المؤلف يود أن يشكر يوليا ناومتشوك (جامعة لويولا شيكاغو) وأجني Žiniauskaitė (اكسبيريمينتيكا المحدودة) للدعم التقني و videographic ممتازة. برنامج أبحاث الدكتور Kaja معتمد من قبل الدكتور جون ص وتيريز هاء مولكاهي وهبت الأستاذية في طب العيون في "جامعة لويولا شيكاغو".

جميع الحيوانات يعاملون وفقا "بيان آرفو" "استخدام الحيوانات" في أوفثالميك والبحث الرؤية "توجيه الجماعة الأوروبية" 86/609/EEC للتجارب على الحيوانات، باستخدام البروتوكولات المعتمدة ويرصدها المجلس تجربة الحيوان في "فنلندا".
1-المستحثة بالليزر الماوس المسيحي نموذج 5
<ol><li>فحص عيون الحيوان الميكروسكوب لأي شذوذ.</li>
	<li>وزن الماوس.</li>
	<li>حساب وإعداد مبلغ مناسب للمسكنات لاستخدام، استناداً إلى وزن الحيوان، مثل خليط من الماء المقطر (محلول كلوريد الصوديوم 0.9%) بنسبة 1:1.5:2.5، أو الكيتامين (40-75 مغ/كغ)، ميديتوميديني (1 مغ/كغ) والكيتامين (75 ملغ/كغ) إكسيلازيني (5 ملغ/كغ)، والماء المقطر (محلول كلوريد الصوديوم 0.9%) بنسبة 5:1؛ 1:2. ماوس ز 20، حقن 0.1 مل مخلوط.</li>
	<li>حقن مخدر إينترابيريتونيلي.</li>
	<li>ضع الماوس مرة أخرى إلى القفص وانتظر حتى يتم تخديره من الحيوان. تأكيد هو تخديره الماوس بشكل صحيح بسبب الافتقار إلى منعكس الدواسة.</li>
	<li>ضمان استخدام الليزر سلامة معدات الحماية الشخصية.</li>
	<li>قم بتشغيل مصباح شق وليزر صمام ثنائي 532 نانومتر.</li>
	<li>إزالة الماوس من القفص والمكان على منصة التدفئة.</li>
	<li>تطبيق قطره واحدة من تروبيكاميدي لتمدد الحدقة. الانتظار لمدة 3-5 دقيقة لتمدد الحدقة الكاملة (3 مم).</li>
	<li>ضع الماوس على المسرح مصباح الشق.</li>
	<li>ضع قطره واحدة من جل السائل أوبثالميك على ساترة إلى أبلاناتي القرنية.</li>
	<li>توجيه العين الماوس مع رأس العصب البصري في المركز.</li>
	<li>تعيين السلطة الليزر إلى 100 ميغاواط، والمدة إلى 100 مللي ثانية، وحجم البقعة إلى 50 ميكرومتر.</li>
	<li>وتركز شعاع الليزر على ظهارة صباغ الشبكية (RPE).</li>
	<li>جعل ثلاث طلقات الليزر إلى عين واحدة عن طريق تجنب الأوعية الدموية الشبكية في موقع مثالي في 4 و 8 و 12:00 م مواقع حول العصب البصري، على التوالي. فحص قاع العين بعد كل الليزر لقطات لعدم وجود نزيف الشبكية. العين كونترالاتيرال بمثابة عنصر تحكم غير lasered.</li>
	<li>تجاهل الماوس ساترة والمكان مرة أخرى على منصة التدفئة.</li>
	<li>تطبيق قطره واحدة من قطرات جل شماعة في كلتا العينين.</li>
</ol>2-التنمية المستدامة-OCT 6،7
<ol><li>ضع الماوس في مرحلة المحاذاة القوارض، وشل الرأس.</li>
	<li>قم بمحاذاة العدسة منظومة التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر (مثلاً، R2200 انفيسو بيوبتيجين/إيكا) لمواجهة العين للتصوير في فيفو باستخدام وحدات تحكم المرحلة X و Y.</li>
	<li>إجراء مسح SD، تشرين الأول/أكتوبر للتحقق من فواصل غشاء بروخ في: مجرد SD-OCT فحص العين كله، يدوياً نقل خط مرجعي في مواقع لاسيريد. فواصل غشاء بروخ في ينبغي أن تكون واضحة للعيان في المناطق lasered (انظر الشكل 1).</li>
</ol>3-فلوريسسين الأوعية 7،،من89
<ol><li>إزالة الماوس مع الحامل، ووضعه على نظام اتحاد كرة القدم (مثلاً، هايدلبرغ سبيكتراليس HRA2).</li>
	<li>التركيز على الليزر حرق مناطق قاع العين باستخدام طريقة انعكاس الأشعة تحت الحمراء مع رأس العصب البصري في منتصف نافذة عرض.</li>
	<li>حقن 0.1 مل ملح الصوديوم فلوريسسين 5% لماوس ز 20 تحت الجلد أو إينترابيريتونيلي.</li>
	<li>وتركز على مستوى تشورويدال.</li>
	<li>التقاط صورة من مستوى التركيز تشورويدال.</li>
	<li>إعادة التركيز على مستوى الشبكية وتأخذ صورة.</li>
	<li>انتظر 30 ثانية وكرر الخطوات 3، 3، 4-6.</li>
	<li>إزالة الماوس من الحامل ووضعه على منصة التدفئة.</li>
	<li>عكس التخدير بخصم α2 ميديتوميديني، أتيباميزولي (0.5 ملغ/كغ، والقائمة)، أو الانتظار لاستعادة الحيوانات من التخدير.</li>
	<li>كرر في فيفو SD، تشرين الأول/أكتوبر، واتحاد كرة القدم التصوير في تخديره من الحيوانات في متابعة أيام 5 و 10 و 14.</li>
</ol>4. متعددة الدرجات
<ol><li>درجة ضرر غشاء بروخ لمن أكتوبر والصور تشورويدال FA اتخاذها فورا بعد اللايزر في اليوم 0 كما يلي: 0--غشاء بروخ لعدم تضرر 1-نجاح تلف غشاء بروخ</li>
	<li>الصف وجود المسيحي من البقع lasered كان التسرب كما لوحظ بمقارنة ديناميات إشارة فلوريسسين في سلسلة من الصور فا الشبكية كما يلي: 0--المظهر الطبيعي لشبكية العين تلوين باهتة 0.5-التسرب 1.0-راشح متعددة المجالات ملاحظة: استخدام التصوير أكتوبر لتأكيد إضافية متعددة أو في كرة القدم مشكوك فيها حيث يوحي وجود السوائل إينتراريتينال في أكتوبر صور متعددة الدرجات.</li>
</ol>5-قياسات سمك الشبكية
<ol><li>استخدام برمجيات تجزئة تلقائية لقياسات سمك الشبكية. التأكد من أن يعتبر سمك الشبكية الكلي، كسمك كل الطبقات من طبقة الألياف العصبية RPE (مواقع القياس الصحي)، أو بخط وهمي يربط RPE المحيطة بموقع الضرر (lasered المواقع) (انظر الشكل 7).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Dobi, E. T., Puliafito, C. A., Destro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+experimental+choroidal+neovascularization+in+the+rat.">A new model of experimental choroidal neovascularization in the rat.</a> Arch. Ophthalmol. Chic. Ill 1960. 107, 264-269 (1989).</li><li>Tobe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+neovascularization+in+mice+with+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+photoreceptors.">Evolution of neovascularization in mice with overexpression of vascular endothelial growth factor in photoreceptors.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 180-188 (1998).</li><li>Seo, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dramatic+inhibition+of+retinal+and+choroidal+neovascularization+by+oral+administration+of+a+kinase+inhibitor.">Dramatic inhibition of retinal and choroidal neovascularization by oral administration of a kinase inhibitor.</a> Am. J. Pathol. 154, 1743-1753 (1999).</li><li>Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+choroidal+and+retinal+neovascularization.">Animal models of choroidal and retinal neovascularization.</a> Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).</li><li>Shah, R. S., Soetikno, B. T., Lajko, M., Fawzi, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mouse+Model+for+Laser-induced+Choroidal+Neovascularization.">A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization.</a> J Vis Exp. (106), e53502 (2015).</li><li>Giani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+evaluation+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+using+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">In vivo evaluation of laser-induced choroidal neovascularization using spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3880-3887 (2011).</li><li>Gong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+an+Image-Guided+Laser-Induced+Choroidal+Neovascularization+Model+in+Mice.">Optimization of an Image-Guided Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model in Mice.</a> PloS One. 10, e0132643 (2015).</li><li>Sheets, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotectin+D1+attenuates+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+mouse.">Neuroprotectin D1 attenuates laser-induced choroidal neovascularization in mouse.</a> Mol. Vis. 16, 320-329 (2010).</li><li>Hoerster, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+and+ex-vivo+characterization+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+variability+in+mice.">In-vivo and ex-vivo characterization of laser-induced choroidal neovascularization variability in mice.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 250, 1579-1586 (2012).</li><li>Sulaiman, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+Optical+Coherence+Tomography+Quantification+Method+for+Choroidal+Neovascularization.">A Simple Optical Coherence Tomography Quantification Method for Choroidal Neovascularization.</a> J. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. 31, 447-454 (2015).</li></ol>

