تعمل هذه البروتوكولات كإرشادات لأفضل الممارسات لتوليد مسحوق العظام لاستخدامها في استخراج الحمض النووي عبر مجموعة من عناصر الهيكل العظمي. هناك عدد قليل من بروتوكولات أخذ عينات الحمض النووي القديمة المنشورة لمواقع أخرى غير العاج والهرم الصخري. سنعرض اليوم طرق أخذ العينات التفصيلية لثلاثة بدائل.
تظهر هذه الطرق أيضا إمكانات كبيرة للاستخدام مع بقايا الطب الشرعي المتدهورة ، ولكن أيضا كخط أساس لتطوير تقنيات مماثلة مع عينات غير بشرية. قم بإجراء جميع عمليات أخذ العينات في غرفة نظيفة مخصصة ، تحت غطاء PCR مجهز بالأشعة فوق البنفسجية أو خزانة السلامة البيولوجية. قم بإيقاف تشغيل تدفق الهواء وانشر رقائق الألومنيوم المعقمة عبر سطح الطاولة لالتقاط أي مسحوق أو شظايا عظام طائشة.
ضع ورقة وزن في صينية وزن معقمة. أمسك الضرس المطهر من المينا بحيث يكون الجذر متجها لأسفل فوق صينية وزن، باستخدام مشبك محمول باليد. جهز مثقاب الأسنان بعجلة قطع دائرية ذات حواف ماسية.
مع ضبط المثقاب على إعداد سرعة متوسطة ، المس حافة المثقاب برفق إلى الجذر بزاوية 20 درجة تقريبا. اكشط العينة لأسفل في الدرج لجمع المادة الصفراء الخارجية من الجذر. توقف عن التجميع بمجرد أن تصبح المادة الأخف وزنا من العاج مرئية.
انقل المسحوق إلى أنبوب LoBind Safe-Lock سعة 2 ملليلتر ، وسجل هذه الكتلة المجمعة من المسحوق باستخدام ميزان مغلق بدقة لا تقل عن 0.01 ملليغرام. انقل المسحوق من ورق الوزن إلى أنبوب LoBind Safe-Lock سعة 2 ملليلتر لاستخراجه. قم بتخزين هذا الأنبوب عند 20 درجة مئوية.
تأكد من استعادة جميع شظايا العظام وأكبر قدر ممكن من المسحوق. قم بتغيير الرقاقة بين كل عينة ، وتخلص من الرقاقة المستخدمة في كيس خطر بيولوجي قابل للتعقيم. قم بتطهير منطقة العمل وانشر رقائق الألومنيوم المعقمة عبر سطح الطاولة في كل مرة قبل الانتقال إلى العظم التالي.
ضع ورقة صغيرة من ورق الوزن في درج وزن قياسي. قم بإزالة وتجاهل الطبقة الخارجية من العظم القشري للقوس الفقري العلوي باستخدام مثقاب الأسنان. بعد ذلك ، قم بتأمين الفقرات في مشبك يدوي ، مع العملية الشائكة للخارج والجانب العلوي لأسفل.
أثناء حمل الفقرة ، قم بالحفر لأعلى في وسط الشق على شكل حرف V ، والذي يتكون من اندماج العملية الشائكة مع الصفائح بسرعة منخفضة وعزم دوران عالي. توقف عن الحفر عندما يكون هناك انخفاض ملحوظ في المقاومة. قم بتغيير موضع الحفر قليلا ، وكرر حتى يتم جمع 50 إلى 100 ملليغرام من مسحوق العظام.
انقل مسحوق العظام من ورق الوزن إلى أنبوب LoBind سعة 2 ملليلتر لاستخراجه ، وقم بتخزينه عند 20 درجة مئوية. تأكد من استعادة جميع شظايا العظام وأكبر قدر ممكن من المسحوق قبل التخلص من ورق القصدير. تطهير منطقة العمل والاستعداد لجمع العينات ، كما هو موضح سابقا.
ضع ورقة صغيرة من ورق الوزن في درج وزن قياسي. امسك قبة الكاحل لأعلى، والسطح الإنسي باتجاه المجمع، فوق درج الوزن. كشط العظم القشري إلى عمق حوالي ملليمتر واحد من عنق الكاحل باستخدام مثقاب الأسنان مع بت منخفض القياس مضبوط على سرعة منخفضة وعزم دوران عالي.
قم بتغيير موضع الحفر وكرر ذلك حتى يتم جمع ما يقرب من 50 إلى 100 ملليغرام من مسحوق العظام. انقل مسحوق العظام هذا من ورق الوزن إلى أنبوب LoBind سعة 2 ملليلتر لاستخراجه. قم بتخزين المسحوق على حرارة 20 درجة مئوية إلى أجل غير مسمى.
قم بتخزين العظم المتبقي والمسحوق الزائد في بيئة معقمة جافة يتم التحكم في درجة حرارتها عند 25 درجة مئوية. تخلص من جميع النفايات في أكياس أو أوعية الأوتوكلاف للمخاطر البيولوجية. تعقيم أو تطهير جميع المعدات القابلة لإعادة الاستخدام وتعريضها للأشعة فوق البنفسجية بين كل عينة.
أنتج Pars petrosa حمضا نوويا داخليا أعلى من مواقع أخذ العينات التشريحية ال 23 الأخرى التي شملها المسح. أنتجت مواقع أخذ العينات التشريحية السبعة الإضافية المعروضة في هذا البروتوكول أعلى إنتاجية تالية. أنتجت المواقع البديلة باستمرار غلة الحمض النووي الكافية لتحليلات علم الوراثة السكانية القياسية.
وكانت معدلات الازدواجية في المكتبات الناجمة عن جميع مواقع أخذ العينات التشريحية منخفضة، مما يشير إلى درجة عالية من التعقيد. أظهرت الأسنان ، وكذلك الفقرات الصدرية الانتعاش الجزيئي الكافي. واحدة من أكثر الجوانب تحديا لأخذ عينات العظام هي عملية الحفر ، مثل كيفية إجراء الحفر ، ومكان الحفر ، ومتى تتوقف عن الحفر.
