincer immédiatement un segment dans du PBS. Diviser le segment en 3 parties, fixer un dans le formol pour la morphométrie. Congeler les deux autres pour la transcription quantitative (RT-PCR) et de protéines (western blot) analyse. Tenez compte de ces segments en tant que témoin, non veine perfusée. </li><li> Utiliser les deux segments restants de la perfusion. <ol><li> Injecter très doucement moyen dans la veine et déterminer le sens d&#39;écoulement normale; en présence de la veine soupapes est inversée. </li><li> Sceller les veines est d&#39;une importance capitale pour le succès expérimental. Vérifier les fuites à travers collatéraux. Fixez les fuites avec 6-0 points de suture de soie. </li> &lt;/ Ol&gt; </li><li> Connectez le segment de veine entre les deux cylindres métalliques, une extrémité à la fois (2.3, Figure 1). Fixer les cylindres avec Ethibon 3-0 autour des indentations (figure 1A et B). <ol><li> Placer le segment veineux ensemble dans la chambre de perfusion préalablement remplie avec un milieu. Répétez la même procédure pour le deuxième segment. REMARQUE: une panne de bien sceller la veine de la bouteille sera une source de la fuite, nécessite une réintervention, et augmenter de façon significative le risque d&#39;infection et d&#39;insuffisance expérimentale. </li></ol></li><li> Pour renforcer (mesh) du deuxième segment, de libérer les deux cylindres avec la veine (ci-joint) des pièces en forme de L (2.3 et figure 1). <ol><li> Soyez doux et ne pas toucher la veine avec des instruments. Faites glisser la maille d&#39;abord sur le cylindre puis sur la veine. Une bousculade push / pull obtiendra le maillage sur la veine. </li><li> Une fois que le maillage couvre toute la surface de la veine assurer la jveine acketed aux cylindres avec Ethibon 3-0. </li><li> Réassembler le composé veine / cylindre sur le support en forme de L et le transférer à la chambre de perfusion, préalablement remplie avec un milieu. </li></ol></li><li> Connecter chaque cylindre métallique (et en sortie) à un séparateur en Y en utilisant un tube de silicone traitée avec du peroxyde d&#39;un diamètre intérieur de 3,2 mm. </li><li> Raccorder la sortie à un deuxième séparateur séparateur en Y à l&#39;aide du même type de tube. De ce répartiteur en Y, utiliser un tube pour mesurer la pression de perfusion à travers les deux navires. Connectez l&#39;autre à la colonne pour former un système en boucle fermée (Figure 2). </li><li> A l&#39;intérieur de l&#39;incubateur, utiliser un long (d&#39;un mètre de longueur) pour connecter le tube de la colonne de pression à la tête de la pompe. </li><li> Remplissez le mettre en place en reliant la tête de la pompe à l&#39;entrée Y-splitter avec un autre tube de grande longueur (Figure 1). </li></ol> 4 veines perfusion <ol><li> Après l&#39;assemblée EVP a été completed, remplir la colonne avec le milieu (rester en dessous de la veine conduit d&#39;évacuation pour permettre le remplissage). Ajouter plus moyen dans la colonne jusqu&#39;à ce que le système est plein. Déplacer tout le système dans l&#39;incubateur maintenu à 37 ± 0,1 ° C avec un pH maintenu constant à 7,40 ± 0,01 (en utilisant un algorithme de CO 2 / pH sur la base de l&#39;équation de Henderson-Hasselbach). </li><li> Apportez la tête de pompe à engrenage extérieur de l&#39;incubateur et le connecter à l&#39;entraînement de la pompe à engrenages. Visser les tiges pour fixer l&#39;ensemble. </li><li> Mettez la puissance de la pompe, assurez-vous qu&#39;il est activé sur le logiciel de pilotage et permet 5 min à moyen et à répartir de façon égale dans tous les compartiments. </li><li> Pour contrôler la pression, utilisez un contrôle de la ligne artérielle. Raccorder la sortie de pression d&#39;EVP (il correspond à cathéter artériel) pour le transducteur de pression relié à l&#39;ordinateur. <ol><li> Assurez-vous que le tube est entièrement remplie de fluide et ne contient pas de bulles. De-bulles, le système de culture à travers le &quot;li artérielne &quot;tube (Figure 2). Faites attention à l&#39;écran et de regarder pour un signal cardioïde pulsatile de 60 impulsions / min d&#39;amplitude constante. A ce stade, la pression moyenne est comprise entre 0 à 10 mm Hg. Si la pression est &lt;0 et la colonne vide progressivement rechercher une fuite (veine collatérale ou joint insuffisant entre la veine et le tube). </li></ol></li><li> Régler la pression minimale de 6 mm Hg pour un test veineuse ou à 90 mm Hg pour un test artérielle. Dans ces conditions, un injecteur d&#39;air applique la pression nécessaire à la colonne et le système. </li><li> Changer le milieu tous les 2 jours en utilisant le tube relié à la colonne de pression. Pour éviter d&#39;endommager le changement de pression, ouvrir le bouchon de la première colonne. </li></ol> 5. achèvement de la perfusion <ol><li> Après 3 ou 7 jours de perfusion: prendre les EVP sur l&#39;incubateur et démonter les veines. Jeter le 5 mm proximale et distale veine extrémités fixées à l&#39;équipement. Couper, un rin 5 mm d&#39;épaisseur centralegs du segment restant et fixer dans du formol (morphométrie). Geler les fragments restants et réduire en poudre pour d&#39;autres analyses moléculaires. </li></ol>