صاحب البلاغ سيمانتاس راجوسكاس، دكتوراه هو الموظف (باحث) ومساهم في شركة اكسبيريمينتيكا أن يقدم عقد خدمات الأبحاث التي تستخدم النموذج المسيحي الإكلينيكية المستخدمة في هذه المقالة.
إيفا كيلكزيوسكي مقدم البلاغ هو موظف (مهندس تطبيقات البحوث، أكتوبر) Microsystems إيكا التي تنتج نظم التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر المستخدمة في هذه المقالة.
صاحب البلاغ فانس جوزيف موظف (أكتوبر نا مدير المبيعات) لايكا Microsystems تنتج نظم التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر المستخدمة في هذه المقالة. فانس جوزيف هو أيضا رئيس ومدير عام سبيكتيفي، شركة ذات مسؤولية محدودة.
المؤلف سيمون Kaja، دكتوراه هو مستشار رئيس العلمية ومساهم في اكسبيريمينتيكا المحدودة، هي عقد السريري بحوث منظمة عروض التعاقد على خدمات البحوث، الطراز المسيحي الإكلينيكية المستخدمة في هذه المادة بما في ذلك. سيمون Kaja، دكتوراه هو أيضا الرئيس التنفيذي لشركة ك & ف العلمية، شركة ذات مسؤولية محدودة، علوم الحياة، شركة استشارات، ويعمل كالدكتور جون ص وتيريز هاء مولكاهي وهبت أستاذ في طب العيون في "شيكاغو جامعة لويولا"، مدرسة ستريتش للطب. تم استعراض شروط هذا الترتيب وأقرتها "جامعة لويولا شيكاغو" وفقا لسياسة تضارب المصالح.
صاحب البلاغ جيدريوس كاليسنيكاس، دكتوراه هو الموظف (المدير التنفيذي) ومساهم في شركة اكسبيريمينتيكا أن يقدم عقد خدمات الأبحاث التي تستخدم النموذج المسيحي الإكلينيكية المستخدمة في هذه المقالة.

