يسمح هذا البروتوكول بالتوليف البسيط والسريع للقطرات النانوية المشبعة بالفلور المتبخرة بصريا ويوفر طريقة لتحسين أداء هذه الجسيمات. يسمح إصدار الشخص بتعزيز التباين بمجرد التلاعب بمرحلة التصوير بالموجات فوق الصوتية أولا. لا يتطلب أي معدات إضافية ويمكن إجراؤه على أي نظام موجات فوق صوتية قابل للبرمجة.
ابدأ بشطف قارورة مستديرة القاع سعة 10 ملليلتر بالكلوروفورم واغسل حقنة زجاجية محكمة الإحكام بسعة 10 ميكرولتر وملليلتر واحد مع الكلوروفورم عن طريق استنشاق حجم المحقنة بالكامل بشكل متكرر وطردها ثلاث مرات. باستخدام المحاقن ، أضف 200 ميكرولتر من 25 ملليغرام لكل ملليلتر DSPE-mPEG-2000 ، وثمانية ميكرولتر من 10 ملليغرام لكل ملليلتر DSPC ، ومليلتر واحد من ملليغرام واحد لكل ملليلتر IR-1048 في الدورق القاعي المستدير. تذكر تنظيف المحاقن بين الدهون أو الصبغة لمنع التلوث في المخزون.
قم بإزالة المذيب باستخدام مبخر دوار. تأكد من ضبط الفراغ ببطء إلى 332 مليبار لمنع الارتطام. بعد خمس دقائق ، قلل الضغط إلى 42 مليبار لإزالة أي ماء قد يكون دخل المحلول.
كعكة الدهون في ملليلتر واحد من PBS و sonicate أو دوامة في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق أو حتى يتم تعليق كل كعكة الدهون وتذوب في الحل. انقل المحلول إلى قنينة زجاجية سعة 7 ملليلتر وضع القارورة في طبق زجاجي مملوء بالثلج للسماح للمحلول بالتبريد لمدة خمس دقائق. شطف حقنة زجاجية مانعة لتسرب الغاز مع بيرفلوروهكسان.
ثم أضف 50 ميكرولتر من بيرفلوروهكسان إلى القارورة باستخدام المحقنة. دقق في صوتنة الخليط مع ضبط السعة على واحد ، وضبط وقت العملية على 20 ثانية ، وضبط النبض على ثانية واحدة ، وضبط النبض على خمس ثوان. ثم قم بتغيير الإعدادات كما هو مذكور في مخطوطة النص وصوتنة الخليط مرة أخرى.
انقل محلول قطرات النانو إلى أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 ملليلتر وأجهزة طرد مركزي عند 300 جرام لمدة ثلاث دقائق لفصل القطرات الأكبر التي تزيد عن ميكرومتر واحد عن القطرات الأصغر. تخلص من الحبيبات وانقل المادة الطافية إلى أنبوب طرد مركزي آخر سعة 1.5 ملليلتر. اغسل المادة الطافية عن طريق الطرد المركزي عند 3،000 جم لمدة خمس دقائق لتكوير جميع القطرات في المحلول.
أعد تعليق PFCnDs في ملليلتر واحد من PBS عن طريق سحب الحبيبات لأعلى ولأسفل ثم صوتنة في سونيكاتير الحمام لمدة دقيقة واحدة. تمييع PFCnDs 100 أضعاف عن طريق إضافة 10 ميكرولتر من مخزون PFCnD إلى 990 ميكرولتر من PBS وسونيكات الحمام لتفريق PFCnDs قبل قياس حجمها. قم بقياس حجم القطرات باستخدام تشتت الضوء الديناميكي.
قم بتفريغ الماء عن طريق ملء دورق فراغ سعة 500 ملليلتر ب 400 ملليلتر من الماء منزوع الأيونات ، وأغلقه بفلين مطاطي ، وقم بتوصيل القارورة بخط التفريغ. افتح خط الفراغ واغمر الجزء السفلي من القارورة في سونيكاتير الحمام. صوتي لمدة خمس دقائق أو حتى لا يكون تشكيل فقاعة الغاز مرئية.
