Die Verfügbarkeit von kultivierbaren Modellorganismen war in vielen Studienbereichen von grundlegender Bedeutung für den Fortschritt. Dieses Protokoll ist unserer Kenntnis nach der einzige Ansatz, der für die Kultivierung von Doliolids zur Verfügung steht. Zuverlässige Doliolid-Kulturtechnologie bietet ein einzigartiges experimentelles Modell, um Organismen zu untersuchen, die für einige der produktivsten Regionen des Ozeans wichtig sind und die frühesten evolutionären Vorfahren von Wirbeltieren darstellen.
Diese Technik ist einzigartig, da sie die Algennahrungspartikel und die Organismen, die in der Wassersäule hängen, ohne Kontakt mit den Wänden des Behälters hält, wie sie in der Natur erfahren. Diese Kultivierungsmethode kann auf die Kultivierung anderer kleiner Gelatine- und Krebstiere oder Planktonarten angewendet werden. Da Doliolids einen komplexen Lebenszyklus haben, ist es entscheidend, die Bedürfnisse jedes Lebensabschnitts zu verstehen und zu erkennen.
Den Lebenszyklus zu lernen und wie man sie erkennt und handhabt, erfordert viel Übung. Nach unserer Erfahrung ist der einzige Weg, diese Kultivierungstechnik zu lernen, sie zu sehen und zu tun. Mehrere andere Projektteilnehmer, darunter Erin Arneson, Nicholas Castalaine, Natalia Lopez, Lauren Lamboye, Briana Pierce, Arya Rodriguez-Santiago und Terrell Scarborough, traten ebenfalls kurz in diesem Video auf.
Vor dem Aufstellen und Aufziehen von Doliolidkulturen im Labor 1,9 und 3,8 Liter Glaskulturgläser reinigen und sterilisieren, indem Sie sie in die Natriumhydroxid-Kaliumpermanganatlösung eintauchen. Lassen Sie die Gläser über Nacht einweichen. Dann die Gläser in die Natriumbisulfitlösung geben.
Lassen Sie die Gläser über Nacht einweichen. Als nächstes spülen Sie die Gläser gründlich mit entionisiertem Wasser. Lassen Sie die Gläser trocknen.
Um die Bestandskulturen zu erhalten, verwenden Sie strenge axenische Kulturtechniken. Alle zwei Wochen übertragen 0,5 Milliliter alter seneszenenter Kultur auf 25 Milliliter frische Wachstumsmedien in sterilen 55 Milliliter Glaskulturröhren. Um größere Mengen Anungsraum für die Fütterung von Doliolids vorzubereiten, übertragen Sie vier Milliliter des Phytoplanktons aus axtischen Beständen in 500 Milliliter Kunststoffgewebekulturkolben mit 200 Millilitern Wachstumsmedien, um bei einer bis 50 Verdünnung zu impfen.
Inkubieren Sie die Kultur in einem Umwelt-Inkubator oder begehbaren Umweltkammer bei 20 Grad Celsius mit einem 12- bis 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklus unter kühlem weiß beleuchteten Licht von 65 bis 85 Mikroeinsteins pro Quadratmeter. Legen Sie Kulturkolben flach, um die Beleuchtung zu maximieren. Wirbeln Sie die Kultur täglich sanft.
Fahren Sie hinaus aufs Meer. Um Doliolids auf dem Festlandsockel zu lokalisieren, setzen Sie das ozeanographische Instrument CTD ein, um Wasserbedingungen zu identifizieren, die dem Vorhandensein von Doliolids durch Profilierung von Wassertemperatur, Salzgehalt und Chlorophyll-A-Fluoreszenz förderlich sind. Bestätigen Sie die Wasserbedingungen, indem Sie Explorativnetze mit speziellen Planktonnetzen durchführen.
Alternativ können Sie ein In-situ-Profilierungs-Bildgebungssystem verwenden, um Doliolids zu erkennen. Jetzt betreiben Sie die Winde, um die CTD abzurufen. Die Niskin-Flaschen, die auf der CTD-Rosette montiert waren, sammelten Meerwasser von der Stelle, an der sich Doliolids befinden, und in der Tiefe, die die höchsten Schätzungen von Chlorophyll enthält.
Spülen Sie drei 22-Liter-Eimer mit Meerwasser und füllen Sie mit Meerwasser etwas mehr als die Hälfte voll. Füllen Sie das Kabeljau-End vollständig mit Meerwasser und befestigen Sie das Kabeljauende am Netz. Stellen Sie das Netz bereit.
Senken und heben Sie das Netz durch die Wassersäule, wobei ein schräger Abschleppwinkel von 15 bis 25 Grad und vertikale Einsatz- und Abrufgeschwindigkeit nicht größer als 15 Meter pro Minute beibehalten werden. Sobald das Netz an Bord ist, übertragen und teilen Sie den Inhalt des Kabeljaus in die Plastikeimer, die jeweils Oberflächenmeerwasser enthalten, das von der Website gesammelt wird. Mit einer Breitbohrglaspipette mischen Sie den Inhalt des Bechers vorsichtig mit der Pipette in vertikalen und horizontalen Bewegungen.
Erstellen Sie mit dem Zeigefinger eine Kapillarabsaugung, um Doliolids zu erfassen und zu übertragen. Erfassen Sie die Doliolids aus gemischtem Phytoplankton im Becher. Nach der Zugabe von Doliolids, fügen Rhodomonas Kultur in das Glas zu einer endgültigen Konzentration von etwa fünf mal 10 bis die dritte bis 10 zu den vierten Zellen pro Milliliter.