ويقدم التصوير المتعدد الوسائط أدوات قيمة لتقييم أمراض متعددة. وقد عرضنا هنا بروتوكولا تصوير تتألف من اتحاد كرة القدم، التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر، وتجزئة التلقائي للتقييم السريع واستنساخه، وموثوق بها من أمراض متعددة. فاصل غشاء بروخ في بعد أن أكدت الإدارة الليزر. وباﻹضافة إلى ذلك، كما يسمح باستخدام SD، تشرين الأول/أكتوبر في هذه المرحلة التصور فوري لنزيف إينتراريتينال وسوبريتينال المحتملة، التي يمكن الخلط بين تفسير النتائج. تم تصنيف الثقوب الشبكية بناء على إشارة فلوريسسين من الصور اتحاد كرة القدم. استخدام SD، تشرين الأول/أكتوبر قدم وصفاً أكثر تفصيلاً لأمراض متعددة. وعلاوة على ذلك، أبرز تحليل التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر طولية في نقاط زمنية مختلفة طوال فترة المتابعة الاختلافات الزمنية في علم الأمراض التي ستظل بعيدة المنال إذا كان الاعتماد على كرة القدم وحدها.
وتم قياس سمك الشبكية إجمالي استخدام تجزئة الآلي. وتم قياس سمك الشبكية في مواقع متعددة وكان المستحث يدوياً. يتم التحقق من تقييم النسيجي فلاتماونت تشورويدال، ومنطقة neovascularization يقاس باستخدام برمجيات تحليل الصورة "صورة ج."
الشفافية المناسبة للمحور البصري أمر حاسم لنجاح أداء البروتوكول المقدم. جفاف القرنية وتشكيل إعتام عدسة العين، هي العوامل الرئيسية التي تشارك في استكشاف الأخطاء وإصلاحها. ولذلك، حالما يحصل تخديره من الماوس، العيون ينبغي أن تكون باستمرار رطب مع الدموع الاصطناعية أو هلام للحفاظ على ترطيب مناسب للقرنية. ينبغي أن يقوم البروتوكول المقترح تفضيلي في غضون 10 دقيقة من تحريض التخدير. وقت التخدير الموسعة قد يسبب تشكيل إعتام عدسة العين ومنع التصوير في فيفو .
وصف بروتوكول لا تقتصر على الدرجات الرصدية للتقدم الذي يستند إلى تسرب الأوعية الدموية على مستوى الشبكية. يمكن إضافة التقييم الكمي لتسرب الشبكية باستخدام البرمجيات "سبيكتراليس هايدلبرغ"، مما يتيح ترسيم منطقة التسرب، ويوفر البيانات الكمية في المنطقة لمصلحة. وباﻹضافة إلى ذلك، اقترح سليمان والزملاء (2015) مؤخرا حساب حجم المسيحي من في فيفو حصلت الصور OCT باستخدام أسلوب الاهليلجي10. نموذج الاهليلجي الأرجح يدخل التحيز نحو المبالغة في تقدير حجم الآفات كما جرى في معظم الحالات بشكل غير منتظم. ومع ذلك، يوفر الارتباط عالية بين قياسات الحجم من [كنفوكل] تحليل عينات نسيجية والكمي الاهليلجي المقترحة من الصور أكتوبر أدلة على أن الأسلوب أداة قيمة للتقييم الكمي لحجم المسيحي10 .
في الختام، نحن نؤمن بعرض تركيبة مختلفة في فيفو التصوير الطرائق، جنبا إلى جنب مع تجزئة الآلي والتحليل النسيجي، ويقدم التقييم استنساخه وموثوق بها من أمراض متعددة في الدراسات الإكلينيكية. الطريقة يمكن أن تكون مفيدة بشكل خاص لإثبات مفهوم التدخل العلاجي الدراسات.

أول محاولة ناجحة لتقليد علم الأمراض البشرية المسيحي في القوارض اتضح منذ ثلاثة عقود تقريبا مع ليزر كريبتون في لونغ-إيفانز الفئران1. وبعد ذلك، استخدمت ليزر كريبتون لكسر غشاء بروخ لسلالة الماوس الأكثر شعبية، C57BL/6J2،،من34. تم التحقق من معدل نجاح الاستقراء متعددة مع اتحاد كرة القدم والبقع النسيجي. تطور سريع لأساليب التصوير موسع، مثل OCT، عزز نمو مجال القوارض نماذج الإكلينيكية. القدرة على رصد التغييرات الشكلية في الشبكية في نقاط زمنية متعددة في العين نفسها إلى حد كبير يسهم في الحد استخدام الحيوانات، وزيادة الكفاءة في الدراسات التجريبية. التقييم النسيجي لآفات متعددة بدلاً من ذلك واضحة، ويتطلب وضع العلامات لنمو الأوعية الدموية غير طبيعي حول الموقع الإدارة الليزر، والحصول على الصور، وتقدير مساحة/وحدة التخزين باستخدام برنامج تحليل صورة. وفي المقابل، يعرض في فيفو طرائق التصوير تحاليل أكثر تعقيداً من أمراض متعددة وتفسيرها.
هنا نقدم طريقة بسيطة وسريعة نسبيا للصف التعريفي، والتدرج، والانحدار الذي استخدام FA، SD--أكتوبر، والأسلوب الآلي تجزئة في الماوس الليزر المستحثة المسيحي النموذجي.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="917">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:275px;">Medetomidine (commercial name Domitor)</td>
			<td style="width:123px;">Orion</td>
			<td style="width:344px;">Vnr 01 56 02</td>
			<td style="width:177px;">Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Ketamine</td>
			<td>Intervet</td>
			<td>Vnr 51 14 85</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">0,9% NaCl</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>357 0340</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Xylazine (commercial name Rompun vet)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>vnr 14 89 99</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tropicamide</td>
			<td>Santen</td>
			<td>Vnr 04 12 36</td>
			<td>Mydriatic agent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Viscotears</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>Vnr 44 54 81</td>
			<td>Lubricant</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Systane</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>&#160;-</td>
			<td>Lubricant</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">5% Fluorescein sodium salt</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6377-100G</td>
			<td>Fluoresent agent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Atipamezole (commercial name Antisedane)</td>
			<td>Orion</td>
			<td>Vnr 47 19 53</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo multimodal imaging and analysis of mouse laser-induced choroidal neovascularization model

