Chronische Pankreatitis ist eine komplexe Erkrankung mit Pankreasentzündungen, Fibrose, Bauchschmerzen und anderen Symptomen. Das Gallengangs-TNBS-Infusionsmodell repliziert die neuropathischen Schmerzen, die bei Patienten mit chronischer Pankreatitis beobachtet wurden. Dieses Gallengangs-TNBS-Infusionsprotokoll wurde optimiert, um die Erzeugung eines chronischen Pankreatitis-Modells bei Mäusen zu induzieren.
Da die Gallengangsmedikamentenfusion bei Mäusen technisch anspruchsvoll ist, wird ihre Visualisierung für Forscher, die neu in der Methode sind, hilfreich sein. Verwenden Sie vor und zwei und drei Wochen nach der Operation Von Frey-Monofilamente, um verschiedene Kraftniveaus in aufsteigender Reihenfolge auf den Oberbauchbereich einer acht bis 10 Wochen alten, C57 schwarzen sechs Maus anzuwenden, 10 Mal für ein bis zwei Sekunden pro Anwendung. Erwägen Sie, den Rückzug oder das Lecken des Bauches als positive Reaktion zu erhöhen.
Laden Sie als nächstes eine Insulinspritze, die mit einer 31-Gauge-Nadel ausgestattet ist, mit 50 Mikrolitern einer frisch zubereiteten 0,75-prozentigen TNBS-Lösung. Laden Sie eine zweite Spritze mit 50 Mikrolitern 10 Prozent Ethanol in Kochsalzlösung als Fahrzeugsteuerung und legen Sie beide Spritzen lichtgeschützt auf Eis. Nachdem Sie eine mangelnde Reaktion auf den Pedalreflex bestätigt haben, entfernen Sie die Haare aus der Bauchregion der betäubten Maus, indem Sie sich rasieren oder haarentfernungscreme auftragen und die Maus auf ein beheiztes Operationspad unter einem Seziermikroskop legen.
Tragen Sie Tiersalbe auf jedes Auge auf und desinfizieren Sie die Operationsstelle mit drei sequenziellen zwei Prozent Jod und drei 70 Prozent Ethanoltüchern verwenden Sie eine Mikroschere, um in einer kontinuierlichen Bewegung einen Schnitt von 0,5 bis einem Zentimeter zu machen, und verwenden Sie Wattestäbchen, um den Zwölffingerdarm sanft freizulegen und den gemeinsamen Gallengang zu lokalisieren. Um den Fluss der Behandlung in die Leber und gallenblase zu verhindern, verwenden Sie das Mikroskop, um einen geraden Mikro-Hämoclip über den proximalen gemeinsamen Kanal zu legen, und führen Sie die Nadel der TNBS-geladenen Spritze durch die Papille des Vaters in den Pankreasgang ein. Verwenden Sie einen gekrümmten Mikro-Hämoclip, um die Nadel zu sichern, und geben Sie die Lösung im Laufe einer Minute in den Pankreasgang.
Wenn die gesamte Lösung geliefert wurde, entfernen Sie vorsichtig die Mikroklemmen und bestätigen Sie, dass der Zwölffingerdarm in seine ursprüngliche Position zurückgekehrt ist. Vor dem Schließen der Bauchhöhle 500 Mikroliter von 36 bis 37 Grad Celsius sterile Kochsalzlösung hinzufügen, um dem Zwölffingerdarm zu helfen, in seine ursprüngliche Position zurückzukehren und die Wiederherstellung der Peristaltik zu unterstützen. Verwenden Sie eine kontinuierliche Naht mit einem Fünf-O-Stich, um den Schnitt in der Muskelschicht zu schließen, und schließen Sie die Haut mit einer unterbrochenen Naht mit einem Vier-O-Stich.
Dann legen Sie die Maus in einen Erholungskäfig auf einem Heizkissen mit Überwachung bis zur vollständigen Liege. Überwachen Sie die Gesundheit und das Verhalten der Maus täglich in der ersten Woche nach der Operation auf Anzeichen von Stress, wie Vokalisieren, eine gebeugte Rückenhaltung oder reduzieren Sie die Fortbewegung und messen Sie das Körpergewicht jeden zweiten Tag. Wie beobachtet, führt die Injektion von 50 Mikrolitern Tinte, wie gezeigt, zur Infiltration der gesamten Bauchspeicheldrüse, was die Induktion eines homogeneren Krankheitsphänotyps ermöglicht.
In dieser repräsentativen Analyse verloren die Mäuse in der Kontrollgruppe in den ersten drei Tagen nach der Operation etwa sechs Prozent ihres ursprünglichen Körpergewichts, bevor sie sich allmählich erholten und bis zum 21. Tag über 100% ihres ursprünglichen Körpergewichts zunahmen. Im Gegensatz dazu verloren Mäuse, die TNBS erhielten, in den ersten fünf Tagen nach der Operation etwa 15 Prozent ihres ursprünglichen Körpergewichts und gewannen bis zum 21. Tag knapp 100 Prozent ihres ursprünglichen Körpergewichts zurück. Im Vergleich zu Kontrollmäusen zeigten die TNBS-injizierten Tiere in der zweiten und dritten Woche nach der Operation eine erhöhte abdominale mechanische Überempfindlichkeit.
Die Größe und das Gewicht pro Körpergewicht der Bauchspeicheldrüse waren bei TNBS-Mäusen im Vergleich zu Bauchspeicheldrüsen, die von Kontrolltieren geerntet wurden, signifikant reduziert, was auf eine ausgeprägte Pankreasatrophie bei TNBS-behandelten Tieren hindeutet, die mit den Befunden bei Menschen mit schwerer und langfristiger chronischer Pankreatitis übereinstimmt. Die histologische Analyse von Pankreasgewebeabschnitten von mit Kontrollethanol behandelten Mäusen zeigte eine normale Morphologie, während Gewebeabschnitte von TNBS-behandelten Mäusen eine leere Realisierung mit einem massiven Verlust von Acinarzellen zeigten, die durch Fettzellinfiltration und Fibrose ersetzt wurden. Zu verhindern, dass das injizierte TNBS in die Galblase und den Darm gelangt, ist wichtig, da ein TNBS gewebeschädigende Wirkungen hat.
Halten Sie die Hand während der Infusion so stabil wie möglich, um eine Punktion dieses Gallengangs zu vermeiden. Neben der Induktion der Entwicklung einer chronischen Pankreatitis kann diese Gallengangsinfusionskunst für Mäuse für die Entwicklung der anderen Pankreaserkrankungsmodelle verwendet werden. Dieses TNBS-Modell der chronischen Pankreatitis Maus kann verwendet werden, um sowohl die Pathogenese als auch die Behandlung von chronischer Pankreatitis sowie anderer Pankreaserkrankungen zu untersuchen.
