Medición de los cambios dinámicos del pH glusómico en el Trypanosoma brucei vivo

El metabolismo de la glucosa es fundamental para el Trypanosoma brucei, pero se sabe poco sobre cómo las células detectan y responden a los cambios en los niveles de glucosa en el medio ambiente. Hemos desarrollado parásitos que expresan un biosensor de pH que nos permite monitorizar el pH glusómico en parásitos vivos, lo que ayudará a comprender las respuestas dinámicas de los parásitos a la fluctuación de nutrientes. Un desafío para este experimento sería la disponibilidad de un citómetro de flujo equipado con un lector de placas de microtitulación, así como los conjuntos de filtros apropiados para medir la fluorescencia del biosensor.

Además, T. brucei es un organismo del grupo de riesgo dos, por lo que el citómetro debe estar alojado dentro de una instalación de nivel de bioseguridad dos. Se ha descubierto que el nivel de pH de los glicosomas puede afectar a la glucólisis, ya que la hexoquinasa y la fosfofructoquinasa son sensibles al pH. Sin embargo, las sondas de pH que se utilizaron anteriormente no se dirigieron con precisión al glucosoma en forma de torrente sanguíneo.

Se necesitaba una mejor herramienta para estudiar la relación entre el pH glusómico y la glucólisis en esta etapa de la vida del parásito. El sensor pHluorin2-PTS1 es una herramienta que se localiza mejor en el glicosoma que las sondas químicas de pH en esta etapa de la vida. Es fácil de usar, ya que solo necesita inducir la expresión del sensor de pH durante la noche, y las células producirán y localizarán pHluorin2 en el glicosoma.

El uso de la citometría de flujo para medir la pHluorina2 aumenta el rendimiento y mejora las mediciones estadísticas en comparación con la microscopía.