يشكر المؤلفون بهرمان كريستيان للمساعدة التقنية لها.
وأيد جاف مؤسسة القاضي ماكس. T.D. تلقي المنح من مؤسسة كرنر آخر (2012_EKES.04) والألمانية الأوقيانوغرافية (DE2133/2-1_. س. س. وتلقى المنح البحثية من الأوقيانوغرافية الألمانية (DFG؛ SCHR992/3-1، SCHR992/4-1).

الحيوانات تلقي الرعاية الإنسانية امتثالا لدليل "المبادئ الحيوانات المختبرية"، أعد المعهد "مختبر الموارد الحيوانية"، ونشرت من قبل "المعاهد الوطنية للصحة". كافة البروتوكولات الحيوان بموافقة السلطة المحلية المسؤولة ('' Amt für Gesundheit und فيربراوتشيرشوتز، هانزستات (مكتب للصحة وحماية المستهلك) هامبورغ '').
1. إعداد قسطرة
ملاحظة: تشير إلى جدول المواد للحصول على معلومات فيما يتعلق بالقسطرة.
<ol><li>أن القسطرة من صاحب القسطرة.</li>
	<li>سحب جويديويري من التجويف من خلال منفذ القاصي بها.</li>
	<li>وضع قطره لاصق cyanoacrylate في النهاية البعيدة للقسطرة. تنبيه: ارتداء قفازات اللاتكس أو النتريل.</li>
	<li>المكان جويديويري في ميناء RX القسطرة والمضي قدما من خلال التجويف إلى منفذ القاصي. بعد ذلك، سحب جويديويري قليلاً ترك مسافة ~ 5 مم إلى النهاية.</li>
	<li>انتظر 5 دقائق للسماح لمادة لاصقة لتجف.</li>
	<li>الانتقال جويديويري، فإنه ينبغي أن تكون ثابتة. إذا كان لا يزال المتنقلة، كرر الخطوات 1.3-1.6.</li>
	<li>ملء المحاقن 3 مل مع المالحة 0.9% 1.5 مل وتوصيله إلى منفذ التضخم بالون.</li>
	<li>دفع المكبس حقنه للتضخم بالون اختبار. اترك 0.6 مل المالحة في المحاقن.</li>
</ol>2. إعداد الماوس
<ol><li>الحصول على الفئران الذكور في سن ال 14 أسبوعا من وزنها حوالي 30 جرام. ملاحظة: قمنا باستخدام الحيوانات التي تم الحصول عليها من المعهد "الحيوانات المختبرية". كنا C57BL/6J هنا.</li>
	<li>استخدام دائرة التعريفي لتسكين الماوس مع 2.0-2.5% إيسوفوراني (معدل تدفق الأوكسجين 500 مل/دقيقة).</li>
	<li>ضع الماوس على ظهرها وسادة تدفئة والحفاظ على التخدير مع فاسيماسك تغطي الفم والأنف من الماوس. الاختيار للعمق الكافي للتخدير معسر القدمين الخلفيتين وذيل للتحقق من عدم وجود ردود الفعل.</li>
	<li>إزالة شعر البطن استخدام المتقلب شعر.</li>
	<li>تنتشر الخلفيتين وتصحيح موقفهم باستخدام الشريط.</li>
	<li>تطهير منطقة البطن باستخدام بوفيدون، تليها الإيثانول 80%. كرر هذه الخطوة مرتين أخريين.</li>
	<li>استخدام ثني جراحية للتأكد من عدم الحصول على الملوثة موقع الجراحية. فتح طبقات الجلد والعضلات على طول لينيا ألبا مع مقص (أو مشرط) للكشف عن أجهزة البطن.</li>
	<li>يكمن في الأمعاء في قفازات رطبة مالحة 0.9% والتفاف لإبقائها رطبة.</li>
	<li>استخدام الملقط غرامة اثنين لإزالة الأنسجة الدهنية فوق الشريان الاورطي البطني.</li>
	<li>استخدام حقنه الأنسولين (30 جرام)، ضخ 250 ميليلتر من الهيبارين الحل (50 U/mL) في الوريد الأجوف السفلي (IVC) وانتظر 3 دقائق لتوزيعه الجهازية. سوف الهيبارين قمع الأرقاء ومنع تخثر الدم غير مرغوب فيه أثناء الجراحة.</li>
	<li>استخدام الملقط اثنين، تشريح الشريان الاورطي إينفرارينال وصولاً إلى أن التشعب وسفنها في الفرع السابق.</li>
	<li>سد الأوعية الجانبية، التي من المتوقع أن توضع في منطقة فرضت، مع كوتيريزير درجة حرارة عالية.</li>
	<li>وقف تدفق الدم قبل لقط الابهر إينفرارينال مباشرة تحت الشرايين الكلوية.</li>
	<li>مكان المشبك ثاني في موقف القاصي فقط فوق التشعب الابهري.</li>
	<li>إجراء شق أفقي صغير باستخدام مقص في نقطة الوسط بين المشابك على طول السفينة. ملاحظة: يجب أن يكون حجم الشق يساوي 1/3 محيط السفينة.</li>
	<li>إدراج الشق حقنه بإبرة (30 جرام) وتدفق الشريان الاورطي مع 250 ميليلتر الهيبارين الحل (50 U/mL).</li>
	<li>استخدام خيوط 10-0، مكان عقده واحدة واحدة على كل جانب من الشق.</li>
	<li>تمدد الشريان الاورطي عن طريق إدراج ديلاتور سفينة في الشق وانتشار السفينة قليلاً. كرر التمدد 2 إلى 3 مرات.</li>
	<li>ترطيب البالون-القسطرة مع المالحة 0.9 في المائة.</li>
	<li>إدراج مسطح البالون-القسطرة في الشريان الاورطي والمضي قدما نحو المشبك الدانية في الشريان الاورطي.</li>
	<li>عندما تصل إلى المشبك الدانية، بعناية فتح المشبك الدانية وتضخيم البالون لمنع تسرب الدم، عن طريق حقن ~0.6 مل من المحلول الملحي. ملاحظة: نسبة تضخم البالون للسفينة 1.5: 1.</li>
	<li>النهوض بالقسطرة إلى الوراء لحوالي 2 سم.</li>
	<li>سحب القسطرة الموسعة إلى الوراء، بينما نزع فتيل البالون قليلاً عن طريق الإفراج عن المحاقن.</li>
	<li>إعادة إرفاق المشبك الدانية عندما تصل القسطرة إلى الشق من الشريان الاورطي. انتفاخ البالون تماما وإزالته.</li>
	<li>شطف الشريان الاورطي مع 250 ميليلتر الهيبارين الحل (50 U/mL) استخدام المحاقن 30 جرام.</li>
	<li>إغلاق شق الابهري باستخدام خيوط 10-0. مكان توقف غرز في كل من الجانب الأفقي، تليها غرز واحد أو اثنين على الجانب البطني.</li>
	<li>فتح المشبك البعيدة. في حالة حدوث نزيف، أغلق المشبك مرة أخرى ووضع غرز إضافية.</li>
	<li>فتح المشبك الدانية بعناية.</li>
	<li>وضع مسحات اثنين على خياطة إلى دعمها ووقف أي نزيف.</li>
	<li>ضع هيموستاتس قابلة للامتصاص على الخياطة المحافظة عليها. ملاحظة: يجب أن تكون مرئية ديستالي من الشق نبض الابهر.</li>
	<li>ضع الأمعاء مرة أخرى في البطن.</li>
	<li>شطف التجويف البطني مع عقيمة المالحة 0.9 في المائة، الذي كان المعالجون مسبقاً إلى 37 درجة مئوية.</li>
	<li>إغلاق طبقة العضلات البطن باستخدام خيوط التشغيل 6-0.</li>
	<li>إغلاق الجلد بخيوط التشغيل 5-0.</li>
	<li>حقن 4-5 ملغ/كغ والايبوبروفين تحت الجلد قبل السماح بالماوس للاستيقاظ. مراقبة الحيوان حتى فقد اكتسب وعيه، والحفاظ على ريكومبينسي القصية. الحفاظ الحيوانات وحدها في قفص حتى الشفاء الكامل.</li>
	<li>إضافة ميتاميزولي إلى مياه الشرب (50 ملغم/100 مل) كدواء للآلام لمدة 3 أيام ومراقبة الحيوانات يوميا. عادة ما تكون الفئران مثل الحلو طعم ميتاميزولي والبدء في الشرب مباشرة بعد الجراحة. إذا فضلت, يمكن استخدام وكلاء الحقن الإفراج المستدام بدلاً من ميتاميزولي. ملاحظة: فترة المراقبة لهذا النموذج 28 يوما.</li>
</ol>3-التشريح المرضى
<ol><li>حصاد الشريان الاورطي أصيب البالون بعد 28 يوما قبل إعداد الفئران كما هو موضح في الخطوات 2.2 إلى 2.9.</li>
	<li>استخدام مقص لإزالة الشريان الاورطي أصيب البالون (بين التشعب و 0.3 مم أعلاه الأوعية الكلوية) و euthanize الماوس عن طريق الاستغناء عن القلب.</li>
	<li>مسح التجويف السفينة مع 0.9% كلوريد الصوديوم.</li>
	<li>إصلاح السفينة المقطوع في بارافورمالدهيد 4% (PFA) بين عشية وضحاها ويذوي ذلك في زيادة تركيزات الإيثانول، بدءاً من الإيثانول 70% 2 ساعة, الإيثانول 80% لمدة ساعة واحدة, الإيثانول 95% لمدة ساعتين، و 100 ٪ الإيثانول لمدة 5 ساعات. ثم احتضان هذه العينات في زيلين نفط لمدة ساعتين 3 مرات، قبل التسلل إلى العينات مع البارافين. ملاحظة: بدلاً من التنظيف السفينة المقطوع مع 0.9% كلوريد الصوديوم، فإنه يمكن أن يتم مسح مع 4% منهاج عمل بيجين. تنبيه: منهاج عمل بيجين وزيلين نفط وهي مواد سامة وينبغي التعامل معها بعناية خاصة.</li>
	<li>تضمين العينة في البارافين ومقطعة شرائح من 5 ميكرون سمك باستخدام مبضع.</li>
	<li>ديبارافينيزي الشرائح مع زيلين نفط 3 مرات لمدة 5 دقائق.</li>
	<li>ترطيب الأنسجة الشرائح باستخدام سلسلة متناقصة من الإيثانول. بدء تشغيل مع الإيثانول 100% 2 مرات لمدة 5 دقائق، تليها 3 دقائق إيثانول 95 ٪، 80% و 70%.</li>
	<li>وصمة عار الشرائح مع ماسون لتلطيخ trichrome ك وصف18.</li>
	<li>يذوي الشرائح الملون في الإيثانول 100% 2 مرات لكل 10 دقائق. واضحة مع زيلين نفط 2 مرات لكل 10 دقيقة وجبل في وسط تصاعد.</li>
	<li>عرض الشرائح مع مجهر حقل مشرق. استخدام عدسة مع 5x التكبير وفتحه عددية من 0.12 لصورة عامة أو عدسة مع تكبير x 20 مع فتحه عددية من 0.35 للمراقبة المفصلة.</li>
