تم توفير التمويل من قبل وزارة الزراعة الأميركية كريس 5347-22620-021-00D و، في جزء منه، من قبل الزراعة والأغذية بحوث مبادرة التنافسية منحة لا. 2011-67009-30141 من المعهد الوطني USDA الأغذية والزراعة. ونحن ممتنون للدعم الفني للجوانا ناصيف. كما نشكر بول بيكر، ديفيد هورتون، دييغو نييتو، وفرانسيس Sivakoff لتوفير بعض الصور المستخدمة في الشكل (3).

1. الأقسام الداخلية، الاحتفاظ، والكشف الداخلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإجراء بمناسبة الداخلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الحشرات من الفائدة (ن ≈ 100 فرد) من مستعمرة المختبر تربى على النظام الغذائي الاصطناعي أو من الميدان وتقسم إلى حاويتين تربية نظيفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع حزمة العادية 20 مل نظام غذائي (لا تحمل علامات علاج المراقبة السلبية) في واحدة من الحاويات. تكملة 20 مل علبة النظام الغذائي الاصطناعي الثانية مع 1.0 مل من 1.0 ملغ / مل الدجاج مفتش / IGY الحل، تخلط جيدا، ووضعه في حاوية أخرى. ملاحظة: إذا لم يكن لدى الحشرة من مصلحة نظام غذائي الاصطناعي، يمكن وضع علامة على أو في أي نظام غذائي مستدام وعادة ما على (على سبيل المثال، والفاصوليا الخضراء والبيض العث والماء والسكر والعسل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للحشرات لاستئناف نشاط التغذية لمدة 24 ساعة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علامة الداخلية إجراء الاحتفاظ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الحزم النظام الغذائي من كل حاوية وتوريد الحشرات ثإيث مصدر الغذاء أخرى للحفاظ عليها خلال مدة التجربة (على سبيل المثال، والفاصوليا الخضراء). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع لفيف (ن = 20) من الحشرات يوميا (أو في أي الفاصل الزمني المطلوب) من كل معاملة وتجمد على الفور في -20 ° C. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطيرة إجراء ELISA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 ميكرولتر من أرنب مكافحة الدجاج IGY الأجسام المضادة الأولية المخفف 1: 500 في تريس مخزنة المالحة (TBS) إلى كل بئر من ELISA صفيحة ميكروسكوبية نظيفة واحتضان مدة لا تقل عن 1 ساعة على RT (ملاحظة: microplates يمكن أيضا أن تكون المحتضنة O / N عند 4 درجات مئوية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل الضد من لوحة ومنع كل بئر مع 300 ميكرولتر من 1.0٪ الخالي من الدسم حل الحليب الجاف لمدة 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في انتظار الخطوات الحضانة السابقة، ضع الحشرات المجمدة بشكل فردي في 1.6 مل أنابيب microcentrifuge مع 1.0 مل من TBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطحن كل الحشرات مع مدقة نظيفة حتى المتجانس تماما وإضافة 100 ميكرولتر من كل عينة لبئر الفردي للELISAطبق. السماح للعينات لاحتضان في RT لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 100 ميكرولتر من سلبية (TBS فقط) وإيجابية (بياض البيض في TBS) ضوابط لالآبار في العمود الأول من كل لوحة ELISA. أيضا، إضافة 100 ميكرولتر من الضوابط الحشرات السلبية (الحشرات لا تحمل علامات) إلى 8 آبار في العمود الأخير من كل لوحة (الشكل 1). السماح للعينات التحكم لاحتضان في RT لمدة 1 ساعة. لاحظ أن النموذج المقدم في الشكل رقم 1 هو القالب نستخدمها لفحوصات موحدة لدينا. وضع العينات في الآبار متروك للسلطة التقديرية للباحث. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل كل بئر ثلاث مرات مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) -tween ثم إضافة 50 ميكرولتر من أرنب مكافحة الدجاج مفتش / IGY مترافق مع الفجل البيروكسيديز المخفف 1: 10000 في 1٪ محلول الحليب واحتضان لمدة 1 ساعة على RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل كل بئر ثلاث مرات مع PBS-توين وإضافة 50 ميكرولتر من tetramethylbenzidine (TMB) الركيزة إلى كل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 10 دقيقة، وقراءة الآبارمع معمل صفيحة ميكروسكوبية وضعت في طول موجي 650 نانومتر. </li></ol></li></ol><img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/53693/53693fig1.jpg" /> الشكل 1. رسم تخطيطي يظهر التسميات جيدا موحدة تستخدم لنموذجي 96 جيدا ELISA صفيحة ميكروسكوبية. كل لوحة تحتوي على 7 آبار مخصصة لضوابط السلبية المالحة تريس مخزنة (TBS)، وهي مخصصة بشكل جيد لعنصر تحكم البروتين الإيجابية (نقاط البيع على Ctrl)، 80 الآبار الفردية المخصصة للحشرات استعادت (نموذج 1 ... 80)، و 8 آبار مخصصة لتحمل أية علامات (السلبية) الضوابط الحشرات (NEG السيطرة 1 ... 