Neovascularization تشورويدال المستحثة بالليزر (المسيحي) نموذج راسخة لتقليد النموذج الرطب لكبر السن البقعي (AMD). في هذا البروتوكول، ونحن نهدف إلى توجيه القارئ ليس ببساطة من خلال الاعتبارات التقنية لتوليد آفات المستحثة بالليزر لتحريك عمليات نيوفاسكولار، ولكن بدلاً من التركيز على المعلومات القوية التي يمكن الحصول عليها من الطولية النقل المتعدد الوسائط المجراة في التصوير طوال فترة المتابعة.
الماوس المستحثة بالليزر النموذجي الذي تم إنشاؤها بواسطة إقامة ليزر صمام ثنائي. واستخدمت تقنيات التصوير المتعدد الوسائط في فيفو لرصد التعريفي المسيحي والتقدم والتراجع. أولاً، أنجز التصوير المقطعي التماسك الضوئية المجال الطيفي (SD--أكتوبر) فورا بعد اللايزر للتحقق من فاصل غشاء بروخ في. وأكد اللاحقة في فيفو التصوير باستخدام الأوعية فلوريسسين (اتحاد كرة القدم) الضرر ناجحة من غشاء بروخ لمن صور المسلسل المكتسبة على مستوى تشورويدال. متابعة طولية من الانتشار المسيحي والانحدار في أيام 5 و 10 و 14 بعد اللايزر أجرى باستخدام كل من التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر واتحاد كرة القدم. ويرد بسيطة وموثوق بها الدرجات من راشح المسيحي ليسيونس من الصور اتحاد كرة القدم. التجزئة التلقائية لقياس مجموع سمك الشبكية، جنبا إلى جنب مع تطبيق عيار يدوي لقياس سماكة الشبكية في مواقع متعددة، والسماح بتقييم غير متحيز لوجود وذمة. وأخيراً، النسيجي التحقق من الذي تتم باستخدام تلطيخ إيسوليكتين GS-IB4 على فلاتمونتس تشورويدال. تلطيخ ثريشولديد، ومنطقة إيسوليكتين-إيجابيا يحسب مع إيماجيج.
هذا البروتوكول مفيدة بشكل خاص في دراسات المداواة التي تتطلب عالية-الإنتاجية-مثل الفحص الباثولوجي المسيحي أنها تتيح سرعة، متعدد الوسائط، وتصنيف موثوق بها ذمة الشبكية وأمراض متعددة. وبالإضافة إلى ذلك، تمكن عالية الدقة التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر تسجيل بصمات المرضية الأخرى، مثل تراكم السوائل سوبريتينال أو إينتراريتينال. ومع ذلك، هذا الأسلوب لا يوفر إمكانية أتمتة تحليل حجم المسيحي من صور التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر، الذي يجب أن تتم يدوياً.