</ol>4-الفلورة الفحص المجهري
<ol><li>ترطيب الأنسجة الشرائح باستخدام سلسلة متناقصة من الإيثانول. بدء تشغيل مع الإيثانول 100% 2 مرات لمدة 5 دقائق، تليها 3 دقيقة من الإيثانول 95 ٪، 80% و 70%.</li>
	<li>إجراء استرداد مستضد بتدفئة الشرائح في حل استرجاع مستضد في باخرة مدة 20 دقيقة.</li>
	<li>السماح لتبرد الشرائح وصولاً إلى درجة حرارة الغرفة.</li>
	<li>بعد الغسيل الشرائح لثلاث مرات مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS)، تطبيق حل حظر مستضد على الأقسام لمدة 30 دقيقة.</li>
	<li>تغسل شرائح ثلاث مرات لمدة 5 دقائق مع برنامج تلفزيوني.</li>
	<li>احتضان الأقسام مع جسم الابتدائي المخفف في جسم الابتدائي مادة. ملاحظة: الوقت تركيز واحتضان الحق ينبغي أن تختار بشكل منفصل لكل جسم.</li>
	<li>تغسل شرائح ثلاث مرات لمدة 5 دقائق مع برنامج تلفزيوني لإزالة الأجسام المضادة غير منضم.</li>
	<li>احتضان الأقسام مع جسم ثانوية قبل مترافق المخفف في جسم الثانوية مادة. ملاحظة: الوقت تركيز واحتضان الحق ينبغي أن تختار بشكل منفصل لكل جسم.</li>
	<li>إزالة الأجسام المضادة غير منضم بالغسيل الشرائح لمدة 5 دقائق ثلاث مرات.</li>
	<li>كونتيرستين نواة الخلية باستخدام 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) لمدة 15 دقيقة؛ ينبغي أن يكون تركيز DAPI النهائي 350 نانومتر.</li>
	<li>تحميل الشرائح في الفلورة متوافق مع تصاعد الحل. ملاحظة: استخدام الحل تركيب خاطئ يمكن أن تحجب إشارة الأسفار.</li>
	<li>عرض الشرائح مع مجهر الأسفار. استخدام عدسة تكبير 40 x مع فتحه عددية 1.3.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deaths:+final+data+for+2009.">Deaths: final data for 2009.</a> Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).</li><li>Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intimal+proliferation+of+smooth+muscle+cells+as+an+explanation+for+recurrent+coronary+artery+stenosis+after+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intimal proliferation of smooth muscle cells as an explanation for recurrent coronary artery stenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 6 (2), 369-375 (1985).</li><li>Greenwald, S. E., Berry, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+vascular+grafts:+the+importance+of+mechanical+and+haemodynamic+properties.">Improving vascular grafts: the importance of mechanical and haemodynamic properties.</a> J Pathol. 190 (3), 292-299 (2000).</li><li>Majesky, M. W., Schwartz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+diversity+in+arterial+wound+repair.">Smooth muscle diversity in arterial wound repair.</a> Toxicol Pathol. 18 (4 Pt 1), 554-559 (1990).</li><li>Owens, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+differentiation+of+vascular+smooth+muscle+cells.">Regulation of differentiation of vascular smooth muscle cells.</a> Physiol Rev. 75 (3), 487-517 (1995).</li><li>Owens, G. K., Kumar, M. S., Wamhoff, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation+in+development+and+disease.">Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease.</a> Physiol Rev. 84 (3), 767-801 (2004).</li><li>Kleemann, R., Zadelaar, S., Kooistra, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokines+and+atherosclerosis:+a+comprehensive+review+of+studies+in+mice.">Cytokines and atherosclerosis: a comprehensive review of studies in mice.</a> Cardiovasc Res. 79 (3), 360-376 (2008).</li><li>Karas, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+intimal+proliferation+after+balloon+injury+and+stenting+in+swine:+an+animal+model+of+restenosis.">Coronary intimal proliferation after balloon injury and stenting in swine: an animal model of restenosis.</a> J Am Coll Cardiol. 20 (2), 467-474 (1992).</li><li>Ip, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+platelets,+thrombin+and+hyperplasia+in+restenosis+after+coronary+angioplasty.">The role of platelets, thrombin and hyperplasia in restenosis after coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 17 (6 Suppl B), 77B-88B (1991).</li><li>Mason, R. G., Read, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+species+differences+in+fibrinolysis+and+blood+coagulation.">Some species differences in fibrinolysis and blood coagulation.</a> J Biomed Mater Res. 5 (1), 121-128 (1971).</li><li>Lafont, A., Faxon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+do+animal+models+of+post-angioplasty+restenosis+sometimes+poorly+predict+the+outcome+of+clinical+trials?.">Why do animal models of post-angioplasty restenosis sometimes poorly predict the outcome of clinical trials?.</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 50-59 (1998).</li><li>Matter, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+balloon-induced+inflammation,+proliferation,+and+neointima+formation+in+apolipoprotein+E+(ApoE)+knockout+mice.">Increased balloon-induced inflammation, proliferation, and neointima formation in apolipoprotein E (ApoE) knockout mice.</a> Stroke. 37 (10), 2625-2632 (2006).</li><li>Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+arterial+injury.">Mouse model of arterial injury.</a> Circ Res. 73 (5), 792-796 (1993).</li><li>Simon, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+neointimal+formation+in+Mac-1(-/-)+mice+reveals+a+role+for+inflammation+in+vascular+repair+after+angioplasty.">Decreased neointimal formation in Mac-1(-/-) mice reveals a role for inflammation in vascular repair after angioplasty.</a> J Clin Invest. 105 (3), 293-300 (2000).</li><li>Sata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+vascular+injury+that+induces+rapid+onset+of+medial+cell+apoptosis+followed+by+reproducible+neointimal+hyperplasia.">A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia.</a> J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).</li><li>Moroi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+genetic+deficiency+of+endothelial+nitric+oxide,+gender,+and+pregnancy+in+vascular+response+to+injury+in+mice.">Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice.</a> J Clin Invest. 101 (6), 1225-1232 (1998).</li><li>Painter, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myointimal+hyperplasia:+pathogenesis+and+implications.+2.+Animal+injury+models+and+mechanical+factors.">Myointimal hyperplasia: pathogenesis and implications. 2. Animal injury models and mechanical factors.</a> Artif Organs. 15 (2), 103-118 (1991).</li><li>Stubbendorff, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+myointimal+hyperplasia+versus+atherosclerosis+in+mice:+an+introduction+of+two+valid+models.">Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models.</a> J Vis Exp. (87), e51459 (2014).</li><li>Deuse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dichloroacetate+prevents+restenosis+in+preclinical+animal+models+of+vessel+injury.">Dichloroacetate prevents restenosis in preclinical animal models of vessel injury.</a> Nature. 509 (7502), 641-644 (2014).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

