الهدف العام لهذا الإجراء ضخ قناة البنكرياس هو تمكين تتبع النسب, إدخال الجينات, واستهداف خط الخلية محددة في البنكرياس. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية حول الأمراض التي تؤثر على البنكرياس، بما في ذلك التهاب البنكرياس المزمن والسكري وسرطان البنكرياس. للبدء، ضع فأرا مخدرا تحت مجهر تشريحي بحيث يتم وضع بطنه في وسط مجال الرؤية.
شل حركة الحيوان بشريط جراحي ثم وضع مرهم العيون على عينيه لمنعه من التجفيف. بعد ذلك، قم بتغطية بطن الفأرة بطبقة سميكة من كريم إزالة الشعر. وبعد ما يقرب من ثلاث دقائق، مسح بلطف قبالة كريم مع الشاش غارقة في الإيثانول 70٪لإزالة جميع الشعر.
وأخيرا، مسح الجلد مع 70٪ الإيثانول، تليها 10٪ محلول يوديد بوفيد لإزالة أي ملوثات وتطهير الجلد. لبدء الجراحة، قم بإنشاء شق جلدي متوسط الخط مع مشرط يمتد من عملية الشيفوئيد إلى السرة. ثم باستخدام ملقط Adson، ورفع الصفاق وجعل مع مقص ثقب خط الوسط الصغيرة.
توسيع قطع على طول خط الوسط من الصفاق بحيث طوله يساوي طول شق الجلد. بعد ذلك ، استخدم الحفارات الحادة لسحب الكبد وبعد تعريض القناة الصفراوية الشائعة ، قم بمشبكها بمشبك الأوعية الدموية المنحني. تحديد الاثني عشر ومع ملقط Arruga، سحبه caudally لعرض الحليمة مرئية ك بقعة بيضاء على السطح الأمامي للجزء الثاني من الاثني عشر.
لتحديد قناة البنكرياس، سحب الديودينوم caudally، ثم وضع إبرة قياس 30-1/5 عرضيا إلى الاثني عشر وجعل ثقب على جداره الذي يضداد مباشرة الحليمة. لبث الحل، أدخل القسطرة المتصلة بمضخة التسريب من خلال استئصال الاثني عشر الذي تم إنشاؤه وحركه على طول القناة حتى يصبح مرئيا داخل السفينة، ولكنه لا يصل إلى أكثر من سنتيمتر واحد لتجنب تجاوز روافد القناة الصغيرة. شل القسطرة عن طريق لقط مع المشبك بولدوغ الأوعية الدموية المنحني الثاني.
ثم قم بتشغيل المضخة لبدء ضخ 150 ميكرولتر من المحلول في القناة. بعد ذلك ، قم بحقن الصفاق من الماوس حوالي 1.5 ملليلتر من المالحة لتجنب أي فقدان لحجم غرست ومن ثم تغطية الأمعاء المكشوفة مع شاش رطب لمنع الجفاف. بمجرد الانتهاء من التسريب ، أطلق القسطرة المشلطة واستخدام مشبك البلدغ ، وأزلها بلطف من قناة البنكرياس.
ثم حرر المشبك من القناة الصفراوية الشائعة. أغلق الصفاق والجلد عن طريق خياطة باستمرار لهم في طبقة واحدة وإدارة أول جرعتين من مسكن، والثانية التي سوف تعطى في اليوم التالي. ثم أعد الفأر إلى قفص وضعه تحت مصباح حراري وتزويد الحيوان بالطعام والماء.
مراقبة الماوس حتى استعادت وعيه الكافي يتجلى في شغل المؤخرة. بعد سبعة أيام من الجراحة ، والمكوس من البنكرياس الحيواني القتل الرحيم ، فضلا عن الطحال والكبد ، والاثني عشر بمثابة ضوابط. تزج الأنسجة المعزولة بأكملها في محلول paraformaldehyde 4٪ وإصلاحها في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها.
بمجرد إصلاح الأنسجة ، يحمي التبريد العينات عن طريق نقعها في محلول السكروز بنسبة 30٪ عند أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها. بعد حماية التبريد بين عشية وضحاها، المفاجئة تجميد العينات في النيتروجين السائل واستخدام microtome، وقطع أقسام الأنسجة في ستة ميكرومتر. وأخيرا، صورة المقاطع تحت المجهر الفلوري.
هنا هي الصور المجهرية من أقسام البنكرياس استئصالها من الفئران بعد سبعة أيام من الجراحة الصورية وضخ قناة البنكرياس من AAV8 تحمل الجين GFP. الكبد والطحال، والاثني عشر معزولة عن الماوس المطعمة AAV8 لم تظهر أي إشارة GFP في حين كشف البنكرياس التعبير GFP بارزة، مما يؤكد تسليم البنكرياس محددة للفيروس بعد ضخ قناة البنكرياس. وبمجرد إتقانها، يمكن القيام بهذه التقنية في 10 دقائق عند تنفيذها بشكل صحيح.
أثناء إجراء هذا الإجراء، من المهم جدا إجراء تشريح دقيق وإجراء أصغر عملية استئصال ثنائي عشر ممكن لإدخال القسطرة. بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين الذين يدرسون البنكرياس للتحقيق في عدد من الأمراض التي تصيب الجهاز ، بما في ذلك التهاب البنكرياس المزمن والسكري وسرطان البنكرياس في كل من القوارض والنماذج الحيوانية الأكبر. بعد مشاهدة هذا الفيديو, يجب أن يكون لديك فهم جيد جدا لكيفية بث كل من فعال وانتقائي قناة البنكرياس.
