Name: transabdominal ultrasound for pregnancy diagnosis in reeves' muntjac deer
Uploaded: 2014-01-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 26 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer at JoVE.com

Los autores desean agradecer a Jeanette Hayes-Klug y Kelly Anderson por la gestión de la colonia muntjac, al Dr. Alan Young por presentarnos al muntjac y al Sr. Cleve Tedford de Cervid Solutions Inc. por proporcionar el muntjac de semillas para este proyecto. Este trabajo fue apoyado por la subvención R01AI093634 de los NIH.

1. Preparación procesal
Todos los procedimientos de animales descritos han sido revisados y aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Estatal de Colorado, una Asociación para la Evaluación y Acreditación del Cuidado de Animales de Laboratorio (AAALAC), institución internacional acreditada.
<ol><li>Antes del examen, inmovilice a los animales utilizando protocolos apropiados de sedación o anestesia para proporcionar relajación y permitir un posicionamiento adecuado. Un manejador sujeta al ciervo mientras que una segunda persona administra la sedación al animal. Nota: Los autores han encontrado la combinación siguiente para proporcionar la sedación eficaz en esta especie: butorfanol (0,45 mg/kg), azaperona (0,035 mg/kg), y medetomidina (0,04 mg/kg), administrada intramuscular en los músculos glúteos.</li>
	<li>Una vez que la mente ha alcanzado un plano de sedación que permite el manejo conforme, colóquela en reclinación dorsal o lateral en una mesa de examen o dentro de un canal en V. Eleve ligeramente la cabeza, el cuello y el tórax (aproximadamente 20-30°) para reducir el riesgo de regurgitación y aspiración de contenido ruminal y para facilitar la ventilación adecuada durante el procedimiento. Nota: En la mayoría de los cérvidos u otras especies de rumiantes, el ultrasonido abdominal se realiza en animales de pie; sin embargo, el tamaño pequeño y las consideraciones del comportamiento de esta especie requieren la sedación pesada para la examinación y la colocación esternal es por lo tanto más difícil y puede imposibilitar técnica de proyección de imagen eficaz. La colocación del animal a medio camino entre la reclinación esternal y lateral puede ser ideal para reducir el riesgo de regurgitación e hipoventilación y debe considerarse si es posible. En cualquier posición reclinada, es crítico monitorear cuidadosamente las respiraciones de los animales y detener inmediatamente el examen y colocar al animal en reclinación esternal si se observa regurgitación o hipoventilación.</li>
	<li>Si es necesario, recorte el cabello de la zona del abdomen a examinar para lograr un contacto adecuado entre la huella del transductor y la piel. Nota: En la gestación temprana, la evidencia del embarazo se puede detectar en el abdomen caudal cerca de las glándulas mamarias. Esta región del muntjac es típicamente sin pelo, y por lo tanto el afeitado puede no estar indicado en este momento. A medida que el feto crece y el útero se distede para ocupar una posición más craneal en el abdomen, el recorte del cabello será necesario antes de la toma de imágenes. Se debe tener cuidado para evitar causar cualquier trauma mecánico a la piel, incluyendo laceraciones de cuchillas de afeitar o lesiones térmicas de cortadoras eléctricas.</li>
	<li>Coloque la unidad de ultrasonido en una ubicación que permita al técnico visualizar fácilmente el monitor mientras realiza el examen con su mano dominante. Introduzca información de identificación de animales (nombre, número de identificación, etc.)en el sistema para etiquetar automáticamente las imágenes guardadas y los bucles de vídeo.</li>
</ol>2. Examen de ultrasonido reproductivo transabdominal
<ol><li>Aplique una generosa cantidad de gel de acoplamiento acústico en el abdomen caudal.</li>
	<li>Coloque un transductor lineal curvo de 5-10 MHz en la piel del abdomen caudal, inmediatamente craneal al pubis, y muévalo lentamente en dirección craneal para evaluar las estructuras dentro de la cavidad pélvica. Escanee los cuadrantes izquierdo y derecho del abdomen caudal para evaluar ambos cuernos del útero bicornuado del muntjac. Nota: El ultrasonido abdominal completo implica la evaluación de todas las vísceras abdominales, incluyendo el hígado, los riñones, el bazo, el aparato gastrointestinal, la vejiga urinaria, y la zona reproductiva. A los efectos de este protocolo, sólo se discutirá detalladamente el examen del embarazo; sin embargo, el aspecto normal de otros órganos abdominales caudales debe ser reconocido pues estas estructuras son probables ser encontradas durante el curso del estudio. Los órganos más comúnmente vistos en esta localización incluyen segmentos del aparato gastrointestinal, de la vejiga urinaria, y de la zona reproductiva. Los intestinos grueso y delgado se identifican por la apariencia característicamente estratificada de la pared intestinal. La luz puede o no ser pronunciada dependiendo del tipo y la cantidad de contenido, que puede incluir partículas de líquidos, gases, mucosas o alimentos. La vejiga urinaria puede ser difícil de identificar a menos que se distede con la orina, y las capas de la pared de la vejiga son significativamente menos distintas que las de los intestinos. Aparte del útero, los ovarios también se pueden encontrar en la ecografía del tracto reproductivo de la hembra muntjac. Los ovarios aparecerán como estructuras ovoides cerca del polo caudal de los riñones, y su apariencia puede cambiar en el transcurso del ciclo estroso. La presencia de folículos maduros múltiples, llenos de líquido dentro de la corteza es sugestiva de celo. Nota: Al rotar y/o "avivar" el cabezal de exploración del transductor, las estructuras se pueden evaluar en planos transversales o sagitales.<ol>
