Este protocolo es importante porque proporciona una técnica integral y de bajo costo efectivo en el tiempo. Responde a elementos clave de la investigación traslacional y categoriza los datos de los componentes tanto a nivel individual como grupal. Esta técnica es ventajosa debido a la cantidad total de información que se puede extraer con respecto al perfil general del animal.
Esto incluye los componentes de categorización y las conclusiones posteriores. Esta técnica podría proporcionar información sobre una amplia gama de áreas de investigación, incluidas la cardiología, la neurología y la farmacología. Esta técnica no es únicamente aplicable a los estudios reproductivos.
Comience por manejar la rata con una sujeción apropiada para la edad, como la sujeción de estilo de compresión para ratas adolescentes, colocando al sujeto contra la región superior del pecho con la nariz apuntando hacia abajo en el suelo. Exponga el canal vaginal del sujeto flexionando suavemente la cola antes de insertar la jeringa. Mientras mantiene la jeringa firme con el dedo índice y el dedo medio, inserte la punta de la jeringa en el canal vaginal en un ángulo paralelo a él, expulse lentamente el cloruro de sodio en el canal empujando el émbolo hacia adentro con el pulgar.
Extraiga el cloruro de sodio del canal vaginal tirando del émbolo de la jeringa lejos del revestimiento epitelial. Utilice los criterios para cada tipo de célula para caracterizar las células presentes en la muestra y registrar los hallazgos. Un epitelial queratinizado nucleado o células epiteliales cuantificadas aparecerá dentada o con bordes angulares.
A pesar de la falta de núcleos, puede mostrar áreas redondas de luz dentro de la célula que representan donde una vez estuvo presente un núcleo llamado núcleo fantasma. Los grandes epiteliales nucleados, o células LNE, son típicamente células de forma redonda a poligonal encerradas por bordes irregulares dentados o angulares. Sus núcleos pueden variar de intactos a degenerados o picnóticos relacionados con la condensación irreversible de la cromatina en el núcleo de una célula que sufre muerte o deterioro.
Los núcleos ocupan menos espacio que el citoplasma dentro de la célula, con una relación nuclear a citoplasmática más baja que las células epiteliales pequeñas. Los leucocitos son células esféricas compactas. El más pequeño en comparación con todos los demás tipos de células descritas.
Las células SNE son células no queratinizadas con núcleos redondos que ocupan un espacio más grande que el citoplasma dentro de la célula, creando una mayor proporción de núcleo a citoplasma en relación con las células epiteliales grandes. Utilice la objetivación inferior, como cuatro X para obtener una vista representativa de la disposición general de las celdas. Registre si las células están agrupadas, dispersas uniformemente o dispersas aleatoriamente, y anote la organización específica de cada tipo de célula.
Luego, estime visualmente y registre la cantidad total de células, como una pizca, moderada o numerosa, y las cantidades de células individuales como un porcentaje de cada tipo de célula presente. Con estos componentes de categorización combinados, determine qué etapa del ciclo estral se presenta. Dentro de la etapa de diestro, se puede ver que los leucocitos son el tipo de célula dominante o el único.
Estos generalmente se organizan de manera agrupada al comienzo de, pero más dispersos en las últimas etapas. La cantidad total de células puede ser comparativamente baja, con mayor frecuencia en las últimas etapas del período de diestro en el segundo o tercer día. Se pueden observar hebras concentradas de leucocitos debido a la alta cantidad de moco que puede estar presente en esta etapa.
Se pueden observar pequeños grupos de hebras celulares de células SNE que acompañan a los leucocitos durante las últimas fases de la transición al proestro. El fluido vaginal, cuando se hace la transición, se hace la transición completa y se sale del diestro, parece viscoso y opaco. Durante la etapa de proestro, las células SNE son las células dominantes, mientras que los leucocitos, LNE y células AKE se pueden encontrar en números bajos.
Las células SNE generalmente están dispuestas en grupos, láminas o hebras durante esta etapa y tienen una apariencia granular que se puede observar a mayor aumento. El fluido vaginal se vuelve no viscoso y transparente una vez que el sujeto pasa completamente a la etapa de proestro. Las células AKE son dominantes durante la etapa estral, con una disminución en las células SNE y un aumento general en el número y tamaño de las células a medida que continúa el estro.
Las células AKE a menudo se agrupan en forma de barras de queratina. También pueden contener núcleos fantasmas que pueden dispersarse más en la transición del proestro al meteestro. El fluido vaginal no es viscoso y transparente a medida que las ratas están en transición, transición completa y transición fuera del estro.
A medida que las ratas hacen la transición al metestro, busque todos los tipos de células, aunque a menudo hay una mayor cantidad de células SNE y LNE en comparación con las LEU. Se observa una mayor cantidad de desechos durante el metestro y las transiciones debido a la desintegración celular epitelial después del estro. Durante esta etapa, hay una falta de disposición consistente ya que se ven todos los tipos de células y en varias cantidades.
Sin embargo, los leucocitos que se empaquetan cerca de las células epiteliales en las etapas iniciales pueden volver a la disposición agrupada cuando se hace la transición al diestro. El fluido vaginal aparece no viscoso y transparente en la etapa. Y cambia a una apariencia más viscosa y opaca mientras se pasa al diestro.
Dentro de cada etapa, se pueden ver muchas variaciones, por ejemplo, dentro de la etapa de diestro, se observaron tanto células epiteliales como leucocitos. En los arreglos, también se observaron hebras de moco agrupadas, compuestas de leucocitos, y aglutinamiento inicial de leucocitos, y un posterior desembolso aleatorio o incluso de desembolso. Al recolectar la muestra de fluido vaginal, hubo colecciones no representadas que justificaron lavados repetidos, que incluyeron la extracción de células escamosas de la pared del canal vaginal debido a la inserción inadecuada de la jeringa.
Una colección de escombros exclusivos, un recuento de células que era demasiado bajo para categorizar y aquellos que estaban fuera de foco. Es común graficar las progresiones de etapa en gráficos de barras, lo que permite a los investigadores examinar el patrón general del ciclo e identificar la ciclicidad. Y las muestras se pueden analizar por la duración del ciclo y el patrón de progresión de la etapa.
Los perfiles de ciclo estral se pueden crear utilizando un gráfico de barras apiladas, ya sea rastreando la progresión de la etapa por rata o por cohorte. Donde los componentes de categorización para cada día se grafican por día o por etapa. Los datos del componente de categorización también se pueden organizar numéricamente para crear rangos estandarizados y recopilar estadísticas.
Practique la técnica para que sea mínimamente invasiva y escanee el portaobjetos del microscopio en busca de muestras representativas para disminuir el sesgo de selección. En general, recuerde, no existe tal cosa como un ciclo normal. Siguiendo este procedimiento, se podrían introducir variables experimentales, como el ejercicio y los paradigmas conductuales.
Esto permitiría a la investigación establecer de antemano el ciclo de referencia de los animales y detectar respuestas hormonales a intervenciones específicas posteriores. Este método permite a los investigadores explorar la conexión entre las hormonas esteroides sexuales y otros sistemas corporales. Un ejemplo de esto es cómo los receptores cardíacos para las hormonas esteroides sexuales se relacionan con la funcionalidad del sistema.
