从人牙囊中分离上皮细胞

该协议展示了一种用于获取人类牙齿上皮细胞的增强方法。在手术过程中很难识别聚集的细胞沉淀。处理上清液时要小心，以防止细胞群丢失。

首先，在手术拔除受影响的第三磨牙期间收获牙囊。开始细胞分离程序或将牙科卵泡储存在4摄氏度的DPBS中，含3%青霉素 - 链霉素。要清洗牙囊，请用镊子握住牙囊并将其放入洗涤管1中。

轻轻摇晃10至15次。取出并将其放入管2中。再次摇晃10到15次。

最后，将其取出并放入管3中，然后摇动它。洗涤三次后，将牙囊置于60毫米培养皿中。用组织剪刀切碎组织，直到牙囊具有纸浆状或粘稠的外观。

使用培养皿的一小段侧部，以尽量减少组织损失。将1型胶原酶和蛋白酶溶液各混合一毫升，放入15毫升锥形管中。将切碎的组织转移到15毫升的锥形管中，然后轻轻摇晃并在37摄氏度下孵育一小时。

向试管中加入5毫升0.05%胰蛋白酶-EDTA。摇晃并在37摄氏度下孵育15分钟。制备含有角质形成细胞血清游离培养基和10%胎牛血清的角质形成细胞培养基。

将三毫升角质形成细胞培养基加入新的50毫升锥形管中。将40微米的过滤器放在该管的顶部。接下来，用10毫升血清学移液管从含有组织的管中吸出上清液，并将其通过过滤器。

将收集的悬浮液转移到15毫升的锥形管中。离心管并除去上清液。然后加入三毫升角质形成细胞血清游离培养基。

再离心三分钟，取出上清液。使用无角质形成细胞血清培养基将单个细胞群平板到60毫米培养皿中。在37摄氏度的5%二氧化碳的加湿气氛中保持培养皿的最终体积为5毫升。

具有上皮形态的细胞在接种单细胞群后7至10天内出现。鹅卵石形上皮细胞的数量在出现时从1到10不等，并且随着时间的推移细胞扩张成菌落。最关键的一步是将牙囊切碎成小颗粒。

它增强了单个细胞与卵泡组织的分离。间充质细胞可以从人牙囊中分离出来。含有血清的培养环境选择间充质细胞并抑制单细胞群的上皮生长。

该协议提供了获取人牙齿上皮细胞的方法。牙齿卵泡来源的上皮细胞可用于研究牙齿上皮 - 间充质相互作用。