<li>Si es necesario diferenciar un útero grávido de la vejiga urinaria, vacíe la vejiga manualmente aplicando una presión suave al abdomen caudal o colocando un catéter urinario y repitiendo la exploración. Nota: La expresión manual de la vejiga solo debe intentarse cuando el animal está en posición esternal o vertical, lo que facilita una orientación más natural de las vísceras abdominales y reduce el riesgo de traumatismo a otras estructuras. El útero también se puede diferenciar de la vejiga urinaria mediante la evaluación del grosor de la pared del órgano. El grosor típico de una vejiga moderadamente distendido es de aproximadamente 1,4 mm24,mientras que los autores han encontrado que la pared más musculosa del útero grávido en el muntjac generalmente mide entre 7-8 mm. Nota: El embarazo temprano es difícil de diagnosticar definitivamente debido a una carencia de estructuras fetales identificables, y de hecho la primera indicación del embarazo puede ser simplemente un pequeño bolsillo flúido en el abdomen caudal. Si se ve en este momento, el embrión en desarrollo aparecerá como una estructura hiperecoica, ovoide a amorfa dentro del útero (Figura 1).</li>
	</ol></li>
	<li>Realice ajustes en la profundidad, la frecuencia y la ganancia según sea necesario para mejorar el contraste y el detalle de la imagen. Nota:las frecuencias más altas están asociadas con longitudes de onda más cortas, que son necesarias para mejorar la resolución de la imagen. La mayoría de los transductores son capaces de funcionar dentro de una gama de frecuencias (por ejemplo, 6-10 MHz)24. La frecuencia se puede ajustar utilizando los controles del escáner en la unidad de ultrasonido, y el aumento de la frecuencia dará como resultado una imagen más clara. El aumento de la frecuencia simultáneamente disminuye la profundidad de la penetración de las ondas sonoras; por lo tanto, la reducción de la frecuencia puede ser necesaria para visualizar estructuras más profundas, pero la resolución puede verse comprometida24. Por esta razón es importante seleccionar la frecuencia más alta posible para alcanzar la profundidad de tejido deseada. Los ajustes en los controles de ganancia alterarán la amplificación de las ondas sonoras que regresan al transductor desde los tejidos y afectarán el grado de contraste en la imagen24. La ganancia debe establecerse en un punto en el que se logre un contraste óptimo entre los tejidos hiperecoicos e hipoecoicos, y estos ajustes pueden necesitar ser ajustados dependiendo de las estructuras que se están fotodeando.</li>
</ol>3. Obtención de mediciones fetales
Nota:La edad gestacional en muchas especies de animales domésticos puede estimarse utilizando rangos de referencia establecidos para las mediciones fetales obtenidas del examen de ultrasonido. Las mediciones más comúnmente utilizadas incluyen la longitud recta de la corona-grupa (SCRL), la profundidad del pecho (CD) y la longitud de la cabeza (HL)17. Si bien aún no se han recopilado datos suficientes para desarrollar pautas confiables de edad gestacional en los ciervos muntjac de Reeves, se pueden recopilar mediciones para comenzar a establecer estas referencias. Se ha demostrado que la frecuencia cardíaca fetal (FHR) en otras especies de cérvidos y rumiantes aumenta linealmente a medida que la gestación progresa hasta cierto punto (típicamente alrededor del día 60 de gestación), momento en el que la frecuencia cardíaca comienza a disminuir17. La FHR puede ser utilizada para estimar la edad gestacional en conjunción con otras observaciones ecográficas, sin embargo es más comúnmente utilizada como medida de viabilidad fetal17,24. La FHR se ha calculado en el muntjac de Reeves tan pronto como 35 días después del apareamiento observado.
<ol><li>Para medir el SCRL, localice el útero en el monitor y realice ajustes finos en la posición del transductor hasta obtener una visión sagital de todo el feto (Figuras 2 y 3). Congelar la imagen y medir la distancia entre el aspecto más dorsal del cráneo y la base del sacro (Figuras 2 y 3).</li>
	<li>Para medir la EC, obtener una vista sagital del feto (la misma imagen puede ser utilizada para medir scrl) y medir la distancia entre los aspectos dorsales y ventrales del tórax (Figuras 2 y 3).</li>
	<li>Para medir el LH, utilizando la misma vista sagital del feto que se describe para las mediciones de SCRL y CD, mida la distancia desde la cresta occipital hasta la base de lanariz (Figuras 2 y 3).</li>
	<li>Para calcular la frecuencia cardíaca fetal, identifique el corazón dentro de la cavidad torácica del feto visualizando sus contracciones rítmicas. Calcule la frecuencia cardíaca contando el número de contracciones (latidos del corazón) que ocurren dentro de un período de tiempo de 1 minuto. Nota: Si la unidad del ultrasonido que es utilizada tiene capacidades de Doppler, esta característica se puede emplear para ayudar más lejos en la distinción del corazón de otros movimientos fetales no específicos.</li>
	<li>Verifique que todas las imágenes guardadas y los bucles de video incluyan toda la información de identificación necesaria, incluido el nombre o número del animal, la fecha, las mediciones y las etiquetas de estructura apropiadas.</li>
</ol>4. Conclusiones procesales y recuperación
<ol><li>Retire todo el gel de contacto de ultrasonido residual del abdomen del animal con un paño suave o toallas de papel. Limpie el gel del transductor antes de almacenar.</li>
	<li>Si utiliza el protocolo de sedación descrito en el paso 1.1, administre atipamezol por vía subcutánea a una dosis de 0,25 mg/kg para revertir los efectos de la medetomidina. Si se utiliza un protocolo de sedación diferente en el que se dispone de un antagonista, administre este agente al animal de acuerdo con las dosis publicadas al concluir el procedimiento para acelerar la recuperación.</li>
	<li>Coloque el muntjac sobre una superficie de cama suave en reclinación esternal, con la cabeza ligeramente elevada para reducir el riesgo de regurgitación y aspiración de contenido ruminal. Vigilar de cerca al animal hasta que esté completamente recuperado y pueda ambular alrededor del recinto sin ayuda.</li>
</ol>

<ol>
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Los autores no tienen nada que revelar.

