测量暴露于含碳颗粒物的气道巨噬细胞中的碳含量

我们的研究范围包括开发和验证一种无创方法来测量气道巨噬细胞中的碳含量，作为暴露于含碳颗粒物的生物标志物。我们的目标是确定这种方法进行大规模个体暴露评估的准确性和可靠性。我们的方案提供了一种无创、精确、标准化的方法来测量气道巨噬细胞中的碳含量。

作为内部暴露生物标志物，这是有效且准确地个体暴露于含碳颗粒物。我们的方案为个体暴露于含碳颗粒物提供了直接可靠的生物标志物。该方法允许使用诱导痰液进行大规模定量，与其他技术相比，提高了准确性和可靠性。

首先在离心管中收集 2 毫升痰液样本。然后，将 20 至 30 毫升准备好的固定液加入试管中，并充分混合内容物。为了制备细胞悬液的消化液，根据所需剂量，将 0.1 克二硫苏糖醇溶解在 100 毫升盐水中。

现在，将含有痰液的试管以 1， 998 G 的速度在 4 摄氏度下离心 30 分钟。然后，丢弃上清液。向沉淀物中加入等体积的痰液消化物。

涡旋并彻底摇晃混合物。之后，将试管放入 37 摄氏度的水浴中，直至完全液化。然后，使用 70 微米滤膜过滤液化混合物。

将过滤后的溶液在 4 摄氏度下以 500 G 离心 7 分钟。弃去上清液，保持细胞沉淀。现在，将细胞沉淀重悬于 Duchenne 磷酸盐缓冲液中。

将溶液在 4 摄氏度下以 500 G 离心 7 分钟，以获得纯细胞沉淀。对于细胞弥散条带制备，向细胞沉渣中加入 200 至 600 μL 磷酸盐缓冲液并充分混合。然后，取 20 微升细胞悬液并制作细胞涂片。

用市售染色液固定干燥的弥散条带 10 秒钟。然后，将涂片浸入染色溶液 A 中 8 秒钟。染色过程中，轻轻上下提起载玻片，然后用流水冲洗掉多余的污渍。

在细胞内观察到清晰可见的黑碳颗粒的小聚集体，碳颗粒的数量各不相同。首先，在显微镜下对染色的痰液玻片进行成像。随机选择染色良好且形态完整的巨噬细胞并捕获其图像。

使用 ImageJ 软件，测量比例以实现准确的像素转换。选择 Measure （度量），然后单击 Set Scale （设置比例）。输入 Distance in pixels， actual length和 单位 length （微米）。

然后，勾选 全球 选项。现在，用不规则的形状勾勒出单元格的轮廓，并使用手绘选择删除背景。在 Edit （编辑） 下，选择 Clear Outside （清除外部）。

通过 Analyze and Measure 测量单元格的总面积。使用 Edit 和 Cut 切出细胞核。将灰度图像转换为黑白图像。

单击 图片， 房屋类型及 8 位。要根据细胞染色调整灰度值以准确计数碳颗粒，请转到 图像，选择 调整， 阈值和 应用.最后，单击 Analyze 并选择 Measurement。

炭黑包装工人在气道巨噬细胞中的碳含量高于对照组。