This work is funded by the Swiss National Foundation (31_138429) and Synapsis Foundation for the support of research on Alzheimer&#8217;s disease.

Todos los procedimientos con animales están en conformidad con la Directiva de la UE 2010/63 / UE relativa a la protección de los animales utilizados para fines científicos y son aprobados por el Comité local de Cuidado de Animales (Cantón de Friburgo, Suiza). 1. Preparación Animal <ol><li> Los animales experimentales <ol><li> Realizar experimentos sobre tipo salvaje adulto de sexo masculino y de ratones transgénicos (C57BL / 6 de fondo) de 3-5 meses de edad. Los tres grupos de ratones corresponden a los controles de tipo salvaje (littermate grupo A, Jagged1 flox / flox 19) y dos líneas condicionales de ratón KO (grupo B, C y Jagged1ncKO, Jagged1gcKO). </li><li> Los ratones en condiciones de laboratorio estándar en una habitación ventilada, con un ciclo de oscuridad / luz controlada 12 horas y proporcionan alimento y agua ad libitum. </li></ol></li></ol> 2. Configuración Experimental <ol><li> Arena Experimental <ol><li> Para el ámbito experimental, utilizar una jaula ratón esterilizada limpia (36 cm largo x 20.5 cm de ancho x 13.5 cm de altura) (Figura 1). </li><li> Asigne a cada ratón a una jaula numerada con ropa de cama fresca, 3 cm de alto. Si se vuelven a utilizar jaulas, como en la prueba de sensibilidad al olor, tome las siguientes medidas para evitar la contaminación cruzada entre los olores y ratones. <ol><li> Marque el lado del agua. </li><li> Limpiar las paredes estrechas de las jaulas con dos papeles de seda rociadas con 70% de etanol, uno para cada lado. </li><li> Apilar las jaulas de acuerdo con el genotipo de los ratones y almacenar temporalmente bajo una campana laminar. </li></ol></li></ol></li><li> Cámara <ol><li> Montar una cámara en un trípode personalizada con el objetivo a 58 cm de la parte inferior de la jaula (Figura 1A). Fijar la posición del trípode y la jaula y delimitar con marcas para permitir que la cámara se centra en la parte superior de la jaula. </li><li> Grabar videos en 320 píxeles x 240 píxeles, 15,08 fotogramas por segundo como archivos MOV. </li></ol></li><li> Olores <ol><li> Resuspender el scents, cuando se indique, en el disolvente en el que son solubles. </li><li> Para la prueba de preferencia de uso de mantequilla de maní. Resuspender la mantequilla de cacahuete en aceite de cacahuete (10% w / v). </li><li> Para la utilización prueba de evitación puro 2-metilbutírico (2-MB) ácido (98%). </li><li> Para la prueba de sensibilidad, utilizar orina femenina de la misma colonia ratón y de fondo (C57BL / 6). <ol><li> Por conveniencia recoger la orina 1-2 días antes de la prueba olfativa. Restringir y mantenga pulsado el ratón debajo de la capilla con su vientre encima de la rejilla de la jaula. Bajo la rejilla jaula colocar una placa de Petri de plástico para recoger las gotas de orina. </li><li> Recoger la orina de cada mujer en un tubo de 1,5 ml y mezclar todas las muestras de orina para normalizar la variabilidad entre animales. Almacenar a -20 ° C hasta su uso. </li><li> En el día del experimento, descongelar la orina y realizar 4 diluciones en agua doblemente destilada a un factor de dilución de 10 (1:10, 1: 100, 1: 1.000; 1: 10.000). </li></ol></li></ol></li></ol>3. Las pruebas olfativas Nota: En este protocolo olores han sido elegidos deliberadamente que se perciben como atrayentes fuertes (mantequilla de maní y orina femenina) o repelente fuerte (ácido 2-MB) 15. Es importante para llevar a cabo la preferencia y las pruebas de sensibilidad a los olores agradables antes de la prueba de evitación para eliminar la posibilidad de cualquier interferencia con el comportamiento olfativo. Sin embargo, en aras de la simplicidad, en este trabajo, prueba de preferencia y la evitación será tanto se describe en la prueba de percepción. Cada sesión de comportamiento comienza con una fase de habituación. <ol><li> La habituación fase <ol><li> Colocar el animal en la jaula asignado limpia y se deja explorar durante 5 min (Figura 1B). Desde el entorno de la jaula experimental es familiar a la jaula de alojamiento, este corto período de tiempo es suficiente para permitir la habituación. </li><li> Si se completa la prueba de sensibilidad en un solo día, realice habituación sólo una vez antes de la application de la más alta olor diluido. Si la prueba de sensibilidad se lleva a cabo en diferentes días, en cada día se necesita una fase de habituación en una nueva jaula limpia. </li></ol></li><li> Prueba de Percepción <ol><li> Después de la habituación, activar la cámara e inmediatamente pipetear 60 l de la agradable aroma (mantequilla de maní) y 60 l de la olor neutro (agua del grifo) sobre las paredes opuestas de la jaula en alrededor de 10 cm desde la parte inferior (Figura 1C). </li><li> Deje que el ratón explorar los olores durante 2 min (Figura 1D). A partir de entonces, apague la cámara. </li><li> En este punto, continúe con la próxima ratón a partir de la fase de habituación. Realizar la prueba de evitación exactamente de la misma manera mediante la aplicación de 60 l de la olor repelente (ácido 2-MB) y 60 l de agua. </li></ol></li><li> Prueba de sensibilidad <ol><li> Evaluar el umbral de atracción de ratones macho a concentraciones crecientes de orina femenina en el siguiente orden: 1: 10.000; 1: 1.000; 1: 100; 1:10 y en la orina pura. </li><li> Después de la habituación, exponer cada ratón para la mayor dilución pipeta por el experimentador como se describe anteriormente en 3.2.1. </li><li> Registre el comportamiento exploratorio de la orina