Este protocolo describe el uso de la sonografía del transabdominal para la diagnosis del embarazo en Reeves' ciervos del muntjac. De acuerdo con otros estudios de ultrasonido, el equipo apropiado y la competencia técnica son imprescindibles para un examen reproductivo exitoso del do muntjac. La revisión cuidadosa de la anatomía mamífera básica, de los principios físicos del ultrasonido de diagnóstico, y del aspecto ultrasonographic típico de las vísceras abdominales ayudará en la reducción de diagnosis equivocadas. Además, la selección de transductores apropiados y la familiaridad con la instrumentación y los controles del escáner son fundamentales para obtener imágenes de alta calidad e interpretación precisa.
Para muchos ultrasonographers inexpertos, los artefactos de la proyección de imagen son una causa común de la resolución pobre de la imagen y del gravamen inexacto de estructuras. La reverberación en la interfaz piel-transductor es uno de los artefactos lo más frecuentemente encontrados en ultrasonido abdominal veterinario, y se puede reducir perceptiblemente eliminando la presencia de gas entre las dos superficies. La depilación adecuada y la generosa aplicación de gel acústico a la piel deben ser suficientes para minimizar el impacto de este artefacto. Las discusiones de otros artefactos de la proyección de imagen se pueden encontrar en varios textos de la sonografía humana y veterinaria, y por lo tanto no serán discutidos más detalladamente aquí; sin embargo, un conocimiento general de estos fenómenos permitirá al ultrasonógrafo controlarlos más eficazmente24.
Si se realiza un examen reproductivo, se debe entender que el útero puede ser difícil de visualizar en un animal normal, no embarazada. En embarazo temprano, el lumen del útero puede llegar a ser identificable como hypoechoic al espacio anecoico mientras que las formas del saco gestacional. En esta etapa en el muntjac, el útero se puede encontrar típicamente explorando en el nivel de, o levemente caudal a, las glándulas mamarias. Antes de la mineralización esquelética o de la aparición de un latido del corazón fetal, el embarazo puede diagnosticarse erróneamente en presencia de otras condiciones reproductivas que hacen que se acumule líquido en el útero, lo que puede incluir patologías como piometra, hidrometra o mucometra. Los diagnósticos de ultrasonido deben realizarse junto con una evaluación clínica completa del animal antes de la sedación para el procedimiento. En la gestación temprana, el conceptus aparecerá como una estructura esférica a ovoide, hiperecoica dentro del saco amniótico. Los puntos específicos de tiempo de desarrollo no están bien caracterizados en esta especie; sin embargo la mineralización esquelética y el movimiento cardiaco fetal aparecen ser constantemente perceptibles en aproximadamente 8 semanas de poste-apareamiento.
En condiciones ideales, el ultrasonido transabdominal puede ser una herramienta increíblemente útil para la evaluación de las estructuras reproductivas en muchas especies, incluido el muntjac de Reeves. El valor de esta técnica, sin embargo, depende en gran medida de las capacidades específicas de las instalaciones de alojamiento de los animales. A diferencia de los mecanismos más pasivos de detección del embarazo, como la observación visual del comportamiento de apareamiento y la posterior distensión abdominal de la dora, el ultrasonido requiere la restricción física y / o química del animal durante un período de tiempo que dura de 5 a 10 minutos o más. En muchas instalaciones, esto no es posible o práctico, y la necesidad del examen debe considerarse sobre la base de los objetivos específicos del estudio. Además, ciertos estados fisiológicos o patológicos pueden sugerir que la ecografía está contraindicada en ciertos animales debido a los efectos potencialmente perjudiciales de la angustia relacionada con la captura y la sedación. Es importante evaluar la idoneidad de cada animal para el examen ecográfico antes de iniciar el estudio, y se debe consultar a un veterinario en las etapas de planificación de estos proyectos.
Las prácticas actuales para la detección del embarazo en el muntjac de Reeves y otras especies de vida silvestre son típicamente pasivas en la naturaleza (observación del comportamiento de apareamiento y distensión abdominal en hace). La progesterona sérica o los niveles de glicoproteína asociados al embarazo pueden ser medidos para confirmar el diagnóstico18,25,sin embargo, los resultados de estos ensayos no proporcionan ninguna información sobre la etapa de gestación o la viabilidad fetal. El ultrasonido ofrece el beneficio de permitir la evaluación en tiempo real del estado reproductivo con una precisión similar o mayor que la de los ensayos de hormonas séricas18,manteniendo al mismo tiempo una mínima invasividad y angustia para los animales. En las operaciones donde la fecha de reproducción es difícil o imposible de determinar, el ultrasonido puede proporcionar un mecanismo más preciso para estimar la etapa de gestación que los ensayos hormonales, incluso en ausencia de tablas gestacionales publicadas. Además, la restricción física y química para el examen de ultrasonido parece causar una angustia mínima a muntjac saludable y proporciona una oportunidad ideal para realizar un examen físico completo y recoger muestras adicionales (sangre, orina, etc.)para evaluaciones generales de la salud.
La estimación de la edad gestacional mediante mediciones ultrasonográficas se ha establecido en muchas especies, incluyendo bovinos1,ovinos2,3,caprinos4,y caballos5,y se ha descrito en un número limitado de especies de cérvidos también8-19. En ausencia de fechas exactas de reproducción o tablas de gestación establecidas, la edad fetal del muntjac de Reeves solo se puede estimar aproximadamente en función de los parámetros de desarrollo fetal descritos para otras especies. Un objetivo específico del trabajo descrito aquí es establecer pautas más formales para el envejecimiento fetal en esta especie. Con suficientes datos normativos en su lugar, las aplicaciones futuras de la ecografía en esta colonia incluirán la identificación de anomalías en el desarrollo fetal en presencia de diferentes variables experimentales y la evaluación de la viabilidad fetal. Además, la sensibilidad y la especificidad del ultrasonido transabdominal se pueden determinar y comparar a otros mecanismos comúnmente empleados para detectar embarazo en especies del cérvido.