<ol>
	<li>Sal Go, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Executive+summary:+heart+disease+and+stroke+statistics--2014+update:+a+report+from+the+american+heart+association.">Executive summary: heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the american heart association.</a> Circulation. 129, 399-410 (2014).</li><li>Sal Conte, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+PREVENT+III:+a+multicenter,+randomized+trial+of+edifoligide+for+the+prevention+of+vein+graft+failure+in+lower+extremity+bypass+surgery.">Results of PREVENT III: a multicenter, randomized trial of edifoligide for the prevention of vein graft failure in lower extremity bypass surgery.</a> Journal of Vascular Surgery. 43, 742-751 (2006).</li><li>Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Bai, Y., Ozaki, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+vein+graft+hemodynamic+manipulations+to+enhance+experimental+utility.">Mouse vein graft hemodynamic manipulations to enhance experimental utility.</a> The American Journal of Pathology. 178, 2910-2919 (2011).</li><li>Davies, M. G., Hagen, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprinted+article+&amp;#34;Pathophysiology+of+vein+graft+failure:+a+review&amp;#34;.">Reprinted article &amp;#34;Pathophysiology of vein graft failure: a review&amp;#34;.</a> European journal of vascular and endovascular surgery : the official journal of the European Society for Vascular Surgery. 42, S19-S29 (2011).</li><li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+hemodynamic+forces+in+the+ex+vivo+arterialization+of+human+saphenous+veins.">Role of hemodynamic forces in the ex vivo arterialization of human saphenous veins.</a> Journal of Vascular Surgery. 57, 1371-1382 (2013).</li><li>Vijayan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+reduction+of+medial+and+intimal+thickening+in+porcine+saphenous+vein+grafts+with+a+polyglactin+biodegradable+external+sheath.">Long-term reduction of medial and intimal thickening in porcine saphenous vein grafts with a polyglactin biodegradable external sheath.</a> Journal of Vascular Surgery. 40, 1011-1019 (2004).</li><li>Jeremy, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+biology+of+saphenous+vein+grafts+fitted+with+external+synthetic+sheaths+and+stents.">On the biology of saphenous vein grafts fitted with external synthetic sheaths and stents.</a> Biomaterials. 28, 895-908 (2007).</li><li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constrictive+external+nitinol+meshes+inhibit+vein+graft+intimal+hyperplasia+in+nonhuman+primates.">Constrictive external nitinol meshes inhibit vein graft intimal hyperplasia in nonhuman primates.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136, 717-725 (2008).</li><li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+shape+memory+in+external+vein-graft+meshes+allows+extreme+diameter+constriction+for+suppressing+intimal+hyperplasia:+a+non-human+primate+study.">Utilization of shape memory in external vein-graft meshes allows extreme diameter constriction for suppressing intimal hyperplasia: a non-human primate study.</a> Journal of Vascular Surgery. 49, 1532-1542 (2009).</li><li>Yeoman, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+constitutive+model+for+the+warp-weft+coupled+non-linear+behavior+of+knitted+biomedical+textiles.">A constitutive model for the warp-weft coupled non-linear behavior of knitted biomedical textiles.</a> Biomaterials. 31, 8484-8493 (2010).</li><li>Longchamp, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+external+mesh+reinforcement+to+reduce+intimal+hyperplasia+and+preserve+the+structure+of+human+saphenous+veins.">The use of external mesh reinforcement to reduce intimal hyperplasia and preserve the structure of human saphenous veins.</a> Biomaterials. 35, 2588-2599 (2014).</li><li>Saucy, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+pulsatile+perfusion+of+human+saphenous+veins+induces+intimal+hyperplasia+and+increased+levels+of+the+plasminogen+activator+inhibitor+1.">Ex vivo pulsatile perfusion of human saphenous veins induces intimal hyperplasia and increased levels of the plasminogen activator inhibitor 1.</a> European Surgical Research. Europaische Chirurgische Forschung. Recherches Chirurgicales Europeennes. 45, 50-59 (2010).</li><li>Dubuis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atorvastatin-loaded+hydrogel+affects+the+smooth+muscle+cells+of+human+veins.">Atorvastatin-loaded hydrogel affects the smooth muscle cells of human veins.</a> The Journal of pharmacology and experimental. 347, 574-581 (2013).</li><li>Deglise, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+connexin43+expression+in+human+saphenous+veins+in+culture+is+associated+with+intimal+hyperplasia.">Increased connexin43 expression in human saphenous veins in culture is associated with intimal hyperplasia.</a> Journal of Vascular Surgery. 41, 1043-1052 (2005).</li><li>Muto, A., Model, L., Ziegler, K., Eghbalieh, S. D., Dardik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+vein+graft+adaptation+to+the+arterial+circulation:+insights+into+the+neointimal+algorithm+and+management+strategies.">Mechanisms of vein graft adaptation to the arterial circulation: insights into the neointimal algorithm and management strategies.</a> Circulation Journal : Official Journal of the Japanese Circulation Society. 74, 1501-1512 (2010).</li><li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+murine+intimal+hyperplasia+model+founded+on+a+focal+carotid+stenosis.">A simplified murine intimal hyperplasia model founded on a focal carotid stenosis.</a> The American Journal of Pathology. 182, 277-287 (2013).</li><li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salvage+treatment+for+venous+aneurysm+complicating+vascular+access+arteriovenous+fistula:+use+of+an+exoprosthesis+to+reinforce+the+vein+after+aneurysmorrhaphy.">Salvage treatment for venous aneurysm complicating vascular access arteriovenous fistula: use of an exoprosthesis to reinforce the vein after aneurysmorrhaphy.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery : the Official Journal of the European Society for Vascular Surgery. 40, 100-106 (2010).</li></ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à divulguer.