8). <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53693/53693fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> 2. الخارجية مارك، الاحتفاظ، والكشف الداخلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإجراء بمناسبة الخارجي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الحشرات من الفائدة (ن ≈ 100الأفراد) من مستعمرة المختبر أو من مجال ومكان إلى قسمين 1.0 L حاويات من البلاستيك مع وجود ثقب قطره 2.5 سم لكمات من جانب كل حاوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رش الحشرات في الحاوية الأولى مع 1.0 مل من درهم 2 O (العلاج السيطرة السلبية) باستخدام البخاخات الطبية. رش الحشرات في الحاويات الثانية مع 1.0 مل من محلول 5.0٪ من بياض البيض والدجاج باستخدام البخاخات الطبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق خرطوم من البخاخات لمنفذ الهواء المختبرات القياسية ثم قم بإدراج الفم من البخاخات إلى 2.5 سم حفرة من الحاوية. ثم، بدوره على منفذ الهواء تدريجيا حتى تنتج البخاخات بخار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مواصلة رش (وسم) حتى تم الاستغناء عن حل بياض البيض (حوالي 2-5 دقائق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة البخاخات ووضع الفلين في حفرة من الحاويات البلاستيكية. السماح للحشرات على الوقوف في RT حتى جفت الحل تماما. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علامة الخارجية إجراء الاحتفاظ<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع كل معاملة الحشرات الجافة في وعاء منفصل تربية نظيفة لتجنب التعرض لمزيد من العلامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الغذاء والماء إلى حاويات نظيفة للحفاظ على الحشرات خلال مدة الدراسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع لفيف (ن = 20) من الحشرات من كل معاملة يوميا وتجمد على الفور في -20 ° C. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإجراء ELISA غير المباشرة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحشرات المجمدة بشكل فردي إلى 1.6 مل أنابيب microcentrifuge وإضافة 1.0 مل من TBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقع العينات لمدة 1 ساعة على مجموعة شاكر المداري في 120 دورة في الدقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة عناصر تحكم السلبية والإيجابية كما هو موضح في الخطوة 1.3.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد النقع، ماصة قسامة 100 ميكرولتر من كل عينة في واحدة من 80 بئرا عينة المعينة على 96 الجديدة جيدا لوحة ELISA كما هو مبين في الشكل 1 السماح للعينات لاحتضان لمدة 1 ساعة على RT (ملاحظة: في microplates يمكن أيضا أن تكون O المحتضنة / N عند 4 درجات مئوية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الآبار ثلاث مرات معPBS-توين ثم قم بإضافة 300 ميكرولتر من الفوسفات مخزنة المالحة التي تحتوي على 1٪ ألبومين المصل البقري (PBS-BSA) إلى كل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 30 دقيقة في RT يغسل مرتين مع PBS-توين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 ميكرولتر من أرنب مكافحة البيض الأجسام المضادة الأولية الألبومين المخفف 1: 8000 في برنامج تلفزيوني BSA-Silwet (0.05٪) إلى كل بئر واحتضان لمدة 1 ساعة على RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل كل بئر ثلاث مرات مع PBS-توين ثم إضافة 50 ميكرولتر من الماعز المضادة للأرنب مفتش مترافق مع الفجل البيروكسيديز المخفف 1: 2000 في برنامج تلفزيوني BSA-Silwet (0.05٪) لمدة 1 ساعة على RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل كل بئر ثلاث مرات مع PBS-توين وإضافة 50 ميكرولتر من TMB الركيزة إلى كل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 10 دقيقة، وقراءة الآبار مع معمل صفيحة ميكروسكوبية وضعت في طول موجي 650 نانومتر. </li></ol></li></ol> تحليل 3. البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب قيمة الامتصاصية متوسط ​​من 8 الحشرات سيطرة سلبية على كل لوحة ELISA ثم حساب الانحراف المعياري استنادا إلى ضوابط السلبية المجمعة جيئة وذهابام كل من لوحات ELISA لدراسة معينة 12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة ست مرات الانحراف المعياري المجمعة إلى الوسط التي تم الحصول عليها عن كل لوحة ELISA للحصول على قيمة العتبة إيجابية ELISA. يعتبر أي عينة الحشرات ذات العوائد قيمة الامتصاصية مساوية أو أكبر من هذه القيمة أن تكون إيجابية لوجود علامة البروتين. </li></ol>

ذكر الأسماء التجارية أو المنتجات التجارية في هذا المنشور هو فقط لغرض توفير معلومات محددة، ولا يعني توصية أو تأييد من قبل وزارة الزراعة الأمريكية. USDA هو مزود تكافؤ الفرص والعمل.