El examen ultrasonográfico es un método bien descrito de diagnóstico de embarazo en bovinos1,ovinos2,3,caprinos4,caballos5,animales de compañía6,7y otras especies de animales domésticos. Esta modalidad de imagen también se ha identificado como una herramienta valiosa para la detección del embarazo y la estimación de la edad fetal en varias especies de cérvidos cautivos, incluidos los ciervosbarbechos 8-11,los ciervos rojos12-16,los ciervos sika de Hokkaido17y los renos18,19. En muchos casos, la ecografía ha producido tasas de precisión más altas que otros mecanismos de detección del embarazo, como la progesterona sérica o el análisis de glicoproteínas asociadas al embarazo9,18. Además, la visualización ultrasonographic de la zona reproductiva puede proporcionar la información adicional con respecto a viabilidad fetal, a edad gestacional, y a la identificación de las anormalidades de desarrollo que serían de otra manera difíciles de determinar. La utilidad de la ecografía para evaluar el estado reproductivo sugiere que esta metodología debería adaptarse a otras especies en las que se utilizan programas de reproducción activa.
El ciervo muntjac de Reeves (Muntiacus reevesi) es una pequeña especie de cérvido nativo del sudeste asiático20. Si bien el ciclo reproductivo de estos animales no está bien caracterizado en sus territorios nativos, los estudios de poblaciones asilvestradas en partes del sur de Inglaterra han mejorado la comprensión de sus patrones de reproducción20. A diferencia de la mayoría de los cérvidos, el muntjac de Reeves parece reproducirse durante todo el año, sin picos de aduladores estacionales aparentes20-22. Muntjac femenino da a luz típicamente a un solo cervatillo que sigue un período de gestación de 210 días, y entra confiablemente en un estro postparto dentro de 24 horas20-22. ¿Que no conciben durante este período postparto volverá al celo aproximadamente 24-25 días más tarde20. En situaciones cautivas, la reproducción se logra típicamente mediante la vivienda con uno o más machos intactos. Este sistema produce tasas de concepción satisfactorias y requiere poca habilidad técnica para el personal, sin embargo, las fechas exactas de reproducción son difíciles, si no imposibles, de determinar.
Los muntjac se utilizan comúnmente en estudios citogenéticos debido a la amplia gama de números de cromosomas diploides y la alta tasa de diversificación cariotípica entre las diferentes especies23. Estos animales también están siendo investigados actualmente como modelo de patogénesis y transmisión de la enfermedad priónica, con especial interés en el estudio de la transmisión vertical de la enfermedad de pérdida crónica (CWD) en cérvidos. La importancia del muntjac en una serie de diferentes aplicaciones de investigación sugiere que se deben establecer tecnologías reproductivas mejoradas para complementar los procedimientos de investigación actuales. Específicamente, los mecanismos no invasores para evaluar el período gestacional podrían potencialmente aclarar variaciones críticas en funcionamiento reproductivo y crecimiento y desarrollo fetal bajo diversas condiciones experimentales. Además, el desarrollo de referencias de medición fetal en tiempo real sería potencialmente valioso para estimar la edad gestacional en situaciones en las que no se pueden determinar las fechas de reproducción. Estudios previos han descrito mecanismos para el uso de mediciones fetales, tales como la longitud de la corona-grupa (CRL), la profundidad torácica (EC) y la longitud de la cabeza (HL) para estimar la etapa aproximada de gestación en especies cérvidas11-14, 16,17. Además, algunos de estos estudios también han establecido pautas que describen cuándo se pueden identificar hitos específicos del desarrollo, como la mineralización esquelética o los latidos del corazón fetales,8-19. Si bien estos datos pueden ser útiles para ayudar a guiar el análisis de ultrasonido reproductivo en el muntjac, la mayoría de las otras especies de cérvidos estudiadas tienen un tamaño corporal mucho mayor y períodos gestacionales más largos, lo que reduce el valor de traslación de estos estudios para aplicaciones de muntjac.
El protocolo contorneado aquí describe la sonografía transabdominal del muntjac femenino con el fin de diagnosticar y de supervisar embarazo. La ejecución acertada de este protocolo puede facilitar la detección temprana del embarazo y la evaluación del crecimiento y del desarrollo fetales. Esta técnica tiene aplicaciones valiosas en la realización de estudios que investigan la reproducción, el desarrollo en el útero o la transmisión vertical de enfermedades infecciosas en un modelo de cérvido pequeño y también puede ser útil para fines clínicos en operaciones de cría en cautividad.