Cette étude révèle une ex vivo système veine de perfusion (EVP) d&#39;effectuer des études approfondies hémodynamiques dans les veines humaines. Ce système permet de veines saphènes sous perfusion des paramètres hémodynamiques déterminées en l&#39;absence de facteurs aggravants inflammatoires et de la croissance libérés par les cellules circulantes in vivo. Ainsi, il permet une meilleure compréhension des voies sous-jacents impliqués dans le contrôle de IH dans les veines humaines greffes 5,11,12,15. Perturbations hémodynamiques reproductibles et quantifiables sont limitées in vivo. Plusieurs procédures complexes de microchirurgie murins ont été décrits. En utilisant un modèle de dérivation de isogreffe par interposition d&#39;une veine cave d&#39;une souris donneuse dans le droit artère carotide commune et la création supplémentaire d&#39;une ligature sortie de branche, mi greffe ou une sténose de l&#39;artère carotide commune, le débit et SS aiguë a diminué et amélioré IH 3. Extérieur vers l&#39;intérieur par rapport remodelage peut en outre être interrogated l&#39;aide d&#39;un mi-focale par rapport à la sténose carotide commune distale 16. Dans les grands animaux (moutons, porcs, et babouin), pontages sont techniquement plus facile et représentent une approche intéressante pour tester des dispositifs à taille humaine pré-cliniques tels que le maillage utilisé dans la présente étude 8-10. Cependant, son coût et la rareté des outils moléculaires validées limitent l&#39;utilisation de ces stratégies. Enfin, ces manipulations de flux modifient constamment la tension de la paroi et ne parviennent pas à interroger un seul constituant. En outre, les relations complexes entre l&#39;hémodynamique et les systèmes immunitaire et endocrinien autres limitent l&#39;analyse d&#39;un seul acteur. Plusieurs questions se posent à l&#39;utilisation de l&#39;EVP. 1) de bas grade contamination bactérienne souvent accompagnée récolte de veine humaine et l&#39;absence ex vivo de cellules circulantes se présenter comme une cause importante d&#39;infection. Ceci est principalement empêché par le lavage des mains les pièces séparément, puis autoclavage tout le matériel avantutiliser. En outre, l&#39;assemblage est effectué en moins de 90 minutes et sous asepsie rigoureuse. 2) d&#39;étanchéité qui endure des stérilisations répétées. Pour cette raison, une construction rectangulaire PMMA-GS a été utilisé, ce qui évite l&#39;utilisation de joints et de limiter la déformation. 3) SS et la tension de paroi sont calculées en des points de temps définis, sur la base du rayon de lumière du vaisseau (histologie), l&#39;écoulement et la viscosité est constante. L&#39;intégration d&#39;une imagerie longitudinale (caméra haute définition, laser ou Doppler) qui surveille en permanence le diamètre de la veine et / ou le débit fournira des informations plus détaillées sur les variations de débit locales et de permettre des calculs de contraintes cycliques. 4) Les deux segments de veines parallèles peuvent avoir des différences non contrôlés dans leur respect de paroi et le rayon. Ainsi, on compare uniquement les segments d&#39;un même ordre d&#39;idée, et supposons que, sous la même pression, le motif de débit est similaire dans les deux segments. Dans cette étude, les veines ont été soumis à un écoulement laminaire pulsatile; Toutefois, 50% olésions hyperplasiques intima f se produisent dans les zones périanastomotique bout en face de la greffe de la veine, où l&#39;écoulement laminaire est perturbé. Des conditions de turbulence peuvent être modélisées avec l&#39;ajout d&#39;une deuxième pompe, non synchronisés avec la première pompe. Les futures études seront effectuées pour évaluer précisément l&#39;impact de la perturbation de l&#39;écoulement laminaire sur IH et l&#39;effet potentiellement bénéfique de grille de renfort. Fait intéressant, la structure flexible de la maille permet enveloppement circonférentiel au niveau des sites d&#39;anastomose, comme déjà réalisée pour réparer les fistules anévrisme 17 (figure 4). Ainsi, le maillage pourrait s&#39;avérer utile pour limiter la dilatation périanastomotique, la perturbation de l&#39;écoulement laminaire et par conséquent réduire IH sur les sites d&#39;anastomose. Cela peut être particulièrement bénéfique dans un pontage distal, souvent affecté par le diamètre inadéquation entre la veine et l&#39;artère tibiale ou une artère fibulaire. En résumé, la configuration illustrée ici permet perfusion parallèle de v humaineins, dans des conditions hémodynamiques identiques. Ces données démontrent que l&#39;utilisation d&#39;une maille de polyester macroporeux tubulaire externe est une méthode efficace pour limiter le développement de greffes veineuses IH en insérés dans un milieu artériel 11. Ce système peut profiter de plusieurs domaines de recherche. Surtout, il apparaît comme un outil puissant pour réaliser des études pré-cliniques destinés à tester la faisabilité et l&#39;efficacité des différentes approches pour réduire IH dans le matériel humain, et est un ajout précieux à des modèles animaux in vivo. Autres supports de prothèse ou mailles recouvertes avec des agents pharmaceutiques seront évalués en utilisant cette méthode 6-10. En outre, on pourrait envisager de tester des molécules pharmacologiques appliquées localement pour éviter IH dans les tissus humains, sous état proche physiologique. interventions de thérapie génique sont également réalisables, la transduction d&#39;un segment de veine pour surexprimer des gènes cibles ou de silence d&#39;intérêt. En conclusion, notre système va augmenter notre noncompré- de la contribution hémodynamique aux maladies de greffe de veine humaines. Il fournit une plate-forme innovante de tester de nouvelles stratégies thérapeutiques et peut se poser comme un «banc à côté de l&#39;outil de traduction.&quot;