frente de agua, dentro de un plazo de 2 minutos en una cámara de vídeo. Después de todas las cohortes ratones son la prueba de la mayor dilución (1: 10.000), exponerlo a una mayor concentración de la orina, como se indicó anteriormente. </li></ol></li></ol> 4. Post-hoc de análisis de datos Nota: Todas las pruebas de comportamiento descritos se procesan post hoc siguiendo las instrucciones de análisis de datos. <ol><li> Abrir archivos MOV en ImageJ para sistemas Windows <ol><li> Instalar Quick Time para Java usando la configuración personalizada de http://www.apple.com/quicktime/download. </li><li> Instale el plugin de Quick Time desde el sitio web ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/qt-capture.html). </li><li> Importe el QTJava.zip (C: Archivos de programa QuickTime QTSystem) en las extens bibliotecaión de ImageJ (.ImageJ jre lib ext). </li><li> Copiar también el QTJava.zip en la carpeta plugins y cambiarle el nombre como QTJava.jar. </li><li> Instale los seis guiones adjuntos en la carpeta Macros (ImageJ plugins Macros). </li><li> Abrir ImageJ y compilar y ejecutar el plugin de Quick Time, a partir de entonces cerca ImageJ. </li><li> Reabrir ImageJ y abra el archivo MOV utilizando Archivo&gt; Importar&gt; usando Quick Time. </li></ol></li><li> Ajuste de vídeo <ol><li> Una vez que el archivo de vídeo se abre en ImageJ, cortar el vídeo con el fin de obtener una constante exploración 2 min desde el momento en que el experimentador ha pipetearon los odorantes en la jaula (T0). Identificar la estructura correspondiente al T0 y quitar los marcos anteriores utilizando incrementos de 1 (ImageJ imagen Pilas ToolsSlice removedor). Utilice el mismo comando para eliminar todas las tramas que superan la exploración 2 min. </li><li> Asegúrese de que la jaula está centrado y si es necesario, utilice la Imagen&gt; Transformar&gt; comando Rotar para alinearlo. </li></ol></li><li> Véaseo Procesamiento Nota: El procesamiento de vídeo es totalmente asistida por ordenador y usa comandos macros que acompañan este documento. <ol><li> Con el fin de restringir el área en la jaula de un 127 píxeles x 218 píxeles Tamaño de ejecutar el Paso 1 macro desde el Plugin&gt; Macros&gt; Ejecutar comando. Mueva el rectángulo fijo sobre la jaula (Figura 2, Paso 1). </li><li> Recortar el área de la jaula en la región de interés (ROI) con el Paso 2 macro (Figura 2, Paso 2). </li><li> Utilice la macro Paso 3 para extraer la imagen del ratón del fondo mediante la asignación de una señal de umbral, eliminación de puntos y el filtrado de la varianza de la señal. Los valores de salida en la trama eje Z indican los valores de gris medio, correspondiente a la intensidad de la sombra del ratón en movimiento dentro de la ROI de la &quot;cámara de agua&quot; durante la exploración 2 min. Copie los resultados en una hoja de cálculo denominada según el retorno de la inversión en un archivo de hoja de cálculo (Figura 2, Paso 3). </li><li> Utilice el Paso 4 macro paraextraer los valores medios de grises el ratón en la ROI &quot;cámara de olor&quot;. Copie los resultados en una hoja de cálculo denominada según el retorno de la inversión en la misma hoja de cálculo como en 4.3.3 (Figura 2, Paso 4). </li><li> Con el fin de restringir aún más el análisis del movimiento del ratón en el retorno de la inversión &quot;perímetro agua&quot; utilizar el Paso 5 macro. Copie el resultado en la hoja de cálculo llamado según el retorno de la inversión en la misma hoja de cálculo como en 4.3.3 (Figura 2, Paso 5). </li><li> Para restringir el análisis del movimiento del ratón en el retorno de la inversión &quot;olor perímetro&quot; utilizar el Paso 6 macro. Copie el resultado en la hoja de cálculo llamado de acuerdo con el archivo de hoja de cálculo de retorno de la inversión como en 4.3.3 (Figura 2, Paso 6). </li><li> Procesar todos los vídeos y comprobar la consistencia en el número de fotogramas por animales. Aquí, registrar todos los animales de 1810 tramas correspondientes a una sesión de exploración de 2 min. </li><li> Para cada animal y para cada tipo de ROI con marcos va de gris mediolues mayor que 0. Divide el número de fotogramas por los valores correspondientes a 1 segundo y obtener los segundos transcurridos en cada retorno de la inversión. </li></ol></li></ol> 5. Análisis estadístico <ol><li> Para cada prueba verificar la homogeneidad de la varianza dentro de grupos / genotipos mediante la prueba de Bartlett utilizando la fórmula disponible en http://www.real-statistics.com/one-way-analysis-of-variance-anova/homogeneity-variances/. </li><li> En la prueba de la atracción y evitación, realizar comparaciones entre los tiempos pasados ​​con agua frente olor dentro de un grupo utilizando la prueba t de Student no direccional asumiendo varianzas iguales o desiguales en función de los resultados de la prueba de Bartlett. Compare los tiempos pasados ​​con los olores restados por el tiempo que pasa con el agua entre los genotipos mediante un modelo lineal con la prueba post-hoc de Bonferroni. </li><li> En la prueba de sensibilidad a analizar las comparaciones del tiempo pasado con el olor restado del tiempo pasado con finalesr entre los grupos en un diluciones específicas de la orina por un modelo lineal con la prueba post-hoc de Bonferroni. Comparar la sensibilidad entre los grupos a las concentraciones crecientes de olor en un 2-Way ANOVA con repeticiones con test post-hoc de Bonferroni. </li><li> La interacción entre genotipos y tratamientos en la prueba de la atracción y la evasión son investigados por 2 vías ANOVA con test post-hoc de Bonferroni. </li></ol>