<table><tbody><tr><td>Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)</td><td>Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge, Iowa</td><td>NADA 135-780</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone tartrate (0.035 mg/kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine HCl (0.04 mg/kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound contact gel</td><td>Medline, Mundelein, Illinois</td><td>MDS092005</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezole hydrochloride (Antisedan) (0.25 mg/kg)</td><td>Orion Corporation, Espoo, Finland</td><td>NADA 141-033</td><td></td></tr><tr><td>V-trough (optional)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Animal may be supported in dorsal recumbency on a standard examination table or other surface without the use of a V-trough</td></tr><tr><td>Electrical clippers or razor blades for hair removal</td><td>Oster, McMinnville, Tennessee</td><td>78005-140</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound system: Ibex Pro portable ultrasound</td><td>E.I. Medical Imaging, Loveland, CO</td><td>Ibex Pro</td><td></td></tr><tr><td>5-10 MHz transducer: CL3.8 5-2.5 MHz 60 mm curved linear array</td><td>E.I. Medical Imaging, Loveland, CO</td><td>290420</td><td></td></tr><tr><td>3 ml syringes</td><td>Covidien</td><td>1.18E+09</td><td></td></tr><tr><td>22 G needles</td><td>Covidien</td><td>8.88E+09</td><td></td></tr></tbody></table>

transabdominal ultrasound for pregnancy diagnosis in reeves' muntjac deer

Los ciervos muntjac de Reeves (Muntiacus reevesi) son una pequeña especie de cérvido nativa del sudeste asiático, y actualmente están siendo investigados como un modelo potencial de transmisión y patogénesis de la enfermedad priónica. La transmisión vertical es un área de interés entre los investigadores que estudian las enfermedades infecciosas, incluida la enfermedad priónica, y estas investigaciones requieren métodos eficientes para evaluar los efectos de la infección materna en el rendimiento reproductivo. El examen ultrasonográfico es una herramienta bien establecida para diagnosticar el embarazo y evaluar la salud fetal en muchas especies animales1-7,incluidas varias especies de cérvidos cultivados8-19,sin embargo, esta técnica no se ha descrito en el ciervo muntjac de Reeves. Aquí describimos el uso del ultrasonido del transabdominal para detectar embarazo en muntjac hace y para evaluar crecimiento y el desarrollo fetales a través del período gestacional. Usando este procedimiento, los animales embarazados fueron identificados tan pronto como 35 días después del emparejamiento del dor-buck y éste era un medio eficaz de supervisar con seguridad el embarazo a intervalos regulares. Los objetivos futuros de este trabajo incluirán el establecimiento de referencias de medición fetal normales para la estimación de la edad gestacional, la determinación de la sensibilidad y la especificidad de la técnica para el diagnóstico del embarazo en diversas etapas de la gestación, y la identificación de variaciones en el crecimiento y desarrollo fetal bajo diferentes condiciones experimentales.

Usando el protocolo descrito aquí, el embarazo se puede diagnosticar y supervisar en los ciervos muntjac de Reeve con técnicas como mínimo invasores. El punto de tiempo más temprano que el embarazo pudo ser detectado por los autores fue aproximadamente 35 días después del comportamiento de apareamiento observado.
En los primeros tiempos de la gestación, el embarazo fue diagnosticado visualizando un útero lleno de líquido identificado como espacio anecoico en el abdomen caudal. Dentro del útero, el embrión en desarrollo apareció como una estructura hiperecoica, ovoide con pocas características identificables (Figura 1). A medida que avanzaba el embarazo, las estructuras fetales se hicieron evidentes y se pudo hacer un diagnóstico concluyente tras la observación de la mineralización esquelética y el latido del corazón fetal(Figuras 2 y 3).
Las mediciones fetales se pueden obtener y utilizar para establecer pautas de referencia para estimar la edad gestacional en los casos en que no se conoce una fecha exacta de reproducción, aunque todavía no hemos desarrollado completamente este sistema en el muntjac. La longitud recta de la corona-grupa (SCRL), el HL, y el CD son las medidas fetales estándar que se utilizan comúnmente para estimar edad fetal en muchas especies17,y estas medidas fueron obtenidas de imágenes del ultrasonido de los embarazos del muntjac usando el protocolo descrito aquí. Las tres mediciones se pueden obtener a partir de la misma imagen sagital correctamente colocada(Figuras 2 y 3),pero se pueden utilizar imágenes separadas si todo el feto no puede ser capturado en una sola vista sagital. En el futuro, estas técnicas también se pueden utilizar para identificar las variaciones en el crecimiento y el desarrollo observadas en diferentes condiciones experimentales y para determinar la viabilidad fetal.
<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50855/50855fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50855/50855fig1.jpg"> Figura 1. Imagen del ultrasonido que demuestra embarazo temprano en un Reeves' ciervos del muntjac. La mente en este estudio había sido alojada con un muntjac macho intacto durante 46 días, sin embargo, no se conoce una fecha exacta de reproducción. Las características fetales no son distinguibles en esta etapa de la gestación.
<img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50855/50855fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50855/50855fig2.jpg"> Figura 2. Imagen de ultrasonido del mismo embarazo representado en la Figura 1, 91 días después de la introducción de la mente a la pelota. (CD - profundidad del pecho, HL - longitud de la cabeza, P - placentome, SCRL - longitud recta de la corona-grupa).
<img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50855/50855fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50855/50855fig3.jpg"> Figura 3. Imagen del ultrasonido de un segundo embarazo que demuestra la colocación apropiada para obtener medidas fetales. Imagen tomada 91 días después de la introducción del do a la pelota. (CD - profundidad del pecho, HL - longitud de la cabeza, P - placentome, SCRL - longitud recta de la corona-grupa).