هذا المقال يوضح نموذج مورين لدراسة وضع تضخم ميوينتيمال ويتيح استكشاف العمليات المرضية الكامنة، واختبار أدوية جديدة أو الخيارات العلاجية.
أن الخطوة الأكثر أهمية في هذا البروتوكول هو تعرية للشريان الاورطي. ينبغي إيلاء عناية خاصة أثناء هذه الخطوة تعرية المفرط يؤدي إلى تشكيل الأوعية الدموية وفشل النموذج. من ناحية أخرى، إذا كان يتم إجراء تعرية غير كاف، ستضع ميوينتيما قليلة جداً. ولذلك، كثافة الخطوة تعرية حاسمة بالنسبة لنتائج ونجاح هذا النموذج الحيواني.
وفيما يتعلق بالعملية الجراحية، من الأهمية بمكان لا هي اخترقت جدران اثنين من السفينة بوضع غرز، مما قد يسفر عن الفشل المبكر سالكيه السفينة. التي وصفناها سابقا نموذج الفأر الذي نحن الناجمين عن السفينة تضيق في الشريان الاورطي البطني من الفئران18. ومع ذلك، هذا ومعظم النماذج الأخرى فقط توفير كميات صغيرة جداً من الأنسجة للتحليل. ميزة هذا الأسلوب هو كمية كبيرة نسبيا من الأنسجة التي تم الحصول عليها (الجزء المتعلق بالسفينة ~ 1 سم). وبالتالي يمكن طعم سفينة واحدة مقسمة إلى أجزاء متعددة واستخدامها لتحليلات مختلفة، الحد من فعالية العدد من الحيوانات التجريبية اللازمة.
وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام مناسبة المغلوب الحيوانات لدراسة وضع تضخم ميوينتيما في ظروف مختلفة من المرض. يمكن أيضا الجمع بين الخلفيات الوراثية مع هذا النموذج الحيواني لفهم الآليات التي من فرط ميوينتيمال في مجموعة متنوعة من الإعدادات أو تأثير بعض الجينات.
باختصار، هذا النموذج الموصوف هنا استنساخه، من السهل القيام به، ويمكن أن تنشأ بسرعة وبشكل موثوق. نماذج العلاج بنجاح اختبار الخيارات في هذا النموذج يمكن تأكيدها كذلك في الحيوانات الكبيرة19.