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	<li>Doty, R. L., Kamath, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influences+of+age+on+olfaction:+a+review.">The influences of age on olfaction: a review.</a> Cognitive Science. 5, 20 (2014).</li><li>Mesholam, R. I., Moberg, P. J., Mahr, R. N., Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfaction+in+neurodegenerative+disease:+a+meta-analysis+of+olfactory+functioning+in+Alzheimer&#8217;s+and+Parkinson&#8217;s+diseases.">Olfaction in neurodegenerative disease: a meta-analysis of olfactory functioning in Alzheimer&#8217;s and Parkinson&#8217;s diseases.</a> Archives of Neurology. 55 (1), 84-90 (1998).</li><li>Moberg, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+Dysfunction+in+Schizophrenia:+A+Qualitative+and+Quantitative+Review.">Olfactory Dysfunction in Schizophrenia: A Qualitative and Quantitative Review.</a> Neuropsychopharmacology. 21 (3), 325-340 (1999).</li><li>Kov&#225;cs, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+olfactory+dysfunction+in+aging+and+neurodegenerative+disorders.">Mechanisms of olfactory dysfunction in aging and neurodegenerative disorders.</a> Ageing Research Reviews. 3 (2), 215-232 (2004).</li><li>Barrios, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfaction+and+neurodegeneration+in+HD.">Olfaction and neurodegeneration in HD.</a> Neuroreport. 18 (1), 73-76 (2007).</li><li>Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfaction+in+Parkinson&#8217;s+disease+and+related+disorders.">Olfaction in Parkinson&#8217;s disease and related disorders.</a> Neurobiology of Disease. 46 (3), 527-552 (2012).</li><li>Doty, R. L., Shaman, P., Dann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+University+of+Pennsylvania+Smell+Identification+Test:+a+standardized+microencapsulated+test+of+olfactory+function.">Development of the University of Pennsylvania Smell Identification Test: a standardized microencapsulated test of olfactory function.</a> Physiology &amp; Behavior. 32 (3), 489-502 (1984).</li><li>Devanand, D. p., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+Deficits+in+Patients+With+Mild+Cognitive+Impairment+Predict+Alzheimer&#8217;s+Disease+at+Follow-Up.">Olfactory Deficits in Patients With Mild Cognitive Impairment Predict Alzheimer&#8217;s Disease at Follow-Up.</a> American Journal of Psychiatry. 157 (9), 1399-1405 (2000).</li><li>Conti, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+Identification+Deficit+Predicts+Clinical+Conversion+from+Mild+Cognitive+Impairment+to+Dementia+Due+to+Alzheimer&#8217;s+Disease.">Odor Identification Deficit Predicts Clinical Conversion from Mild Cognitive Impairment to Dementia Due to Alzheimer&#8217;s Disease.</a> Archives of Clinical Neuropsychology. 28 (5), 391-399 (2013).</li><li>Keller, A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Better+Smelling+Through+Genetics:+Mammalian+Odor+Perception.">Better Smelling Through Genetics: Mammalian Odor Perception.</a> Current opinion in neurobiology. 18 (4), 364-369 (2008).</li><li>Brai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch1+activity+in+the+olfactory+bulb+is+odour-dependent+and+contributes+to+olfactory+behaviour.">Notch1 activity in the olfactory bulb is odour-dependent and contributes to olfactory behaviour.</a> European Journal of Neuroscience. 40 (10), 3436-3449 (2014).</li><li>Larson, J., Hoffman, J. S., Guidotti, A., Costa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+discrimination+learning+deficit+in+heterozygous+reeler+mice.">Olfactory discrimination learning deficit in heterozygous reeler mice.</a> Brain Research. 971 (1), 40-46 (2003).</li><li>Alonso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+Discrimination+Learning+Increases+the+Survival+of+Adult-Born+Neurons+in+the+Olfactory+Bulb.">Olfactory Discrimination Learning Increases the Survival of Adult-Born Neurons in the Olfactory Bulb.</a> The Journal of Neuroscience. 26 (41), 10508-10513 (2006).</li><li>Wesson, D. W., Keller, M., Douhard, Q., Baum, M. J., Bakker, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+urinary+odor+discrimination+in+female+aromatase+knockout+(ArKO)+mice.">Enhanced urinary odor discrimination in female aromatase knockout (ArKO) mice.</a> Hormones and behavior. 49 (5), 580-586 (2006).</li><li>Kobayakawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb.">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450 (7169), 503-508 (2007).</li><li>Witt, R. M., Galligan, M. R., Despinoy, J., Segal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+Behavioral+Testing+in+the+Adult+Mouse.">Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (23), (2009).</li><li>Lee, A. W., Emsley, J. G., Brown, R. E., Hagg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marked+differences+in+olfactory+sensitivity+and+apparent+speed+of+forebrain+neuroblast+migration+in+three+inbred+strains+of+mice.">Marked differences in olfactory sensitivity and apparent speed of forebrain neuroblast migration in three inbred strains of mice.</a> Neuroscience. 118 (1), 263-270 (2003).</li><li>Page, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computerized+assessment+of+social+approach+behavior+in+mouse.">Computerized assessment of social approach behavior in mouse.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 3, 48 (2009).</li><li>Nyfeler, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Jagged1+signals+in+the+postnatal+subventricular+zone+are+required+for+neural+stem+cell+self-renewal.">Jagged1 signals in the postnatal subventricular zone are required for neural stem cell self-renewal.</a> Embo J. 24 (19), 3504-3515 (2005).</li><li>Tong, M. T., Peace, S. T., Cleland, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+and+mechanisms+of+olfactory+learning+and+memory.">Properties and mechanisms of olfactory learning and memory.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, (2014).</li><li>Corthell, J., Stathopoulos, A., Watson, C., Bertram, R., Trombley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+Bulb+Monoamine+Concentrations+Vary+with+Time+of+Day.">Olfactory Bulb Monoamine Concentrations Vary with Time of Day.</a> Neuroscience. 247, 234-241 (2013).</li><li>Lehmkuhl, A. M., Dirr, E. R., Fleming, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+assays+for+mouse+models+of+neurodegenerative+disease.">Olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51804 (2014).</li></ol>

There is no conflict of interest.