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Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

El ultrasonido de Transabdominal se describe como medios eficaces, no invasores para evaluar la situación reproductiva en Reeves' ciervos del muntjac. Estos métodos se pueden utilizar para alcanzar diagnosis temprana del embarazo y para evaluar viabilidad fetal. Los usos futuros de esta técnica incluyen la valoración de la edad gestacional y los efectos de la enfermedad maternal sobre el desarrollo fetal.

Ultrasonido transabdominal para el diagnóstico del embarazo en los ciervos muntjac de Reeves

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

transabdominal-ultrasound-for-pregnancy-diagnosis-reeves-muntjac

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

10.2K vistas.  Colorado State University. El ultrasonido de Transabdominal se describe como medios eficaces, no invasores para evaluar la situación reproductiva en Reeves' ciervos del muntjac. Estos métodos se pueden utilizar para alcanzar diagnosis temprana del embarazo y para evaluar viabilidad fetal. Los usos futuros de esta técnica incluyen la valoración de la edad gestacional y los efectos de la enfermedad maternal sobre el desarrollo fetal.

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Murine Fetal Echocardiography

Transgenic mice displaying abnormalities in cardiac development and function represent a powerful tool for the understanding the molecular mechanisms underlying both normal cardiovascular function and the pathophysiological basis of human cardiovascular disease. Fetal and perinatal death is a common feature when studying genetic alterations affecting cardiac development 1-3. In order to study the role of genetic or pharmacologic alterations in the early development of cardiac function, ultrasound imaging of the live fetus has become an important tool for early recognition of abnormalities and longitudinal follow-up. Noninvasive ultrasound imaging is an ideal method for detecting and studying congenital malformations and the impact on cardiac function prior to death 4. It allows early recognition of abnormalities in the living fetus and the progression of disease can be followed in utero with longitudinal studies 5,6. Until recently, imaging of fetal mouse hearts frequently involved invasive methods. The fetus had to be sacrificed to perform magnetic resonance microscopy and electron microscopy or surgically delivered for transillumination microscopy. An application of high-frequency probes with conventional 2-D and pulsed-wave Doppler imaging has been shown to provide measurements of cardiac contraction and heart rates during embryonic development with databases of normal developmental changes now available 6-10. M-mode imaging further provides important functional data, although, the proper imaging planes are often difficult to obtain. High-frequency ultrasound imaging of the fetus has improved 2-D resolution and can provide excellent information on the early development of cardiac structures 11.

Fetal and perinatal death is a common feature when studying genetic alterations affecting cardiac development. High-frequency ultrasound imaging has improved 2-D resolution and can provide excellent information on early cardiac development and is an ideal method to detect the impact on cardiac structure and function prior to death.

La ecocardiografía fetal murino

Transgenic mice displaying abnormalities in  cardiac development and function represent a powerful tool for the understanding  the molecular mechanisms ...

Investigación

Medicina

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is routinely used as an in vivo model to study embryo implantation and pregnancy progression. Unfortunately, such murine studies require pregnancy interruption to enable follow-up phenotypic analysis. To address this issue, we used three-dimensional (3-D) reconstruction of HFUS imaging data for early detection and characterization of murine embryo implantation sites and their individual developmental progression in utero. Combining HFUS imaging with 3-D reconstruction and modeling, we were able to accurately quantify embryo implantation site number as well as monitor developmental progression in pregnant C57BL6J/129S mice from 5.5 days post coitus (d.p.c.) through to 9.5 d.p.c. with the use of a transducer. Measurements included: number, location, and volume of implantation sites as well as inter-implantation site spacing; embryo viability was assessed by cardiac activity monitoring. In the immediate post-implantation period (5.5 to 8.5 d.p.c.), 3-D reconstruction of the gravid uterus in both mesh and solid overlay format enabled visual representation of the developing pregnancies within each uterine horn. As genetically engineered mice continue to be used to characterize female reproductive phenotypes derived from uterine dysfunction, this method offers a new approach to detect, quantify, and characterize early implantation events in vivo. This novel use of 3-D HFUS imaging demonstrates the ability to successfully detect, visualize, and characterize embryo-implantation sites during early murine pregnancy in a non-invasive manner. The technology offers a significant improvement over current methods, which rely on the interruption of pregnancies for gross tissue and histopathologic characterization. Here we use a video and text format to describe how to successfully perform ultrasounds of early murine pregnancy to generate reliable and reproducible data with reconstruction of the uterine form in mesh and solid 3-D images.

Mice are widely used to study gestational biology. However, pregnancy termination is required for such studies which precludes longitudinal investigations and necessitates the use of large numbers of animals. Therefore, we describe a non-invasive technique of high-frequency ultrasonography for early detection and monitoring of post-implantation events in the pregnant mouse.

Un nuevo uso de la ecografía tridimensional de alta frecuencia para la caracterización de embarazo temprano en el ratón

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...

