الهدف العام لهذا الإجراء هو مراقبة الأوعية الدموية الدماغية بعد نزيف تحت العنكبوتية في الفئران في الجسم الحي. ويتم ذلك من خلال تطبيق عالية التردد السونوغرافيا المزدوجة مرمزة بالألوان تحت التخدير مع isoflurane. تتم معالجة بيانات التصوير لتحديد سرعات تدفق الدم في الشرايين السباتية الداخلية داخل وخارج الجمجمة.
تشير سرعة تدفق الدم داخل الجمجمة المتسارعة إلى سرعة الأوعية الدموية الدماغية. في هذه الدراسة، قمنا بإجراء قياسات لسرعات تدفق الدم من الشرايين داخل الجمجمة وخارج الجمجمة في الفئران الإناث، C57BL/6N الذين تتراوح أعمارهم بين 11 إلى 12 أسبوعا. وقد تعرضت الفئران إما لتحريض SAH أو جراحة صورية تم وصفها بالتفصيل في مكان آخر.
لإعداد التبديل فحص التصوير فوق الصوتي على جهاز الموجات فوق الصوتية وأدخل ID.Warm الحيوان لوحة التدفئة من نظام الموجات فوق الصوتية إلى 37 درجة مئوية. تأكد من أن مسبار درجة حرارة المستقيم جاهز للاستخدام. استخدام حمام الماء الدافئ لتسخين هلام الموجات فوق الصوتية إلى 37 درجة مئوية.
إعداد كريم إزالة الشعر، كريم الاتصال للأقطاب ومرهم العين. تأكد من تركيب المحول بشكل صحيح على الذراع الميكانيكية وتأكد من أن غرفة تحريض التخدير يتم مسحها مع 4٪ isoflurane و 40٪ أكسجين. حث التخدير عن طريق وضع الماوس في الغرفة لمدة دقيقة واحدة.
حماية العينين مع مرهم. استمر فقط بعد الوصول إلى تخدير عميق بما فيه الكفاية. الحفاظ على التخدير مع 1.5٪ isoflurane و 40٪ الأكسجين باستخدام قناع التخدير طوال العملية برمتها.
في الخطوة الأولى ، يتم تحديد سرعات تدفق الدم في الشرايين السباتية الداخلية داخل الجمجمة مع السونوغرافيا المزدوجة عالية التردد عبر الجمجمة. ضع الماوس في موضع عرضة على لوحة التدفئة من نظام الموجات فوق الصوتية للحفاظ على درجة حرارة الجسم 37 درجة مئوية. تطبيق مرهم العين على كلا الجانبين.
قبل الامتحان الأول تقصير الفراء في occiput مع ماكينة حلاقة كهربائية. ثم إزالة الشعر المتبقي كيميائيا باستخدام كريم إزالة الشعر. استخدمي مسحة قطنية لنشر وفرك الكريم لمدة دقيقتين حتى يبدأ الشعر في السقوط.
بعد دقيقتين إضافيتين إزالة كريم والشعر مع ملعقة وتطهير الجلد مع مطهر الجلد الكحولية. معطف الأطراف الأربعة للحيوان مع عجينة موصل وإصلاحها مع الشريط على أقطاب تخطيط القلب جزءا لا يتجزأ من المجلس. ضع التشحيم على مسبار درجة حرارة المستقيم وأدخله بعناية لمراقبة درجة حرارة الجسم ، باستخدام مصباح احترار إضافي إذا لزم الأمر.
تحقق، إذا تم عرض المعلمات الفسيولوجية، تخطيط القلب وإشارة التنفس بشكل صحيح على شاشة نظام الموجات فوق الصوتية. إذا لزم الأمر، يمكن تعديل مستوى التخدير للحصول على معدل ضربات القلب المستهدف من 4 إلى 500 نبضة في الدقيقة. معطف مع هلام الموجات فوق الصوتية.
استخدم محول صفيف خطي ومعدل إطار أعلى من 200 إطار في الثانية للحصول على صور بالموجات فوق الصوتية وتركيبها على الذراع الميكانيكية. ضع محول على أوكسبوت يميل مرة أخرى بمقدار 30 درجة. استخدم وضع B ووضع CW-Doppler لتصور الشريان السباتي الداخلي داخل الجمجمة الأيمن وتحريك المحول مع وحدة التحكم ذهابا وإيابا حتى نجد أقصى تدفق للشرايين.
لجمع المعلومات التشريحية استخدام التقليدية وضع B و CW-دوبلر و بدء الاستحواذ من خلال النقر على زر الحصول على. لتسجيل المعلومات حول خصائص تدفق الأوعية داخل الجمجمة انقر على زر دوبلر موجة النبض، وضع حجم عينة في وسط السفينة والحصول على حلقة سيني أطول من ثلاث ثوان. المضي قدما بشكل متطابق مع الجانب الأيسر.
في الخطوة التالية يتم تحديد سرعات تدفق الدم من الشرايين السباتية الداخلية خارج الجمجمة مع السونوغرافيا المزدوجة عالية التردد. ضع الماوس في وضعية السبق على لوحة التدفئة في نظام الموجات فوق الصوتية للحفاظ على درجة حرارة الجسم من 37 درجة مئوية. قبل الفحص الأول إزالة الشعر من الجزء الأمامي من الرقبة مع ماكينة حلاقة كهربائية.
ثم إزالة الشعر المتبقي كيميائيا باستخدام كريم إزالة الشعر كما هو موضح سابقا. معطف الأطراف الأربعة للحيوان مع عجينة موصل وإصلاحها مع الشريط على أقطاب تخطيط القلب جزءا لا يتجزأ من المجلس. ضع التشحيم على مسبار درجة حرارة المستقيم وأدخله بعناية لمراقبة درجة حرارة الجسم.
