يصاب أكثر من 50٪ من مرضى سرطان القولون والمستقيم بورم خبيث في الكبد من خلال نشر الوريد البابي. ولا تزال النماذج الحيوانية الحالية لدراسة ورم خبيث في الكبد بسرطان القولون والمستقيم غير كافية لتلخيص العملية البيولوجية. يوفر حقن الوريد البابي لأورام سرطان القولون والمستقيم بيئة ورم غنية بالخلايا الليفية تسمح بالتحقيق في الحديث المتبادل بين الخلايا السرطانية النقيلية و CAS في ورم خبيث في سرطان القولون والمستقيم الكبد.
توفر هذه التقنية منصة لتقييم فعالية الاستراتيجيات العلاجية التي تستهدف البيئة الدقيقة للورم من ورم خبيث في الكبد من سرطان القولون والمستقيم. هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص للتحقيق في التفاعلات بين CAS والخلايا السرطانية والبيئة الدقيقة للورم. إذا لم يتم وضع طرف القطن بشكل صحيح على موقع الحقن، فقد يحدث نزيف مفرط بعد إزالة الإبرة.
يتوقف نقع طرف القطن بمجرد تحديد موقع الحقن. قد يكون من الصعب تحديد الوريد البابي وتصور موقع الحقن دون إظهار مرئي لهذا الإجراء. للبدء ، قم بإعداد منطقة جراحية معقمة باستخدام ستائر معقمة على وسادة تدفئة.
بالإضافة إلى ذلك ، قم بإعداد جميع الأدوات اللازمة للجراحة كما هو موضح في مخطوطة النص. ثم قم بإضاءة المنطقة الجراحية عن طريق ضبط موضع مصدر الضوء. بعد ذلك ، حقن 0.1 ملليغرام تحت الجلد لكل كيلوغرام من وزن الجسم من البوبرينورفين في فأر لإدارة الألم الجراحي.
ثم قم بتخدير الفأر واستخدام ماكينة حلاقة كهربائية ، احلق من المنتصف إلى أعلى البطن في منطقة بعيدة عن المنطقة الجراحية المعقمة لتجنب تلويث الشعر للموقع. تنظيف موقع الشق بالتناوب مع بيتادين و 80٪ من الإيثانول لتعقيم المنطقة الجراحية. كرر ثلاث مرات.
ضع الماوس في المنطقة الجراحية على وسادة تدفئة في وضع ضعيف مع صيانة تخدير الأيزوفلوران. ثم ضع ستارة جراحية مع ثقب على بطنها. ارفع جلد البطن بالملقط وقم بعمل شق جلدي من سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات عند خط الوسط باستخدام مقص ، مع قطع الجلد فقط ، مع التأكد من أن الشق يتراوح من منتصف البطن إلى عملية الخناق في القص وليس فوق الطرف السفلي من عملية الخنازير.
ثم ارفع الجدار البريتوني بالكامل باستخدام ملقط وقم بعمل شق مماثل من سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات إلى الصفاق باستخدام مقص. تجنب قطع الأمعاء والحجاب الحاجز. بعد ذلك ، انقع شاشا جراحيا بمحلول ملحي دافئ وضعه بجوار الشق الموجود على يمين الجراح.
اسحب الأمعاء الدقيقة والغليظة بلطف باستخدام برعم قطني منقوع بالمحلول الملحي وضعه على الشاش المنقوع بمحلول ملحي. قم بتغطية الأمعاء بشاش رطب إضافي لإبقائها رطبة. بعد ذلك ، اسحب الأمعاء بلطف إلى يمين الجراح باستخدام الشاش الرطب.
ثم ضع توترا لطيفا لتصور الوريد البابي. إذا كان تصور الوريد البابي صعبا ، فقم بضبط موضع المعدة بلطف باستخدام برعم قطني رطب. بعد توصيل التعليق الورمي بلطف عدة مرات للحصول على تعليق خلوي متجانس ، اسحب 100 ميكرولتر من تعليق الخلية في حقنة هاميلتون أو حقنة ملليلتر واحدة متصلة بإبرة قياس 33 ، وتجنب فقاعات الهواء.
أدخل ببطء الإبرة المشطوفة في الوريد البابي بعمق إدخال من ثلاثة إلى أربعة ملليمترات وزاوية الإبرة موازية تقريبا لوريد الباب. حقن الخلايا السرطانية ببطء على مدى 30 ثانية لمنع انسداد الوريد البابي. يتغير لون الكبد مؤقتا من الأحمر إلى الأبيض.