وقد وصفت الإجراء immunomarking البروتين المفصلية أول ما يقرب من ربع قرن منذ 9. منذ ذلك الحين، تم تكييفها الإجراء لدراسة أنماط تشتت تشكيلة واسعة من المفصليات باستخدام تدار داخليا وخارجيا مفتش / IgYs. وقد أثبتت هذه البروتينات علامات ثابتة لمجموعة واسعة من أنواع الحشرات اخ...

تتبع حركة الآفات المفصلية، وأعداء الطبيعية (الطفيليات والمفترسات)، والملقحات في الطبيعة أمر ضروري لفهم أفضل لكيفية تحسين خدمات النظام الإيكولوجي. المكون الرئيسي لمعظم أنواع البحوث تشتت هو وجود طريقة يمكن الاعتماد عليها لوضع علامة على المفصلية (ق) من الفائدة. مجموعة متنوعة من المواد (على سبيل المثال، والدهانات والأصباغ والأتربة الملونة، والعلامات، والعناصر النادرة، البروتينات) وقد استخدمت للاحتفال المفصليات لتقييم ديناميات السكان، وتشتيت قدراته، والتغذية والسلوكيات، والتفاعلات البيئية الأخرى 1،2. ومدى ملاءمة علامة تستخدم لتفريق أي بحث معين يتوقف على نوع الدراسة التي تجري. هناك ثلاثة تصنيفات واسعة لوضع علامات المفصليات: (1) علامة الإفراج الاستيلاء (MRR)، (2) علامة التقاط، و (3) علامة التقاط النفس. للبحث علامة الافراج عن الاستيلاء، المحقق عادة يصادف المفصليات جماعي في laboratoراي والنشرات لهم في نقطة مركزية في هذا المجال. ثم استعادت المفصليات في مختلف فترات الزمنية والمكانية باستخدام أجهزة جمع مختلفة (على سبيل المثال، شبكة الاجتياح، فراغ، فخ لزجة) 3،4،5. ثم يتم فحص العينات استعاد لعلامة محددة للتمييز الإفراج عن أفراد الأصلي. للبحث علامة التقاط، المحقق عادة تنطبق علامة مباشرة في مجال استخدام معدات الرش (على سبيل المثال، بخاخ على ظهره، والازدهار وبخاخ فوهة). أفضل علامات للبحوث علامة التقاط غير مكلفة وتطبيقها بسهولة على الموائل والمفصلية ل. للبحث علامة التقاط النفس، المحقق عادة تنطبق علامات إلى الطعم المفصلية 6،7 أو عش مدخل 8. في المقابل، فإن المفصلية يمثل نفسه داخليا من قبل التهام الطعم ملحوظ أو خارجيا من قبل &quot;تنظيف&quot; حتى مقابل المارك فور خروجها من العش. كما ذكر أعلاه، فقد كان لنا العديد من أنواع علاماتإد وضع علامة مجموعة متنوعة من الأنواع المفصلية. ومع ذلك، عدد قليل جدا مفيدة للجميع ثلاثة من هذه الفئات البحوث النثر. وكان التطور الإجراء البروتين immunomarking انجازا كبيرا لوسم الحشرات. Immunomarking يضع تسمية البروتين على المفصليات سواء داخليا أو خارجيا والتي، بدورها، تم الكشف من قبل انزيم مرتبط المناعي فحص محدد لمكافحة البروتين (ELISA). وكانت أول علامات هذا البروتين المناعي تستخدم الأرانب (مفتش) والدجاج مفتش / IGY 9،10. فإنها تبين أن علامات فعالة جدا لMRR والبحوث علامة التقاط النفس (انظر المناقشة). للأسف، والبروتينات مفتش / IGY مكلفة وبالتالي فهي ليست عملية للبحث علامة التقاط ومعظم أنواع البحوث علامة التقاط النفس. وفي وقت لاحق، تم تطوير الجيل الثاني من ELISAs كشف عن البروتين للبروتينات الموجودة في بياض البيض الدجاج (الزلال)، حليب البقر (الكازين) وحليب الصويا (التربسين البروتين المانع). كل فحص حساس جدا ومحددة، وأكثرالأهم من ذلك، يستخدم البروتينات التي هي أقل تكلفة بكثير من البروتينات مفتش / IGY 11. وقد أثبتت هذه البروتينات الفعال لMRR، علامة التقاط، والبحوث علامة التقاط النفس (انظر المناقشة). في هذه المقالة، وصفنا وشرح كيفية إجراء علامة البروتين الدراسات الاحتفاظ المختبر. مثل هذه الدراسات هي المرحلة الأولى من الأبحاث اللازمة لأي نوع من الدراسة تشتت المجال. على وجه التحديد، فمن الأهمية بمكان أن المحققين أعرف كم من الوقت سيتم الاحتفاظ علامة على الأنواع المفصلية المستهدفة قبل الشروع في دراسات تشتت المجال. هنا، وصفنا وشرح كيفية داخليا وخارجيا بمناسبة الحشرات لMRR، علامة التقاط، وعلامة التقاط النفس دراسات نوع الحقل. نحن بعد ذلك شرح كيفية الكشف عن وجود علامات مع ELISAs غير المباشرة وشطيرة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Food storage container (for insect rearing)</td>
			<td>Rubbermaid/Tupperware</td>
			<td>Various sizes</td>
			<td>Various manufacturers &#38; vendors. Mesh fabric is glued in a window `</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small volume nebulizer (Micro Mist)</td>
			<td>Teleflex-Hudson RCI</td>
			<td>1881</td>
			<td>Available online and in medical supply shops. Other brands will work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes, 1.6 ml w/cap</td>
			<td>Continental Lab Products</td>
			<td>4445.X</td>
			<td>Any similar type will work. We prefer brands that have easy to open lids.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam storage box for microcentrifuge tubes (5x20 grid)</td>
			<td>RPI Corp.</td>
			<td>145746</td>
			<td>This design is nice because it doesn&#39;t crowd the tubes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispenser, repeater</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>4982000322</td>