فقاعة أو سوبريتينال النزيف فورا بعد اللايزر غير مرئي دائماً. ولذلك، أهمية خاصة للتحقق من الأضرار لغشاء بروخ في SD، تشرين الأول/أكتوبر. ويبين الشكل 1 مثال على تصوير أكتوبر عند نقاط زمنية مختلفة بعد الليزر.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig1.jpg"> الشكل 1 : أكتوبر أون الوجه رأي العين النظارة (صورة كبار الشخصيات) يظهر ثلاثة مجالات lasered المبينة في دوائر الأبيض والأخضر والأحمر- أكتوبر ب-مسح الصور أخذت السابقة اللايزر (الأساس)، مباشرة بعد اللايزر للتحقق من فاصل غشاء بروخ في (أيام 0، أسهم أشر إلى موقع الضرر)، و 5 و 10 و 14 يوما بعد إقامة الليزر. كما يمكن أن يرى من المنطقة المحددة باللون الأبيض (الصف الأول من الصور)، الذي لم تتطور في وقت لاحق تيميبوينتس. المنطقة المحددة باللون الأخضر والأحمر وضع المسيحي، التي تم الكشف عنها في متابعة يوم 5. ومع ذلك، في تيميبوينتس يوم 10 و 14، تراجعت هذه الآفات متعددة. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56173/56173fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
وتظهر الأرقام 2 و 3 تصوير المسلسل باستخدام كرة القدم، الذي أكد الأضرار ناجحة من غشاء بروخ في جميع المواقع الثلاثة في اليوم 0 ماوس C57BL/6jRj عمرها 10 أسبوع ذكور.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig2.jpg"> الشكل 2 : تصوير مسلسل اتحاد كرة القدم اتخذ كل 20 s (الصور 1 إلى 18) على مستوى تشورويدال فورا بعد الليزر الإدارة. الأسهم البيضاء في الصورة 1 نقطة إلى مواقع lasered، التي تبين تسرب fluorescein في وقت لاحق تيميبوينتس (الأسهم البيضاء في صورة 18). <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56173/56173fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig3.jpg"> الشكل 3 : تصوير مسلسل اتحاد كرة القدم اتخذ كل 20 s (الصور 1 إلى 18) على مستوى الشبكية مباشرة بعد الليزر الإدارة. هو المجال الذي يحتوي على التسرب فلوريسسين والدرجات من 1 (راشح المسيحي) أشار السهم الأبيض في الصورة 18. ملاحظة كثافة متزايدة، فضلا عن منطقة fluorescein إيجابيا، أثناء تيميكورسي لكرة القدم التصوير (السهم الأبيض في الصور 8 و 11). تم تصنيف مجالين المبينة باللون الأبيض في الصورة 18 كوجود إشارة فا خافت (الدرجات 0.5). <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56173/56173fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
بالإضافة إلى تصنيف الأمراض المسيحي، التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر مفيد أيضا تكشف عن معلومات إضافية في موقع الآفة، مثلاً، وجود سائل سوبريتينال، وذمة، والانحدار الذي. ويبين الشكل 4 بصمات المرضية الرئيسية المسيحي المستحثة بالليزر في الفئران.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig4.jpg"> الشكل 4 : الباثولوجيا "الطيفي المجال البصري التماسك التصوير المقطعي التصوير من المسيحي"- SD--أكتوبر يوفر علم أمراض متعددة مفصلة داخل نسيج الشبكية، كما يتبين من هذه الصور التمثيلية على تندب الأنسجة، وتكوين المسيحي، وتراكم السائل. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56173/56173fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
وذمة بقعيه واحدة من السمات المميزة المرضية الرئيسية للنموذج أية أم دي الرطب في البشر. في النموذج الذي المستحثة بالليزر، يمكن تقييم سمك الشبكية باستخدام تجزئة الآلي. قياس دليل لمواقع مختارة lasered مطلوب لقياس سماكة الشبكية في موقع المسيحي. يبين الشكل 5 مثال على تقرير التي تم إنشاؤها بعد تجزئة الآلي.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig5.jpg"> الشكل 5 : التحديد الكمي لسمك الشبكية. سمك الشبكية مقيسة بتجزئة الآلي <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56173/56173fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
استخدام تجزئة الآلي طريقة سريعة لتقديم لمحة عامة عن سمك الشبكية (الجدول 1). 6A الأرقام و 6B تظهر أمثلة الممثل لتجزئة الآلي من منطقة شبكية سليمة ومن منطقة الشبكية مع أمراض متعددة، على التوالي. على الرغم من أخطاء طفيفة في التمييز بين طبقات الشبكية الفردية، عموما، تسلم البرنامج موثوق سمك الشبكية الكلي في الفئران المصطبغة.
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig6.jpg"> الرقم 6 : الآلي تجزئة طبقات الشبكية. الآلي تقسيم المنطقة الشبكية صحية (A) والشبكية التي تحتوي على المسيحي (العلامة النجمية في الصورة ب). <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56173/56173fig6large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
من أجل تقييم سمك الشبكية في مناطق lasered، وتم قياس كل منطقة lasered يدوياً كما يلي: يعتبر سمك الشبكية مجموع سماكة كل الطبقات من طبقة الألياف العصبية إلى خط وهمي يربط RPE المحيطة بالموقع الضرر (الشكل 7 و الجدول 1).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>المنطقة</td>
			<td>يوم 5</td>
			<td>يوم 10</td>
			<td>14 يوم</td>
		</tr>
<tr>
<td>مجموع سمك الشبكية، ميكرومتر</td>
			<td>218±7.8</td>
			<td>220±7.2</td>
			<td>221±9.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>منطقة lasered 1</td>
			<td>200</td>
			<td>204</td>
			<td>214</td>
		</tr>
<tr>
<td>منطقة lasered 2</td>
			<td>226</td>
			<td>217</td>
			<td>220</td>
		</tr>
<tr>
<td>منطقة lasered 3</td>
			<td>222</td>
			<td>223</td>
			<td>227</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">وترد البيانات mean±SD</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1. مجموع سمك الشبكية وسمك الشبكية في مواقع متعددة خلال متابعة 14 يوما حسبما تقرره تجزئة الآلي باستخدام البرمجيات إينفيفوديفير (v. 3.0.8).
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig7.jpg"> الشكل 7 : دليل قياس سمك الشبكية في منطقة lasered مع أمراض متعددة. الخط الأصفر يشير إلى مجموع سمك الشبكية من طبقة الألياف العصبية إلى طبقة RPE وهمي (الخط الأسود) في موقع الإدارة الليزر. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56173/56173fig7large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
الأشيع، تأكدت الآفات متعددة باستخدام العلامات إيسوليكتين GS IB4 (الشكل 8 أ). تم استخدام برمجيات تحليل الصورة "ي صورة" لحساب منطقة الآفة متعددة (الشكل 8B).
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig8.jpg"> الشكل 8 : تحليل النسيجي. يمكن تحديده كمياً وصمة عار نسيجية الآفة متعددة من فلاتماونت تشورويدال (باللون الأخضر، A) باستخدام مستوى العتبة في "الصورة ي" (ب). شريط مقياس ألف 50 ميكرومتر. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56173/56173fig8large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model at JoVE.com

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

في فيفو التصوير المتعدد الوسائط، وتحليل للماوس المستحثة بالليزر طراز نيوفاسكولاريزيشن تشورويدال

نقدم هنا، فائدة التصوير الطولي في فيفو في متابعة التغييرات الشكلية من neovascularization تشورويدال المستحثة بالليزر في الفئران.

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this ...

in-vivo-multimodal-imaging-analysis-mouse-laser-induced-choroidal

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

9.0K Views.  Experimentica Ltd.. نقدم هنا، فائدة التصوير الطولي في فيفو في متابعة التغييرات الشكلية من neovascularization تشورويدال المستحثة بالليزر في الفئران.

