طرق للكشف عن السعال والتهاب مجرى الهواء في الفئران

يركز بحثي على السعال المزمن. لفهم الفيزيولوجيا المرضية للسعال ، تطلبت دراساتي عينات اختبار للتحقق من التغيرات في مستويات العوامل الرئيسية. أهدف إلى وضع إجراءات موحدة لحصاد عينات الأنسجة من الفئران.

غالبا ما يحدث فرط الحساسية للسعال بسبب عدوى فيروسية. لأول مرة ، وجدنا أن العدوى الفيروسية قد تؤدي إلى فرط حساسية السعال مع زيادة إفراز الإنترفيرون جاما من الخلايا الليمفاوية التائية في الرئة. يعاني معظم مرضى السعال المزمن من فرط الحساسية للسعال ، والذي يتميز بزيادة الاستجابة العصبية لمجموعة من المحفزات التي تؤثر على الشعب الهوائية والرئتين.

في المستقبل ، سنركز على العمليات الطرفية والمركزية التي تساهم في فرط حساسية السعال. للبدء ، خذ الفأر المصاب ب H1N1 المخدر بعمق بعد اكتشاف السعال ، واجمع الدم من مدارات العين. رج أنبوب جمع الدم لخلط الدم ومضادات التخثر بالكامل لمنع تخثر الدم.

بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي للدم الذي تم جمعه عند 800 جم لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. اجمع المادة الطافية وقم بتخزينها. أعد تعليق الحبيبات في مليلتر واحد من محلول D-Hank.

انشر 10 ميكرولترات من معلق خلايا الدم على شريحة زجاجية لتحديد ملامح الخلايا. لحصاد الطحال ، افتح صدر الفأر ، وأزل الأذن الأيسر ، ثم قم بنفخ الدورة الدموية الرئوية والجهازية بخمسة ملليلتر من المحلول الملحي العادي. باستخدام ملقط جراحي ، قم بإزالة الطحال بالكامل من الفأر.

الآن ، قم بقياس وزن الطحال. قطع الطحال إلى نصفين. إصلاح النصف الأول مع 4٪ بارافورمالدهيد في درجة حرارة الغرفة لتحليل الأنسجة المرضية.

قم بتخزين النصف الثاني عند 80 درجة مئوية تحت الصفر لقياس السيتوكين. لجمع سائل غسل القصبات الهوائية ، افصل الرئة اليمنى عن طريق الربط في القصبات الهوائية الجذعية الرئيسية اليمنى. اجمع سائل غسل القصبات الهوائية من الرئتين اليسرى عن طريق الغسيل ثلاث مرات باستخدام 0.5 مل من PBS.

جمعت أجهزة الطرد المركزي سائل غسل القصبات الهوائية عند 800 جم لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. ثم اجمع المادة الطافية. أعد تعليق الحبيبات في 200 ميكرولتر من PBS.

باستخدام شريحة العد ، عد الكريات البيض في سائل غسل القصبات الهوائية. لتحديد ملامح الخلية عن طريق التعداد التفاضلي ، قم بتشويه 50 ميكرولترا من تعليق الخلية على شرائح زجاجية واتركها حتى تجف. قم بإصلاح الشريحة باستخدام 4٪ بارافورمالدهايد طوال الليل قبل تلطيخها بالهيماتوكسيلين يوزين.

بعد جمع سائل غسل القصبات الهوائية ، قم بإزالة وإصلاح نصف الرئة اليمنى والقصبة الهوائية بنسبة 4٪ بارافورمالدهيد لتحليل الأنسجة المرضية. قم بتخزين النصف الآخر عند 80 درجة مئوية تحت الصفر لفحص النشاف الغربي و RT-qPCR ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم. أدت العدوى بفيروس H1N1 إلى تغيرات التهابية في رئتي الفئران ، بما في ذلك الوذمة والعديد من الخلايا الليمفاوية وتسلل العدلات.

تسببت العدوى بفيروس H1N1 في حدوث تغيرات التهابية في القصبة الهوائية للفأر ، بما في ذلك تساقط الأهداب وتسلل الخلايا الالتهابية. أدت عدوى فيروس H1N1 إلى زيادة كبيرة في نسبة منطقة اللب الأبيض إلى منطقة الطحال بأكملها في الفئران ، مع تراكم الخلايا الليمفاوية في اللب الأبيض للطحال.