وقد تضيق الشرايين في الشرايين التاجية والطرفية لها أثر كبير على معدلات الاعتلال والوفيات بين المرضى1. هو إحدى الآليات المرضية الكامنة وراء تضخم ميوينتيما (MH)، التي تتسم بزيادة الانتشار والهجرة وتوليف البروتين المصفوفة خارج الخلية من الخلايا (SMC) العضلات الملساء والأوعية الدموية2. SMC تقع في طبقة وسائط الإعلام من السفينة وتهاجر إلى التحفيز على سطح التجويف. وتشمل عوامل النمو، السيتوكينات، وخلية خلية الاتصال، الدهون، عناصر المصفوفة خارج الخلية، والقص الميكانيكية إشارات محفزة وتمتد القوات3،4،،من56. الإصابات الناجمة عن الجدار السفينة، مرضية أو علاجية المنشأ، تتسبب الخلايا البطانية وتلف الخلايا العضلية الملساء وتحفيز ردود الفعل الملتهبة، ويؤدي بالتالي إلى MH7.
نماذج حيوانية مختلفة متاحة حاليا لدراسة إصابات الشرايين وتضخم ميوينتيما. الحيوانات الكبيرة مثل الخنازير أو الكلاب لديها ميزة مشاركة الشريان مماثلة وتشريح الشرايين التاجية مع البشر، وهي مناسبة خاصة للتحقيق في أساليب وإجراءات وأجهزة قسطرة8دراسات. بيد النماذج خنزير يكون العيب من أعلى ثرومبوجينيسيتي9،10، بينما الكلاب لا تملك إلا استجابة معتدل للسفينة إصابة11. وبالإضافة إلى ذلك، تتطلب كافة نماذج حيوانية كبيرة المساكن الخاصة والمعدات والموظفين، التي ترتبط بارتفاع التكاليف ولا تتوفر دائماً في مؤسسة. وتشمل نماذج حيوانية صغيرة الجرذان والفئران. مقارنة بالجرذان، الفئران لها مزايا انخفاض التكلفة ووجود مجموعة متنوعة من ضرب نماذج. يمكن أن يكون النموذج المبين في هذا الفيديو جنبا إلى جنب مع الذين-/--الفئران التي تتغذى على اتباع نظام غذائي غربي لتقليد عن كثب وضع قسطرة في سفن تصلب الشرايين12السريرية. النماذج السابقة الناجمة عن إصابة الأوعية الدموية عبر أسلاك إصابة13أو جفاف السوائل14، ربيع15أو الكفة إصابة16. نظراً لطبيعة الضرر الذي سوف تؤثر بشكل كبير على التنمية والدستور من MH، استخدام قسطرة بالون للحث على إصابة السفينة هو أفضل طريقة لمحاكاة الإعداد السريرية.
في هذا المقال يصف لنا طريقة جديدة لحمل MH مع قسطرة بالون في الفئران. يسمح استخدام قسطرة البالون (1.2 مم × 6 مم) مع منفذ RX (الشكل 1A) كشط طبقة إينتيمال، وفي الوقت نفسه، تحريض الذي السفينة. كل من هذه العوامل مشغلات هامة لتطوير MH. وقت الملاحظة لهذا النموذج هو17من 28 يوما.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-0 Ethilon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2814G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>BD Medical</td>
			<td>309658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H1758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 prolene suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>EH7229H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>8706H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acid Fuchsin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8129-25G</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antigen retrieval solution</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S1699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Azophloxin</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>1B-103</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen Eye and Nose ointment</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>1578675</td>
			<td>Eye ointment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution</td>
			<td>Betadine Purdue Pharma</td>
			<td>NDC:67618-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>Stock number 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp applicator</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18056-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen 3</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab7778</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Goat IgG AF555</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21432</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbit IgG AF488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21206</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbit IgG AF488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11055</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbit IgG AF555</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A31572</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td>2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 96%</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td>2295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td>2246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FAP</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab28246</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps fine</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps standard</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11023-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial Acetic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>537020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td>WAHL</td>
			<td>8786-451A ARCO SE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Rotexmedica</td>
			<td>PZN 3862340</td>
			<td>25.000 I.E./mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High temperature cautery kit</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>18010-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image-iT FX Signal Enhancer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I36933</td>
			<td>Blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Green SF</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>1B-211</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical clamp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18055-04</td>
			<td>Micro-Serrefine - 4mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>1012268-06U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molybdatophosphoric acid hydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.00532.0100</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0,9%</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12075-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novaminsulfon</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td>PZN 03530402</td>
			<td>Metamizole</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orange G</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>1B-221</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Leica biosystems</td>
			<td>REF 39602004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS pH 7,4</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PFA 4%</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>#157135S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ponceau S solution</td>
			<td>Serva Electrophoresis</td>
			<td>33427</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody diluent</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S3022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold Mounting solution</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>P36930</td>
			<td>Mounting solution for immunofluorescence stained slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Replaceable Fine Tip</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>H101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resorcin-Fuchsin Weigert</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>2E-30</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>400684.00.00</td>
			<td>Carprofen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14028-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Vannas-style</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody diluent</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S0809</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast acting Adhesive MINIS 3x1g</td>
			<td>UHU</td>
			<td>45370</td>
			<td>Cyanoacrylate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Rack</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>21057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SM22</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab10135</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMA</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab21027</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staining dish</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>21075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tabotamp fibrillar</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>431962</td>
			<td>Absorbable hemostat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transpore Surgical Tape</td>
			<td>3M</td>
			<td>1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U-100 Insulin syringe</td>
			<td>BD Medical</td>
			<td>324825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18603-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitro-Clud</td>
			<td>Langenbrinck</td>
			<td>04-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigerts iron hematoxylin Kit</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.15973.0002</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td>3410</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

