نعترف مركز علم الوراثة انواع معينة لC. سلالات ايليجانس. وقدمت الدعم المالي من قبل معهد بحوث فوكس تيري. علينا أيضا أن نعترف الدعم الممنوح للEP من Rolande ومارسيل غوسلين العليا Studentship ومنحة التدريب CIHR / FRSQ في FRN53888 أبحاث السرطان من برنامج التدريب أبحاث السرطان ماكجيل المتكاملة.

1. إعداد الكواشف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد وسائل الاعلام للC. ايليجانس النمو (في هذه الحالة، والحيوانات البرية من نوع والحيوانات flcn-1 (ok975) متحولة). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استعد تعديلها إلا Bacto-ببتون (MYOB) مزيج Youngren والجافة التي تحتوي على 5.5 غرام من تريس حمض الهيدروكلوريك، و 2.4 غرام من قاعدة تريس، 31 غرام من Bactopetone، 20 غرام من كلوريد الصوديوم و 0.08 غرام من الكولسترول. تخلط جيدا مع اهتزاز. ملاحظة: هذا المزيج هو كاف لإعداد 10 L من MYOB المتوسطة. ملاحظة: يمكن استخدام عادي متوسط ​​النمو (NGM) لوحات بدلا من لوحات MYOB 27. ومع ذلك، فإن نفس النوع من لوحات يجب أن تستخدم لمقارنات صحيحة بين السلالات وبين يكرر مستقلة. في هذا البروتوكول، ونحن تستخدم فقط لوحات MYOB. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 1 L من MYOB المتوسطة وذلك بإضافة 6 غرام من MYOB المزيج الجاف، 17 غرام من أجار وجعل ما يصل الى 1 L مع H 2 O والأوتوكلاف لمدة 45 دقيقة في 122 درجة مئوية. صب لوحات واسمحوا الجافة في RT لمدة 2 أيام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام تقنية معقمة، تطعيم 100 مل من cultuإعادة من مرق LB المتوسطة مع E. البكتيريا القولونية OP50 وتنمو O / N عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحات MYOB البذور مع E. البكتيريا القولونية OP50. السماح لها أن تنمو في RT لمدة 48 ساعة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استعدادا لdownregulation الجينات باستخدام رني <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد MYOB لوحات رني الرضاعة. المضي قدما كما هو الحال في الخطوات 1.1.1 و1.1.2. بعد التعقيم، والسماح للمتوسطة ليبرد إلى حوالي 55 درجة مئوية، وإضافة 1 مل من 1 M الآيزوبروبيل β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) و 1 مل من 100 ملي الأمبيسلين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خط E. القولونية HT115 البكتيريا تحولت مع البلازميد، والذي يعبر إما السيطرة أو flcn EV-1 رني خاص على الأمبيسلين (50 ميكروغرام / مل) / تتراسايكلين (15 ميكروغرام / مل) أجار لوحات. تنمو ثقافة O / N عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار المستعمرات وتطعيم E. القولونية HT115 البكتيريا تحولت مع البلازميد الذي يعبر إما السيطرة أو flcn EV-1 رني محددة وتنمو الثقافة في LB / الأمبيسلين (50 ميكروغرام / مل) والمتوسطة O / N عند 37 &amp; #176؛ C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحات البذور مع E. البكتيريا القولونية HT115 EV أو HT115 flcn-1 البكتيريا رني. ملاحظة: حافظ على لوحات 48 ساعة على RT قبل الاستخدام. إذا رني ضربة قاضية من قبل الرضاعة في فعالية استخدام وسائل أخرى للتسليم DS-RNA 28. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حمل الاكسدة باستخدام الباراكوات (PQ): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد العازلة M9 عن طريق خلط 3 غرام من KH 2 PO 4 و 6 غرام من نا 2 هبو 4، 5 غرام من كلوريد الصوديوم و 0.25 غرام من MgSO 4 · 7 H 2 O. حتى تصل الى 1 L مع الماء المقطر. حل الأوتوكلاف لمدة 45 دقيقة في 122 درجة مئوية، وتخزين الزجاجات على RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم الفحص، وإعداد حل M9 / PQ التي تحتوي على. لهذا البروتوكول، استخدم 100 ملي PQ (0.1028 غرام من PQ الذائبة في 4 مل من العازلة M9 يسد كامل 96 لوحات جيدا مع 40 ميكرولتر من M9 / PQ لكل بئر). تنبيه: PQ هو مركب خطرة وشديدة السمية. التعامل وفقا للمبادئ التوجيهية الملائمة. ملاحظة: عند تشغيل أولا الجديدالقطار أو شرطا جديدا، فمن المستحسن لفحص البقاء على قيد الحياة في زيادة تركيزات PQ لتحديد أفضل تركيز لاستخدامها من أجل قتل الحيوانات في غضون 7-10 ساعة. </li></ol></li></ol> 2. إعداد العمر متزامنة-L4 السكان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 20 المنحرفين الكبار حامل لوحة MYOB جديدة مع المصنف E. البكتيريا القولونية OP50. إعداد لوحات عدة استنادا إلى عدد من الديدان اللازمة أثناء