Video: In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and evaluating mouse models of human disease. MRI is an excellent modality for investigating genetically altered animals. It is capable of whole brain coverage, can be used in vivo, and provides multiple contrast mechanisms for investigating different aspects of neuranatomy and physiology. The advent of high-field scanners along with the ability to scan multiple mice simultaneously allows for rapid phenotyping of novel mutations.
Effective mouse MRI studies require attention to many aspects of experiment design. In this article, we will describe general methods to acquire quality images for mouse phenotyping using a system that images mice concurrently in shielded transmit/receive radio frequency (RF) coils in a common magnet (Bock et al., 2003). We focus particularly on anatomical phenotyping, an important and accessible application that has shown a high potential for impact in many mouse models at our imaging centre. Before we can provide the detailed steps to acquire such images, there are important practical considerations for both in vivo brain imaging (Dazai et al., 2004) and ex vivo brain imaging (Spring et al., 2007) that should be noted. These are discussed below.

Magnetic resonance imaging (MRI) has become an increasingly popular tool for examining the phenotype of genetically altered mice. This article illustrates the methods necessary to achieve high-throughput phenotyping of genetically altered mice using multiple-mouse MRI.

متعددة الماوس تشريحي عصبي التصوير بالرنين المغناطيسي

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, both in preclinical and clinical studies. However, to date results regarding functional outcome and/or tissue regeneration following stem cell transplantation are quite diverse. Generally, a clinical benefit is observed without profound understanding of the underlying mechanism(s)1. Therefore, multiple efforts have led to the development of different molecular imaging modalities to monitor stem cell grafting with the ultimate aim to accurately evaluate survival, fate and physiology of grafted stem cells and/or their micro-environment. Changes observed in one or more parameters determined by molecular imaging might be related to the observed clinical effect. In this context, our studies focus on the combined use of bioluminescence imaging (BLI), magnetic resonance imaging (MRI) and histological analysis to evaluate stem cell grafting.
BLI is commonly used to non-invasively perform cell tracking and monitor cell survival in time following transplantation2-7, based on a biochemical reaction where cells expressing the Luciferase-reporter gene are able to emit light following interaction with its substrate (e.g. D-luciferin)8, 9. MRI on the other hand is a non-invasive technique which is clinically applicable10 and can be used to precisely locate cellular grafts with very high resolution11-15, although its sensitivity highly depends on the contrast generated after cell labeling with an MRI contrast agent. Finally, post-mortem histological analysis is the method of choice to validate research results obtained with non-invasive techniques with highest resolution and sensitivity. Moreover end-point histological analysis allows us to perform detailed phenotypic analysis of grafted cells and/or the surrounding tissue, based on the use of fluorescent reporter proteins and/or direct cell labeling with specific antibodies.
In summary, we here visually demonstrate the complementarities of BLI, MRI and histology to unravel different stem cell- and/or environment-associated characteristics following stem cell grafting in the CNS of mice. As an example, bone marrow-derived stromal cells, genetically engineered to express the enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) and firefly Luciferase (fLuc), and labeled with blue fluorescent micron-sized iron oxide particles (MPIOs), will be grafted in the CNS of immune-competent mice and outcome will be monitored by BLI, MRI and histology (Figure 1).

This article describes an optimized sequence of events for multimodal imaging of cellular grafts in rodent brain using: (i) in vivo bioluminescence and magnetic resonance imaging, and (ii) post mortem histological analysis. Combining these imaging modalities on a single animal allows cellular graft evaluation with high resolution, sensitivity and specificity.

التصوير المتعدد الوسائط من زرع الخلايا الجذعية في الجهاز العصبي المركزي من الفئران

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains technically challenging. One approach, Activation-Induced Manganese-enhanced MRI (AIM MRI), has been used successfully to map neuronal activity in rodents 1-5. In AIM MRI, Mn2+ acts a calcium analog and accumulates in depolarized neurons 6,7. Because Mn2+ shortens the T1 tissue property, regions of elevated neuronal activity will enhance in MRI. Furthermore, Mn2+ clears slowly from the activated regions; therefore, stimulation can be performed outside the magnet prior to imaging, enabling greater experimental flexibility. However, because Mn2+ does not readily cross the blood-brain barrier (BBB), the need to open the BBB has limited the use of AIM MRI, especially in mice.
One tool for opening the BBB is ultrasound. Though potentially damaging, if ultrasound is administered in combination with gas-filled microbubbles (i.e., ultrasound contrast agents), the acoustic pressure required for BBB opening is considerably lower. This combination of ultrasound and microbubbles can be used to reliably open the BBB without causing tissue damage 8-11.
Here, a method is presented for performing AIM MRI by using microbubbles and ultrasound to open the BBB. After an intravenous injection of perflutren microbubbles, an unfocused pulsed ultrasound beam is applied to the shaved mouse head for 3 minutes. For simplicity, we refer to this technique of BBB Opening with Microbubbles and UltraSound as BOMUS 12. Using BOMUS to open the BBB throughout both cerebral hemispheres, manganese is administered to the whole mouse brain. After experimental stimulation of the lightly sedated mice, AIM MRI is used to map the neuronal response.
To demonstrate this approach, herein BOMUS and AIM MRI are used to map unilateral mechanical stimulation of the vibrissae in lightly sedated mice 13. Because BOMUS can open the BBB throughout both hemispheres, the unstimulated side of the brain is used to control for nonspecific background stimulation. The resultant 3D activation map agrees well with published representations of the vibrissae regions of the barrel field cortex 14. The ultrasonic opening of the BBB is fast, noninvasive, and reversible; and thus this approach is suitable for high-throughput and/or longitudinal studies in awake mice.

A technique is described for broadly opening the blood-brain barrier in the mouse using microbubbles and ultrasound. Using this technique, manganese can be administered to the mouse brain. Because manganese is an MRI contrast agent that accumulates in depolarized neurons, this approach enables imaging of neuronal activity.

