Este protocolo induce hiperglucemia en pescados de la cebra en un patrón de la subida y de la caída que mímico la hiperglucemia que se considera en el tipo diabetes dos. La principal ventaja de esta técnica es que se trata de una técnica no invasiva que permite asegurar que la hiperglucemia es la causa de las alteraciones observadas en los peces hiperglucémicos. Este protocolo se podría potencialmente utilizar para explorar las avenidas terapéuticas o los productos farmacéuticos que apuntan complicaciones de la hiperglucemia.
Este protocolo tiene muchos pasos, pero cuando los pasos se siguen correctamente y con cuidado, debería convertirse rápidamente en una segunda naturaleza. Recuerde, sin embargo, siempre tratar a los animales con suavidad y humanidad a lo largo de todo el protocolo. Comience por establecer seis tanques, dos para cada grupo experimental.
Utilice tanques de dos litros, si el número total de peces es inferior a 20 y tanques de cuatro litros si el número total de peces es superior a 20. Etiquete uno de los dos tanques, el tanque de alojamiento y el otro tanque de solución. Mantenga los tanques en un baño de agua a 28 a 29 grados Centígrados para mantener la temperatura del agua.
El primer día, coloque los peces en sus respectivas soluciones de tratamiento durante 24 horas. El segundo día, transfiera los peces de sus soluciones de tratamiento al agua durante 24 horas. El tercer día, transfiera los peces del agua a las soluciones de tratamiento.
Continúe con esta exposición alterna durante el resto del experimento. Transferencia diaria de peces de control tratados con agua de agua a agua. Asegúrese de que los peces sean alimentados y transferidos dentro de la misma ventana de dos horas cada día durante la duración del experimento.
Transfiera los peces de cada grupo de tratamiento del tanque de alojamiento al tanque de solución correspondiente utilizando una red de pescado estándar. Coloque el tanque que contiene los peces de nuevo en el baño de agua y reemplace la piedra de aire y la tapa del tanque. Este tanque es ahora el tanque de alojamiento y el tanque que anteriormente contenía el pez es ahora el tanque de solución.
Deseche la solución vieja y limpie el tanque junto con las tapas del tanque, las líneas de aire, las piedras de aire y las redes para evitar la acumulación de glucosa y manitol. Use agua y una esponja dedicada para cada condición de tratamiento para limpiar adecuadamente los tanques. Seque los tanques de solución recién limpiados con una toalla de papel y prepare las soluciones para el día siguiente usando este tanque.
Asegúrese de que los demás elementos estén secos y separados por los grupos de tratamiento apropiados. Para preparar las soluciones de azúcar, llene cada tanque de solución con dos o cuatro litros de agua del sistema. Mida la cantidad correcta de glucosa y manitol usando una báscula de carga superior y botes de pesaje separados para cada producto químico.
Agregue la alícuota de glucosa o manitol pesada al tanque de solución limpia apropiado. Revuelva las soluciones con barras de agitación de vidrio separadas hasta que los azúcares se disuelvan por completo. A continuación, devuelva los tanques de solución al baño de agua y cúbralos con sus tapas correspondientes.
Para preparar la solución de agua, llene los tanques experimentales con agua del sistema Devuelva estos tanques de solución al baño de agua y cúbralos con sus tapas correspondientes. Los valores del azúcar de sangre fueron elevados perceptiblemente después de tratamientos de la glucosa de cuatro semanas y de ocho semanas. Con hiperglucemia definida como tres veces los promedios de control de los grupos tratados con agua y manitol tratados.
El tejido retiniano recogido después de cuatro semanas de hiperglucemia tenía un aumento en niveles ácidos fibrilosos glial de la proteína o de GFAP. La expresión de GFAP se observa en las células gliales de Mueller en la retina, que se alteran en la retinopatía diabética. Este aumento en GFAP fue asociado a un aumento en niveles nucleares del kappaB del factor.
Sugiriendo que la hiperglucemia inducida acciona una respuesta inflamatoria y un gliosis reactivo. Las grabaciones del ERGIO después de cuatro semanas del tratamiento identificaron una respuesta disminuida en las retinas tratadas glucosa comparadas a los controles tratados manitol. Las amplitudes del fotorreceptor y de los componentes bipolares de la célula fueron disminuidas en pescados hyperglycemic.
Este procedimiento se puede complementar con otras pruebas de hiperglucemia. Por ejemplo, un ensayo de memoria se puede utilizar para observar los déficits cognitivos o registrar respuestas basadas en la visión, como la respuesta optomotora para evaluar las complicaciones basadas en la visión. Una vez establecida esta técnica, nuestro laboratorio pudo utilizarla para estudiar complicaciones inducidas por hiperglucemia en el modelo de pez cebra.
Observamos estas complicaciones relativamente rápidamente, después de cuatro semanas del tratamiento.