Biología del Desarrollo

Fetal Echocardiography and Pulsed-wave Doppler Ultrasound in a Rabbit Model of Intrauterine Growth Restriction

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ultrasound and fetal echocardiography. Increasingly, these imaging modalities are being employed clinically to examine cardiac function and assess wellbeing in utero, thereby guiding timing of birth decisions. Here, we used a rabbit model of IUGR that allows analysis of cardiac function in a clinically relevant way. Using isoflurane induced anesthesia, IUGR is surgically created at gestational age day 25 by performing a laparotomy, exposing the bicornuate uterus and then ligating 40-50% of uteroplacental vessels supplying each gestational sac in a single uterine horn. The other horn in the rabbit bicornuate uterus serves as internal control fetuses. Then, after recovery at gestational age day 30 (full term), the same rabbit undergoes examination of fetal cardiac function. Anesthesia is induced with ketamine and xylazine intramuscularly, then maintained by a continuous intravenous infusion of ketamine and xylazine to minimize iatrogenic effects on fetal cardiac function. A repeat laparotomy is performed to expose each gestational sac and a microultrasound examination (VisualSonics VEVO 2100) of fetal cardiac function is performed. Placental insufficiency is evident by a raised pulsatility index or an absent or reversed end diastolic flow of the umbilical artery Doppler waveform. The ductus venosus and middle cerebral artery Doppler is then examined. Fetal echocardiography is performed by recording B mode, M mode and flow velocity waveforms in lateral and apical views. Offline calculations determine standard M-mode cardiac variables, tricuspid and mitral annular plane systolic excursion, speckle tracking and strain analysis, modified myocardial performance index and vascular flow velocity waveforms of interest. This small animal model of IUGR therefore affords examination of in utero cardiac function that is consistent with current clinical practice and is therefore useful in a translational research setting.

We describe examination of fetal cardiac function with contemporary functional fetal echocardiography and fetoplacental Doppler ultrasound using the VisualSonics VEVO 2100 microultrasound in a surgically induced model of intrauterine fetal growth restriction in a rabbit.

Ecocardiografía Fetal y Ecografía Doppler de onda pulsada en un modelo de conejo de Restricción del crecimiento intrauterino

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ...

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and painless, and the application is easy, fast, and can be done anywhere, even with mobile devices. During pregnancy, ultrasound imaging is standardly used to closely monitor fetal development. The technique is important to assess intrauterine growth restriction (IUGR), a pregnancy complication with short- and long-term health consequences for both the mother and fetus. Understanding the process of IUGR is indispensable for developing effective therapeutic strategies. 
The ultrasound system used in this manuscript is an ultrasound device produced for the analysis of small animals and can be used in various research fields, including pregnancy research. Here we describe the usage of the system for in vivo analysis of fetuses from natural killer (NK) cell/mast cell (MC)-deficient mothers that give birth to growth-restricted pups. The protocol includes preparation of the system, handling of the mice before and during measurements, and the usage of the B-mode, color doppler mode, and pulse-wave doppler mode. Fetal size, placental size, and blood supply to the fetus were analyzed. We found reduced implantation sizes and smaller placentas in NK/MC-deficient mice from mid-gestation onwards. In addition, MC/NK-deficiency was associated with absent and reversed end diastolic flow in the fetal Arteria umbilicalis(UmA) and an elevated resistance index. The methods described in the protocol can easily be used for related and non-related research topics.

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Here we describe the technique of high frequency ultrasound for in vivo analysis of fetuses in mice. This method allows the follow-up of fetuses and the analysis of placental parameters as well as maternal and fetal blood flow throughout pregnancy.

Ultrasonido de alta frecuencia para el análisis del desarrollo Fetal y placentario en Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and ...

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to assessing pathology post-mortem in animals euthanized at multiple time points in different cohorts, which increases the number of mice needed for a study. Imaging mice in longitudinal studies can track the progression of disease in individual animals, reducing the number of mice needed. Advances in ultrasound technology have allowed for the detection of micrometer-level changes in tissues. Ultrasound has been used to study follicle maturation in ovaries and xenograft growth but has not been applied to morphological changes in the mouse uterus. This protocol examines the juxtaposition of pathology with in vivo imaging comparisons in an induced endometrial cancer mouse model. The features observed by ultrasound were consistent with the degree of change seen by gross pathology and histology. Ultrasound was found to be highly predictive of the observed pathology, supporting the incorporation of ultrasonography into longitudinal studies of uterine diseases such as cancer in mice.

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

This protocol describes a method for monitoring the progression of morphological changes over time in the uterus in an inducible mouse model of endometrial cancer using ultrasound imaging with correlation to gross and histological changes.

Evaluación ecográfica no invasiva de la progresión del cáncer de endometrio en la deleción dirigida por Pax8 de los supresores tumorales Arid1a y Pten en ratones

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Investigación sobre el cáncer

Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment

The mouse is the mammalian animal model of choice for many human diseases and biological processes. Developmental biology often requires staged-pregnant mice to determine evolving processes at various timepoints. Moreover, optimal and efficient breeding of model mice requires an assessment of timed pregnancies. Most commonly, mice are mated overnight, and the presence of a vaginal plug is determined; however, the positive predictive value of this technique is suboptimal, and one needs to wait to know if the mouse is truly pregnant. High-resolution ultrasound biomicroscopy is an effective and efficient tool for imaging: 1) Whether a mouse is pregnant; 2) What gestational stage the mouse has reached; and 3) Whether there are intrauterine losses. In addition to the embryos and fetuses, the investigator must also recognize common artifacts in the abdominal cavity so as not to mistake these for a gravid uterus. This article provides a protocol for imaging along with illustrative examples.