			<td>Anything similar will help speed up the dispensing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pestles, plastic disposable tissue grinders, 1.5 mL</td>
			<td>Kimble Chase</td>
			<td>749521-1500</td>
			<td>Available with various vendors. Pestles can be cleaned and autoclaved for reuse.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Falcon ELISA plates, 96-well (flat bottom)</td>
			<td>BD</td>
			<td>351172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovation pipette, manual (20-200 &#181;l)</td>
			<td>VistaLab</td>
			<td>1057-0200 or 1070-0200</td>
			<td>Any similar type will work. This model is ergonomic.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reservoirs, sterile reagent</td>
			<td>VistaLab</td>
			<td>4054-1000</td>
			<td>Anything similar will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic pipette, 8-channel (50-1200 &#181;l) (Biohit eLine)</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>730391</td>
			<td>If you had to pick one electronic model, this size is most useful.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic pipette, 8-channel (10-300 &#181;l) (Biohit eLine)</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>730361</td>
			<td>Anything similar will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manifold, multiwell plate washer (8-position, straight)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z369802&#160;</td>
			<td>Anything similar will work for manual plate washing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader with absorbance detection</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>SpectraMax 250</td>
			<td>Anything similar will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken IgG/IgY</td>
			<td>United States Biological</td>
			<td>I1903-15R</td>
			<td>Also available from other sources</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg whites</td>
			<td>Grocery store</td>
			<td>&#8220;All Whites&#8221;, &#8220;Egg Beaters&#8221;, etc.</td>
			<td>Mix 5 mL with 95 mL dH2O for 5% solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris (Trizma Base)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T1503</td>
			<td>2.42 g/L to make TBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>29.22 g/L to make TBS and 8.0 g/L for PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic (Na2HPO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0876&#160;</td>
			<td>1.14 g/L for PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td>0.2 g/L for PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td>0.2 g/L for PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20, EIA grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td>Add 0.5 mL per L to PBS after salts are dissolved.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS with 1% BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3688</td>
			<td>Mix 1 packet in 1 L dH20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Chicken IgY (IgG) (whole molecule) antibody produced in rabbit (1:500)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6409</td>
			<td>Mix 100 &#181;l in 50 ml TBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry Milk, Powdered or Fresh Milk (1%)</td>
			<td>Grocery store</td>
			<td></td>
			<td>Mix 10 g with 1 L dH2O for 1% solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Chicken IgY (IgG) (whole molecule)-Peroxidase antibody produced in rabbit (1:10000)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9046</td>
			<td>Mix 100 ul in 1 L of 1% milk</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Chicken Egg Albumin antibody produced in rabbit (1:8000)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6534</td>
			<td>Dilute 125 &#181;l in 1 L PBS-BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Rabbit IgG Peroxidase Conjugate (1:2000)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6154</td>
			<td>Dilute 0.5 ml in 1 L PBS-BSA, then add 1.3 ml Silwet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vac-In-Stuff (Silwet L-77)silicon-polyether copolymer</td>
			<td>Lehle Seeds</td>
			<td>VIS-01</td>
			<td>Add as last ingredient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMB Microwell One Component Peroxidase Substrate</td>
			<td>SurModics</td>
			<td>TMBW-1000-01</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