balloon-based injury to induce myointimal hyperplasia in the mouse abdominal aorta

من الضروري استخدام نماذج حيوانية لفهم أفضل لمتولي حسن، أحد الأسباب الرئيسية لتضيق الشرايين. في هذه المقالة، نبدي نموذج تعرية بالون مورين، وقابلة للمقارنة مع نماذج إصابة السفينة الراسخة في الحيوانات الكبيرة. نموذج تعرية الشريان الاورطي بالقسطرة البالونية يقلد الإعداد السريرية، ويؤدي إلى تغييرات مماثلة في باثوبيولوجيكال والفسيولوجية. بإيجاز، بعد إجراء شق أفقي في أبدوميناليس الشريان الاورطي، قسطرة بالون سيتم إدراجها في السفينة، وتضخم، وعرض ريتروجراديلي. تضخم البالون سيؤدي إلى إصابة البطانية والذي من السفينة. بعد إزالة القسطرة، سيتم إغلاق شق الابهري مع غرز واحد. النموذج الموضح في هذه المقالة استنساخه، من السهل القيام به، ويمكن أن تنشأ بسرعة وبشكل موثوق. ومناسبة خاصة لتقييم تكلفة العوامل العلاجية التجريبية، التي يمكن تطبيقها بطريقة اقتصادية. باستخدام الماوس خروج المغلوب سلالات مختلفة، يمكن تقييم تأثير جينات مختلفة في التنمية MH.

تعرية بالون نموذج مناسب لدراسة تطور MH في الفئران. الحيوانات التعافي تماما من الجراحة وإظهار حالة بدنية ممتازة بعد انتهاء عملية. قمنا بإنشاء هذا النموذج في الفئران 50 مع أقل من معدل الوفاة 3% بسبب العملية الجراحية. 1B الأرقام ج- إظهار الخطوات الجراحية الرئيسية. بعد شق جلد على طول لينيا ألبا، تحديد أبدوميناليس الشريان الاورطي. وضع المشابك ميكروسورجيكال (الشكل 1B). جعل شق صغير في منتصف الشريان الاورطي، تعيين قسطرة بالون في السفينة وشريحة من الوراء، ضد اتجاه تدفق الدم (الشكل 1). حركة البالون تضخم يؤدي إلى إلغاء البطانية، وفي الوقت نفسه، الذي السفينة. سيتم إغلاق شق الابهري مع غرز واحد. يجب أن تكون نبض الابهر مرئية ديستالي من الشق.
MH يتطور تدريجيا في الفساد على مر الزمن. تلطيخ مع ماسون في غذائها trichrome يوضح تشكيل ميوينتيما داخل الصفيحة المرنة الداخلية (الشكل 2A). ميوينتيمال الآفات تتألف أساسا من المكونات الخلوية إيجابية SM22 وبعض عناصر المصفوفة خارج الخلية (الشكل 2). كذلك يتم تقييم الخلايا ميوينتيمال تلطيخ الفلورة. السكان الرئيسية في ميوينتيما يتكون من خلايا العضلات الملساء (العضلات الملساء أكتين (SMA) إيجابية) وخلايا myofibroblasts (تنتجها الخلايا الليفية تنشيط بروتين (يندرج) إيجابية) (الشكل 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56477/56477fig1.jpg"> رقم 1. الخطط القسطرة وغرس به. (أ) التخطيطي المفصل للقسطرة. منفذ القاصي، بالون، التبادل السريع المنفذ (بورت RX)، جويديويري، والتجويف واحد RX-المنفذ، مضاعفة لومن من ميناء RX بالون، محور، ميناء التضخم بالون. (ب) توضيح التخطيطي لإجراء العمليات الجراحية. توقف تدفق الدم من الشريان الاورطي أبدوميناليس مع المشابك الدقيقة اثنين ويتم إجراء شق صغير. جيم مضخمة قسطرة داخل الشريان الاورطي أبدوميناليس. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56477/56477fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56477/56477fig2.jpg"> رقم 2. تشكيل ميوينتيما داخل الصفيحة المرنة الداخلية. (أ) دينوديد الماوس أورتاس يتم حصادها، البارافين جزءا لا يتجزأ، ويظهر مقطع العرضي ممثل في تلطيخ trichrome. (ب) وتلطيخ الفلورة مزدوجة من عورتا الجرداء بالون يرد. الصف العلوي يصور الآفات ميوينتيمال الملون ل SM22 والكولاجين الثالث. في الصف السفلي، ملطخة سفن SMA ويندرج. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56477/56477fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta at JoVE.com