تحضير 10٪ من الأمونيوم لكل محلول كبريتات عن طريق إذابة 500 ملليغرام في خمسة ملليلتر من الماء المنزوع الغاز. حرك المحلول برفق إذا لم يذوب بيرسلفات الأمونيوم تماما. في دورق سعة 400 ملليلتر مع قضيب تقليب على طبق تقليب، أضف 150 ملليلترا من الماء المنزوع الغاز و50 ملليلترا من محلول ثنائي ساكريلاميد أكريلاميد 40 لتكوين 200 ملليلتر من محلول ثنائي أكريلاميد أكريلاميد 10٪.
حرك الخليط عند 200 دورة في الدقيقة للسماح بالخلط المناسب دون إدخال فقاعات. قم بوزن 400 ملليغرام من السيليكا وأضفها إلى محلول بيساكريلاميد 10٪ من مادة الأكريلاميد لتشكيل 0.2٪ من محلول السيليكا والأكريلاميد. قم بإعداد قالب مربع مع إدراج أسطواني عن طريق قطع الأطراف من ماصة نقل بلاستيكية ودعمها في القالب بشريط مختبري.
أضف ملليلتر من محلول بيرسلفات الأمونيوم بنسبة 10٪ إلى الكأس الزجاجية للحصول على تركيز نهائي يساوي 0.1٪وأضف 250 ميكرولترا من TEMED إلى المحلول الوهمي. اترك المحلول يحرك لمدة تقل عن دقيقة. صب المحلول بسرعة في القالب مع الحرص على عدم إدخال فقاعات الهواء في المحلول.
يجب أن يتبلمر المحلول في غضون 10 دقائق. قم بإزالة الشبح عن طريق تشغيل الطرف المسطح لملعقة المختبر حول حافة القالب وقلب القالب. قم بتشغيل وتسخين نظام الليزر النبضي لمدة 20 دقيقة تقريبا باتباع تعليمات الشركة المصنعة.
تأكد من توصيل حزمة الألياف الضوئية بشكل صحيح بإخراج الليزر ووضع الساقين بشكل صحيح داخل حامل حزمة الألياف. بعد تشغيل نظام التصوير بالموجات فوق الصوتية ، قم بتوصيل محول طاقة تصوير الصفيف بالنظام وقم بإصلاح محول الطاقة داخل الحامل لمحاذاة مستوى التصوير الخاص به مع المقطع العرضي لليزر. اضبط تردد تكرار النبض لنظام الليزر على 10 هرتز وضع عداد طاقة في نهاية حزمة الألياف لقياس الطاقة.
اضبط تأخير مفتاح Q حتى يكون الطلاقة المقدرة 70 مليون لكل سنتيمتر مربع. ردم إحدى القنوات في بولي أكريلاميد فانتوم بهلام الموجات فوق الصوتية وخليط PFCnD باستخدام حقنة بلاستيكية ذات طرف منزلق سعة ملليلتر. قم بتغطية الجزء العلوي من القناة بحرية باستخدام هلام الموجات فوق الصوتية وإزالة أي فقاعات باستخدام حقنة بلاستيكية ذات طرف منزلق سعة ملليلتر.
أخيرا ، ضع شبح بولي أكريلاميد أسفل محول الطاقة وحزمة الألياف. تنتج الصياغة الناجحة والفصل بالطرد المركزي ل PFCnDs قطرات يبلغ قطرها حوالي 200 إلى 300 نانومتر. يزداد حجم القطرات بمرور الوقت بسبب الالتحام والانتشار في عملية تعرف باسم نضج أوستوالد.
تم العثور على التباين من تضمين النبضة النهائية ليكون أكبر بحوالي 3.2 مرة ، وهذا يمثل تحسنا بنسبة 220٪ من النبض P. تم حساب المنطقة شديدة الصدى لكل إطار وتم تسويتها بواسطة المنطقة شديدة الصدى للإطار الأول ثم تركيبها على نموذج الاضمحلال الأسي. كان وقت الاضمحلال المميز للمنطقة شديدة الصدى الطبيعية أطول بمقدار 3.5 مرة في التصوير بالنبض N مقارنة بالنبض P.
تم تسجيل إطارات الصور التفاضلية للوضع B في الوقت المناسب لكل تصوير N-pulse و P-pulse. أحد أهم الأشياء هو طرد الليبيدات الموجودة في قاع القارورة لضمان دمجها بشكل صحيح في كعكة الليبيدات.