بعد الحقن ، قم بإزالة الإبرة ببطء وقم بتطبيق ضغط لطيف على الفور على موقع الحقن باستخدام برعم قطني جاف لمدة خمس دقائق. قم بإزالة برعم القطن وقم بتطبيق إسفنجة مرقئ على الفور على موقع الحقن. امسك الإسفنجة ببرعم قطني أو ملقط واضغط بضغط لطيف لمدة خمس دقائق أخرى.
بعد خمس دقائق ، قم بإزالة الضغط على الإسفنجة المرقئة وتأكد من عدم وجود نزيف من موقع الحقن. في حالة حدوث نزيف ، قم بإجراء الإرقاء بالضغط على الفور باستخدام برعم قطني لمدة 10 دقائق تقريبا. ثم ضع إسفنجة مرقئ إضافية لمدة خمس دقائق أخرى.
بعد التأكد من عدم وجود نزيف ، قم بإزالة الشاش الجراحي على الأمعاء. ثم باستخدام حقنة مملوءة بخمسة ملليلترات من المياه المالحة ، قم برش المحلول الملحي على الأمعاء لمنع التصاق الأعضاء. ضع الأمعاء بلطف داخل تجويف البطن وقم بخياطة الصفاق باستخدام 4-0 خيوط بولي جلاكتين.
ثم رفع جانبي الجلد مع ملقط ، وتطبيق دبابيس الجلد لإغلاق شق الجلد ، مع الحرص على عدم تدبيس الأمعاء. قم بإيقاف تشغيل الأيزوفلوران ، ولكن حافظ على تدفق الأكسجين قيد التشغيل. راقب الماوس بعناية.
وعندما يستيقظ الماوس ، ضعه في قفص فارغ على وسادة تدفئة. راقب الماوس حتى يصبح واعيا ومتنقلا بشكل طبيعي. بعد أربع ساعات من الجراحة ، حقن تحت الجلد 0.1 ملليغرام لكل كيلوغرام من البوبرينورفين.
راقب الماوس بعناية يوميا لمدة أسبوع ، وتحقق من الغرز والتئام الجروح. بعد سبعة إلى 10 أيام من الجراحة، قم بإزالة دبابيس الجلد باستخدام مزيل دباسة. أظهر التهجين بالحمض النووي الريبي في الموقع بعد أسبوعين من حقن الوريد الذيل AAV-8 Islr الإفراط في التعبير عن Islr في الكبد.
بعد أسبوعين من حقن AAV mRuby2 ، تم حقن معلقات خلية واحدة من المواد العضوية لسرطان القولون في الوريد البابي للفأر. من الناحية العيانية ، أدى حقن الوريد البابي هذا إلى عقيدات ورم بيضاء متعددة في الكبد. أظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين للنقائل الكبدية لسرطان القولون والمستقيم الناجم عن حقن الوريد البابي علم الأنسجة المرضي للسرطان الغدي الأنبوبي المتمايز بشكل معتدل مصحوبا برد فعل لحمية ونخر من البلاستيك الوهمي.
هذا علم الأنسجة الغني بالسدى يلخص بأمانة نقائل الكبد البشرية لسرطان القولون والمستقيم ، مما يجعل هذا النموذج مناسبا للبحوث الانتقالية التي تحقق في سدى الورم النقيلي. أكدت الكيمياء النسيجية المناعية لأكتين العضلات الملساء ألفا وجود الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان ، في حين أظهر تلطيخ Picro-Sirius الأحمر مصفوفة وفيرة خارج الخلية في اللحمة المتوسطة للورم. كشفت الكيمياء المناعية ل EPCAM أن سرطان القولون والمستقيم النقيلي أظهر تبرعم الورم ، وهو سمة من سمات سوء تشخيص سرطان القولون والمستقيم.
وكان مؤشر وضع العلامات Ki67 حوالي 80٪ مما يشير إلى أن معظم الخلايا السرطانية نشطة من الناحية الانقسامية. وأظهرت الفئران متوسط بقاء على قيد الحياة لمدة 57 يوما بعد حقن الورم في الوريد البابي. أظهرت الفئران المعالجة ب AAV-8 Islr تحسنا في بقاء الفئران ، وانخفضت في إشارات التصوير الحي من الأورام ، وزادت من إشارات البروتين المورفوجيني العظمي ، وانخفضت خلايا Ki67 المتكاثرة.
تأكد من تطبيق طرف القطن على موقع الحقن الصحيح ويتم تطبيق الإسفنجة المرقئة فقط بعد توقف النزيف. يمكن مراقبة ظهور الورم باستخدام تصوير IVIS للتأكد من أن الخلايا السرطانية تنمو داخل الكبد.