administering and detecting protein marks on arthropods for dispersal research

وغالبا ما يتطلب مراقبة الحركة المفصلية إلى فهم أفضل لديناميات المرتبطة السكاني وأنماط النثر، وتفضيلات النبات المضيف، والتفاعلات البيئية الأخرى. وعادة ما تعقب المفصليات في الطبيعة عن طريق وضع علامات عليها مع علامة فريدة من نوعها ومن ثم إعادة جمعها عبر الزمان والمكان لتحديد قدرات تشتتهم. بالإضافة إلى علامات المادية الفعلية، مثل الغبار الملون أو الطلاء، وأثبتت أنواع مختلفة من البروتينات فعالة جدا لوسم المفصليات للبحث البيئي. البروتينات يمكن أن تدار داخليا و / أو خارجيا. ويمكن بعد ذلك يتم الكشف عن البروتينات على المفصليات استعادت مع انزيم مرتبط المناعي فحص بروتين معين (ELISA). نحن هنا وصف بروتوكولات للخارجيا وداخليا علامات المفصليات مع البروتين. وأظهرت مثالين تجريبية بسيطة: (1) علامة البروتين الداخلية التي أدخلت على حشرة من خلال توفير نظام غذائي التخصيب من البروتين و (2) علامة البروتين الخارجية موضعيا لpplied لحشرة باستخدام البخاخات الطبية. نحن ثم تتصل دليل خطوة بخطوة من الساندويتش وطرق ELISA غير المباشرة المستخدمة للكشف عن علامات البروتين على الحشرات. في هذه المظاهرة، وتناقش مختلف جوانب اقتناء وكشف عن علامات البروتين على المفصليات للعلامة الافراج عن الاستيلاء، علامة التقاط، وأنواع علامة التقاط النفس من البحوث، جنبا إلى جنب مع مختلف الطرق التي كان الإجراء immunomarking تكييفها لتلائم مجموعة واسعة من أهداف البحث.

الداخلية بمناسبة: وأظهرت نتائج الاختبار الداخلي الاحتفاظ علامة في الشكل 2A. كانت محسوبة ELISA قيمة العتبة الحرجة 0.054. عموما (جميع التواريخ عينة أربعة مجتمعة)، والحشرات علاجها بد?...

Watch this Scientific Journal Video about Administering and Detecting Protein Marks on Arthropods for Dispersal Research at JoVE.com

Administering and Detecting Protein Marks on Arthropods for Dispersal Research

Proteins are often used to mark arthropods for dispersal research. Methods for administering internal and external protein marks on arthropods are demonstrated. Protein mark detection techniques, either through indirect or sandwich enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs), are also illustrated.

إدارة والكشف عن علامات البروتين على المفصليات للبحوث تشتت

Monitoring arthropod movement is often required to better understand associated population dynamics, dispersal patterns, host plant preferences, and other ...

administering-detecting-protein-marks-on-arthropods-for-dispersal

Research

JoVE Journal

Environment

7.3K Views.  Arid-Land Agricultural Research Center. Proteins are often used to mark arthropods for dispersal research. Methods for administering internal and external protein marks on arthropods are demonstrated. Protein mark detection techniques, either through indirect or sandwich enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs), are also illustrated. 

Video: Administering and Detecting Protein Marks on Arthropods for Dispersal Research

Modification and Application of a Leaf Blower-vac for Field Sampling of Arthropods

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropod populations in rice. When used in combination with an enclosure, application of this sampling device provides absolute estimates of the populations of arthropods as numbers per standardized sampling area. The sampling efficiency depends critically on the sampling duration. In a mature rice crop, a two-minute sampling in an enclosure of 0.13 m2 yields more than 90% of the arthropod population. The device also allows sampling of arthropods dwelling on the water surface or the soil in rice paddies, but it is not suitable for sampling fast flying insects, such as predatory Odonata or larger hymenopterous parasitoids. The modified blower-vac is simple to construct, and cheaper and easier to handle than traditional suction sampling devices, such as D-vac. The low cost makes the modified blower-vac also accessible to researchers in developing countries.

Assessment of arthropod abundance in crops is critical for investigating population dynamics and species interactions. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropods in rice.

تعديل وتطبيق ورقة المنفاخ-VAC لأخذ العينات مجال المفصليات

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the ...