Las pruebas que se proponen en este protocolo permiten evaluar diferentes aspectos del comportamiento olfativo innata en ratones: la percepción de los olores, la discriminación entre los olores frente a agua y la sensibilidad a los olores. Este protocolo se puede aplicar a cualquier olor de acuerdo con la preferencia y la escala de evitación previamente demostrado 15. Dado que el protocolo se basa en la actividad exploratoria es importante que los ratones no muestran ningún deterioro motor o la ansiedad que puede afectar su movimiento e interferir con la exploración olfativa. Las pruebas descritas están destinadas a ratones macho adulto sin embargo se pueden adaptar para investigar el olfato también en hembras adultas o ratones de edad. Antes de comenzar un estudio de investigación de la olfacción como en ratones, es importante prestar atención a los siguientes aspectos: 1) realizar cada prueba en un intervalo de al menos 3 días. Evitar debe ser probado en último para minimizar la interferencia de la memoria olfativa 20; 2) realizar el correoxperimentos al mismo momento del día, de preferencia en la tarde, cuando los ratones se encuentran en su ciclo activo 21 y utilizan una fuente de la luz tenue. Además, la programación de la prueba olfativa a veces los controles definidos para los posibles cambios circadianos en funciones olfativas 22; 3) antes de comenzar la prueba de evitación, que utiliza odorantes repelentes, tales como ácidos, traer una jaula en el tiempo en la suite experimental y mantener la jaula bajo una campana laminar. Este paso es importante para evitar la habituación a la odorante y obtener una respuesta más homogénea en el mismo grupo; 4) separar temporalmente los ratones que se han probado hasta que todos los ratones de la misma jaula están expuestos a la sustancia odorífera, para minimizar la contaminación odorante; 5) utilizar animales de la misma cepa, ya que diferentes cepas pueden comportarse de una manera heterogénea cuando se expone a un odorante 23; 6) el experimentador debe usar una bata de laboratorio en todo momento y cambiar los guantes entre los animales para evitar el olor de mezcla; 7)Después de pipetear el operador debe moverse lentamente lejos de la jaula a una distancia de 1,3 metros para evitar cualquier confusión estimulación a los ratones durante la exploración olfatorio; 8) los ratones que muestran valores de gris medias sólo en una de las cámaras deben ser excluidos del estudio, ya que se espera que los ratones para explorar ambas cámaras en diferentes grados. El método descrito ofrece varias ventajas sobre otros protocolos: es muy fácil de configurar, utiliza materiales de bajo costo, es de finalización rápido y se aprovecha de software de código abierto, como ImageJ. Además, proporcionamos macros están listos para ser instalados y que pueden ser utilizados, a medida y adaptarse a cualquier escenario y más de 2 perímetros de olor. Se ha de señalar que sólo el tiempo pasado en el olor perímetro asignado es una medida de la actividad olfativa. Considerando que el tiempo empleado en cada cámara da una lectura de la actividad exploratoria del ratón y es sólo una estimación aproximada del comportamiento olfativo. Al igual que con otros métodos, el poder estadístico puede ser adquirida por el aumento del número de animales por grupo. En comparación con la prueba olfativa usando olfatómetros, que puede controlar automáticamente por presión de vapor y el tiempo de entrega 12 - 14, el protocolo propuesto está menos controlada. Sin embargo, todos los olores se aplican en volúmenes iguales, a una distancia definida y por la misma ventana de tiempo. Por lo tanto, manteniendo estas variables constante, en esta prueba de un olfatómetro no es necesario. Hay otra limitación potencial de este protocolo que consiste en el tiempo requerido para el ajuste y el corte de cada vídeo para obtener un número fijo de tramas. Sin embargo, el mismo análisis asistido por ordenador se puede utilizar también en configuraciones más sofisticadas con los puertos de olor entregar el olor en momentos específicos. En este caso, el corte de vídeo se podría establecer de forma automática. En comparación con otros protocolos que utilizan almohadillas de algodón impregnated con olor para probar la atracción y la evitación, el presente protocolo proporciona una información adicional sobre la discriminación olfativa entre una novela olor y un olor neutro (agua) 15,16 en una sola sesión experimental. Por otra parte, el protocolo no requiere cegamiento experimental y puede ser completamente realizado por un solo investigador mediante el análisis asistido por ordenador imparcial. Estas pruebas simples se pueden utilizar para controlar la progresión de los déficits neuronales en modelos de ratón de la enfermedad de Alzheimer o de Parkinson y para investigar los mecanismos de transmisión olfativo.

