Die Morphologiewissenschaft und die Qualität von Zellen, Stärkegranulaten und den Proteinkörpern im Kern bestimmen das Gewicht und die Qualität des Saatguts. In dieser Studie stellen wir als einfache Population eines ganzen Kerns dar, der in LR White Resin eingebettet ist, und etablieren eine einfache Trockensaugmethode für ganze Kerne. Wir wählen LR White Resin als eingebettetes Medium aus zwei Hauptgründen.
Erstens ist es eine niedrige Viskosität und starke Durchlässigkeit, was zu seinen guten Anwendungen bei der Vorbereitung dieser mächtigen Samenabschnitte führt, insbesondere für Getreidereife Kerne mit einem großen Volumen und hohem Stärkegehalt. Zweitens kann die in LR White Resin eingebettete Probe leicht mit vielen chemischen Farbstoffen gefärbt werden, um die Morphologie von Proben unter Licht mit Fluoreszenzmikroskop deutlich zu zeigen. Die vorbereiteten Abschnitte können speziell gefärbt werden, um die Zellen, Stärkegranulate und Proteinkörper deutlich in der Entstehung eines ganzen Kerns auszustellen, und die Morphologieparameter können auch quantitativ analysiert werden.
Die Methode enthält Studien. Hier verwenden wir ausgereifte Maiskerne mit größerem Volumen und hohem Stärkegehalt als Beispiel, um die Prozesse Schritt für Schritt auszustellen. Zunächst werden Die Kerne in eine einfache Flasche gesteckt.
Fügen Sie etwa 10 Millimeter von 2,5%Phosphat-gepuffertes Glutaraldehyd hinzu. einen weiteren pH 7,2 und legen Sie es bei 4 Grad Celsius für 48 Stunden, um sie beide zu beheben. Nehmen Sie dann diese Kerne heraus und schneiden Sie sie längs oder quer, mit zwei bis drei Millimetern Dicke.
Sie benötigen eine scharfe doppelseitige Klinge. Und fixieren Sie sie für weitere 48 Stunden. Als nächstes waschen Sie Ihre Proben dreimal mit etwa 10 Millimetern, also 0,1 M Phosphatpuffer, pH 7,2 für 30 Minuten jedes Mal.
Um die Proben Schritt für Schritt zu hydratisieren, tränken Sie sie zunächst in etwa 10 Millimeter 30% 30 Minuten wässrige Lösung für 30 Minuten und sukzessive in 10 Millimeter einweichen, also 50%70%90% einmal und 100% dreimal. Um eine Probe Schritt für Schritt zu infiltrieren, holen Sie sie sukzessive mit 10 Millimetern LR White HarzLösung mit Ethanol von 25%50%75% einmal verdünnt, und 100%zweimal bei vier Grad Celsius für 12 Stunden jedes Mal. Vor der Einbettung müssen wir die Sockel für Proben vorbereiten.
250 Mikroliter reines LR-Weißharz in zwei Millimeter Zentrifugenrohr geben und 48 Stunden lang bei sechs Grad Celsius polymerisieren. Als nächstes sukzessive 500 Mikroliter reines LR-Weißharz hinzufügen und die Probe mit einem Sockel in das Zentrifugenrohr infiltrieren. Nach dem Richten der Proben mit anatomischer Nadel, legen Sie das Harz bei sechs Grad Celsius in einen Ofen für 48 Stunden.
Nehmen Sie diese eingebetteten Kerne aus dem Zentrifugenrohr und schneiden Sie überschüssiges Harz um eine Probe mit einer scharfen Klinge aus. Legen Sie den Harzblock in den Probenhalter von Mikroton und schneiden Sie das überflüssige Harz auf der Oberfläche der Probe und um die Probe mit der Klinge ab. Die Oberfläche der Probe schließlich mit einem Glasmesser weiter polieren, bis ein vollständiger Abschnitt gebildet werden kann.
Jetzt ist es Zeit, diesen erstaunlichen Abschnitt mit zwei Mikrometern Dicke vorzubereiten. Vor dem Schneiden, legte ein kleines Kupfer sprach etwa zwei Millimeter über klingenden Rand, um zu verhindern, dass ein Abschnitt krümmt. Wie der Abschnitt ländiert, setzen Sie eine Rede unter den Abschnitt, um es zu unterstützen.
Als nächstes fügen Sie die 100 Mikroliter Wasser auf der unausstehenden Rutsche hinzu und übertragen Sie den kompletten und ungebrochenen Abschnitt vorsichtig mit den Bewirten ins Wasser. Erhitzen und trocknen Sie sie bei 50 Grad Celsius, um den faltigen Abschnitt zu glätten. Schließlich brauchen zwei wichtige Tipps Aufmerksamkeit.
Erstens, wenn der Abschnitt bröckelt oder reißt, verlängern Sie die Zeit für jede Harzinfiltration der Probe. Zweitens, wenn der Abschnitt einige Linien parallel zum Messer hat, klemmen Sie den Probenblock fest. Wenn der Abschnitt einige Linien vertikal zum Messer hat, verwenden Sie bitte ein neues Messer.