A Flow-through Exposure System for Evaluating Suspended Sediments Effects on Aquatic Life

This paper describes the Fish Larvae and Egg Exposure System (FLEES). The flow-through exposure system is used to investigate the effects of suspended sediment on various aquatic species and life stages in the laboratory by using pumps and automating delivery of sediment and water to simulate suspension of sediment. FLEES data are used to develop exposure-response curves between the effects on aquatic organisms and suspended sediment concentrations at the desired exposure duration. The effects data are used to evaluate management practices used to reduce the interactions between aquatic organisms and anthropogenic causes of suspended sediments. The FLEES is capable of generating total suspended solids (TSS) concentrations as low as 30 to as high as 800 mg/L, making this system an ideal choice for evaluating the effects of TSS resulting from many activities including simulating low ambient levels of TSS to evaluating sources of suspended sediments from dredging operations, vessel traffic, freshets, and storms.

A robust and flexible flow-through exposure system designed to maintain sediment in suspension is presented. The system is used to investigate the effects of suspended sediment on various aquatic species and life stages in the laboratory.

نظام التعرض تدفق من خلال لتقييم موقوف الرواسب التأثيرات على الحياة المائية

This paper describes the Fish Larvae and Egg Exposure System (FLEES). The flow-through exposure system is used to investigate the effects of suspended ...

Experimental Protocol for Detecting Cyanobacteria in Liquid and Solid Samples with an Antibody Microarray Chip

Global warming and eutrophication make some aquatic ecosystems behave as true bioreactors that trigger rapid and massive cyanobacterial growth; this has relevant health and economic consequences. Many cyanobacterial strains are toxin producers, and only a few cells are necessary to induce irreparable damage to the environment. Therefore, water-body authorities and administrations require rapid and efficient early-warning systems providing reliable data to support their preventive or curative decisions. This manuscript reports an experimental protocol for the in-field detection of toxin-producing cyanobacterial strains by using an antibody microarray chip with 17 antibodies (Abs) with taxonomic resolution (CYANOCHIP). Here, a multiplex fluorescent sandwich microarray immunoassay (FSMI) for the simultaneous monitoring of 17 cyanobacterial strains frequently found blooming in freshwater ecosystems, some of them toxin producers, is described. A microarray with multiple identical replicates (up to 24) of the CYANOCHIP was printed onto a single microscope slide to simultaneously test a similar number of samples. Liquid samples can be tested either by direct incubation with the antibodies (Abs) or after cell concentration by filtration through a 1- to 3-&#956;m filter. Solid samples, such as sediments and ground rocks, are first homogenized and dispersed by a hand-held ultrasonicator in an incubation buffer. They are then filtered (5 - 20 &#956;m) to remove the coarse material, and the filtrate is incubated with Abs. Immunoreactions are revealed by a final incubation with a mixture of the 17 fluorescence-labeled Abs and are read by a portable fluorescence detector. The whole process takes around 3 h, most of it corresponding to two 1-h periods of incubation. The output is an image, where bright spots correspond to the positive detection of cyanobacterial markers.

Experimental Protocol for Detecting Cyanobacteria in Liquid and Solid Samples with an Antibody Microarray Chip

The presence of cyanobacterial toxins in fresh water reservoirs for human consumption is a major concern for water management authorities. To evaluate the risk of water contamination, this article describes an protocol for the in-field detection of cyanobacterial strains in liquid and solid samples by using an antibody microarray chip.

بروتوكول تجريبي للكشف<em&gt; البكتيريا الزرقاء</em&gt; في العينات السائلة والصلبة مع الأجسام المضادة ميكروأري رقاقة

Global warming and eutrophication make some aquatic ecosystems behave as true bioreactors that trigger rapid and massive cyanobacterial growth; this has ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of scientific publications address microplastic pollution of the sea surface. The protocol below describes the methodology for sampling, sample preparation, separation and chemical identification of microplastic particles. A manta net fixed on an &#187;A frame&#171; attached to the side of the vessel was used for sampling. Microplastic particles caught in the cod end of the net were separated from samples by visual identification and use of stereomicroscopes. Particles were analyzed for their size using an image analysis program and for their chemical structure using ATR-FTIR and micro FTIR spectroscopy. The described protocol is in line with recommendations for microplastics monitoring published by the Marine Strategy Framework Directive (MSFD) Technical Subgroup on Marine Litter. This written protocol with video guide will support the work of researchers that deal with microplastics monitoring all over the world.

The protocol below describes the methodology for: microplastics sampling on the sea surface, separation of microplastic and chemical identification of particles. This protocol is in line with the recommendations for microplastics monitoring published by the MSFD Technical Subgroup on Marine Litter.