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

يوضح هذا المقال نموذج مورين لدراسة وضع تضخم ميوينتيمال (MH) بعد إصابة البالون الابهري.

إصابة القائم على البالون لحمل ميوينتيمال تضخم في الشريان الاورطي البطني الماوس

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

balloon-based-injury-to-induce-myointimal-hyperplasia-mouse-abdominal

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

9.5K Views.  University Heart Center. يوضح هذا المقال نموذج مورين لدراسة وضع تضخم ميوينتيمال (MH) بعد إصابة البالون الابهري.

Video: Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The C-seal: A Biofragmentable Drain Protecting the Stapled Colorectal Anastomosis from Leakage

Colorectal anastomotic leakage (AL) is a serious complication in colorectal surgery leading to high morbidity and mortality rates1. The incidence of AL varies between 2.5 and 20% 2-5. Over the years, many strategies aimed at lowering the incidence of anastomotic leakage have been examined6, 7. 
The cause of AL is probably multifactorial. Etiological factors include insufficient arterial blood supply, tension on the anastomosis, hematoma and/or infection at the anastomotic site, and co-morbid factors of the patient as diabetes and atherosclerosis8. Furthermore, some anastomoses may be insufficient from the start due to technical failure.
Currently a new device is developed in our institute aimed at protecting the colorectal anastomosis and lowering the incidence of AL. This so called C-seal is a biofragmentable drain, which is stapled to the anastomosis with the circular stapler. It covers the luminal side of the colorectal anastomosis thereby preventing leakage.
The C-seal is a thin-walled tube-like drain, with an approximate diameter of 4 cm and an approximate length of 25 cm (figure 1). It is a tubular device composed of biodegradable polyurethane. Two flaps with adhesive tape are found at one end of the tube. These flaps are used to attach the C-seal to the anvil of the circular stapler, so that after the anastomosis is made the C-seal can be pulled through the anus. The C-seal remains in situ for at least 10 days. Thereafter it will lose strength and will degrade to be secreted from the body together with the gastrointestinal natural contents.
The C-seal does not prevent the formation of dehiscences. However, it prevents extravasation of faeces into the peritoneal cavity. This means that a gap at the anastomotic site does not lead to leakage.
Currently, a phase II study testing the C-seal in 35 patients undergoing (colo-)rectal resection with stapled anastomosis is recruiting. The C-seal can be used in both open procedures as well as laparoscopic procedures. The C-seal is only applied in stapled anastomoses within 15cm from the anal verge. In the video, application of the C-seal is shown in an open extended sigmoid resection in a patient suffering from diverticular disease with a stenotic colon.

The C-seal is a biofragmentable drain protecting the stapled colorectal anastomosis. In this video, details of the manufacturing, deployment and use are shown.

سي الختم : استنزاف Biofragmentable حماية القولون من التحام مدبس التسرب

Colorectal anastomotic leakage (AL) is a serious complication in colorectal surgery leading to high morbidity and mortality rates1. The incidence of AL ...

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged mechanical ventilation, contributes to morbidity and mortality of critical illness, and studies on novel genetic or pharmacological targets are areas of intense investigation (1-3, 5, 8, 26, 30, 33-36). ALI is defined by the acute onset of the disease, which leads to non-cardiac pulmonary edema and subsequent impairment of pulmonary gas exchange (36). We have developed a murine model of ALI by using a pressure-controlled ventilation to induce ventilator-induced lung injury (2). For this purpose, C57BL/6 mice are anesthetized and a tracheotomy is performed followed by induction of ALI via mechanical ventilation. Mice are ventilated in a pressure-controlled setting with an inspiratory peak pressure of 45 mbar over 1 - 3 hours. As outcome parameters, pulmonary edema (wet-to-dry ratio), bronchoalveolar fluid albumin content, bronchoalveolar fluid and pulmonary tissue myeloperoxidase content and pulmonary gas exchange are assessed (2). Using this technique we could show that it sufficiently induces acute lung inflammation and can distinguish between different treatment groups or genotypes (1-3, 5). Therefore this technique may be helpful for researchers who pursue molecular mechanisms involved in ALI using a genetic approach in mice with gene-targeted deletion.

A murine model for ventilator induced lung injury is an important tool to study an acute lung injury in vivo. Here, we report an easy applicable in situ model for acute lung injury using high-pressure mechanical ventilation to induce acute failure of the lung.

