Diese Studie zeigt, dass der manuell geführte Ultraschall gut geeignet ist, um die Entwicklung der Uteruspathologie in einem induzierten Mausmodell des Endometriumkarzinoms zu überwachen. Die Ultraschallbildgebung ist nicht-invasiv und ermöglicht somit Längsschnittstudien einzelner Mäuse über Tage und Wochen hinweg. Dies ermöglicht es, individuelle Variationen zu erfassen und letztendlich weniger Tiere für die Untersuchung zu verwenden.
Diese Methode kann leicht zur Überwachung pathologischer Veränderungen und anderer Spiegelungsmodelle angewendet werden, einschließlich solcher für Neoplasien und chronische Erkrankungen des Harn- und Verdauungstrakts. Beginnen Sie mit der Einrichtung des Ultraschallgeräts für die Bildgebung der Gebärmutter oder des Eierstocks, indem Sie einen Schallkopf oder eine Sonde mit einem Bereich von 32 bis 56 Megahertz auswählen. Gehen Sie auf dem Startbildschirm zur Registerkarte Anwendungen und wählen Sie Mausmodus für kleinen Bauch.
Klicken Sie dann auf Scannen, um zum Startbildschirm zurückzukehren, und warten Sie, bis ein Live-Bild angezeigt wird. Wählen Sie als Nächstes den B-Modus aus den Optionen in der linken Symbolleiste, bevor Sie auf die Option Weitere Steuerelemente klicken, um zusätzliche Werkzeuge für die Bildverfeinerung anzuzeigen, z. B. Bildverstärkung und -tiefe, oder um die Einstellungen für die Clip-Aufnahme anzupassen, z. B. die Anzahl der Bilder pro Sekunde. Sobald Sie die Bildeinstellungen ausgewählt haben, kehren Sie zum Startbildschirm zurück, indem Sie auf B-Modus klicken.
Legen Sie eine drei bis 10 Milliliter große Spritze, die mit einer sterilen isotonischen Flüssigkeitslösung gefüllt ist, für einige Minuten zwischen ein Heizkissen und ein saugfähiges Pad, um es auf 35 bis 40 Grad Celsius vorzuheizen. Wenn das Gerät keinen Stövchen hat, legen Sie eine Flasche Ultraschallgel auf das Heizkissen. Um ein bis zwei Milliliter Lösung in die Bauchhöhle einer Maus zu injizieren, befestigen Sie die Maus mit einer Hand am Genick und legen Sie das Ventrum frei.
Halten Sie die Maus dann in einem Winkel von etwa 20 Grad, wobei die Nase zum Boden zeigt. Führen Sie eine 25-Gauge-Tuberkulin-Spritzennadel durch die Haut und die Bauchdecke des kaudalen rechten Quadranten des Abdomens ein. Um eine Injektion in das Gefäßsystem oder den Magen-Darm-Trakt zu vermeiden, ziehen Sie den Spritzenkolben mit minimalem Druck zurück, um nach Blut zu suchen.
Positionieren Sie die Maus in ventraler Liegeposition auf dem saugfähigen Pad über einem Heizkissen, bevor Sie einen Nagetiernasenkegel sicher über die Nase und die Schnauze der Maus legen. Platzieren Sie eine kleine Menge des vorgewärmten Ultraschallgels abaxial zur Wirbelsäule auf beiden Seiten der anästhesierten Maus zwischen der letzten Rippe und dem Becken. Geben Sie eine kleine Menge Gel auf die Ultraschallsonde.
Als nächstes platzieren Sie die Sonde parallel zu den Wirbeln, wobei sich die Vorderseite der Sonde auf der kranialen Seite befindet. Scannen Sie mit einer Maus in Bauchlage langsam den Bereich nach dem Orientierungspunkt der Niere. Mit Blick auf die Niere ziehen Sie die Sonde kaudal, um den Eierstock zu finden, der eine leicht echoarme ovale bis runde Struktur innerhalb eines sehr echoarmen ovariellen Fettpolsters ist, das kranial-ventral von der Niere und dorsal-lateral von der dorsalen Bauchwand begrenzt wird.
Verbessern Sie den Bildkontrast, indem Sie die Signalverstärkung mit dem Schieberegler am unteren Rand des Steuerungsbildschirms anpassen. Um die Darstellung der Niere zu verbessern, üben Sie mit einem Finger Druck auf den kontralateralen Bauch aus. Variieren Sie den Druck und den Winkel von parallel zur Wirbelsäule bis etwa 20 Grad ventral.