Les maladies cardiovasculaires sont la principale cause de morbidité et de mortalité dans les pays occidentaux 1. Malgré les progrès réalisés dans les traitements endovasculaires, la chirurgie de pontage reste le pilier de thérapies contemporaines, ainsi plus d&#39;un demi-million de greffes veineuses sont effectuées chaque année aux États-Unis. Cependant, malgré des décennies de recherche, 30-60% de la baisse des greffes extrémité de la veine échouent dans les premières années en raison de l&#39;hyperplasie intimale (IH) 2. Les forces mécaniques, en particulier à faible contrainte de cisaillement (SS) et haute tension de la paroi, jouent un rôle essentiel dans l&#39;initiation et le développement de cette réponse hyperplasique 3,4. Pour résoudre ce problème, un ex vivo veines système de perfusion (EVP) a été généré pour étudier, dans des conditions strictement contrôlées hémodynamiques (pression et la contrainte de cisaillement), le comportement des veines saphènes humaines. Dans cette étude, après insertion dans la circulation artérielle analogue, l&#39;hypertension (moyenne = 100 mm Hg) a été suffisant pour stimuler prolifration et la migration des cellules musculaires lisses dans l&#39;intima (IH) 5. Études sur les mammifères ont suggéré l&#39;utilisation du renforcement externe comme une méthode efficace pour soutenir la &quot;veine artérialisée&quot; et contrecarrer l&#39;hémodynamique aigu change la veine faces une fois implanté dans un milieu artérielle. Le maillage empêché surdistension, des contraintes de cisaillement, et de réduire la tension de la paroi et par conséquent IH 6-10. Cependant, les mécanismes sous-jacents et son applicabilité aux veines humaines dans l&#39;amélioration de dérivation perméabilité n&#39;ont pas été entièrement caractérisé. Nos EVP ont été utilisées pour comparer, dans un état imitant les modifications une veine visages fois inséré dans un régime artérielle (stress et de pression à cisaillement élevé), le comportement des veines saphènes humaines dans l&#39;absence et la présence d&#39;un macroporeuse maille polyester tubulaire externe. En empêchant le remodelage pathologique et IH, le maillage a fourni la preuve de son efficacité clinique potentielle 11 </sup&gt;. Cette étude 1) présente un modèle ex vivo de veines saphènes humaines perfusion sous pression contrôlée et la contrainte de cisaillement 2) démontre que maille polyester macro-poreuse externe réduit IH et fournit des informations cruciales pour son application clinique potentielle.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1113">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:453px;">Name</td>
			<td style="width:371px;">Company</td>
			<td style="width:145px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:144px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 - Glutamax</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>61870-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"><a name="RANGE!A3">Penicilline/Streptomycine/Fungizone</a></td>
			<td>Bioconcept</td>
			<td>4-02F00-H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextran from Leuconostoc spp. 500 gr.</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>31390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tampon PBS CHUV pH 7.1-7.3 1 lt.</td>
			<td>Laboratorium und Grosse Apotheke Dr. G. Bichsel AG</td>
			<td>100 0 324 00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cryosectionning embedding medium - Tissue-Tek OCT Compound</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-373-65</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silicon Tubing (Peroxide) L/S 16 (96400-16 ) - 7.5m</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>MF0037ST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Y-splitter&#160;</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>Y-connector</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm Culture dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS430165-100EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 ml Falcon tube</td>
			<td>BD Bioscence</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 ml Falcon tube</td>
			<td>BD Bioscence</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gearing pump - Reglo-Z</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>SM 895&#160;</td>
			<td>&#160;App-Nr 03736-00194</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pump Head</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>MI0008&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Monitoring Kit TRANSPAC IV</td>
			<td>icumedical</td>
			<td>011-0J736-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20 mL Syringes</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>4612041-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Etibon 3-0 FS-2</td>
			<td>Ethicon- Johnson&#38;Johnson</td>
			<td>EH7346H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mesh ProVena 6-8mm</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>1105012-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl: Sodium Chlorure Solution perfusion 0.9% (100 ml)</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>534534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Masterflex L/S Standard Drive</td>
			<td>Cole-Parmer Instrument Co</td>
			<td>7521-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition card</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>PCI-6024 E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flowmeter module</td>
			<td>Transonic Systems Inc.</td>
			<td>TS410 and T402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stopcock with 3-ways</td>
			<td>BD Connexta Luerlock</td>
			<td>394600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Millex Filter</td>
			<td>Milian</td>
			<td>SE2M229I04</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