El olfato es una de las funciones sensoriales más desarrollados e importantes en los mamíferos. Cualquier alteración en la actividad olfativa puede afectar la ingesta de alimentos, el comportamiento social y, en el peor de los casos, incluso la supervivencia. En los seres humanos, el deterioro del olfato es dependiente de 1 año y es considerado un fuerte predictor de trastornos neurológicos 2-6. La prueba de identificación del olfato desarrollado por la Universidad de Pennsylvania representa actualmente una de las pruebas más utilizadas, no invasivos y cuantificables, de diagnóstico que pueden evaluar los déficits neurológicos primeros 7 y predecir con alta probabilidad la progresión de la demencia 8,9. La accesibilidad del sistema olfativo y la prominencia del olfato en los roedores, ha desatado una intensa línea de investigación frente a los mecanismos de las funciones olfativas subyacentes 10. Hemos demostrado anteriormente que la pérdida de la función del recept señalizacióno Notch1 afecta evitar olfativa 11. En este protocolo que utilizamos ratones que carecen del ligando de señalización, Jagged1, en neuronas o células gliales para estudiar el rendimiento olfativo. Olfato innato se define por tres parámetros como la percepción, la discriminación entre los olores y la sensibilidad olfativa 4. Pruebas olfativas en roedores se puede hacer en una variedad de maneras y algunos estudios de comportamiento hacer uso de olfatómetros, que proporcionan el olor al animal en un concentraciones de vapor específicas y en un marco de tiempo precisa 12 - 14. Sin embargo, esta instrumentación es caro y puede estar disponible sólo en instalaciones especializadas. En nuestro trabajo, ofrecemos un protocolo de prueba olfativa simple, rápida y reproducible, que se lleva a cabo utilizando aromas volátiles. Las pruebas descritas percepción medida para un atrayente o un olor repelente y evaluar la discriminación entre el olor y 11,15,16 agua. Usando la misma configuración, wE también puede medir la sensibilidad a un olor a diferentes concentraciones 16,17. El procesamiento post-hoc asistida por ordenador de vídeo, inspirado en la obra de la página y sus colegas 18, ofrece resultados sin la necesidad de cegamiento experimental y permitiendo una sola persona para llevar a cabo todo el experimento. Este protocolo está destinado a proporcionar un punto de partida para estudiar el comportamiento olfativo en ratones.

<table><tbody><tr><td>Mouse cage</td><td>Italplast (Italy)</td><td>1144B</td><td>36 cm length x 20.5 cm width x 13.5 cm height</td></tr><tr><td>Chipped wood bedding</td><td>Abedd (Austria)</td><td>LTE E-001</td><td>3 cm high</td></tr><tr><td>Peanut butter</td><td>Migros (Switzerland)</td><td>NA</td><td>1:10</td></tr><tr><td>2-Methylbutyric</td><td>Sigma Aldrich (Switzerland)</td><td>W269514</td><td>Pure</td></tr><tr><td>Female urine from fertile females of same mouse strain</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Dilution series</td></tr><tr><td>Camera</td><td>Olympus (US)</td><td>Camedia C-8080</td><td>MOV files</td></tr><tr><td>Quicktime for Java (Windows)</td><td>Apple (USA)</td><td>NA</td><td>video plugin for visualizing MOV files</td></tr><tr><td>ImageJ for Windows</td><td>NIH (USA)</td><td>NA</td><td>Video Processing/Analysis</td></tr></tbody></table>

simple and computer-assisted olfactory testing for mice

El olfato está altamente conservada entre las especies y se requiere para la reproducción y la supervivencia. En los seres humanos, el olfato es también uno de los sentidos que se ve afectado con el envejecimiento y es un fuerte predictor de enfermedades neurodegenerativas. Por lo tanto, las pruebas de olfato se utiliza como un método de diagnóstico no invasivo para detectar déficits neurológicos desde el principio. Con el fin de comprender los mecanismos subyacentes de sensibilidad olfativa red, la investigación olfativa en roedores ha cobrado impulso en la última década. A continuación, presentamos un método muy simple, eficiente en tiempo y reproducible prueba olfativa de innata percepción del olor y la sensibilidad en los ratones sin la necesidad de cualquier restricción de alimentos o agua antes. Las pruebas se realizan en un ambiente familiar a los ratones, requieren sólo los olores y una sesión de 2 minutos de exposición odorante. Se lleva a cabo el análisis, post-hoc, utilizando comandos asistida por ordenador en ImageJ y puede ser, por lo tanto,, Llevado a cabo de principio a fin por un investigador. Este protocolo no requiere ningún hardware o configuración especial y está indicado para cualquier laboratorio interesado en probar la percepción olfativa y sensibilidad.