High-resolution ultrasound can help streamline experiments requiring timed-pregnant mice by determining the state of pregnancy, gestational age, and pregnancy losses. Presented here is a protocol to illustrate methods to assess mouse pregnancies as well as potential pitfalls (image artifacts) that may mimic pregnancy.

¿Está mi ratón embarazada? Evaluación de ultrasonido de alta frecuencia

The mouse is the mammalian animal model of choice for many human diseases and biological processes. Developmental biology often requires staged-pregnant ...

Murine Neural Plate Targeting by In Utero Nano-Injection (NEPTUNE) at Embryonic Day 7.5

Manipulating gene expression in the developing mouse brain in utero holds great potential for functional genetics studies. However, it has previously largely been restricted to the manipulation of embryonic stages post-neurulation. A protocol was developed to inject the amniotic cavity at embryonic day (E)7.5 and deliver lentivirus, encoding cDNA or shRNA, targeting &gt;95% of the neural plate and neural crest cells, contributing to the future brain, spinal cord, and peripheral nervous system. This protocol describes the steps necessary to achieve successful transduction, including grinding of the glass capillary needles, pregnancy verification, developmental staging using ultrasound imaging, and optimal injection volumes matched to embryonic stages. 
Following this protocol, it is possible to achieve transduction of &gt;95% of the developing brain with high-titer lentivirus and thus perform whole-brain genetic manipulation. In contrast, it is possible to achieve mosaic transduction using lower viral titers, allowing for genetic screening or lineage tracing. Injection at E7.5 also targets ectoderm and neural crest contributing to distinct compartments of the eye, tongue, and peripheral nervous system. This technique thus offers the possibility to manipulate gene expression in mouse neural-plate- and ectoderm-derived tissues from preneurulation stages, with the benefit of reducing the number of mice used in experiments.

Murine Neural Plate Targeting by In Utero Nano-Injection NEPTUNE at Embryonic Day 7.5

In this protocol, we describe how to inject the mouse amniotic cavity at E7.5 with lentivirus, leading to uniform transduction of the entire neural plate, with minimal detrimental effects on survival or embryonic development.

Focalización de la placa neural murina mediante nanoinyección in utero (NEPTUNE) en el día embrionario 7.5

Manipulating gene expression in the developing mouse brain in utero holds great potential for functional genetics studies. However, it has previously ...

Ultrasonography in Experimental Reproductive Investigations on Rats

With the development of assisted reproductive technology and the ethical limitations of research on humans, rat animal models have been widely used in reproductive medicine. In the past, the study of reproductive system development in rodents has been based on one-time histological examination of excised tissues. Recently, with the development of high-resolution transabdominal ultrasound, high-quality sonography can now be performed to evaluate the reproductive organs of rats, allowing a new method for studying the reproductive system. Images were obtained using a high-resolution ultrasonographic system. Gynecological ultrasonography was performed on 28 eight-week-old non-pregnant rats and 5 pregnant Sprague-Dawley rats. We describe how to recognize organs of the reproductive system and associated structures in typical views during different phases of the estrus cycle. Color flow Doppler was used to measure uterine artery blood flow and evaluate uterine blood flow pattern changes during different stages of pregnancy. We have demonstrated that ultrasound exploration is a useful method for evaluating changes in internal reproductive organs. Its use raises the possibility of conducting additional experiments, including medical or surgical procedures, and provides the ability to monitor sonographic changes to internal organs without sacrificing animals.

This manuscript describes the utility of ultrasound performed on female rats to design experimental models for reproductive and gynecological investigation. A step-by-step explanation of how to perform ultrasonographic evaluation is shown.

Ultrasonografía en las investigaciones de reproducción Experimental en ratas

With the development of assisted reproductive technology and the ethical limitations of research on humans, rat animal models have been widely used in ...

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

Métodos de recolección de leche Ratones y Reeves Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Biología

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive behaviors and the acquisition of gametes and embryos for physiological or molecular research. Amphibians contribute to one-quarter to one-third of vertebrate research, and of interest in this context is their contribution to the scientific community&#39;s knowledge of reproductive processes and embryological development. However, most of this knowledge is derived from a small number of species. In recent times, the decimation of amphibians across the globe has required increasing intervention by conservationists. The captive recovery and assurance colonies that continue to emerge in response to the extinction risk make existing research and clinical applications invaluable to the survival and reproduction of amphibians held under human care. The success of any captive population is founded on its health and reproduction and the ability to develop viable offspring that carry forward the most diverse genetic representation of their species. For researchers and veterinarians, the ability to monitor and control ovarian development and health is, therefore, imperative. The focus of this article is to highlight the different assisted reproductive techniques that can be used to monitor and, where appropriate or necessary, control ovarian function in amphibians. Ideally, any reproductive and health issues should be reduced through proper captive husbandry, but, as with any animal, issues of health and reproductive pathologies are inevitable. Non-invasive techniques include behavioral assessments, visual inspection and palpation and morphometric measurements for the calculation of body condition indices and ultrasound. Invasive techniques include hormonal injections, blood sampling, and surgery. Ovarian control can be exercised in a number of ways depending on the application required and species of interest.

The study of amphibian biology provides valuable information on the reproductive, physiological, embryological and developmental processes that drive organisms of many taxonomic groups. Here, we present a comprehensive guide on different methodologies that can be used to study ovarian control and monitoring in amphibians.

Técnicas Reproductivas para el Monitoreo y Control de La Ovacada en Anfibios

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...