يعد نموذج TMEV أحد المنصات التجريبية الأولى التي تسمح بالتحقيق في آليات تطور النوبات نتيجة لعدوى الجهاز العصبي المركزي. تزيد عدوى الجهاز العصبي المركزي بشكل كبير من خطر الإصابة بالصرع. يساعد هذا النموذج على تحديد الأهداف والمركبات العلاجية المحتملة للمرضى المعرضين للخطر.
يجب تدريب المجربين على العمل مع الفئران. يمكن ممارسة حقن الفيروس بشكل جيد للغاية عن طريق حقن الصبغة في الحيوانات الميتة لتحقيق الدقة والروتين الكافيين. ستوضح الإجراء لورا بيل ، طالبة دراسات عليا من مختبري.
للبدء ، قم بإزالة غطاء حقنة الأنسولين وأضف أنابيب البولي إيثيلين كطوق حول الإبرة لضمان عمق حقن مناسب يبلغ 2.5 ملم. ثم اغمر المحقنة في الإيثانول لمدة 30 دقيقة وضع المحقنة تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، ضع الغطاء مرة أخرى على الإبرة ولف المحقنة في كيس تعقيم.
قم بلصق الحقيبة لإغلاقها ووضع ملصق بتاريخ التحضير. لإجراء حقن الفيروس ، احصل على حصص من سلالة دانيلز من TMEV من الفريزر ناقص 80 درجة مئوية. قم بإذابة الفيروس واحتفظ به على الجليد.
ثم قم بتحميل المحقنة بتعليق الفيروس. بعد ذلك ، قم بتنظيف المقعد بمطهر واعمل تحت ممتص الدخان. انقل الماوس المخدر من صندوق التخدير أسفل الغطاء وتحقق من التسامح الجراحي عن طريق إجراء قرصة إصبع القدم.
ثم قم بتنظيف رأس الحيوان باستخدام وسادة كحول وقم بإمالة رأس الماوس قليلا إلى اليسار بحيث يشير موقع الحقن إلى الأعلى. اسحب الجلد للخلف قليلا وأدخل الإبرة في الرأس. بعد ذلك ، قم بحقن 20 ميكرولتر داخل الودي على عمق 2.5 ملم في المنطقة الزمنية لنصف الكرة الأيمن.
اترك المحقنة في مكانها لمدة خمس إلى 15 ثانية وتحقق من وجود أي تسرب من الحقن أو إذا شوهدت فقاعات هواء ، ثم قم بإعداد حقنة جديدة. عند سحب المحقنة بعناية ، قم بتدويرها قليلا. ثم نقل الحيوان إلى قفص جديد ، والذي يتم وضعه نصف على ، نصف قبالة وسادة التدفئة أثناء الشفاء من التخدير.
ولا تترك الحيوانات دون مراقبة حتى تستعيد وعيها الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي. أولا ، أحضر جميع الأقفاص إلى مقاعد البدلاء وراقب الحيوانات للنوبات مرتين يوميا خلال مرحلة الضوء. سجل نشاط النوبة بمقياس سباق معدل وأبلغ عن عدد النوبات وشدتها.
بعد ذلك ، حرك قلما عبر القفص لإحداث بعض الضوضاء ونقل كل إلى صندوق آخر والعودة. بالنسبة للحيوانات التي لم تستولي عليها بشكل عفوي أو بعد اهتزاز القفص اللطيف ، قم بإثارة النوبات عن طريق التعامل الأكثر كثافة أثناء قلب الفأر بعناية عن طريق قلبه على ذيله من اليسار إلى اليمين. راقب كل لسلوك النوبة مرة أخرى وكرر العملية للأقفاص اللاحقة.
تم تسجيل النوبات السلوكية إذا حدثت أثناء حقن المخدرات أو أثناء جلسات مراقبة التعامل مع النوبات اللاحقة. تم تقديم البيانات المرصودة كخريطة حرارية تم إنشاؤها من خلال تصوير مراحل النوبة بألوان مختلفة. من خلال تسجيل EEG ، يمكن تحديد أحداث الصرع المختلفة في المرحلة المزمنة ، بعد أشهر من الإصابة ب TMEV.
يظهر القياس الكمي لتنكس الحصين والفئران المصابة بالصرع TMEV انخفاضا كبيرا في منطقة الحصين وزيادة مقابلة في منطقة البطين لفئران TMEV مقارنة بالضوابط. يمكن أن يقدم التحليل المناعي النسيجي معلومات حول معلمات مختلفة مثل وجود الخلايا الالتهابية. في هذه الحالة ، تم تلطيخ الأجزاء التي تحتوي على الحصين بالأجسام المضادة لتسمية الخلايا الليمفاوية التائية.
لا تظهر الحيوانات المصابة بوهمية أي تسلل للخلايا التائية ، في حين شوهد تسلل معتدل في غالبية الفئران المصابة ب TMEV. تظهر بعض الفئران المصابة تسلل شديد للخلايا الليمفاوية التائية. ليس كل الحيوانات لديها نوبات خلال كل فترة مراقبة.
أيضا ، يحدث أعلى معدل للنوبات في اليومين الخامس والسادس بعد التلقيح. نستخدم نموذج TMEV لاختبار فعالية الأدوية الجديدة المضادة للنوبات ضد النوبات التي تسببها العدوى. يمكن أيضا تقييم المقايسات التي تحقق في التغيرات السلوكية المرضية والتغيرات الفيزيولوجية الكهربية.
زود نموذج TMEV مجتمع أبحاث الصرع بأول نموذج مستحث بعدوى الجهاز العصبي المركزي لصرع الفص الصدغي ، مما يسمح بالتحقيق في الآليات الأساسية لتكوين الصرع بعد العدوى.
