乳腺癌细胞原位注射到小鼠乳房脂肪板

这种方法可以帮助回答癌症领域关于微环境如何支持肿瘤生长或特定药物是否可以有效抑制乳腺癌进展的关键问题。肿瘤诱导技术的主要优点是无需手术，在原位建立乳腺癌是一种侵入性较小的方法。使用这种技术，肿瘤细胞生长在乳腺脂肪垫内，在适当的组织环境中，模仿人类乳腺癌的进展比皮下注射或异种移植到小鼠细胞更密切。

我们的技术员曹克欣将协助张甘林演示这个程序。在手术前一天，手动约束接收小鼠，将动物腹部侧转向毛皮，在第四个奶嘴周围剃光。用薄薄的一层脱毛霜擦拭毛皮。

30 至 60 秒后，使用蒸馏水取出奶油，然后用软纸巾擦干鼠标。手术当天，将乳腺癌细胞悬浮液稀释至每毫升PBS浓度的2倍至第5个细胞，在冰上无菌微离心管中。每次注射前，加载一毫升注射器，配备45比16针，每只小鼠50微升细胞。

并确认每个静种动物对手趾捏缺乏反应。将软膏涂抹在动物的眼睛上，用钳子将第一只小鼠的第四个奶嘴周围的皮肤搭上帐篷，为注射器的跟随创建一个通道。握住针头朝上，皮下进入皮肤的针头从奶嘴5至10毫米，在隧道后，直到针尖几乎到达奶嘴。

使用钳子在第一个奶嘴周围对皮肤进行帐篷，为注射器的跟随创造了一个通道。针头应在钳子尖之间输入，并应该抬起，而不是压在组织中。小心地将针头向上移入乳腺脂肪垫，直到斜角在奶嘴下，并释放皮肤帐篷，让癌细胞缓慢注射。

插入时，小心地将针头向上移入乳腺脂肪垫，直到斜面位于奶嘴下。你会感到阻力，以确保细胞传递到正确的位置。注射所有细胞后，稍微将针头转向一侧，然后缓慢地收回注射器。

使用棉签对针伤口施加压力10至20秒，使无液体渗漏。注射的奶嘴应显示为透明、白色、扁平的球体，奶嘴位于中心。要建立肿瘤体积，请将小鼠腹部侧向上，并使用卡钳测量肿瘤的长度和宽度。

为了捕捉肿瘤的生物发光，在成像前10分钟，每公斤D-露西费林注射到小鼠颈部的后面150毫克。并在适当的生物发光成像参数下捕获原发肿瘤和转移的生物发光图像。在适当的实验时间点，用剪刀从皮肤上收获肿瘤。

将镇痛溶液应用于手术现场，以减轻术后疼痛。然后根据标准方案用手术缝合线关闭皮肤。让动物在加热灯下恢复，并监测，直到完全恢复。

使用手术刀将原发性肿瘤切成两个相等的部分。将一半组织储存在4%的甲状甲醛中，用于随后的血氧素和 eosin 染色和免疫组织化学。将另一半冷冻在液氮中，用于西印或RNAi隔离。

在适当的实验终点收获肺根据标准解剖方案，并在PBS中清洗器官。然后将肺部固定为4%的甲醛，以验证血氧素和 eosin 染色的转移。如证明，原发性肿瘤生长可以通过肿瘤体积和活肿瘤细胞生物发光来测量。

在接种的早期阶段，由于没有建立继发肿瘤，或者原发性肿瘤的强生物发光信号阻碍用弱信号检测小转移性肿瘤，因此不会观察到转移。切除后，可以检测和分析远器官转移性分子的生物发光信号。通过血氧林和 eosin 染色对原发性乳腺肿瘤和肺部分的形态进行分析，发现肿瘤细胞接种动物的血管生成增加，抗CD31微维塞尔标记染色就证明了这一点。

尝试此程序时，请务必在传递肿瘤细胞之前确保针尖位于正确的位置。按照这个程序，雾化器，如动物超声波，可以执行，以回答有关膀胱补充原发性肿瘤在体内的其他问题。该技术开发后，为肿瘤发生领域的研究人员和药物开发领域的研究人员探索肿瘤发生的关键因素和途径以及穆林动物模型中抗癌药物的机据铺平了道路。

不要忘记，使用异氟兰或其他气体麻醉剂可能极其难以剂量，并且在执行此程序时应始终采取预防措施，如使用活性炭面膜。