procedure for human saphenous veins ex vivo perfusion and external reinforcement

Le pilier de thérapies contemporaines pour une maladie étendue artérielle occlusive est pontage veineux. Cependant, sa durée de vie est menacé par une hyperplasie de l&#39;intima (IH) qui mène éventuellement à une occlusion des vaisseaux et échec de la greffe. Les forces mécaniques, en particulier à faible contrainte de cisaillement et haute tension de la paroi, sont pensés pour initier et de soutenir ces changements cellulaires et moléculaires, mais leur contribution exacte reste à démêler. Pour évaluer de façon sélective le rôle de la pression et la contrainte de cisaillement sur ​​la biologie de IH, un ex vivo système de perfusion (EVP) a été créé pour perfuser les segments de veines saphènes humaines sous régime artérielle (stress de cisaillement élevé et haute pression). D&#39;autres innovations techniques ont permis à la perfusion simultanée de deux segments de la même veine, on renforcé avec un maillage externe. Les veines ont été récoltées en utilisant une technique sans contact et immédiatement transférés au laboratoire pour le montage dans la EVP. Un segment de la isol fraîchementATED veine n&#39;a pas été perfusé (contrôle, jour 0). Les deux autres segments ont été perfusés pendant jusqu&#39;à 7 jours, un être complètement à l&#39;abri avec un 4 mm (diamètre) maillage externe. La pression, la vitesse d&#39;écoulement, et la fréquence du pouls ont été contrôlés en permanence et adaptés à reproduire les conditions hémodynamiques régnant dans l&#39;artère fémorale. A la fin de la perfusion, les veines ont été démontées et utilisées pour l&#39;analyse histologique et moléculaire. Sous conditions ex vivo, la perfusion à haute pression (artérielle, moyenne = 100 mm Hg) est suffisante pour générer IH et le remodelage des veines humaines. Ces altérations sont réduits en présence d&#39;un filet de polyester externe.