La prueba mide la percepción de la atracción a la mantequilla de maní y la evitación de ácido 2-MB. Tres grupos de ratones se prueban y el tiempo pasado en el &quot;olor perímetro&quot; se cuantifican en comparación con agua. En la prueba de preferencia, el grupo de control A muestra preferencia significativa al olor en comparación con agua (8 t = 2,52, p &lt;0,05). Por otra parte, el grupo B no muestra ningún interés significativo para la mantequilla de maní y pasa más tiempo con agua (t 6 = 3.22, p &lt;0.05). Por lo tanto, se comporta de manera diferente del grupo de control A (F 1,7 = 26,39, p &lt;0,005). Además, el grupo C no muestra la discriminación y pasa casi al mismo tiempo con el agua y la mantequilla de maní (t 8 = 0,78, p = 0,45). En conjunto, los tres grupos se comportan de manera diferente (F 2,9 = 19,83, p &lt;0,005) y hay una interacción significativa entre el genotipo y el tratamiento (mantequilla de maní y agua) (F 2,1 = 4,90, p &lt;0,005) ( <strong&gt; Figura 3A). En respuesta a la 2-MB ácido del grupo de control muestra un reflejo de evitación y como resultado pasa más tiempo con agua (8 t = 2.67, p &lt;0.05). De manera similar, el grupo B muestra un reflejo de evitación pronunciada a 2 MB-ácido (t = 6 3,71, p &lt;0,01). Por otro lado, el grupo C no discrimina entre las dos olores y pasa tiempos comparables con 2-MB ácido y agua (8 t = 2,2, p = 0,6) (Figura 3B). En general, la comparación de la respuesta de evitación los tres grupos no se muestran un comportamiento diferente significativa (F 2, 9 = 0,76, p = 0,49) como resultado no hay interacción entre el tratamiento y el genotipo (F 1, 2 = 0,52, p = 0.63). En la prueba de sensibilidad olfativa a la orina femenina, la curva muestra la preferencia a la orina a diferentes concentraciones frente a agua (Preferencia index = tiempo pasado con la orina sustraído por el tiempo que pasa con el agua). En ªes de prueba, se observa que el grupo control A tiene un umbral de atracción a la orina a una dilución de 1: 1000 y muestra el aumento de la atracción a la orina con concentraciones crecientes. Grupo B y C muestran un 100 veces mayor umbral a la atracción (1:10) en comparación con el grupo A (2,9 F = 4,78, p &lt;0,05). Grupo B y C de visualización curvas de sensibilidad comparables (F 1,19 = 0,36, p = 0,55). Comparando la sensibilidad entre los grupos, parece que el grupo A tiene mayor sensibilidad a la orina femenina en comparación con el grupo B y C (F 2,19 = 7,12, p &lt;0,01) (Figura 4). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52944/52944fig1.jpg" /> Figura 1: Representación de la configuración utilizada para realizar las pruebas olfativas. (A) de la cámara por encima de la jaula. (B) Los ratones se colocan en una jaula para un período de habituación 5 minutos. (C) El odorantes se pipetean en la pared de la jaula. (D) La actividad exploratoria de un odorante comparación con el agua se pone a prueba en una ventana 2 min. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52944/52944fig2.jpg" /> Figura 2:.. De flujo de trabajo de procesamiento de vídeo asistida por ordenador mediante comandos de macros en ImageJ El ejemplo se refiere a un ratón del grupo A se expone a la orina a una dilución 1:10 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52944/52944fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52944/52944fig3.jpg" /> Figura 3:. Los resultados representativos de las pruebas de preferencia y de evitación olfativas Los ratones de los tres grupos (n = 5 para el grupo A, n = 4 para el grupo B y n = 5 para el grupo C) se han expuesto a (A) de maní, peroter y ácido (B) 2-MB para una sesión de exploración de 2 min. Se representa el tiempo total de explorar el olor (círculos negros) frente a agua (círculos grises). Las diferencias significativas en el comportamiento olfativo entre los grupos se indican mediante barras horizontales negras y asteriscos. Diferencias significativas en los tiempos entre el olor y el agua dentro de los grupos olfateando se muestran por bares y asteriscos horizontales grises. * P &lt;0,05, ** P &lt;0,01, *** p &lt;0,01 (barras horizontales grises, la prueba t de Student; barra horizontal negro, un modelo lineal). Las barras de error son los errores estándar de la media (SEM). <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52944/52944fig4.jpg" /> Figura 4:. Los resultados representativos de las pruebas de sensibilidad a concentraciones crecientes de orina femenina La curva de índice de preferencia, propuesta por el tiempo de exploración con orina a diferentes concentraciones restados por el tiempo que pasa con el agua, muestra que el grupoA (n = 5) tiene la mayor sensibilidad a la orina en comparación con el grupo B (n = 4) y C (n = 5). * P &lt;0,05 (barras horizontales negras, ANOVA de una vía). Las barras de error son SEM.

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Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice

We present a simple and unbiased olfactory test in mice. With this protocol olfactory discrimination, preference, avoidance and sensitivity to a novel odor as compared to water can be assessed in single behavioral sessions. This method is indicated for a single experimenter and analysis is based on computer-assisted video processing.

Simple y asistida por ordenador de pruebas olfativas para Ratones

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected ...

simple-and-computer-assisted-olfactory-testing-for-mice

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Behavior

9.9K vistas.  University of Fribourg. We present a simple and unbiased olfactory test in mice. With this protocol olfactory discrimination, preference, avoidance and sensitivity to a novel odor as compared to water can be assessed in single behavioral sessions. This method is indicated for a single experimenter and analysis is based on computer-assisted video processing. 

Video: Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice

Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and other social interactions. The electroolfactogram (EOG) recording is an informative, easy to conduct, and reliable method to assay olfactory function at the level of the olfactory epithelium. Since the 1956 description of the EOG by Ottoson in frogs1, the EOG recording has been applied in many vertebrates including salamanders, rabbits, rats, mice, and humans (reviewed by Scott and Scott-Johnson, 2002, ref. 2). The recent advances in genetic modification in mice have rekindled interest in recording the EOG for physiological characterization of olfactory function in knock-out and knock-in mice. EOG recordings have been successfully applied to demonstrate the central role of olfactory signal transduction components3-8, and more recently to characterize the contribution of certain regulatory mechanisms to OSN responses9-12.
Odorant detection occurs at the surface of the olfactory epithelium on the cilia of OSNs, where a signal transduction cascade leads to opening of ion channels, generating a current that flows into the cilia and depolarizes the membrane13. The EOG is the negative potential recorded extracellularly at the surface of the olfactory epithelium upon odorant stimulation, resulting from a summation of the potential changes caused by individual responsive OSNs in the recording field2. Comparison of the amplitude and kinetics of the EOG thus provide valuable information about how genetic modification and other experimental manipulations influence the molecular signaling underlying the OSN response to odor. 
Here we describe an air-phase EOG recording on a preparation of mouse olfactory turbinates. Briefly, after sacrificing the mouse, the olfactory turbinates are exposed by bisecting the head along the midline and removing the septum. The turbinate preparation is then placed in the recording setup, and a recording electrode is placed at the surface of the olfactory epithelium on one of the medial turbinates. A reference electrode is electrically connected to the tissue through a buffer solution. A continuous stream of humidified air is blown over the surface of the epithelium to keep it moist. The vapor of odorant solutions is puffed into the stream of humidified air to stimulate the epithelium. Responses are recorded and digitized for further analysis.

The electroolfactogram (EOG) recording is an informative, easy-to-conduct, and reliable way of assessing olfactory function at the level of the olfactory epithelium. This protocol describes a recording setup, mouse tissue preparation, data collection, and basic data analysis.

