从脂藻酸盐中获取频闪血管部分或SVFs需要用胶原酶进行消化,这增加了生物污染的风险。一种更好的方法,以获得SVF没有胶原酶应该开发。这些技术使我们能够通过简单的机械过程在其原生细胞外矩阵中获得SVF。
演示这个程序的将是来自我们实验室的研究生陈西航。获得脂肪样本后,将脂止汗液转移到一个50毫升的管中,让收获的脂肪平衡10分钟。接下来,使用宽尖移液器将脂肪从管的顶层拉入新的 50 毫升管中,然后通过离心来旋转脂肪。
管的上层是科尔曼脂肪分数。将科尔曼脂肪的上部 2/3 转移到新的 15 毫升管中。这部分被认为是低密度脂肪。
将科尔曼脂肪的下三分之一转移到第二个15毫升管中。这部分被认为是高密度脂肪。要从低密度脂肪中产生细胞外基质频量血管分数凝胶,请使用两个 20 毫升注射器,由雌性 luer 锁连接器连接,以移位 10 毫升的低密度脂肪。
这是摧毁脂肪细胞的关键步骤。执行间环转换的速度和时间有助于提高最终产品的质量。最后一次间移后,通过离心收集脂肪,将顶部油层转移到15毫升管中。
然后将粘性中细胞外基质频量血管分数凝胶层转移到一个新的15毫升锥形管中。要从高密度脂肪中产生细胞外基质生成血管分数凝胶,请将低密度油馏分的两毫升添加到高密度脂肪样品的五毫升中。移位混合脂肪,如证明,直到在乳液内观察到絮凝。
通过离心收集絮凝物并丢弃顶部油层。然后收集粘性中间层,并混合此分数与低密度细胞外基质频量血管分数凝胶样品。将科尔曼脂肪处理成细胞外基质频血管分数凝胶后,废弃油的体积占最终体积的80%,而油层下保存的脂肪组织只有20%被视为细胞外基质频量血管分数凝胶。
细胞外基质频血管分数凝胶具有光滑的液体状纹理,使其通过27量表细针。然而,科尔曼脂肪由一个整体脂肪结构组成,大纤维只能通过18个量表管。移植后的第三天,大量小型脂肪细胞与多个细胞内脂滴,广泛血管化结缔组织,并渗透炎症细胞出现。
从第15天开始,炎症细胞的数量开始逐渐减少,脂肪细胞开始成熟。到90日,移植物中大部分血管化结缔组织已被成熟的脂肪细胞所取代。细胞外基质频血管部分凝胶移植也含有一些利平阳性的腺细胞移植三天后,与小尺寸的脂肪细胞,与多个细胞内脂滴开始出现第15天。
当天的每个领域 90 个细胞外基质频血管部分凝胶移植部分表现出大量积极腺细胞和新形成的血管。可以进行流细胞测量以确定产品中的细胞群体。扫描电子显微镜可以可视化产品的微观结构。
该技术为外科医生和研究人员提供了一种简单的方法,从脂肪组织获得具有高浓度SVF细胞的SVF细胞与原生细胞基质纤维的产品。