JoVE Journal

Bioengineering

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Un protocolo para múltiples genes Knockout en ratón Intestinal Organoids utilizando un CRISPR-concatemer

Este protocolo describe los pasos para la clonación de múltiples ARN guía único en un guía de ARN concatemer vector, que es de uso particular en la creación de múltiples gen knockouts utilizando CRISPR / Cas9 tecnología. La generación de knockouts dobles en organoides intestinales se muestra como una posible aplicación de este método.

Capítulos en este video

0:05

Title

0:50

Cloning of gRNAs into the CRISPER-concatemer Vector

3:40

Assessing Success of Cloning by Restriction Digest

5:28

Preparing Intestinal Organoids for Electroporation

8:08

Electroporation

10:36

Results: Successful Generation of CRISPER-concatemers and Electroporation of Intestinal Organoids

11:24

Conlcusion

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