Las respuestas de los análisis de las neuronas sensoriales olfativas ratón Utilizando la grabación Electroolfactogram Aire fase

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and ...

Investigación

Neurociencias

Barnes Maze Testing Strategies with Small and Large Rodent Models

Spatial learning and memory of laboratory rodents is often assessed via navigational ability in mazes, most popular of which are the water and dry-land (Barnes) mazes. Improved performance over sessions or trials is thought to reflect learning and memory of the escape cage/platform location. Considered less stressful than water mazes, the Barnes maze is a relatively simple design of a circular platform top with several holes equally spaced around the perimeter edge. All but one of the holes are false-bottomed or blind-ending, while one leads to an escape cage. Mildly aversive stimuli (e.g.&#160;bright overhead lights) provide motivation to locate the escape cage. Latency to locate the escape cage can be measured during the session; however, additional endpoints typically require video recording. From those video recordings, use of automated tracking software can generate a variety of endpoints that are similar to those produced in water mazes (e.g.&#160;distance traveled, velocity/speed, time spent in the correct quadrant, time spent moving/resting, and confirmation of latency). Type of search strategy (i.e.&#160;random, serial, or direct) can be categorized as well. Barnes maze construction and testing methodologies can differ for small rodents, such as mice, and large rodents, such as rats. For example, while extra-maze cues are effective for rats, smaller wild rodents may require intra-maze cues with a visual barrier around the maze. Appropriate stimuli must be identified which motivate the rodent to locate the escape cage. Both Barnes and water mazes can be time consuming as 4-7 test trials are typically required to detect improved learning and memory performance (e.g.&#160;shorter latencies or path lengths to locate the escape platform or cage) and/or differences between experimental groups. Even so, the Barnes maze is a widely employed behavioral assessment measuring spatial navigational abilities and their potential disruption by genetic, neurobehavioral manipulations, or drug/ toxicant exposure.

The dry-land Barnes maze is widely used to measure spatial navigation ability in response to mildly aversive stimuli. Over consecutive days, performance (e.g.&#160;latency to locate escape cage) of control subjects improves, indicative of normal learning and memory. Differences between rats and mice necessitate apparatus and methodology changes that are detailed here.

Barnes Maze estrategias de ensayo con pequeñas y grandes modelos de roedores

Spatial learning and memory of laboratory rodents is often assessed via navigational ability in mazes, most popular of which are the water and dry-land ...

Comportamiento

Testing for Odor Discrimination and Habituation in Mice

This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the mouse can discriminate between non-social odors and social odors, whether the mouse habituates to a repeatedly presented odor, and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented with a novel odor. Since many social behavior tests measure the experimental animal&#8217;s response to a familiar or novel mouse, false positives can be avoided by establishing that the animals can detect and discriminate between social odors. There are similar considerations in learning tests such as fear conditioning that use odor to create a novel environment or olfactory cues as an associative stimulus. Deficits in the olfactory system would impair the ability to distinguish between contexts and to form an association with an olfactory cue during fear conditioning. 
In the odor habitation/dishabituation test, the mouse is repeatedly presented with several odors. Each odor is presented three times for two minutes. The investigator records the sniffing time directed towards the odor as the measurement of olfactory responsiveness. A typical mouse shows a decrease in response to the odor over repeated presentations (habituation). The experimenter then presents a novel odor that elicits increased sniffing towards the new odor (dishabituation). After repeated presentation of the novel odor the animal again shows habituation. This protocol involves the presentation of water, two or more non-social odors, and two social odors. In addition to reducing experimental confounds, this test can provide information on the function of the olfactory systems of new knockout, knock-in, and conditional knockout mouse lines.

This manuscript describes a protocol to examine the olfactory system of rodents. The olfactory habituation/dishabituation test will allow investigators to determine whether a mouse habituates to a repeatedly presented odor and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented a novel odor.

Las pruebas para detectar olor Discriminación y habituación en ratones

This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the ...

Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

The rodent olfactory system is of increasing interest to scientists, studied, in part, in systems biology because of its stereotyped, yet accessible circuitry. In addition, this area's unique ability to generate new neurons throughout an organism's lifetime makes it an attractive system for developmental and regenerative biologists alike. Such interest necessitates a means for a quick, yet reliable assessment of olfactory function. Many tests of olfactory ability are complex, variable or not specifically designed for mice. Also, some tests are sensitive to memory deficits as well as defects in olfactory abilities, confounding obtained results.
Here, we describe a simple battery of tests designed to identify defects in olfactory sensitivity and preference. First, an initial general health assessment allows for the identification of animals suitable for further testing. Second, mice are exposed to various dilutions of scents to ascertain whether there is a threshold difference. Third, mice are presented with various scents, both attractive and aversive, that allow for the assessment of olfactory preference. These simple studies should make the initial characterization of olfactory behavior accessible for labs of varied resources and expertise.

Fundamental, yet unique properties of the rodent olfactory system have led to its increasing study among biologists. A relatively simple assessment of its function is then also needed. Here we describe sensitive tests for the characterization of mouse olfactory sensitivity and preference.

Pruebas del comportamiento olfativo en el ratón adulto

The rodent olfactory system is of increasing interest to scientists, studied, in part, in systems biology because of its stereotyped, yet accessible ...

Biología

Evaluación del deterioro olfativo en ratones debido a la inhalación de contaminantes ambientales

Studying the Effects of Inhaled Environmental Pollutants on Olfactory Function in Mice

Olfactory impairment is a significant public health problem and independently predicts the risk of neurodegenerative diseases. Inhaled environmental pollutants exposure may impair olfaction; thereby, there is an urgent need for methods to evaluate the effects of inhaled environmental pollutants exposure on olfaction. Mice are ideal models for olfactory experiments because of their highly developed olfactory system and behavioral characteristics. To assess the effects of inhaled environmental pollutants exposure on olfactory function in mice, a detailed buried food test and social odor discrimination experiment is provided, including the experiment preparation, the selection and construction of experimental facilities, the testing process, and indexes of time. Meanwhile, timekeeping equipment, operational details, and the experimental environment are discussed to ensure the success of the assay. Zinc sulfate is used as the treatment to demonstrate the feasibility of the experimental approach. The protocol provides a simple and clear operational process for assessing the effects of inhaled environmental pollutants on olfactory function in mice.