التهوية الضغط الشواهد للحث على إصابة الرئة الحادة في الفئران

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to generate an animal model that reflects the characteristics of the human disease 3-5. However, in various models the induction of disease was rather complex and often hepatitis was only transient3-5. Therefore, we have developed a straightforward mouse model that uses the major human autoantigen in type 2 autoimmune hepatitis (AIH-2), namely hCYP2D6, as a trigger6. Type 1 liver-kidney microsomal antibodies (LKM-1) antibodies recognizing hCYP2D6 are the hallmark of AIH-27,8. Delivery of hCYP2D6 into wildtype FVB or C57BL/6 mice was by an Adenovirus construct (Ad-2D6) that ensures a direct delivery of the triggering antigen to the liver. Thus, the ensuing local inflammation generates a fertile field9 for the subsequent development of autoimmunity. A combination of intravenous and intraperitoneal injection of Ad-2D6 is the most effective route to induce a long-lasting autoimmune damage to the liver (section 1). Here we provide a detailed protocol on how autoimmune liver disease is induced in the CYP2D6 model and how the different aspects of liver damage can be assessed. First, the serum levels of markers indicating hepatocyte destruction, such as aminotransferases, as well as the titers of hCYP2D6 antibodies are determined by sampling blood retroorbitaly (section 2). Second, the hCYP2D6-specific T cell response is characterized by collecting lymphocytes from the spleen and the liver. In order to obtain pure liver lymphocytes, the livers are perfused by PBS via the portal vein (section 3), digested in collagen and purified over a Percoll gradient (section 4). The frequency of hCYP2D6-specific T cells is analyzed by stimulation with hCYP2D6 peptides and identification of IFN&gamma;-producing cells by flow cytometry (section 5). Third, cellular infiltration and fibrosis is determined by immunohistochemistry of liver sections (section 6). Such analysis regimen has to be conducted at several times after initiation of the disease in order to prove the chronic nature of the model. The magnitude of the immune response characterized by the frequency and activity of hCYP2D6-specific T and/or B cells and the degree of the liver damage and fibrosis have to be assessed for a subsequent evaluation of possible treatments to prevent, delay or abrogate the autodestructive process of the liver.

Infection of mice with an Adenovirus expressing the major human autoantigen cytochrome P450 2D6 (hCYP2D6) recognized by sera of patients suffering from type 2 autoimmune hepatitis results in a persistent form of autoimmune-mediated liver disease characterized by extensive hepatitis, fibrosis and generation of a CYP2D6-specific immune response.

النموذج الحيواني CYP2D6: كيف للحث على كسرطان الكبد في الفئران

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to ...

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current estimates put the prevalence of amblyopia at approximately 1-3%1-3, the majority of cases being monocular2. Amblyopia is most frequently caused by ocular misalignment (strabismus), blur induced by unequal refractive error (anisometropia), and in some cases by form deprivation.
Although amblyopia is initially caused by abnormal visual input in infancy, once established, the visual deficit often remains when normal visual input has been restored using surgery and/or refractive correction. This is because amblyopia is the result of abnormal visual cortex development rather than a problem with the amblyopic eye itself4,5 . Amblyopia is characterized by both monocular and binocular deficits6,7 which include impaired visual acuity and poor or absent stereopsis respectively. The visual dysfunction in amblyopia is often associated with a strong suppression of the inputs from the amblyopic eye under binocular viewing conditions8. Recent work has indicated that suppression may play a central role in both the monocular and binocular deficits associated with amblyopia9,10 .
Current clinical tests for suppression tend to verify the presence or absence of suppression rather than giving a quantitative measurement of the degree of suppression. Here we describe a technique for measuring amblyopic suppression with a compact, portable device11,12 . The device consists of a laptop computer connected to a pair of virtual reality goggles. The novelty of the technique lies in the way we present visual stimuli to measure suppression. Stimuli are shown to the amblyopic eye at high contrast while the contrast of the stimuli shown to the non-amblyopic eye are varied. Patients perform a simple signal/noise task that allows for a precise measurement of the strength of excitatory binocular interactions. The contrast offset at which neither eye has a performance advantage is a measure of the "balance point" and is a direct measure of suppression. This technique has been validated psychophysically both in control13,14 and patient6,9,11 populations.
In addition to measuring suppression this technique also forms the basis of a novel form of treatment to decrease suppression over time and improve binocular and often monocular function in adult patients with amblyopia12,15,16 . This new treatment approach can be deployed either on the goggle system described above or on a specially modified iPod touch device15.

Amblyopia is a developmental disorder of the visual cortex that is often accompanied by strong suppression of one eye. We present a new technique for measuring and treating interocular suppression in patients with amblyopia that can be deployed using virtual reality goggles or a portable iPod Touch device.

قياس وعلاج الحول في قمع

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the cornea, which can be caused by trauma, keratoplasty or infectious disease, breaks down the so called &lsquo;angiogenic privilege' of the cornea and forms the basis of multiple visual pathologies that may even lead to blindness. Although there are several treatment options available, the fundamental medical need presented by corneal neovascular pathologies remains unmet. In order to develop safe, effective, and targeted therapies, a reliable model of corneal NV and pharmacological intervention is required. Here, we describe an alkali-burn injury corneal neovascularization model in the mouse. This protocol provides a method for the application of a controlled alkali-burn injury to the cornea, administration of a pharmacological compound of interest, and visualization of the result. This method could prove instrumental for studying the mechanisms and opportunities for intervention in corneal NV and other neovascular disorders.

Neovascularization (NV) of the cornea can complicate multiple visual pathologies. Utilizing a controlled, alkali-burn injury model, a quantifiable level of corneal NV can be produced for mechanistic study of corneal NV and evaluation of potential therapies for neovascular disorders.

