印制糖类阵列是分析小动物循环抗碳水化合物抗体汇辑的一种敏感技术

该协议的总体目标是使用基于印刷甘油阵列的技术，研究小动物血清中循环的抗甘油抗体的轮廓。这种方法在早期诊断和正确治疗某些病理条件下具有潜力，其中针对甘油结构的抗体起着重要作用。该技术的主要优点是，可以使用相同的实验设置中测量数百个具有非常高灵敏度的甘油靶点，使用最少的样本量。

要准备微型阵列，请使用非接触式机器人阵列。打印六个复制的 50 毫升甘油和 10 微克每毫升多糖和 300 毫摩尔 PBS， pH 8.5 到 n-羟基 6 肉桂衍生玻璃幻灯片。每张幻灯片包含重复六次的四个不同子阵列块。

每个亚阵列由112个不同的甘油点组成，包括控制。在室温下将幻灯片孵育在湿气盒中一小时。要阻止微阵列，在室温下用阻塞缓冲器孵育幻灯片 1 个半小时。

然后用超纯水清洗乙二醇芯片，然后通过空气干燥。准备缓冲区一到缓冲区四，如文本协议中所述。要准备乙二醇芯片和样品，请将带幻灯片的存储盒放在桌子上，直到达到室温。

打开盒子，将乙二醇芯片转移到孵化室中，孵化室应已用湿滤纸调节，以保持腔内湿度恒定。同时，在1.5毫升管中用缓冲液稀释小鼠血清。使用涡流混合器使血清溶液均匀五秒钟。

均质化后，在37摄氏度下在水浴中孵育稀释血清10分钟，以避免免疫球蛋白聚集。然后在10，000倍的G和25摄氏度下将管子离心3分钟。收集上一液并丢弃任何沉淀材料。

将乙二醇芯片小心地放在孵化室中。用一毫升缓冲液三孵育，以消除乙二醇芯片表面的任何残留物质。15分钟，在25摄氏度。

将乙二醇芯片保持垂直位置，并使用塑料巴氏菌移液器用一些缓冲液三滴重新清洗。然后，使用滤纸小心地从乙二醇芯片表面取出缓冲液。将乙二醇芯片放回孵化室。

使用微移液器将稀释的血清样品扩散到乙二醇芯片表面。确保使用移液器的尖端覆盖稀释血清样品，使乙二醇芯片表面的所有干燥区域覆盖。在37摄氏度下孵育1个半小时。

孵育后，去除多余的样品，将乙二醇芯片浸入25摄氏度的缓冲液三中5分钟。将乙二醇芯片传递给带缓冲器四的容器，最后用超纯水清洗乙二醇芯片。在 175 倍 G 和 25 摄氏度下将乙二醇芯片离心一分钟，以去除液体。

将乙二醇芯片放回孵化室后，将山羊抗小鼠结合到生物素的溶液扩散到乙二醇芯片表面。在37摄氏度下用轨道搅拌孵育一小时。拆下未绑定分数并重复洗涤步骤。

离心后，在25摄氏度的黑暗中孵育乙二醇芯片45分钟，在缓冲液2中每毫升孵育两微克相应的氟铬标记的链球菌素溶液。在黑暗中工作后，去除未绑定的分数，并重复洗涤步骤，通过空气干燥乙二醇芯片。要扫描阵列，请将乙二醇芯片留在桌子上，直到其在黑暗中达到室温。

同时，打开滑动扫描仪和激光器。握住微型阵列，将乙二醇芯片滑入插槽，直到其触碰背面。通过运行 EasyScan 扫描乙二醇芯片，并保存扫描为 tif 文件。

使用 ScanArray 分析系统量化阵列。通过单击主窗口中的配置和文件组中的文件，打开以前扫描的图像。以 GAL 格式加载相应的数组文件模板，该模板表示玻璃幻灯片上打印甘油的处置。

通过仔细将阵列与图像中的点对齐并启动量化来调整 GAL 模板。选择定量周长作为定量类型运行容易定量和定量方法固定圆。取消单击自动查找点的所有选项，并选择规范化方法的低点。

将量化数据另存为 csv 文件。使用 Microsoft Excel 或其他适当的应用程序将这些数据传输到公共电子表格文件中。基因相同的小鼠不应被视为免疫学等价物，因为它们已经开发出不同的天然抗碳水化合物抗体模式。

如图所示，只保存了12种甘油特异性。此处显示，是使用荧光扫描仪从微芯片扫描中获得的图像的代表性示例。然后，网格与每个子数组中的点对齐。

检测到每个点的荧光，结果将传输到一个通用的电子表格文件中。使用小鼠血清孵育后，使用扫描阵列读取器扫描糖片。用微阵列分析系统对数据进行分析，结果以RFU中值加负中值绝对偏差。

蓝色和白色表示低于 4000 RFU 的背景绑定信号。红色表示大于或等于 4000 RFU 的正绑定信号。在乙二醇芯片中暴露的甘油结构大部分被balp C小鼠循环的抗甘油抗体所识别。

一旦掌握了这项技术，如果执行得当，可以在5小时45分钟内完成。看完这段视频后，您应该对如何使用打印机糖蛋白阵列技术来调查血清样本中循环的抗碳水化合物抗体的循环和水平有了很好的了解。在尝试此过程时，重要的是要记住，糖芯片必须由眼镜灯的底部进行操作。

条形码的位置。以避免接触印制的甘油。此外，确保使用移液器尖端稀释的血清样品覆盖糖片的所有干燥区域。

完全覆盖糖片单个表面所需的体积约为 1 毫升。按照这个程序，其他方法，如微球基悬浮阵列，可以回答与抗甘油抗体配置文件的灵活多路复用检测有关的其他问题。这项技术推出后，为生物分子和免疫学领域的研究人员探索小动物中的非蛋白乙二醇相互作用铺平了道路。