Autor destacado: Evaluación de los efectos olfativos de los contaminantes en el aire: alimentos enterrados y pruebas de olor social

This paper provides a detailed description of the buried food test and social odor discrimination experiment to assess the effects of inhaled environmental pollutants exposure on olfactory function in mice.

Estudio de los efectos de los contaminantes ambientales inhalados sobre la función olfativa en ratones

Olfactory impairment is a significant public health problem and independently predicts the risk of neurodegenerative diseases. Inhaled environmental ...

Medio ambiente

Assessment of Mouse Judgment Bias through an Olfactory Digging Task

Judgment biases (JB) are differences in the way that individuals in positive and negative affective/emotional states interpret ambiguous information. This phenomenon has long been observed in humans, with individuals in positive states responding to ambiguity 'optimistically' and those in negative states instead showing 'pessimism'. Researchers aiming to assess animal affect have taken advantage of these differential responses, developing tasks to assess judgment bias as an indicator of affective state. These tasks are becoming increasingly popular across diverse species and fields of research. However, for laboratory mice, the most widely used vertebrates in research and a species heavily relied upon to model affective disorders, only one JB task has been successfully validated as sensitive to changes in affective state. Here, we provide a detailed description of this novel murine JB task, and evidence of its sensitivity to mouse affect. Though refinements are still necessary, assessment of mouse JB opens the door for answering both practical questions regarding mouse welfare, and fundamental questions about the impact of affective state in translational research.

This article provides a detailed description of a novel mouse judgment bias protocol. Evidence of this olfactory digging task's sensitivity to affective state is also demonstrated and its utility across diverse research fields is discussed.

Evaluación del sesgo de juicio del ratón a través de una tarea de excavación olfativa

Judgment biases (JB) are differences in the way that individuals in positive and negative affective/emotional states interpret ambiguous information. This ...

Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process and may be a useful behavioral marker for early detection. Earlier detection in neurodegenerative disease is a major goal in the field because this is when neuroprotective therapies have the best potential to be effective. Therefore, in preclinical studies testing novel neuroprotective strategies in rodent models of neurodegenerative disease, olfactory assessment could be highly useful in determining therapeutic potential of compounds and translation to the clinic. In the present study we describe a battery of olfactory assays that are useful in measuring olfactory function in mice. The tests presented in this study were chosen because they measure olfaction abilities in mice related to food odors, social odors, and non-social odors. These tests have proven useful in characterizing novel genetic mouse models of Parkinson&#8217;s disease as well as in testing potential disease-modifying therapies.

Impairment in olfactory function is a common feature in many neurodegenerative disorders including Parkinson, Alzheimer, and Huntington diseases. In the present article, we describe a set of tests for assessing olfaction discrimination and detection in mice that can be used to measure olfactory abilities in mouse models of neurodegenerative diseases.

Los ensayos olfativos para modelos de ratón de Enfermedades Neurodegenerativas

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of olfactory-driven behaviors and their modulation. These coding properties depend heavily on the initial interaction between odor molecules and the olfactory receptor (OR) expressed in the OSNs. The identity, specificity and ligand spectrum of the expressed OR are critical. The probability to find the ligand of the OR expressed in an OSN chosen randomly within the epithelium is very low. To address this challenge, this protocol uses genetically tagged mice expressing the fluorescent protein GFP under the control of the promoter of defined ORs. OSNs are located in a tight and organized epithelium lining the nasal cavity, with neighboring cells influencing their maturation and function. Here we describe a method to isolate an intact olfactory epithelium and record through patch-clamp recordings the properties of OSNs expressing defined odorant receptors. The protocol allows one to characterize OSN membrane properties while keeping the influence of the neighboring tissue. Analysis of patch-clamp results yields&#160;a precise quantification of ligand/OR interactions, transduction pathways and pharmacology, OSNs&#39; coding properties and their modulation at the membrane level.&#160;

Analyzing the physiological properties of olfactory sensory neurons still faces technical limitations. Here we record them through perforated patch-clamp in an intact preparation of the olfactory epithelium in gene-targeted mice. This technique allows the characterization of membrane properties and responses to specific ligands of neurons expressing defined olfactory receptors.

Perforado grabación de patch-clamp de ratón neuronas sensoriales olfativas en neuroepitelio Intacto: Análisis funcional de las neuronas que expresan un odorante del receptor Identificado

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

Simple y asistida por ordenador de pruebas olfativas para Ratones

Resumen

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Capítulos en este video

Las respuestas de los análisis de las neuronas sensoriales olfativas ratón Utilizando la grabación Electroolfactogram Aire fase

Barnes Maze estrategias de ensayo con pequeñas y grandes modelos de roedores

Las pruebas para detectar olor Discriminación y habituación en ratones

Pruebas del comportamiento olfativo en el ratón adulto

Estudio de los efectos de los contaminantes ambientales inhalados sobre la función olfativa en ratones

Estudio de los efectos de los contaminantes ambientales inhalados sobre la función olfativa en ratones

Estudio de los efectos de los contaminantes ambientales inhalados sobre la función olfativa en ratones

Evaluación del sesgo de juicio del ratón a través de una tarea de excavación olfativa

Los ensayos olfativos para modelos de ratón de Enfermedades Neurodegenerativas

Perforado grabación de patch-clamp de ratón neuronas sensoriales olfativas en neuroepitelio Intacto: Análisis funcional de las neuronas que expresan un odorante del receptor Identificado