Überprüfen Sie die Farbe des Verdauungstraktes von Doliolids. Die rote Farbe bestimmt, dass die Doliolids aktiv füttern. Um zu verhindern, dass Doliolids an der Luft-Wasser-Schnittstelle gefangen werden, füllen Sie die Gläser vollständig mit ungefiltertem, partikelreichem Meerwasser, um den Kopfraum zu vermeiden.
Legen Sie ein Stück Plastikfolie über die Glasöffnung. Vermeiden Sie die Schaffung von Luftblasen, die auch die Tiere beschädigen können. Schrauben Sie die Kappe vorsichtig auf das Glas und invertieren Sie das Glas vorsichtig, um festzustellen, ob Blasen vorhanden sind.
Wenn Blasen vorhanden sind, füllen Sie mehr Meerwasser, um sie zu entfernen. Nachdem die Gläser mit dem Deckel wieder versiegeln und wischen Sie das überschüssige Wasser von der Außenseite des Glases. Montieren Sie jedes Glas auf das Planktonrad, indem Sie das Glas auf die mit Gummirohren überzogenen vertikalen Metallstangen und zwischen einer Edelstahlschlauchklemme legen.
Stellen Sie sicher, dass die Rückseite des Glases gegen den Gummischlauch gepolstert ist. Stellen Sie die Schraube ein, um die Schlauchklemme um das Glas zu ziehen. Lassen Sie die Gläser bei 0,3 Rpm drehen, um die Doliolids in Suspension zu halten.
Nach drei Tagen Gewöhnung an die Laborbedingungen 100 bis 150 Milliliter Kulturwasser aus dem Glas in einen Probenbehälter übertragen und die Algenkonzentration mit einem Coulter-Zähler messen. Basierend auf der Schätzung der Algenkonzentration, fügen Sie genügend Algen hinzu, um die Konzentration im Kulturglas auf 40 bis 95 Mikrogramm Kohlenstoff pro Liter zu erhöhen. Verwenden Sie den Partikelzähler, um die Algenkonzentrationen nach der Fütterung der Doliolids zu überwachen, um die Entscheidung zu bestimmen, wie häufig und wie viel Algen den Kulturen hinzugefügt werden.
Halten Sie Phytoplanktonkonzentrationen in den Kulturgläsern zwischen 40 und 95 Mikrogramm Kohlenstoff pro Liter. Doliolids zu kultivieren erfordert, sie durch ihren komplizierten Lebenszyklus zu unterstützen. Entwicklung von Larven und Oozooiden und frühen Krankenschwestern.
Sobald mindestens acht Trophozooide auf dem Katapult der Krankenschwester sichtbar sind, überführen Sie mindestens vier Krankenschwestern in ein neues Kultivierungsglas. Sobald die Phorozooide drei Millimeter groß werden, reduzieren Sie die Anzahl der Tiere im Glas. Wenn die Phorozooiden größer als fünf Millimeter werden und Gonozooid-Cluster entwickelt haben, entfernen alle bis auf vier Phorozooide.
Dieses Protokoll gibt einen Überblick über einen Dolioletta gegenbauri Sammel- und Anbauansatz. Die Algenabfertigungsraten waren in Konzentrationen von 20 bis 60 Mikrogramm Kohlenstoff pro Liter ähnlich und gingen mit zunehmender Lebensmittelkonzentration zurück. Die Clearance-Raten stiegen proportional gegenüber Temperaturbereichen, die das D.gegenbauri-Wachstum unterstützen.
Es wurden Wachstumsraten von 0,1 bis 0,7 Millimeter pro Tag in Abhängigkeit von Temperatur und Nahrungsmittelverfügbarkeit beobachtet. Der Anbau von Doliolids hängt davon ab, dass die ozeanischen Bedingungen erfolgreich nachgeahten werden und den Bedürfnissen der Tiere während ihres komplizierten Lebenszyklus gerecht werden. Folglich ist ein schonender Umgang mit den Tieren während ihrer Gefangennahme, Isolierung und Haltung erforderlich.
Lebensmittelkonzentrationen müssen häufig überwacht und angepasst werden. Dies gilt insbesondere in den sich entwickelnden Larven- und Oozooidenlebensstadien. Diese Methode wurde speziell für die Aufzucht kleiner Zooplanktonarten an der Basis des Marinenahrungsnetzes entwickelt.
Diese Methode wird beispielsweise wertvoll sein, um Zooplankton-Reaktionen auf den Klimawandel zu untersuchen. Seit ihrer Entwicklung hat diese Technik den Weg für Zooplankton-Ökologen geebnet, um die Labor-basierte Fütterungs-, Wachstums- und Reproduktionsraten von Doliolids zu bestimmen. Zusätzlich ebnete diese Methode den Weg für revolutionäre molekularbasierte Untersuchungen der Doliolid-Diät in der Natur.
Ich möchte Sie daran erinnern, dass das Glasreinigungsprotokoll Reagenzien beinhaltet, die Atemreizstoffe sind und in gut belüfteten Bereichen verwendet werden sollten. Die Arbeit auf See kann auch gefährlich sein, also befolgen Sie die Sicherheitsvorschriften des Schiffes.
