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Komplementierung der Spleißaktivität durch einen Galectin-3 - U1 snRNP Komplex auf Perlen

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2.1K Views

•

08:48 min

•

December 9th, 2020

DOI :

10.3791/61990-v

December 9th, 2020

•

Patricia G. Voss¹, Kevin C. Haudek¹, Ronald J. Patterson², John L. Wang¹

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology, Michigan State University, ²Department of Microbiology and Molecular Genetics, Michigan State University

Zusammenfassung

Dieser Artikel beschreibt die experimentellen Verfahren zur (a) Depletion von U1 snRNP aus Kernextrakten mit gleichzeitigem Verlust der Spleißaktivität; und (b) Rekonstitution der Spleißaktivität im U1-depletierten Extrakt durch Galectin-3 - U1-snRNP-Partikel, die an Perlen gebunden sind, kovalent gekoppelt mit Anti-Galectin-3-Antikörpern.

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Pre mRNA Splei en

zellfreier Splei assay

Glyceringradientenfraktionierung

U1 snRNP Komplex

Kapitel in diesem Video

0:04

Introduction

0:53

Preparation of NE Depleted of U1 snRNP (U1ΔNE)

2:10

Immunoprecipitation of 10S Fractions of Glycerol Gradients by Anti-Gal3

3:52

Assembly of Splicing Reaction and Analysis of Products

6:09

Results: RNA and Polypeptide Compositions of the Anti-Gal3 Precipitate of the 10S Region of the Glycerol Gradient and its Ability to Reconstitute Splicing in U1ΔNE

8:08

Conclusion

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