استخدام مصباح الاحترار إضافية إذا لزم الأمر. تحقق مرة أخرى من العرض الصحيح للمعلمات الفسيولوجية على الشاشة. معطف الجزء الأمامي من الرقبة مع هلام الموجات فوق الصوتية ارتفعت درجة حرارتها إلى 37 درجة مئوية.
ضع المحول الموازي للحيوان وضبط الموضع من أجل الحصول على صور طولية للشريان السباتي الأيمن. استخدم وضع B CW-Doppler لتصور الشريان السباتي الأيمن. يجب أن تحتوي الصورة على الشريان السباتي المشترك الصحيح والشريان السباتي الداخلي الأيمن والشريان السباتي الخارجي الأيمن.
لجمع المعلومات التشريحية استخدام التقليدية وضع B و CW-دوبلر و بدء الاستحواذ من خلال النقر على زر الحصول على. لتسجيل معلومات حول خصائص تدفق الشريان السباتي خارج الجمجمة انقر على زر دوبلر موجة النبض، ضع حجم العينة في وسط الشريان السباتي المشترك الشريان السباتي الداخلي والشريان السباتي الخارجي والحصول على حلقة سينية أطول من ثلاث ثوان. المضي قدما بشكل متطابق مع الجانب الأيسر.
إنهاء التخدير وإزالة الحيوان من لوحة الاحترار ووضعه في قفص، وضعت في حاضنة ساخنة إلى 36 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لمنع انخفاض حرارة الجسم والتحقق من الشفاء التام. الخطوة التالية هي معالجة بيانات التصوير السونوغرافي الفائق. استخدام محطة عمل خارجية لمعالجة بيانات الموجات فوق الصوتية عالية التردد.
تصدير وضع B، وضع CW-دوبلر والصور PW-دوبلر وضع والحلقات سيني إلى برنامج مختبر Vevo. افتح دراسة الموجات فوق الصوتية المصدرة. حدد واحد وفتح PW-دوبلر حلقة سيني من الشريان السباتي داخل الجمجمة.
في هذا البروتوكول عادة ما يتم تسجيل سبع إلى ثماني نبضات في منحنيات سرعة التدفق المقابلة. وقفة حلقة cine وانقر على زر القياس. اختر حزمة الأوعية الدموية وانقر على RICA PSV لقياس ذروة الضغط الانقباضي للشريان السباتي داخل الجمجمة الأيمن.
الآن انقر على اليسار على ذروة منحنى السرعة وسحب خط مستقيم إلى خط الصفر. تحديد القياس بنقرة زر الماوس الأيمن. الآن اختيار EDV ريكا لقياس السرعة الانبساطية نهاية.
انقر على اليسار على الحد الأدنى من طفح منحنى السرعة في نهاية diastole. اسحب الخط مباشرة إلى خط الصفر وحدد القياس بنقرة زر الماوس الأيمن. اختر ريكا VTI لقياس وقت السرعة المتكاملة.
انقر على اليسار في بداية منحنى السرعة واتبع المنحنى مع الماوس حتى نهاية الهضبة الانبساطية. ثم انقر بزر الماوس الأيمن مرة أخرى لتحديد القياس. تصدير البيانات من الشرايين السباتية الداخلية داخل المخ باستخدام زر التقرير.
اضغط تصدير وحفظ البيانات كملف تقرير VSI. استخدم نفس النهج لقياس PSV و EDV و VTI للشرايين السباتية الداخلية خارج الجمجمة الصحيحة وتصدير البيانات وفقا لذلك. المضي قدما بشكل مماثل مع الجانب الأيسر واستخدام LICA PSV، EDV وVTI.
في خمسة فئران وثلاثة منها تم تحريض SAH في حين أن اثنين الحصول على جراحة صورية تم تحديد سرعات تدفق الدم من الشريان الداخلي داخل الجمجمة والشريان السباتي الداخلي خارج الجمجمة قبل يوم واحد من الجراحة وبعد يوم واحد وثلاثة وسبعة أيام من الجراحة. قبل الجراحة، كانت سرعات تدفق الدم الزائدة وداخل الجمجمة وكذلك نسبة تدفق الدم داخل وخارج الجمجمة متشابهة بين SAH والحيوانات الصورية. في اليوم الأول بعد تحريض SAH لم تكن هناك تغييرات كبيرة في سرعات تدفق الدم داخل أو خارج الجمجمة أو النسب بين تدفق الدم داخل وخارج الجمجمة.
في اليومين الثالث والسابع زادت سرعات تدفق الدم داخل الجمجمة في الشريان السباتي الداخلي بشكل ملحوظ واثنين من SAH التي تشير إلى توسع الأوعية الدماغي بعد SAH. كما ظلت سرعات تدفق الدم خارج الجمجمة دون تغيير تقريبا، ونسب سرعات تدفق الدم داخل وخارج الجمجمة زادت أيضا بشكل كبير في اليوم السابع في الحيوانات SAH تشير إلى vasospasm الدماغي. في الختام عالية التردد مرمزة بالألوان عبر الجمجمة السونوغرافيا المزدوجة يمكن استخدامها لأداء في قياسات الجسم الحي لسرعات تدفق الدم داخل الجمجمة في الفئران.
على غرار الوضع في المرضى البشر تسارع سرعات تدفق الدم داخل الجمجمة في الفئران بعد SAH تشير إلى vasospasm. الطريقة السونوغرافية الفائقة الموضحة هنا سريعة وقليلة التوغل. فإنه يسمح الدراسات الطولية من vasospasm في نماذج مورين SAH.
