这种方法可用于使用BBN致癌物质可重现膀胱肿瘤,并通过MRI成像膀胱肿瘤负担的大小和延伸。该技术采用操作员独立的快速成像方法,采集时间短,诊断质量高,在肿瘤发育的中间阶段对小鼠进行高通量测定。为了诱导膀胱癌肿瘤的形成,在不透明的饮用水容器中加入0.05%的BBN,为6周大的C57黑色六只小鼠提供饮用水。
然后根据当地的 IACUC 指南,每周监测动物两次,以发现膀胱肿瘤有危难迹象。接触后16至24周,将装有25至27针的1毫升注射器与100至200微升无菌盐水一起装入盐水下皮注射到BBN处理的动物中。10分钟后,将鼠标转移到磁共振成像仪的成像支架中,并插入连接到生理记录计算机的直肠温度探针,以监测动物的体温。
接下来,在鼠标的下腹部放置一个4通道四角接收器线圈,并在集成成像软件中启动自动调整,获取整个小鼠身体的三轴图像集。从这组参考图像中,识别感兴趣的区域,并沿轴向、日冕和下垂平面获取三组正交切片图像。使用具有稳态进展成像序列的真正快速成像,将 TR 设置为 900 毫秒,将 TE 设置为两毫秒,将 FA 设置为 70,14 平均值。
然后在成像平台软件中选择适当的几何参数,在整个膀胱中获得一系列 0.5 毫升厚度的切片和 0.148 毫米的平面分辨率。获得所有图像后,将覆盖整个膀胱的切片集导出到适当的医学图像分析软件程序,并滚动浏览生成的图像,以定位膀胱中点的切片,使膀胱壁和流明的可视化能够选择膀胱中心有代表性的轴向视图进行定量分析。然后跟踪膀胱外边缘和内流明周围的边界,仔细描绘所选代表性轴向视图中感兴趣的区域,并从外边缘减去内流明以计算膀胱壁的表面面积。
BBN暴露20周后,用70%乙醇清洁切口区域,用钳子提起腹壁皮肤。做一个中线切口从阴性共体到西腓体过程,并抓住腹膜,使腹腔的尖锐切口。识别中线下腹部的膀胱,用钳子抓住膀胱的圆顶。
将膀胱远离周围结构,包括骨囊、直肠和脂肪。切开连接膀胱圆顶的脐带和腹壁的中位脐带韧带。切开靠近膀胱的尿道,提起膀胱头加,切开尿道切除膀胱。
然后用PBS冲洗切除的膀胱,并立即将组织压在平衡上。在这里,具有代表性的真实快速成像与稳态进展磁共振图像膀胱壁三D重建和病理图像的小鼠与一个大肿瘤和控制小鼠没有肿瘤显示。从磁共振成像派生的膀胱壁厚每周与获得前体内获得的膀胱重量测量相关。
MRI衍生膀胱壁厚和前维沃获得的膀胱重量数据也表明与肿瘤阶段有关联,以及非肌肉侵入性膀胱癌和肌肉侵入性膀胱癌分层病理学时的关系。请记住,当小鼠拥有完整的膀胱时,最好获取图像。在膀胱肿瘤的 MR 成像后,小鼠可以酌情分成具有类似肿瘤特征的队列。
这项技术使研究人员能够探索新的免疫疗法和其他治疗方法,以改善我们患者的结果。重要的是要记住,BBN是一种致癌物质,在处理这种化合物时,应始终采取适当的预防措施。