光斑分析分析果蝇拉瓦尔光轴

使用光斑测定，可以在进入光区域之前、期间和之后跟踪幼虫的行为，从而分析幼虫运动的细节。这种测定简单易做。光响应只测试一次，以便排除光自适应的任何可能影响。

要准备加糖板，缓慢而均匀地覆盖一个15厘米的培养盘的底部，用大约4毫米厚的热1%agar层。让板在室温下冷却，直到加糖凝固。要设置视觉刺激系统，请将准备好的 LED 光源夹在铁架上，注意光线朝桌面向下投射。

稍微倾斜气缸，直到圆柱体平面和垂直平面之间的角度约为 10 度。将 470 纳米蓝色 LED 灯连接到大功率 LED 驱动器的 LED 插头，然后打开驱动器。转动驾驶员右上角的旋钮以选择通道 470 纳米并单击 LED。

当屏幕显示检查时，桌面上将显示一个蓝色光斑。单击"确定"并转动旋钮以调整灯光的强度。上下移动光源的位置，将光源的直径调整为两厘米。

旋转旋钮，根据实验要求选择光强。使用带标准光电二极管功率传感器的紧凑型功率计控制台测量现场的最大光功率和最小光功率。光功率需要在实际实验中在黑暗中测量。

然后记录光功率，测量三次，并使用平均值。要设置想象系统，请用比桌面上光点高出约 10 厘米的铁夹住一个高分辨率网络摄像机，然后调整相机镜头朝桌面的方向。通过 USB 接口将相机连接到运行 Windows 7 的计算机，然后将阿加格板放在相机下方的桌面上。

打开 AMCap 9.22 软件，光斑将自动显示在 AMCap 窗口中。向左或向左移动相机，以确保光点靠近窗口中心。使用夹子将 850 加或减 3 纳米带通滤波器固定到摄像机正下方的 5 到 7 毫米。

将三个红外光生成 LED，其中央波长为 850 纳米，均匀地围绕距板边缘约 5 厘米的 agar 板周围，LED 镜头朝向板的 70 度角。然后通过交流变频器将 LED 连接到电源。在 AMCap 软件的菜单中，选择选项、视频设备和捕获格式，将捕获视频的像素大小设置为 800 x 600，帧速率设置为每秒 60 帧。

取下滤镜，在相机下面放置一把标尺。调整摄像机对焦，直到比例线清晰且与视频视场宽度平行，然后单击捕获、设置和视频捕获以选择保存路径。然后单击"开始录制"以记录对应于 600 像素的实际距离，并计算每个像素与实际距离的比率。

在将幼虫引入成像设置之前，请获取光位置的简短视频，并命名未过滤的控制背景视频光区域之一。将滤光片放回相机镜头上，以尽可能低的设置打开远离实验装置的灯，同时仍可以清晰观察幼虫。用勺子从培养基中去除一些幼虫，然后轻轻地选择第三个星幼虫。

用蒸馏水清洗幼虫，将幼虫放在加糖板的中心。轻轻去除幼虫中多余的水，并关闭房间灯。在打开红外 LED 灯之前，让幼虫在黑暗环境中适应两分钟。

需要在黑暗中进行以下避光行为实验。为了方便演示，我们在明亮的灯光下拍摄。轻轻地将幼虫刷到盘子的中心。

当幼虫开始直爬行时，旋转板，使幼虫朝光斑方向移动。单击"捕获"、设置和视频捕获以选择保存路径，然后单击"开始录制"录制。允许幼虫爬向、进入和离开光斑，直到它几乎离开视野，然后单击停止录制。

将滤光片移离摄像机，获取光斑位置的简短视频。然后命名后检测未过滤的视频光区域二，并将此视频与光区域一个视频进行比较，以确保光斑位置不变。在这里，可以观察到有代表性的幼虫的尾部速度、身体弯曲角度和身体弯曲的角度速度。

与父母控制相比，与父母控制相比，在具有八胺神经反应抑制的八巴胺神经元的第三星幼虫中，幼虫头铸件的大小，因此，最大身体弯曲角度显著减小，表明 Tdc2-Gal4 神经元是正常幼虫光反应所必需的。要成功处理图像，请确保相机不会阻挡光线，并且光斑是圆形的，靠近窗口的中心。按照这个程序，可以进行光遗传学来观察幼虫在激活特定神经元时的反应。

利用这种测定，可以分析幼虫运动的细节，从而可以研究环境和内部因素对幼虫避光行为的远大影响。