والقلوي حرق الإصابات نموذج من القرنية اتساع الأوعية الدموية في ماوس

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque formation and stenosis, as observed for example in ischemic heart disease. Two highly reproducible mouse models&#160;&#8211;&#160;both resulting in artery stenosis but each underlying a different pathway of development&#160;&#8211; are introduced here. The models represent the two most common causes of artery stenosis; namely one mouse model for each myointimal hyperplasia, and atherosclerosis are shown. To induce myointimal hyperplasia, a balloon catheter injury of the abdominal aorta is performed. For the development of atherosclerotic plaque, the ApoE -/- mouse model in combination with western fatty diet is used. Different model-adapted options for the measurement and evaluation of the results are named and described in this manuscript. The introduction and comparison of these two models provides information for scientists to choose the appropriate artery stenosis model in accordance to the scientific question asked.

This video shows two models of intimal plaque development in murine arteries and emphasizes the differences in myointimal hyperplasia and atherosclerosis.

حمل عضلية للبطانة الشريانية الحميد مقابل تصلب الشرايين في فئران: مقدمة من اثنين من نماذج صالحة

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are still occurring, particularly in reconstructive flap surgery. Multiple experimental flap models have been developed to analyze underlying causes and mechanisms and to investigate treatment strategies to prevent ischemic complications. The limiting factor of most models is the lacking possibility to directly and repetitively visualize microvascular architecture and hemodynamics. The goal of the protocol was to present a well-established mouse model affiliating these before mentioned lacking elements. Harder et al. have developed a model of a musculocutaneous flap with a random perfusion pattern that undergoes acute persistent ischemia and results in ~50% necrosis after 10 days if kept untreated. With the aid of intravital epi-fluorescence microscopy, this chamber model allows repetitive visualization of morphology and hemodynamics in different regions of interest over time. Associated processes such as apoptosis, inflammation, microvascular leakage and angiogenesis can be investigated and correlated to immunohistochemical and molecular protein assays. To date, the model has proven feasibility and reproducibility in several published experimental studies investigating the effect of pre-, peri- and postconditioning of ischemically challenged tissue.

The window of the murine dorsal skinfold chamber presented visualizes a zone of acute persistent ischemia of a musculocutaneous flap. Intravital epi-fluorescence microscopy permits for direct and repetitive assessment of the microvasculature and quantification of hemodynamics. Morphologic and hemodynamic results can further be correlated with histological and molecular analyses.

إصابة الأنسجة الدماغية في دائرة ثنية الجلد الظهري للماوس: A الجلد رفرف نموذج المعنية بالتحقيق في نقص التروية الحاد الثابتة

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.

Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.

إنشاء البطن التصاقات في الفئران

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

Reproducible Arterial Denudation Injury by Infrarenal Abdominal Aortic Clamping in a Murine Model

Percutaneous vascular interventions uniformly result in arterial denudation injuries that subsequently lead to thrombosis and restenosis. These complications can be attributed to impairments in re-endothelialization within the wound margins. Yet, the cellular and molecular mechanisms of re-endothelialization remain to be defined. While several animal models to study re-endothelialization after arterial denudation are available, few are performed in the mouse because of surgical limitations. This undermines the opportunity to exploit transgenic mouse lines and investigate the contribution of specific genes to the process of re-endothelialization. Here, we present a step-by-step protocol for creating a highly reproducible murine model of arterial denudation injury in the infrarenal abdominal aorta using external vascular clamping. Immunocytochemical staining of injured aortas for fibrinogen and &#946;-catenin demonstrate the exposure of a pro-thrombotic surface and the border of intact endothelium, respectively. The method presented here has the advantages of speed, excellent overall survival rate, and relative technical ease, creating a uniquely practical tool for imposing arterial denudation injury in transgenic mouse models. Using this method, investigators may elucidate the mechanisms of re-endothelialization under normal or pathological conditions.

Understanding the cellular and molecular mechanisms of re-endothelialization following arterial denudation injury is of paramount importance in preventing thrombosis and restenosis of arteries. Here we describe a protocol for reproducible arterial denudation injury of the infrarenal abdominal aorta. The procedure was developed to investigate the underlying mechanisms that regulate endothelial regeneration using mouse models.

استنساخه الشرياني التعرية الإصابات وذلك Infrarenal البطن الأبهري لقط في نموذج الفئران

Percutaneous vascular interventions uniformly result in arterial denudation injuries that subsequently lead to thrombosis and restenosis. These ...

A Model of Cardiac Remodeling Through Constriction of the Abdominal Aorta in Rats

Heart failure is one of the leading causes of death worldwide. It is a complex clinical syndromethat includes fatigue, dyspnea, exercise intolerance, and fluid retention. Changes in myocardial structure, electrical conduction, and energy metabolism develop with heart failure, leading to contractile dysfunction, increased risk of arrhythmias, and sudden death. Hypertensive heart disease is one of the key contributing factors of cardiac remodeling associated with heart failure. The most commonly-used animal model mimicking hypertensive heart disease is created via surgical interventions, such as by narrowing the aorta. Abdominal aortic constriction is a useful experimental technique to induce a pressure overload, which leads to heart failure. The surgery can be easily performed, without the need for chest opening or mechanical ventilation. Abdominal aortic constriction-induced cardiac pathology progresses gradually, making this model relevant to clinical hypertensive heart failure. Cardiac injury and remodeling can be observed 10 weeks after the surgery. The method described here provides a simple and effective approach to produce a hypertensive heart disease animal model that is suitable for studying disease mechanisms and for testing novel therapeutics.

A rat model of abdominal aortic constriction that induces cardiac hypertrophy and remodeling is described. An efficient, highly-reproducible, and minimally-invasive method is used to provide a simple yet useful platform for research in myocardial hypertrophy and dysfunction.

نموذج من القلب إعادة عرض من خلال انقباض البطن الأورطي في الجرذان

Heart failure is one of the leading causes of death worldwide. It is a complex clinical syndromethat includes fatigue, dyspnea, exercise intolerance, and ...