小鼠心肌梗死和心肌缺血再灌注损伤的诱导

本研究描述了一种可定制的方法，通过显微操作精确结扎左前降支冠状动脉，在 Miro 中创建心肌功能模型。该协议减少了手术时间，确保了可控的梗死大小，并提高了小鼠的存活率。在整个手术过程中，使用带有预热至 37 摄氏度的加热垫的矩形 OT。

手术前，用紫外线和70%酒精对电路板进行消毒。首先将鼠标放在 OT 上，仰卧位，头部下方有纱布，以免眼睛过热。将眼药膏涂抹在眼睛上，以防止眼睛干燥。

在胸部使用毛发去除霜，用无菌棉签均匀按摩一分钟。用纱布擦拭多余的毛皮。使用聚维酮碘，然后使用70%酒精清洁该区域，并用纱布覆盖胸部。

在上切牙下方使用 4-O 缝合线并将其固定在锚点上，以保持嘴巴略微张开并便于插管。拉动尾巴以保持身体笔直，并用胶带将其固定在 OT 上。用胶带固定四肢并将它们拧紧在锚点上。

不要过度伸展前肢，以免呼吸功能受损。用镊子打开下颌并抬起舌头。然后使用照明器观察喉咙和声门。

轻轻地将一根 22 号插管和一根钝的截短针穿过口腔插入气管，在喉咙下方约 1 厘米处。用一只手握住舌头，用钝镊子稍微向上移动。同时用另一只手将管子轻轻插入气管。

小心不要将管子插入食道。小心地取下针头。在连接到呼吸机之前，通过将管子放入水中以形成气泡来检查插管。

将气管插管连接到设置为每分钟 120 次的呼吸机，并将潮气量调节为 250 微升。通过检查双侧对称性胸廓扩张来验证插管。然后用胶带固定与 OT 的连接，以免其脱落。

将心电图电极放在爪子上并将它们连接到心电图记录仪。在整个手术过程中监测心脏电生理学。取下胸部的纱布。

用 70% 酒精对切口区域进行三次擦洗循环消毒。为了减少手术部位的污染，用无菌手术单覆盖小鼠，在手术区域上有一个孔。用手术刀做斜皮肤切口后，通过对皮下组织进行钝性解剖来暴露肋骨。

注意不要伤害血管、肋骨和肺部。使用无菌棉涂抹器止血。确定第三肋间隙，切开约 6 至 8 毫米的切口。

然后通过对肋间隙中的组织进行钝性解剖来打开胸腔。注意不要伤到胸内动脉。使用镊子跨越肋间隙。

将预先消毒的自制牵开器插入胸腔，然后向后拉，将切口扩散到大约六毫米宽。用橡皮筋将牵开器连接到 OT 上。小心地切除周围的组织，使心脏完全暴露。

用弯曲的镊子轻轻拉出心包，而不会伤害心脏。使用解剖显微镜并引导聚焦且适当的光线进行 LAD 可视化。轻轻按压所选结扎位置下方的部位以暂时扩大 LAD，然后重新检查 LAD。

在解剖显微镜下，使用锥形针通过 8-0LAD下方的丝绸结扎。确保针头不够深而无法进入左心室，也不要太浅，以免损坏 LAD。用松散的双结系紧结扎。

将一根 2 到 3 毫米的 PE-10 管放入平行于动脉的环中。轻轻收紧结扎环，直到它绕过动脉和管道。然后用滑结固定环。

注意不要因过度收紧压力而损坏心肌壁。结扎后左心室前壁苍白，证实LAD血流停止。如果需要永久结扎，请按照文本手稿中的说明进行。

从切口上取下牵开器。然后用斗牛犬夹暂时闭合伤口。确保鼠标继续连接到呼吸机。

当缺血期结束时，取下斗牛犬夹并插入牵开器以打开切口并暴露心脏和结扎部位。解开滑结并取下 PE-10 管。苍白的颜色变为粉红色，证实了血流恢复。

同时，为了检测再灌注，观察心电图是否有ST段抬高的潜在溶解。离开 8-0如果进行随后的埃文斯蓝和 TTC 染色，则原位结扎。否则，请在此步骤中移除缝合线。

取出牵开器，用4-O丝线缝合第三和第四肋骨，闭合切口。注意不要伤到肺部。轻轻按压胸部，同时系上缝合结，以排出可能滞留在胸腔中的空气。

用连续的4-O丝线缝合肌肉层。从气管插管、皮肤切开、开胸手术、LAD鉴定和结扎到再灌注，均获得实验过程的标准图像。代表性心电图图像证实了结扎后心肌缺血和再灌注，并伴有显著的ST段抬高。

滑结解开后ST段抬高的溶解。开胸手术前，保持气道畅通非常重要，最重要的是确保LAD结扎牢固，避免损伤。该程序之后将进行超声心动图以评估心脏功能以及 TTC 以评估心肌损伤。