L&#39;EVP est un outil précieux pour évaluer de manière indépendante les forces hémodynamiques sur la veine saphène humaine greffe remodelage et IH. La figure 1 montre la chambre de perfusion et le support de la veine. Dans les figures 1A et B, le soutien de la veine avant (figure 1A) et après (figure 1B) assemblage, respectivement, sont représentés. Il se compose (de haut en bas) de 1 brut tube en acier inoxydable mesurant 9 cm, qui sert de support pour les deux pièces en forme de L qui peut facilement coulisser (de la gauche vers la droite) et fournit une technique fiable pour ajuster la taille de l&#39;appui de la veine. Chacune de ces pièces est titulaire d&#39;un disque de POM pour s&#39;adapter à un cylindre en acier (de connecteur veineuse) fixé en place par des vis intégrées (tête de flèche). Figure 1C-D montre la chambre de perfusion seul (C) et après l&#39;insertion du support de nervure (D). Sur la chambre d&#39;irrigation, les dépressions sont conçus pourmaintenir le support de la veine en place (en haut) et d&#39;éviter le vrillage du tube de raccordement qui entrent et sortent de la veine (en bas). La figure 2 montre des images en temps réel (Figure 2A) et une représentation schématique (figure 2B) de la EVP. La chambre de perfusion, les veines et les supports, ainsi que la colonne de pression, sont maintenus dans un environnement contrôlé (température, CO 2 et O 2), tandis que la pompe, l&#39;injecteur de charge, et des dispositifs de commande restent tous à l&#39;extérieur de l&#39;incubateur. La figure montre la pompe à engrenage (1) qui génère un signal impulsionnel commandé par un ordinateur (2), qui contrôle la vitesse d&#39;écoulement (3), la pression (4), et commande la pression diastolique minimale (5); deux segments d&#39;un même veine saphène sont connectés en parallèle à la pompe à perfusion à l&#39;intérieur des chambres de perfusion séparés (6a, 6b) placés dans un incubateur de culture cellulaire. Sur la figure 3,, L&#39;analyse montre que histomorphométrique renfort externe empêche l&#39;hyperplasie de l&#39;intima et média remodelage pathologique autrement observé après 7 jours sous haute pression (schéma artériel, = 100 mm Hg moyenne) perfusion. Dans la figure 3A, les coupes histologiques représentatives colorées pour l&#39;hématoxyline-éosine (HE) révèle le revêtement de la lumière par des noyaux de cellules endothéliales et les noyaux de SMC dans la couche de support dans toutes les conditions. Figures 3B-C montre représentant Van Gieson élastique Lamina ( VGEL) sections colorées. Sur la figure 3B, l&#39;intima est épaissie (IH) dans les veines perfusés à haute pression (moyenne = 100 mm Hg) pendant 7 jours par rapport au témoin non perfusées veines, un phénomène largement diminué en présence d&#39;une maille externe. Figure 3C illustre pathologique remodelage extérieur et des médias éclaircie dans les veines soumis à 7 jours de la pression artérielle. Ceci est en grande partie empêché par l&#39;armature externe. AILLEURSe, sur la figure 3D, trichrome de coloration de Masson (bleu = tissu conjonctif, rouge = muscle) associe ce remodelage pathologique avec la persistance de seulement l&#39;une des trois couches musculaires et l&#39;accumulation de cellules de muscle lisse dans la couche interne (intima). L&#39;armature externe préserve la distribution de la structure de support et de CML. La figure 4 illustre une application clinique actuelle de la maille externe. Un exemple illustratif est fourni par un renfort externe de la fistule artério-veineuse d&#39;anévrisme (accès d&#39;hémodialyse). Figure 4A montre une représentation temps-courant de l&#39;armature de la veine (du haut vers le bas). En premier lieu, le filet a été placé autour d&#39;un tube rigide tandis que l&#39;extrémité de la veine est fixée sur un mandrin (panneau supérieur). Ensuite, la veine a été tiré à travers le tube, grâce à la broche. Une fois que la veine a été mis en place, le tube a été retiré lentement, en laissant la maille autour de la veine (uREFPP et du milieu). Dans ce cas particulier, la procédure a été répétée sur les deux côtés des veines, et les veines segments et des renforts de maille ont été assemblés par une anastomose de bout en bout (panneau inférieur). Figure 4B offre une vue agrandie de la fin artério-veineuse anastomose -HDMI côté, montrant que le treillis est enroulé autour de l&#39;anastomose en l&#39;attachant le long de la paroi postérieure de l&#39;artère. <img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig1highres.jpg" width="500" /> Figure 1: Le support de la veine et de la chambre de perfusion. A. Le soutien de la veine est composé de 1 tube lisse, en forme de L 2-pièces, disques et cylindres (former du haut vers le bas). B. Le soutien de la veine D. La perfusion une fois assemblés. C. Vue de la chambre de perfusion. chambre est conçue pour maintenir en place le support de la veine et permet sa connexionion de la veine et tubes de liaison. <img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig2highres.jpg" width="500" /> La figure 2 ex vivo du système de perfusion. A. Le tout assembler EVP dans l&#39;incubateur de culture cellulaire. B. Représentation schématique. 1) la pompe générer une onde pulsatile cardioïde; 2) l&#39;ordinateur contrôlant la pression, le débit (type, taux et amplitude); 3) l&#39;appareil de mesure de débit; 4) du transducteur de pression - la ligne artérielle; 5) de l&#39;injecteur sous pression; 6) deux segments d&#39;un même veine saphène sont perfusés sans (6a) ou avec treillis d&#39;armature externe (6b). <img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig3highres.jpg" width="500" /> Figure 3 Le renforcement externe empêche l&#39;hyperplasie intimale. A. coupes histologiques représentatives colorées à l&#39;hématoxyline-éosine (HE). Bar représente 50 um. Colombie-Britannique. Coupes histologiques représentatives colorées pour l&#39;élastine (VGEL). l = m = lumière médias, IH = hyperplasie intimale. Bar représente 50 um. D. représentatifs des coupes histologiques colorées au trichrome de Masson. Bar représente 50 um. <img alt="Figure 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig4highres.jpg" width="500" /> Figure 4 Renforcement externe d&#39;une fistule d&#39;anévrisme. Photos A. Temps-cours de renforcement de la veine (de haut en bas). B. Vue agrandie de l&#39;anastomose de bout en côté artérioveineuse.