بروتوكول للجزيئات البلاستيك الصغيرة أخذ العينات على سطح البحر وتحليل عينة

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

RGB and Spectral Root Imaging for Plant Phenotyping and Physiological Research: Experimental Setup and Imaging Protocols

Better understanding of plant root dynamics is essential to improve resource use efficiency of agricultural systems and increase the resistance of crop cultivars against environmental stresses. An experimental protocol is presented for RGB and hyperspectral imaging of root systems. The approach uses rhizoboxes where plants grow in natural soil over a longer time to observe fully developed root systems. Experimental settings are exemplified for assessing rhizobox plants under water stress and studying the role of roots. An RGB imaging setup is described for cheap and quick quantification of root development over time. Hyperspectral imaging improves root segmentation from the soil background compared to RGB color based thresholding. The particular strength of hyperspectral imaging is the acquisition of chemometric information on the root-soil system for functional understanding. This is demonstrated with high resolution water content mapping. Spectral imaging however is more complex in image acquisition, processing and analysis compared to the RGB approach. A combination of both methods can optimize a comprehensive assessment of the root system. Application examples integrating root and aboveground traits are given for the context of plant phenotyping and plant physiological research. Further improvement of root imaging can be obtained by optimizing RGB image quality with better illumination using different light sources and by extension of image analysis methods to infer on root zone properties from spectral data.

An experimental protocol is presented for assessment of soil grown plant root systems with RGB and hyperspectral imaging. Combination of RGB image time series with chemometric information from hyperspectral scans optimizes insights into plant root dynamics.

RGB والتصوير الطيفي الجذر فينوتيبينج النباتية والبحوث الفسيولوجية: الإعداد التجريبية والتصوير البروتوكولات

Better understanding of plant root dynamics is essential to improve resource use efficiency of agricultural systems and increase the resistance of crop ...

Basic Research in Plasma Medicine - A Throughput Approach from Liquids to Cells

In plasma medicine, ionized gases with temperatures close to that of vertebrate systems are applied to cells and tissues. Cold plasmas generate reactive species known to redox regulate biological processes in health and disease. Pre-clinical and clinical evidence points to beneficial effects of plasma treatment in the healing of chronic ulcer of the skin. Other emerging topics, such as plasma cancer treatment, are receiving increasing attention. Plasma medical research requires interdisciplinary expertise in physics, chemistry, and biomedicine. One goal of plasma research is to characterize plasma-treated cells in a variety of specific applications. This includes, for example, cell count and viability, cellular oxidation, mitochondrial activity, cytotoxicity and mode of cell death, cell cycle analysis, cell surface marker expression, and cytokine release. This study describes the essential equipment and workflows required for such research in plasma biomedicine. It describes the proper operation of an atmospheric pressure argon plasma jet, specifically monitoring its basic emission spectra and feed gas settings to modulate reactive species output. Using a high-precision xyz-table and computer software, the jet is hovered in millisecond-precision over the cavities of 96-well plates in micrometer-precision for maximal reproducibility. Downstream assays for liquid analysis of redox-active molecules are shown, and target cells are plasma-treated. Specifically, melanoma cells are analyzed in an efficient sequence of different consecutive assays but using the same cells: measurement of metabolic activity, total cell area, and surface marker expression of calreticulin, a molecule important for the immunogenic cell death of cancer cells. These assays retrieve content-rich biological information about plasma effects from a single plate. Altogether, this study describes the essential steps and protocols for plasma medical research.

A high-throughput cold physical plasma treatment protocol of liquids and cells is shown. It involves setting up different feed gas compositions for plasma ignition, measuring the plasma&#39;s emission spectra, and the subsequent analysis of liquids and cellular activity after plasma treatment.

البحوث الأساسية في الطب البلازما-نهج إنتاجية من السوائل للخلايا

In plasma medicine, ionized gases with temperatures close to that of vertebrate systems are applied to cells and tissues. Cold plasmas generate reactive ...

Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

Dimethylated thioarsenicals such as dimethylmonothioarsinic acid (DMMTAV) and dimethyldithioarsinic acid (DMDTAV), which are produced by the metabolic pathway of dimethylarsinic acid (DMAV) thiolation, have been recently found in the environment as well as human organs. DMMTAV and DMDTAV can be quantified to determine the ecological effects of dimethylated thioarsenicals and their stability in environmental media. The synthesis method for these compounds is unstandardized, making replicating previous studies challenging. Furthermore, there is a lack of information about storage techniques, including storage of compounds without species transformation. Moreover, because only limited information about synthesis methods is available, there may be experimental difficulties in synthesizing standard chemicals and performing quantitative analysis. The protocol presented herein provides a practically modified synthesis method for the dimethylated thioarsenicals, DMMTAV and DMDTAV, and will help in the quantification of species separation analysis using high performance liquid chromatography in conjunction with inductively coupled plasma mass spectrometry (HPLC-ICP-MS). The experimental steps of this procedure were modified by focusing on the preparation of chemical reagents, filtration methods, and storage.

Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

This article presents modified experimental protocols for dimethylmonothioarsinic acid (DMMTAV) and dimethyldithioarsinic acid (DMDTAV) synthesis, inducing dimethylarsinic acid (DMAV) thiolation through mixing of DMAV, Na2S, and H2SO4. The modified protocol provides an experimental guideline, thereby overcoming limitations of the synthesis steps that could have caused experimental failures in quantitative analysis.