تصوير الأعصاب وظيفية عن طريق الموجات فوق الصوتية تعطيل حاجز الدم في الدماغ والتصوير بالرنين المغناطيسي المنغنيز معززة لل

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

We developed a system that integrates live imaging of fluorescent markers and culturing slices of embryonic mouse neuroepithelium. We took advantage of existing mouse lines for genetic cell lineage tracing: a tamoxifen-inducible Cre line and a Cre reporter line expressing dsRed upon Cre-mediated recombination. By using a relatively low level of tamoxifen, we were able to induce recombination in a small number of cells, permitting us to follow individual cell divisions. Additionally, we observed the transcriptional response to Sonic Hedgehog (Shh) signaling using an Olig2-eGFP transgenic line 1-3 and we monitored formation of cilia by infecting the cultured slice with virus expressing the cilia marker, Sstr3-GFP 4. In order to image the neuroepithelium, we harvested embryos at E8.5, isolated the neural tube, mounted the neural slice in proper culturing conditions into the imaging chamber and performed time-lapse confocal imaging. Our ex vivo live imaging method enables us to trace single cell divisions to assess the relative timing of primary cilia formation and Shh response in a physiologically relevant manner. This method can be easily adapted using distinct fluorescent markers and provides the field the tools with which to monitor cell behavior in situ and in real time.

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Here we develop the tools necessary for ex vivo live imaging to trace single cell divisions in the mouse E8.5 neuroepithelium

فيفو السابقين التصوير لايف من الانقسامات الخلوية واحدة في الظهارة العصبية ماوس

We developed a system that integrates live imaging of fluorescent markers and culturing slices of embryonic mouse neuroepithelium. We took advantage of ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal degeneration. Lack of growth cone formation, regeneration, and loss of additional myelinated axonal projections within the spinal cord greatly limits neurological recovery following injury. To assess how central myelinated axons of the spinal cord respond to injury, we developed an ex vivo living spinal cord model utilizing transgenic mice that express yellow fluorescent protein in axons and a focal and highly reproducible laser-induced spinal cord injury to document the fate of axons and myelin (lipophilic fluorescent dye Nile Red) over time using two-photon excitation time-lapse microscopy. Dynamic processes such as acute axonal injury, axonal retraction, and myelin degeneration are best studied in real-time. However, the non-focal nature of contusion-based injuries and movement artifacts encountered during in vivo spinal cord imaging make differentiating primary and secondary axonal injury responses using high resolution microscopy challenging. The ex vivo spinal cord model described here mimics several aspects of clinically relevant contusion/compression-induced axonal pathologies including axonal swelling, spheroid formation, axonal transection, and peri-axonal swelling providing a useful model to study these dynamic processes in real-time. Major advantages of this model are excellent spatiotemporal resolution that allows differentiation between the primary insult that directly injures axons and secondary injury mechanisms; controlled infusion of reagents directly to the perfusate bathing the cord; precise alterations of the environmental milieu (e.g., calcium, sodium ions, known contributors to axonal injury, but near impossible to manipulate in vivo); and murine models also offer an advantage as they provide an opportunity to visualize and manipulate genetically identified cell populations and subcellular structures. Here, we describe how to isolate and image the living spinal cord from mice to capture dynamics of acute axonal injury.

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

We present a protocol utilizing two-photon excitation time-lapse microscopy to simultaneously visualize the dynamics of axon and myelin injuries in real time. This proposed protocol permits studies of both intrinsic and extrinsic factors which can influence central myelinated axon fate after injury and contribute to permanent clinical disability.

ل<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; يسببها الليزر اصابات الحبل الشوكي نموذج لتقييم آليات محور عصبي تنكس في الوقت الحقيقي

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

3-D Imaging and Analysis of Neurons Infected In Vivo with Toxoplasma gondii

Toxoplasma gondii is an obligate, intracellular parasite with a broad host range, including humans and rodents. In both humans and rodents, Toxoplasma establishes a lifelong persistent infection in the brain. While this brain infection is asymptomatic in most immunocompetent people, in the developing fetus or immunocompromised individuals such as acquired immune deficiency syndrome (AIDS) patients, this predilection for and persistence in the brain can lead to devastating neurologic disease. Thus, it is clear that the brain-Toxoplasma interaction is critical to the symptomatic disease produced by Toxoplasma, yet we have little understanding of the cellular or molecular interaction between cells of the central nervous system (CNS) and the parasite. In the mouse model of CNS toxoplasmosis it has been known for over 30 years that neurons are the cells in which the parasite persists, but little information is available about which part of the neuron is generally infected (soma, dendrite, axon) and if this cellular relationship changes between strains. In part, this lack is secondary to the difficulty of imaging and visualizing whole infected neurons from an animal. Such images would typically require serial sectioning and stitching of tissue imaged by electron microscopy or confocal microscopy after immunostaining. By combining several techniques, the method described here enables the use of thick sections (160 &#181;m) to identify and image whole cells that contain cysts, allowing three-dimensional visualization and analysis of individual, chronically infected neurons without the need for immunostaining, electron microscopy, or serial sectioning and stitching. Using this technique, we can begin to understand the cellular relationship between the parasite and the infected neuron.

3-D Imaging and Analysis of Neurons Infected In Vivo with Toxoplasma gondii

Using this protocol, we were able to image 160 &#181;m thick brain sections from mice infected with the parasite Toxoplasma gondii, which enables visualization and analysis of the spatial relationship between the encysting parasite and the infected neuron.

التصوير 3-D وتحليل الخلايا العصبية المصابة<em&gt; في فيفو</em&gt; مع<em&gt; التوكسوبلازما</em

Toxoplasma gondii is an obligate, intracellular parasite with a broad host range, including humans and rodents. In both humans and rodents, Toxoplasma ...

