El objetivo general de este protocolo es radiosintetizar un trazador de triptófano radiomarcado F18 mediante un enfoque de una olla y dos pasos. El radiotrazador puede encontrar una aplicación generalizada para la obtención de imágenes del metabolismo del triptófano. La técnica utiliza el radioisótopo con una vida media más larga, menos precursor de reacción y menos volumen de reacción, y una fase ambientalmente benigna para la purificación.
El radiotrazador se puede utilizar para el diagnóstico de diversos trastornos que afectan al cerebro, incluyendo pero no limitado a la epilepsia, trastornos neuropsiquiátricos, y neuro-oncología. Este método se puede aplicar a otros módulos de radioetiquetado disponibles comercialmente. Una vez que se reciba la solución de fluoruro F18, comience inspeccionando la caja de plomo en la superficie y, desde la distancia de un metro, registre las tasas máximas de exposición a la radiación.
Después de realizar una prueba de limpieza para asegurarse de que la caja de envío no esté contaminada, registre la dosis y el tiempo de fluoruro F18. Transfiera la solución de fluoruro F18 al sistema de síntesis de radioquímica. Conecte la línea de argón con una aguja corta y la línea de transferencia de fluoruro F18 con una aguja larga al vial de fluoruro F18.
Luego, cierre la puerta de vidrio de la celda caliente y la puerta de plomo. Encienda la línea de suministro de argón haciendo clic en Suministro de argón. Aumente la presión del argón y encienda la línea de empuje de fluoruro F18 para empujar el fluoruro F18 acuoso a través del cartucho ligero QMA.
Una vez que toda la radiactividad esté atrapada en el cartucho de luz QMA, y la lectura del detector de radiactividad sea constante, aumente la presión del argón y sople argón a través del cartucho durante otros cinco minutos para eliminar el exceso de agua. Después de apagar la línea de empuje de fluoruro F18, disminuya la presión del argón a cero y cambie la válvula de dos posiciones de seis puertos de la posición de captura de fluoruro F18 a la posición de elución. Abra el vial de reacción, encienda la posición MVP de entrada una línea de argón y empuje la solución de K222 y carbonato de potasio en la posición MVP de entrada un vial a través del cartucho de luz QMA para eliminar la radiactividad en el vial de reacción.
Cambie la posición de elución de fluoruro F18 a la posición de atrapamiento. Haga clic en el botón Calor para calentar el reactor a 110 grados centígrados, encienda la línea de argón de salida MVP posición cuatro que se conecta al reactor y evapore el disolvente en el vial de salida MVP posición cuatro. Haga clic en el botón Enfriar para enfriar el reactor a temperatura ambiente con dióxido de carbono comprimido.
Apague la línea de barrido, cambie la posición MVP de entrada uno a la posición dos y agregue el acetonitrilo anhidro en el vial dos. Dos enciendan la línea de barrido y el calentador para secar azeotropicalmente el fluoruro F18 a 110 grados centígrados. Una vez que el reactor alcance la temperatura ambiente, apague la línea de barrido, cambie la posición MVP de entrada dos a la posición tres y agregue el precursor de radiomarcado de tosilato en el vial tres.
Cierre el reactor y caliente las mezclas de reacción a 100 grados centígrados durante 10 minutos. Para evaporar el disolvente de reacción, una vez que el reactor se enfríe, encienda la línea de barrido y evapore el disolvente de reacción a 100 grados centígrados. Una vez que el reactor se enfríe, apague la línea de barrido y cambie la posición MVP de entrada tres a la posición cuatro.
Cuando se agrega la mezcla de ácido clorhídrico acetonitrilo, caliente la reacción a 100 grados Celsius durante 10 minutos para desproteger los grupos protectores terc-butilo y terc-butiloxicarbonilo en el precursor de radiomarcado. Para neutralizar la reacción, cuando el reactor alcance la temperatura ambiente, cambie la posición MVP de entrada cuatro a la posición cinco y agregue dos hidróxido de sodio molar a la mezcla de reacción y apague la línea de argón MVP de entrada. A continuación, comience a transferir la mezcla de reacción al archivo intermedio haciendo clic en el botón F en el MVP de salida para cambiar el MVP de salida de la posición de ventilación cuatro a la posición cinco, y luego haciendo clic en el botón F en el MVP de entrada para cambiar el MVP de entrada de la posición cinco a la posición seis.
