先前的研究表明,光屈光性角膜切除术或跨上皮PRK是研究角膜愈合以及与上皮角膜组织病理学清创相关的变化的最佳动物模型之一。与其他啮齿动物相比,使用蒙古沙鼠作为动物模型有几个优点。首先,角膜具有与人类角膜相同的组织学层。
其次,眼睛在解剖学上比其他啮齿动物的眼睛大,更容易操作。所有这些研究都是在科尔多瓦天主教大学免疫学和传染病研究与发展中心的设施中进行的。第一步是对层流柜的工作表面进行消毒。
为此,使用了70%的酒精。要使用的手术器械。一次性材料,如针头和注射器,以及麻醉啮齿动物的药物,被放置在工作区。
如有必要,还应放置一次性手术区域以容纳分泌物和啮齿动物毛发。实验中使用了三只六个月大的雄性蒙古沙鼠,大小和体重相似,大约90克。稍后要进行的手术仅在右眼上进行。
将装有啮齿动物的笼子取出并放置在层流柜内。我们继续打开盒子,识别每只沙鼠,并在秤上称重。它们是无害但精致的动物。
应始终佩戴一次性手套。为了正确处理,操作员应用他不熟练的手牢牢抓住它的尾巴,并用熟练的手,用拇指和食指轻轻按下耳朵后面以握住动物,并用小指握住尾巴。根据动物的体重,计算每个沙鼠所需的麻醉量。
一毫升注射器应装满氯胺酮,每公斤100毫克以上50,甲苯噻嗪每公斤2毫克。在进行光学相干断层扫描之前,放置无菌手术单以保护设备免受分泌物或动物毛发的侵害。当其中一个操作员抱着动物时,另一个操作员必须捕获。
用显微镜拍摄眼睛,并对啮齿动物的内部部分进行了多次切片。可以观察到整个角膜,前房,虹膜,虹膜角膜角和突出到前房的晶状体。此外,中央和周围角膜厚度测量显示中心厚度为160微米,在外围减少到约110微米。
在进行准分子激光PTK之前,放置无菌手术单以保护设备免受分泌物或动物毛发的侵害。在直径为3毫米处消融了60至62微米的角膜厚度。对角膜进行拍照以评估即时形态变化。
在这张照片中,可以看到,沙鼠右眼的眼球。A、正常眼球表面不规则观察。B,在进行PTK后五分钟拍摄的照片显示角膜表面出现不规则。
参见荧光素染色角膜溃疡的证据。在OCT上,右箭头标记碎屑积聚在中心的区域,左箭头标记角膜溃疡的边缘。该实验中使用的牺牲方法是通过使用二氧化碳室。
以不同的时间间隔处死,并在术后24和96小时对正常眼球和术后眼球进行眼球摘除术,以观察角膜愈合情况。将每个去核眼球置于甲醛中并由病理学家处理。拍摄了多个切片、测量和照片。
在组织学上,角膜厚度与OCT获得的厚度一致,并且向外围逐渐变薄。这是因为外周的上皮层和基质纤维层减少。蒙古沙鼠角膜与人类具有相同的分层前上皮层,有四到六层细胞,占角膜总厚度的28%。
鲍曼层,基质占总厚度的66%。这巩固了膜和内皮。在手术后 24 小时,可以在箭头标记的地方看到角膜溃疡。
还观察到多块上皮无赘体溶解和孤立性角化不良,急性上皮下炎性浸润,基质水平水肿。在PTK后96小时在手术沙鼠中观察到的变化是,水肿增加,基质纤维和细胞解聚,应该注意的是,内部上皮已经完全再生并且不存在炎症浸润。本研究显示了目前沙鼠动物模型的积极结果,并证实了它是角膜伤口愈合的新研究选择。
迄今为止,还没有出版物详细分析蒙古沙鼠角膜的解剖学和组织学。因此,我们希望这个动物模型将成为未来科学研究的基础。