M&#252;ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after severe damage. Investigating the regeneration pathways in zebrafish might bring new insights to develop innovative strategies for the treatment of retinal degenerative diseases in mammals. Herein, we focused on the induction of a focal lesion to the outer retina in adult zebrafish by means of a 532 nm diode laser. A localized injury allows investigating biological processes that take place during retinal degeneration and regeneration directly at the area of damage. Using non-invasive optical coherence tomography (OCT), we were able to define the location of the damaged area and monitor subsequent regeneration in vivo. Indeed, OCT imaging produces high-resolution, cross-sectional images of the zebrafish retina, providing information which was previously only available with histological analyses. In order to confirm the data from real-time OCT, histological sections were performed and regenerative response after the induction of the retinal injury was investigated by immunohistochemistry.

The zebrafish is a popular animal model to study mechanisms of retinal degeneration/regeneration in vertebrates. This protocol describes a method to induce localized injury disrupting the outer retina with minimal damage to the inner retina. Subsequently, we monitor in vivo the retinal morphology and the M&#252;ller glia response throughout retinal regeneration.

إطلاق مولر خلية التنشيط في تنكس الشبكية المستحثة بالليزر ونموذج التجديد في الزرد

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after ...

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) occlusion of the middle cerebral artery (MCA) using a catheter. This generally accepted technique, however, has some limitations, thereby limiting its extensive use. Stroke induction by this method is often characterized by high variability in the localization and size of the ischemic area, periodical occurrences of hemorrhage, and high death rates. Also, the successful completion of any of the transient or permanent procedures requires expertise and often lasts for about 30 minutes. In this protocol, a laser irradiation technique is presented that can serve as an alternative method for inducing and studying brain injury in rodent models.
When compared to rats in the control and MCAO groups, the brain injury by laser induction showed reduced variability in body temperature, infarct volume, brain edema, intracranial hemorrhage, and mortality. Furthermore, the use of a laser-induced injury caused damage to the brain tissues only in the motor cortex unlike in the MCAO experiments where destruction of both the motor cortex and striatal tissues is observed.
Findings from this investigation suggest that laser irradiation could serve as an alternative and effective technique for inducing brain injury in the motor cortex. The method also shortens the time for completing the procedure and does not require expert handlers.

The protocol presented here shows a technique to create a rodent model of brain injury. The method described here uses laser irradiation and targets motor cortex.

إصابة الدماغ الناجمة عن الليزر في القشرة الحركية للفئران

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

Imaging and Analysis of Neurofilament Transport in Excised Mouse Tibial Nerve

Neurofilament protein polymers move along axons in the slow component of axonal transport at average speeds of ~0.35-3.5 mm/day. Until recently the study of this movement in situ was only possible using radioisotopic pulse-labeling, which permits analysis of axonal transport in whole nerves with a temporal resolution of days and a spatial resolution of millimeters. To study neurofilament transport in situ with higher temporal and spatial resolution, we developed a hThy1-paGFP-NFM transgenic mouse that expresses neurofilament protein M tagged with photoactivatable GFP in neurons. Here we describe fluorescence photoactivation pulse-escape and pulse-spread methods to analyze neurofilament transport in single myelinated axons of tibial nerves from these mice ex vivo. Isolated nerve segments are maintained on the microscope stage by perfusion with oxygenated saline and imaged by spinning disk confocal fluorescence microscopy. Violet light is used to activate the fluorescence in a short axonal window. The fluorescence in the activated and flanking regions is analyzed over time, permitting the study of neurofilament transport with temporal and spatial resolution on the order of minutes&#160;and microns, respectively. Mathematical modeling can be used to extract kinetic parameters of neurofilament transport including the velocity, directional bias and pausing behavior from the resulting data. The pulse-escape and pulse-spread methods can also be adapted to visualize neurofilament transport in other nerves. With the development of additional transgenic mice, these methods could also be used to image and analyze the axonal transport of other cytoskeletal and cytosolic proteins in axons.

We describe fluorescence photoactivation methods to analyze the axonal transport of neurofilaments in single myelinated axons of peripheral nerves from transgenic mice that express a photoactivatable neurofilament protein.

التصوير والتحليل لنقل الليفية العصبية في العصب الذبي الماوس المخزّن

Neurofilament protein polymers move along axons in the slow component of axonal transport at average speeds of ~0.35-3.5 mm/day. Until recently the study ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent and cause visual impairment and blindness. Understanding how such diseases progress is critical to formulating new treatments. In vivo&#160;microscopy in animal models of disease is a powerful tool for understanding neurodegeneration and has led to important progress towards treatments of conditions ranging from Alzheimer&#39;s disease to stroke. Given that the retina is the only central nervous system structure inherently accessible by optical approaches, it naturally lends itself towards in vivo imaging. However, the native optics of the lens and cornea present some challenges for effective imaging access.
This protocol outlines methods for in vivo two-photon imaging of cellular cohorts and structures in the mouse retina at cellular resolution, applicable for both acute- and chronic-duration imaging experiments. It presents examples of retinal ganglion cell (RGC), amacrine cell, microglial, and vascular imaging using a suite of labeling techniques including adeno-associated virus (AAV) vectors, transgenic mice, and inorganic dyes. Importantly, these techniques extend to all cell types of the retina, and suggested methods for accessing other cellular populations of interest are described. Also detailed are example strategies for manual image postprocessing for display and quantification. These techniques are directly applicable to studies of retinal function in health and disease.

In vivo imaging is a powerful tool for the study of biology in health and disease. This protocol describes transpupillary imaging of the mouse retina with a standard two-photon microscope. It also demonstrates different in vivoimaging methods to fluorescently label multiple cellular cohorts of the retina.

تصوير الفوتون عبر الحدقة في الجسم الحي لشبكية العين الفأرية

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...