Watch this Scientific Journal Video about Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement at JoVE.com

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Les mécanismes conduisant au développement de l&#39;hyperplasie intimale (IH) et la veine échec de la greffe sont encore mal compris. Cette étude décrit un système ex vivo pour perfuser les veines humaines sous écoulement et pression contrôlée. En outre, l&#39;efficacité de renforcement de maille externe pour limiter le développement d&#39;IH a été évaluée.

Procédure pour saphènes humaines veines<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusion et renforcement externe

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

procedure-for-human-saphenous-veins-ex-vivo-perfusion-external

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

11.1K vues.  Brigham and Women's Hospital/Harvard Medical School.  Les mécanismes conduisant au développement de l'hyperplasie intimale (IH) et la veine échec de la greffe sont encore mal compris. Cette étude décrit un système ex vivo pour perfuser les veines humaines sous écoulement et pression contrôlée. En outre, l'efficacité de renforcement de maille externe pour limiter le développement d'IH a été évaluée. 

Vidéo: Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

Technique de Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Foie de perfusion pour l&#39;entreposage, de l&#39;évaluation et de réparation des marginaux greffes du foie

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Recherche

Médecine

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

Méthode de isolé<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Lung perfusion dans un modèle rat: Leçons tirées élaboration d&#39;un programme EVLP Rat

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial cells tend to lose hormone receptor expression. Widely used hormone receptor positive breast cancer cell lines are of limited relevance to the in vivo situation. Here, we describe an ex vivo model to study hormone action in the human breast. Fresh human breast tissue specimens from surgical discard material such as reduction mammoplasties or mammectomies are mechanically and enzymatically digested to obtain tissue fragments containing ducts and lobules and multiple stromal cell types. These tissue microstructures kept in basal medium without growth factors preserve their intercellular contacts, the tissue architecture, and remain hormone responsive for several days. They are readily processed for RNA and protein extraction, histological analysis or stored in freezing medium. Fluorescence activated cell sorting (FACS) can be used to enrich for specific cell populations. This protocol provides a straightforward, standard approach for translational studies with highly complex, varied human specimens.

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

We have developed a novel ex vivo model to study hormone action in the human breast. It is based on tissue microstructures isolated from surgical breast tissue specimens which preserve tissue architecture, intercellular interactions, and paracrine signaling.

Une<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modèle pour étudier action hormone dans le sein humain

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from cirrhosis to cardiovascular diseases). There is no effective treatment and the in vitro tools available do not mimic the in vivo situation rendering the progress of the out of control wound healing process still enigmatic.
To date, 2D and 3D cultures of fibroblasts derived from DD patients are the main experimental models available. Primary cell cultures have many limitations; the fibroblasts derived from DD are altered by the culture conditions, lack cellular context and interactions, which are crucial for the development of fibrosis and weakly represent the derived tissue. Real-time PCR analysis of fibroblasts derived from control and DD samples show that little difference is detectable. 3D cultures of fibroblasts include addition of extracellular matrix that alters the native conditions of these cells. 
As a way to characterize the fibrotic, proliferative properties of these resection specimens we have developed a 3D culture system, using intact human resections of the nodule part of the cord. The system is based on transwell plates with an attached nitrocellulose membrane that allows contact of the tissue with the medium but not with the plastic, thus, preventing the alteration of the tissue. No collagen gel or other extracellular matrix protein substrate is required. The tissue resection specimens maintain their viability and proliferative properties for 7 days. This is the first &#8220;organ&#8221; culture system that allows human resection specimens from DD patients to be grown ex vivo and functionally tested, recapitulating the in vivo situation.

Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

Dupuytren&#8217;s disease (DD) is a fibroproliferative disease of the palm of the hand. Here, we present a protocol to culture resection specimens from DD in a three-dimensional (3D) culture system. Such short-term culture system allows preservation of the 3D structure and molecular properties of the fibrotic tissue.