إعداد دممتاالخامس ودمدتاV استخدام DMAالخامس للتطبيقات البيئية: توليف وتنقيتها، وتأكيد

Dimethylated thioarsenicals such as dimethylmonothioarsinic acid (DMMTAV) and dimethyldithioarsinic acid (DMDTAV), which are produced by the metabolic ...

Experimental Protocol for Detecting Mitochondrial Function in Hepatocytes Exposed to Organochlorine Pesticides

This paper presents detailed methods on detecting hepatic mitochondrial function for a better understanding the cause of metabolic disorders caused by environmental organochlorine pesticides (OCPs) in hepatocytes. HepG2 cells were exposed to &#946;-hexachlorocyclohexane (&#946;-HCH) for 24 h at an equivalent dose of internal exposure in general population. Ultrastructure in hepatocytes was examined by transmission electron microscopy (TEM) to show the damage of mitochondria. Mitochondrial function was further evaluated by mitochondrial fluorescence intensity, adenosine 5'-triphosphate (ATP) levels, oxygen consumption rate (OCR) and mitochondrial membrane potential (MMP) in HepG2 cells incubated with &#946;-HCH. The mitochondria fluorescence intensity after stained by mitochondrial green fluorescent probe was observed with a fluorescence microscopy. The luciferin-luciferase reaction was used to determine ATP levels. The MMP was detected by the cationic dye JC-1 and analyzed under flow cytometry. OCR was measured with an extracellular flux analyzer. In summary, these protocols were used in detecting mitochondrial function in hepatocytes with to investigate mitochondria damages.

Understanding the influence of environmental organochlorine pesticides (OCPs) on mitochondrial function in hepatocytes is important in exploring the mechanism of OCPs causing metabolic disorders. This paper presents detailed methods on detecting hepatic mitochondrial function.

البروتوكول التجريبي للكشف عن وظيفة الميتوكوندريا في خلايا الكبد المعرضة لمبيدات الآفات أورجاكلوري

This paper presents detailed methods on detecting hepatic mitochondrial function for a better understanding the cause of metabolic disorders caused by ...

The Hawaii Protocol for Scientific Monitoring of Coffee Berry Borer: a Model for Coffee Agroecosystems Worldwide

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at capturing and quantifying the dynamics and impact of this invasive insect pest as well as the development of its host plant across a heterogeneous landscape. The cornerstone of this comprehensive monitoring system is timely georeferenced data collection on CBB movement, coffee berry infestation, mortality by the fungus Beauveria bassiana, and coffee plant phenology via a mobile electronic data recording application. This electronic data collection system allows field records to be georeferenced through built-in global positioning systems, and is backed by a network of weather stations and records of farm management practices. Comprehensive monitoring of CBB and host plant dynamics is an essential part of an area-wide project in Hawaii to aggregate landscape-level data for research to improve management practices. Coffee agroecosystems in other parts of the world that experience highly variable environmental and socioeconomic factors will also benefit from implementing this protocol, in that it will drive the development of customized integrated pest management (IPM) to manage CBB populations.

Comprehensive monitoring of coffee berry borer and host plant dynamics is essential for aggregating landscape-level data to improve management of this invasive pest. Here, we present a protocol for scientific monitoring of coffee berry borer movement, infestation, mortality, coffee plant phenology, weather, and farm management via a mobile electronic data recording application.

البروتوكول هاواي للرصد العلمي للحفار بيري البن: نموذج للنظم الإيكولوجية الزراعية البن في العالم

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at ...

Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are also a useful scientific model to study motion vision and flight dynamics in a controlled laboratory setting. As the larvae develop in organically polluted water, they are useful models for investigating investment in microbial immunity. While large scale commercial breeding for agriculture already occurs, there are no standardized protocols for maintaining captive populations for scientific studies. This is important as commercial captive breeding programs focusing on mass output during peak pollination periods may fail to provide a population that is consistent, stable and robust throughout the year, as is often needed for other research purposes. Therefore, a method to establish, maintain and refresh a captive research population is required. Here, we describe the utilization of an artificial hibernation cycle, in addition to the nutritional and housing requirements, for long term maintenance of Eristalis tenax. Using these methods, we have significantly increased the health and longevity of captive populations of E. tenax compared to previous reports. We furthermore discuss small scale rearing methods and options for optimizing yields and manipulating population demographics.

Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

The overall goal of these procedures is to establish, maintain and refresh a captive population of Eristalis tenax in a research setting.

تربية والصيانة الطويلة الأجل من هوفيرفليس تيناكس اريستاليس "البحوث والدراسات"

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are ...