يمكن استخدام مقايساتنا لاختبار المركبات لآثارها على وظيفة خلايا الحيوانات المنوية البشرية. على وجه التحديد، يمكن استخدام هذه الطرق بسرعة وسهولة فحص أعداد كبيرة من المركبات لآثارها على إشارات الكالسيوم والتفاعل acrosome في خلايا الحيوانات المنوية البشرية. و سوف تسهل العروض التوضيحية البصرية لهذه الطريقة على الآخرين إعداد تجارب مماثلة في مختبراتهم الخاصة.
تبدأ من خلال وضع واحد 50 ملليلتر أنبوب لكل ملليلتر واحد من عينة من السائل المنوي الخام في رف أنبوب في زاوية 45 درجة وإضافة أربعة ملليلتر من 37 درجة مئوية السائل الأنبوبي الإنسان أو HTF المتوسطة الإيجابية لكل أنبوب. بعد ذلك ، بعناية ماصة واحدة ملليلتر من عينة السائل إلى الجزء السفلي من كل أنبوب ووضع الأنابيب في 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. في نهاية الحضانة، استخدم تلميح ماصة معدلة عقد في زاوية 45 درجة لنقل بلطف أكبر قدر من الجزء العلوي من خلية الحيوانات المنوية motile التي تحتوي على HTF المتوسطة الإيجابية ممكن في أنبوب جديد 15 ملليلتر البلاستيك.
لحساب الخلايا المنوية التي تم جمعها، تمييع 20 ميكرولتر aliquot إلى عامل من 10، 20، 30، 50، أو 90 في المخزن المؤقت S100 في أسفل جولة أنبوب ملليلتر وفقا للتركيز المتوقع. دوامة خلايا الحيوانات المنوية المخففة لمدة 10 ثوان في 700 دوران في الدقيقة الواحدة. بعد ذلك ، غمر كاسيت SP1 في العينة والاكتئاب تماما المكبس الأبيض لpireate aliquot من العينة في الكاسيت.
ثم ضع الكاسيت في علبة قياس الخلايا الصورة وتشغيل PI ملطة الحيوانات المنوية البشرية الخلية المقايسة وفقا لعامل التخفيف تطبيقها. لقياس التغيرات في تركيز الكالسيوم الحر داخل الخلايا، الماصات بلطف عينة الحيوانات المنوية صعودا وهبوطا مرة واحدة واستخدام ماصة مكرر التلقائي إلى aliquot 50 ميكرولترات من خلايا الحيوانات المنوية الملطخة بالفلوروهور إلى 24 آبار من صف واحد من لوحة بئر 384 ميكرو. ضع لوحة البئر الصغيرة في قارئ لوحة الفلوريسين في 30 درجة مئوية وحدد البروتوكول المناسب لفلوروفور.
حدد بئر في صف من خلايا الحيوانات المنوية وضبط كسب إلى قيمة الهدف من 20٪ ثم بدء القياس. بعد 10 دورات خط الأساس، وقفة التجربة وإخراج الدرج مع لوحة بئر ميكرو. باستخدام ماصة 12 قناة، بسرعة إضافة 25 ميكرولترات من الحلول المعدة من المركبات والضوابط ذات الاهتمام في 12 آبار مكررة في الصف والعودة على الفور لوحة للقارئ لمواصلة القياس في أسرع وقت ممكن.
أي تغييرات في الفلوريسك ردا على إضافة المركبات أو الضوابط سيتم التقاطها من قبل الصك. لتحليل التفاعل الاجناض ، بعد احتضان خلايا الحيوانات المنوية ذات القدرات مع الأصباغ الفلورية المناسبة أو المركبات أو الضوابط ، اخلط العينات عن طريق الأنابيب وإضافة 50 ميكرولترات من كل عينة اختبار إلى 100 ميكرولترات من محلول شل الحركة. اخلط العينات مرة أخرى ثم قم بتحميل الغرف من شريحة A2 واحدة لكل عينة مع ما يقرب من 30 ميكرولترات من العينة لكل غرفة.
ثم ضع الشريحة الأولى المحملة على علبة مقياس صوت الصورة. حدد بروتوكول FlexiCyte واضغط تشغيل. هنا نتائج تمثيلية من تجربة اختبار تأثير أربعة مركبات، ويمكن ملاحظة عنصر تحكم البروجسترون إيجابية والتحكم العازلة السلبية باستخدام متوسط الإنتاجية الكالسيوم إشارة التحاليل كما هو موضح.
في هذا الرسم البياني، يتم عرض منحنى استجابة جرعة من البروجسترون المستمدة من التغيرات في نسبة الذروة في تركيز الكالسيوم الحر داخل الخلايا الناجم عن تركيز مخففة تسلسليا من البروجسترون. توضح هذه البيانات آثار واحدة سلبية أو واحدة من اثنين من الضوابط الإيجابية على تحريض رد فعل acrosome في خلايا الحيوانات المنوية البشرية مكثفة في متوسطة الإنتاجية acrosome تحليل التفاعل. ولتجنب تفويت قمم الإشارات المستحثة، من الأهمية بمكان إضافة المواد الكيميائية بسرعة إلى الآبار المتماثلة ومواصلة القياس فوراً بعد ذلك.
عن طريق تغيير نوع من الفلوروفور والأصباغ، يمكن بسهولة أن يتم تعديل لدينا مقايسات للإجابة على الأسئلة العلمية المختلفة. وقد استخدمت هذه المقايسات بالفعل في العديد من الدراسات لاختبار مجموعات كبيرة من المركبات لآثارها على وظيفة الحيوانات المنوية البشرية.