Human Dupuytren de<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Culture pour l&#39;étude de myofibroblastes et de matrice extracellulaire Interactions

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

Ex Situ Normothermique machine perfusion de foies de donneurs

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

The severe organ shortage has resulted in increased use of marginal kidney grafts for transplantation. This has triggered interest in alternative storage methods, since marginal grafts especially tolerate cold storage poorly. The technique of normothermic ex vivo kidney perfusion (NEVKP) represents a novel preservation method for kidney grafts prior to &#160;transplantation.

Normothermique<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kidney Perfusion pour la préservation du rein Greffes avant la transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are time consuming, expensive, and labor intensive. To overcome these obstacles, many research groups have turned to spheroid cultures of cancer cells. While useful, tumor spheroids or aggregates do not replicate cell-matrix interactions as found in vivo. As such, three-dimensional (3D) culture approaches utilizing an extracellular matrix scaffold provide a more realistic model system for investigation. Starting from subcutaneous or intracranial xenografts, tumor tissue is dissociated into a single cell suspension akin to cancer stem cell neurospheres. These cells are then embedded into a human-derived extracellular matrix, 3D human biogel, to generate a large number of microtumors. Interestingly, microtumors can be cultured for about a month with high viability and can be used for drug response testing using standard cytotoxicity assays such as 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and live cell imaging using Calcein-AM. Moreover, they can be analyzed via immunohistochemistry or harvested for molecular profiling, such as array-based high-throughput kinomic profiling, which is detailed here as well. 3D microtumors, thus, represent a versatile high-throughput model system that can more closely replicate in vivo tumor biology than traditional approaches.

Patient-derived xenografts of glioblastoma multiforme can be miniaturized into living microtumors using 3D human biogel culture system. This in vivo-like 3D tumor assay is suitable for drug response testing and molecular profiling, including kinomic analysis.

Génération de microtumeurs Utilisation 3D Biogel humain Système de culture et les cellules de glioblastome patients dérivés pour Kinomic Profilage et Testing Réponse Drug

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

Un petit modèle Animal de Perfusion hépatique normothermique Ex Vivo

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts

Small animal models are most commonly used in cardiovascular research due to the availability of genetically modified species and lower cost compared to larger animals. Yet, larger mammals are better suited for translational research questions related to normal cardiac physiology, pathophysiology, and preclinical testing of therapeutic agents. To overcome the technical barriers associated with employing a larger animal model in cardiac research, we describe an approach to measure physiological parameters in an isolated, Langendorff-perfused piglet heart. This approach combines two powerful experimental tools to evaluate the state of the heart: electrophysiology (EP) study and simultaneous optical mapping of transmembrane voltage and intracellular calcium using parameter sensitive dyes (RH237, Rhod2-AM). The described methodologies are well suited for translational studies investigating the cardiac conduction system, alterations in action potential morphology, calcium handling, excitation-contraction coupling and the incidence of cardiac alternans or arrhythmias.

The objective of this study was to establish a method for investigating cardiac dynamics using a translational animal model. The described experimental approach incorporates dual-emission optocardiography in conjunction with an electrophysiological study to assess electrical activity in an isolated, intact porcine heart model.

Optocardiographie et études d'électrophysiologie des coeurs perfusés d'Ex Vivo Langendorff

Small animal models are most commonly used in cardiovascular research due to the availability of genetically modified species and lower cost compared to ...

Determining and Controlling External Power Output During Regular Handrim Wheelchair Propulsion

The use of a manual wheelchair is critical to 1% of the world&#39;s population. Human powered wheeled mobility research has considerably matured, which has led to improved research techniques becoming available over the last decades. To increase the understanding of wheeled mobility performance, monitoring, training, skill acquisition, and optimization of the wheelchair-user interface in rehabilitation, daily life, and sports, further standardization of measurement set-ups and analyses is required. A crucial stepping-stone is the accurate measurement and standardization of external power output (measured in Watts), which is pivotal for the interpretation and comparison of experiments aiming to improve rehabilitation practice, activities of daily living, and adaptive sports. The different methodologies and advantages of accurate power output determination during overground, treadmill, and ergometer-based testing are presented and discussed in detail. Overground propulsion provides the most externally valid mode for testing, but standardization can be troublesome. Treadmill propulsion is mechanically similar to overground propulsion, but turning and accelerating is not possible. An ergometer is the most constrained and standardization is relatively easy. The goal is to stimulate good practice and standardization to facilitate the further development of theory and its application among research facilities and applied clinical and sports sciences around the world.

Accurate and standardized assessment of external power output is crucial in the evaluation of physiological, biomechanical, and perceived stress, strain, and capacity in manual wheelchair propulsion. The current article presents various methods to determine and control power output during wheelchair propulsion studies in the laboratory and beyond.

Détermination et contrôle de la puissance externe pendant la propulsion régulière en fauteuil roulant handrim

The use of a manual wheelchair is critical to 1% of the world&#39;s population. Human powered wheeled mobility research has considerably matured, which ...