Sobald das gewünschte Organ sichtbar ist, nehmen Sie ein Video auf, indem Sie auf Clip speichern oder Aufnahme starten klicken. Wenn Sie fertig sind, klicken Sie auf Aufnahme beenden, um Bilder bei einer voreingestellten Anzahl von Bildern beizubehalten. Halten Sie die Sonde kaudal, bis sich der Eierstock im kranialsten Aspekt des Gesichtsfeldes befindet.
Variieren Sie den Druck und den Winkel der Sonde, um die Gebärmutter zu betrachten und abzubilden. Wiederholen Sie die Video- und Bildsammlung für jedes Organ von Interesse. Finde die Gebärmutter, die in Längsrichtung entlang der dorsalen Bauchdecke verläuft, mit Blick auf die seitliche Beinmuskulatur.
Überwachen Sie das Gewebe auf eine peristaltische Bewegung, um die Darmschlingen von den stationären Hörnern der Gebärmutter zu unterscheiden. Platzieren Sie die Maus in dorsaler Lage, um die Bilder aus einem ventralen Zugang zu sammeln. Stellen Sie sicher, dass die Augenbefeuchtung ausreichend ist und die Schnauze im Nasenkonus befestigt ist.
Tragen Sie eine kleine Menge des vorgewärmten Ultraschallgels auf den ventralen Abdomen auf, bevor Sie die Sonde an der Mittellinie und am Schädel des Schambeins anbringen, um die Blase als echoarmen Orientierungspunkt zu lokalisieren. Um die Gebärmutterhörner zu finden, ziehen Sie die Sonde seitlich zur Blase. Üben Sie leichten digitalen Druck von einer oder beiden Seiten der Maus aus.
Sobald sich die Uterushörner im Sichtfeld befinden, halten Sie die Sonde senkrecht zur Maus und scannen Sie beide Seiten des Abdomens, um Queransichten beider Hörner zu erfassen. Drehen Sie die Sonde, um sagittale Ansichten aufzunehmen. Wischen Sie die Maus nach dem Ultraschall mit einem Papiertuch ab, bevor Sie sie zur Erholung in ihren Käfig zurücklegen.
Sobald die Maus nach zwei bis fünf Minuten vollständig wach ist, bringen Sie die Maus in den Tierraum zurück. Der Ultraschallbildvergleich der Bauchhöhle der Maus vor und nach der Kochsalzinjektion zeigte die verbesserte Darstellung der Bauchorgane, einschließlich der Gebärmutter und der Eierstöcke nach der Kochsalzinjektion. Ein ventraler Zugang wurde verwendet, um die Querschnitte der Uterushörner neben der echoarmen Blase zu untersuchen.
Immunhistochemie mit Antikörpern, die gegen Arid1a und Pten gerichtet sind, wurde verwendet, um den adäquaten Verlust von Tumorsuppressorproteinen in den Epithelzellen der Gebärmutter im Vergleich zum benachbarten Stromagewebe zu untersuchen. Nach dreiwöchiger Doxycyclin-Behandlung wurden Ultraschallbilder eines Mausuterus mit frühen pathologischen Veränderungen entdeckt, die das echoarme und erweiterte Lumen des Uterus zeigten. In der grobpathologischen und histopathologischen Studie desselben Uterus wurden ein kleinerer, aber erweiterter dünnwandiger Uterus bzw. eine frühe Endometriumhyperplasie unter Beibehaltung des unterschiedlichen Lumens beobachtet.
Die Mäuse, die zu späteren Zeitpunkten eingeschläfert wurden, zeigten einen größeren Uterus mit einem kleineren Lumen und einer verdickten Wand. Beim Erlernen der manuellen Platzierung von Sonden können übermäßiger Druck oder schnelle Bewegungen die Organidentifizierung erschweren. Verwenden Sie sanfte, bewusste Bewegungen und konzentrieren Sie sich darauf, zuerst die Organe zu identifizieren, die Orientierungspunkte sind.
Am Ende der Studie werden Mäuse geopfert und Gewebe entnommen, um den Gen-Knockdown zu bestätigen und Gewebeveränderungen zu charakterisieren. Diese Technik ermöglicht es den Forschern, intraabdominelle Läsionen im Laufe der Zeit zu überwachen. Und in unserem Fall haben wir damit das Fortschreiten des Gebärmutterkrebses im iPad-Modell überwacht, was wir dann histopathologisch bestätigt haben.
