تزيد هذه التقنية من السائل الدماغي الشوكي أو مستويات الجلوكوز CSF في الفئران دون التأثير على تركيز الجلوكوز في الدم. هذا يساعد على التحقيق في الآثار المباشرة لارتفاع مستويات الجلوكوز CSF على وظائف دماغ الحيوان. يمكن لهذه التقنية إنشاء نماذج حيوانية لاستكشاف الدور اللاهوتي لارتفاع الجلوكوز CSF في الخلل المعرفي.
مما يؤدي إلى اكتشاف أهداف جزيئية جديدة لتحسين الوظيفة الإدراكية. ستساعد الطريقة أيضا في تحديد ما إذا كانت مستويات الجلوكوز CSF المرتفعة كافية للتوسط في الأنماط الظاهرية للاضطرابات التنكسية العصبية في الفئران. يجب الانتباه إلى التجميع السليم والتحضير لإعداد القنية وإدخال القنية في الدماغ عند الإحداثيات الصحيحة.
لبدء الجراحة لزرع المضخة الصغيرة التناضحية ، ضع الماوس المخدر على الإطار التجسيمي. تناسب رأس الحيوان على شريط القاطعة. تغطية الأنف بمخروط الأنف للحفاظ على التخدير وتوصيل تدفق الأيزوفلوران بمخروط الأنف بمعدل 1.5 إلى 2٪ ضع وسادة تدفئة تحت الماوس للحفاظ على درجة حرارة الجسم.
بعد تطهير المنطقة الجراحية وإجراء شق فضح سطح الجمجمة بملعقة ومسح الدم ، إن وجد ، بأطراف القطن. استخدم الكي إذا كان النزيف بغزارة. افركي بطرف قطني مغموس في 3٪ بيروكسيد الهيدروجين لفضح خيوط الجمجمة.
العمل تحت المجهر ، لاحظ bregma و lambda للتنقل في إحداثيات الجمجمة. اضبط جميع الإحداثيات على الصفر عند bregma. باستخدام مثقاب كهربائي بعناية ودون تمزق الأم الجافية ، قم بعمل ثقب عند الإحداثيات 0.5 ملم من الخلف إلى bregma و 1 ملم جانبي إلى خط الوسط باتجاه اليمين.
أدخل مرقئا وافتحه وأغلقه برفق لعمل جيب للمضخة الصغيرة. أمسك المضخة من طرف معدل التدفق ادفعها عبر الجلد المقطوع إلى الجيب الذي تم إنشاؤه. ضع بعض الغراء على الجانب السفلي من القنية ، وقم بتثبيته في حامل القنية.
تأكد من عدم انسداد القنية وأن المحلول يتدفق بشكل صحيح. ثم خفض القنية ببطء من خلال ثقب حفر ، 2 ملليمتر بطني على سطح الجمجمة. اتركه هناك لمدة خمس دقائق على الأقل للسماح للغراء بالتصلب.
بمساعدة المقص ، قم بقص الجزء العلوي من القنية للتأكد من عدم إزاحتها من سطح الجمجمة. قم بتغطية القنية بطبقة من الأسمنت السني للحصول على دعم إضافي. بالنسبة لمجموعة السائل الدماغي الشوكي أو السائل الدماغي الشوكي ، ضع الماوس المخدر بشكل صحيح على الإطار المجسم.
بعد تثبيت الرأس على الإطار كما هو موضح سابقا ، قم بتدوير المقابض لإمالة الرأس بحيث يواجه الأنف لأسفل. بعد تطهير المنطقة الجراحية وإجراء شق ، قم بإزالة الدعم من جسم الفأر واترك الفأر يرتاح عموديا بحيث يتم تمديد الرقبة بالكامل ظهريا. باستخدام ملقط غير حاد منحني ، قم بتقسيم عضلات الرقبة الخلفية برفق من خط الوسط لإنشاء نافذة صغيرة.
ثم استخدمي أداة وضع طرف قطني مبلل لإزاحة عضلات الرقبة برفق من خط الوسط إلى المحيط. لاحظ ما إذا كانت الصهريج ماجنا مكشوفة كنافذة مثلثة مع غشاء جافية شفاف. ضع مجموعة المناور الدقيق على الإطار التجسيمي بجوار الماوس مع التأكد من أن الطرف الشعري لا يلمس أي سطح.
كسر طرف الشعيرات الدموية برفق دون الإخلال بالإعداد. قم بتدوير المقابض المقابلة على المناور الدقيق للمحاذاة ببطء وتحريك الطرف الشعري نحو الصهريج الكبير. يتم الشعور ببعض المقاومة بمجرد أن يلامس الطرف الشعري غشاء الصهريج الكبير.
ادفع الطرف ببطء شديد ضد الغشاء بمساعدة المقابض التي تحرص على عدم إتلاف أي أوعية دموية في الغشاء. عندما يتم ثقب الغشاء ، يتدفق السائل الدماغي النخاعي إلى الشعيرات الدموية في وقت واحد بسبب الضغط الشعري السلبي. اترك الإعداد لبضع دقائق حتى يتجمع ما يقرب من 10 ميكرولتر من السائل الدماغي النخاعي في الشعيرات الدموية.
قم بإزالة الشعيرات الدموية بعناية من المحقنة وإرفاقها بموزع لمبة microcap. اضغط على المصباح لنقل السائل الدماغي النخاعي إلى أنبوب طرد مركزي صغير معقم. ضع الدعم تحت الماوس وقم بتدوير المقابض المجسمة لتسوية الرأس.
أغلق الجرح بخيوط النايلون. حقن 300 ميكرولتر من المياه المالحة المعقمة تحت الجلد قبل إزالة الماوس من الجهاز. إعطاء الرعاية بعد العملية الجراحية للحيوانات حتى يحين الوقت لإزالة الغرز ، حوالي 7 إلى 10 أيام بعد الجراحة.
أظهر السائل الدماغي الشوكي الذي تم جمعه بعد 10 أيام من الجراحة زيادة بنحو ستة أضعاف في مستوى الجلوكوز في الفئران ، مملوءة بنسبة 50٪ من الجلوكوز مقارنة بالفئران التي تم ضخها بالسائل الدماغي الشوكي. ومع ذلك ، لم تكن مستويات الجلوكوز في الدم مختلفة بين المجموعات. أثناء خفض القنية في الدماغ ، قم بسحبها للخلف وتحقق مما إذا كان السائل الدماغي النخاعي يخرج من الحفرة.
من الضروري أيضا تحديد الصهريج العظيم بشكل صحيح ومنع تلوث السائل الدماغي الشوكي بالدم. يمكن أيضا استخدام هذه التقنية لتوصيل أي دواء غير قادر على عبور الحاجز الدموي الدماغي لاختبار تأثيره على وظائف المخ. هناك عدد محدود جدا من النماذج الحيوانية لمرض السكري ، وهي تزعج توازن الجلوكوز في البيئة المحيطية.
ومع ذلك ، يساعد هذا النموذج في التحقيق في التغيرات الخاصة بالدماغ في تنظيم الجلوكوز على الوظيفة العصبية.