Después de encender la línea de argón MVP de salida, empuje la mezcla de reacción a través de los cartuchos de óxido de aluminio neutro apilado y C8 hasta el vial intermedio instalado antes del bucle de muestra de HPLC. Para enjuagar el reactor, cambie la posición MVP de salida cinco a la posición seis, empuje la solución de enjuague en el vial de salida MVP posición seis a través del vial de reacción, los cartuchos y el vial intermedio, sucesivamente. A continuación, comience la purificación de la mezcla cambiando el bucle HPLC de la posición de inyección a la posición de carga y encendiendo la línea de argón MVP de entrada.
Cuando la mezcla se cargue en el bucle HPLC de cinco mililitros, cambie el botón Cargar a Inyectar, haga clic en Inyectar HPLC para iniciar el cromatograma HPLC a un caudal de tres mililitros por minuto y, a continuación, haga clic en el botón Monitor HPLC para acceder al cromatograma HPLC en tiempo real. Haga clic en el botón MVP de desviación para desviar la fracción de HPLC objetivo a la columna corta C18 en aproximadamente 12 minutos. Después de recolectar la radiactividad objetivo en la columna C18, cambie la válvula de desviación de cuatro puertos y dos posiciones a la posición de recolección de desechos y enjuague la columna quiral a una velocidad de cuatro mililitros por minuto durante seis minutos para eliminar el enantiómero menor D F18 FETrp y otras impurezas ultravioletas.
Haga clic en el botón MVP de desviación para desviar la fase móvil de HPLC a la posición MVP de formulación uno a tres mililitros por minuto. Observe que la fase móvil pasa a través de la columna quiral y la columna C18 para purificar L-F18 FETrp retenido en la columna C18. Aproximadamente a los 32 a 34 minutos, recoja la fracción objetivo en la posición MVP de la formulación dos viales.
A continuación, empuje la solución de dos viales de la posición MVP de la formulación a través de la línea de administración y el filtro estéril en el vial de dosis final. Evalúe la actividad y el volumen de la dosis final después de retirar el filtro estéril. Enjuague el sistema con agua ultra pura seguida de etanol a un caudal de cuatro mililitros por minuto durante al menos 15 minutos por lavado.
Apague la bomba HPLC y la caja del PLC, cierre el programa, apague la línea aérea comprimida, la línea de argón, la línea de dióxido de carbono y la potencia principal del módulo. Retire aproximadamente 0,1 mililitros de la dosis final en un inserto de 0,2 mililitros de un vial de control de calidad. Ejecute la muestra caliente como se describe el programa de secuencia parcial en el manuscrito de texto.
Analizar los datos de control de calidad calculando las purezas químicas y radioquímicas en el exceso de valor enantiomérico y la actividad molar. Después de determinar el valor de pH, suelte la dosis si todos los resultados de las pruebas pasan el rango aceptable. Se muestran los cromatogramas de HPLC representativos para el control de calidad.
Los picos insignificantes entre el volumen vacío en 10 minutos del programa se detectaron en el cromatograma en blanco. La referencia estándar no radiomarcada L-fluoroetilo-triptófano mostró la presencia de un solo isómero bien separado de la referencia estándar de su contraparte D. La dosis final de triptófano L-F18 mostró alta pureza química y pureza radioquímica.
Las pruebas de estabilidad del producto final a la concentración de dosis más alta durante hasta ocho horas mostraron que el triptófano L-F18 era estable en términos de pureza química, pureza radioquímica, exceso enantiomérico y valor de pH. Las purezas químicas y radioquímicas superiores al 95% se lograron utilizando este protocolo. Se utilizan dos columnas para la purificación del trazador.
Recuerde cambiar a la columna C18 para eliminar las impurezas químicas. Podemos adaptar rápidamente este método a la producción clínica del radiotrazador de triptófano marcado con flúor-18.