Um die Morphologie von Zellen, Stärkegranulaten und Proteinkörpern zu beobachten, können wir die Abschnitte mit fluoreszierendem Aufheller 28, Jodlösung und Coomassie brillant blau R250 beflecken. Für andere spezifische Flecken, stützen Sie sich auf den Vorschlag Forschung. Hier verwenden wir Jodlösung, um Stärkegranulat als Beispiel zu färben.
Fügen Sie 40 Mikroliter Jodlösung hinzu, um den Abschnitt einzutauchen. Und halten Sie es im Glas für eine Minute. Und dann die Probe mit einer Deckhülse bedecken.
Und die überschüssige Agentenlösung um sie herum ausräumen. Beobachten und fotografieren Sie die Probe sofort unter einem beleuchteten Mikroskop, das mit einer CCTV-Kamera ausgestattet ist. Wir können die fotografierten Bilder für Flächen, langen oder kurzen Zugriff und Rundheit von Zellen, Stärkegranulaten und Proteinkörpern in verschiedenen Regionen für den Kernel mit Morphologie-Analysesoftware verarbeiten und quantitativ analysieren.
Wir etablieren eine einfache Trockenschnittmethode zur Aufbewahrung ganzer Kernabschnitte in LR White Resin. Die Methode kann Quer- und Längsabschnitte des gesamten Kerns mit zwei Mikrometern vorbereiten. oder Beispiele, kann der reife ganze Samen von Ölraps quer und längs geschnitten werden.
Auch die Abschnitte eines ausgereiften ganzen Maiskerns mit größerem Volumen können erfolgreich vorbereitet werden. Darüber hinaus können der sich entwickelnde Kern, der gekochte Kern und der gekeimte Kern auch mit der Methode untersucht werden. Die vorbereiteten Abschnitte ganzer Kernel haben die folgenden Anwendungen.
Zunächst können die Abschnitte des gesamten Kerns verwendet werden, um die Gewebestruktur von Samen zu beobachten. Zum Beispiel können die Abschnitte des ganzen Embryos von Ölraps, der mit Safranin gefärbt ist, deutlich zeigen, dass es sich um einen radikalen, hyperlässigen, inneren und äußeren Teil des ganzen Kerns handelt, der verwendet werden kann, um die Morphologie von Zellen zu beobachten und zu analysieren. Zum Beispiel sind die transversalen Abschnitte des ganzen Embryos von Ölraps mit fluoreszierendem Aufheller 28 gefärbt, und die Zellöle sind spezifisch gefärbt.
Die Mikromorphologie von Zellen in allen Regionen des gesamten Embryos kann mit hoher Vergrößerung dargestellt werden. Die morphologischen Parameter von parenchymalen Zellen können mit Hilfe einer Morphologie-Analysesoftware quantitativ analysiert werden und zeigen einige Unterschiede in verschiedenen Regionen von Embryonen auf. Die transversalen Abschnitte des ganzen Maiskerns, der mit fluoreszierendem Aufheller 28 befleckt ist, können auch als Morphologie von Zellen aufweisen, und die morphologischen Parameter der Zellen sind in verschiedenen Regionen von Endosperm unterschiedlich.
Abschnitte des ganzen Kerns können mit Jodlösung gefärbt werden, um ihre Morphologie von Stärkegranulaten zu zeigen, zum Beispiel können die transversalen und die Längsschnitte von mit Jod befleckten Maiskernen ihre Morphologie von Stärkegranulat deutlich aufweisen. Das Stärkegranulat in verschiedenen Regionen zeigt signifikant unterschiedliche Morphologie, Größe und Menge in Endospermzellen. Die quantitative Analyse morphologischer Parameter von Stärkegranulat zeigt, dass sie in verschiedenen Regionen für Endosperm signifikant unterschiedlich sind.
Die Abschnitte können verwendet werden, um die Morphologie von Proteinkörpern zu beobachten und zu analysieren. Zum Beispiel ist das Stärkeprotein blau mit Coomassie brillant blau R250 gefärbt. Die räumliche Verteilung des Stärkeproteins im gesamten Embryo von Ölraps kann bei einer geringen Vergrößerung beobachtet werden, und die Mikrostruktur kann bei hoher Vergrößerung deutlich gezeigt werden.
Darüber hinaus können auch der Zahlenfehlerindex und die Morphologieparameter von Proteinkörpern in ausgewählten Regionen quantitativ analysiert werden. Diese Technik ermöglicht die erste und einfache Herstellung von Harzabschnitten ganzer Kerne aus der Entwicklung und Reife von Samen. Die Abschnittsanwendungen in der Gewebestruktur des ganzen Kerns und dann die Untersuchung der Morphologie von Zellen, Stärkegranulat, und die Proteinkörper in verschiedenen Regionen eines ganzen Kerns.
Die aufgenommenen Bilder können quantitativ analysiert werden, um die morphologischen Parameter von Zellen, Stärkegranulaten und Proteinkörpern zu zeigen und sie in verschiedenen Regionen des gesamten Kerns weiter zu vergleichen.