الفحص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمح لهم لوضع البيض لمدة 6 ساعة ثم استخدام دودة سلك البلاتين الإختيار إزالة الأمهات. تحقق لوحات تحت المجهر لتقدير عدد البيض الذي تضعه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للفقس البيض وتنمو عند 20 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. في هذا الوقت، والحيوانات في أواخر L4 / الشباب مرحلة البلوغ. اختيار الحيوانات نفس المرحلة ونقل إلى الآبار التي تحتوي على حل PQ. ملاحظة: منذ 48 ساعة حضانة ينطبق فقط على المسوخ التي تنمو على نحو مماثل لالبرية من نوع الحيوانات، فمن المهم رصد التنمويةمعدل طفرات اختبار حديثا لضمان توافقه مع معدل التنمية النوع البري، وإلا، يجب استخدام الجداول الزمنية الأخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدلا من ذلك، استخدام تقنيات التزامن. توليد السكان متزامنة من الديدان L1 اليرقات باستخدام محلول هيبوكلوريت (25 مل من الماء و 125 مل من 5.25٪ هيبوكلوريت الصوديوم، و 50 مل من 4 M هيدروكسيد الصوديوم؛ التفاف زجاجة مع رقائق الألومنيوم لعزل من الضوء). ومع ذلك، لهذا الاختبار، فمن غير المستحسن، لأن التبييض المكثف قد تؤثر على سلوك الحيوانات أثناء الفحص. تنبيه: التعامل مع محلول هيبوكلوريت فقا للمبادئ التوجيهية. ملاحظة: عند استخدام رني إلى أسفل تنظيم الجينات في المصالح، مزامنة المنحرفين كما هو موضح في الباب 2، باستثناء نقل الأمهات إلى لوحات رني المصنف مع البكتيريا محددة رني. عندما ضربة قاضية مع رني ضعيفة، فمن المستحسن التغذية لأجيال متعددة. </li></ol> 3. المسرحية الإجهاد التأكسدي المقاومة الفحص &lt;/ P&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 40 ميكرولتر من 100 ملي PQ الحل (إعداد الطازجة) إلى كل بئر من 96 لوحة جيدا. استخدام لا يقل عن 12 بئرا كما يعيد كل حالة (العلاج، متحولة، وما إلى ذلك). باستخدام دودة اختيار سلك البلاتين، ونقل 5-8 الحيوانات L4 اليرقات على كل جانب مما يدل على وقت البدء ووقت الانتهاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند بدء شرط آخر، لاحظ وقت البدء ووقت الانتهاء. وضع لوحة في 20 درجة مئوية في فترة حضانة بين نقل الديدان وسجل الحيوانات النافقة بعد ساعة من وقت البدء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مجهر تشريح، عد بقاء كل ساعة. يهز بلطف لوحة قبل البدء في العد. تشير الديدان التي لا تتحرك، حتى بعد اكتشاف ضوء عالي الكثافة، والحيوانات النافقة. يشير أيضا إلى عدد من الحيوانات على قيد الحياة. ملاحظة: عند النظر إلى شكل دودة، والذيول وحركة الرأس في تضخم عالية، تساعد في تحديد الديدان الميتة من على قيد الحياة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذه الخطوة كل ساعة حتى معظم الديدان قد لقوا حتفهم. </li></ol> &lt;ص الطبقة = &quot;jove_title&quot;&gt; 4. تقرير من البقاء على قيد الحياة نسبة في كل مرة نقطة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب العدد الكلي للحيوانات في حالة بإضافة العدد الكلي للحيوانات نقلها إلى كل جانب. تجاهل الحيوانات التي تضررت أو قتل على النقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل نقطة زمنية، وحساب العدد الكلي للحيوانات الميتة في حالة (مجموع الحيوانات النافقة في 12 بئرا). لكل نقطة زمنية، وحساب النسبة المئوية للموت (عدد الحيوانات النافقة مقسوما على العدد الكلي للحيوانات ومضروبا 100) ونسبة البقاء على قيد الحياة (100 ناقص الموت في المئة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذا الاختبار 3 مرات على الأقل مستقلة. </li></ol>

<ol>
	<li>Schieber, M., Chandel, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS+function+in+redox+signaling+and+oxidative+stress.">ROS function in redox signaling and oxidative stress.</a> Curr Biol. 24, R453-R462 (2014).</li><li>Alfadda, A. A., Sallam, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+in+health+and+disease.">Reactive oxygen species in health and disease.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 936486 (2012).</li><li>Finkel, T., Holbrook, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidants,+oxidative+stress+and+the+biology+of+ageing.">Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing.</a> Nature. 408, 239-247 (2000).</li><li>Di Carlo, M., Giacomazza, D., Picone, P., Nuzzo, D., San Biagio, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+oxidative+stress+and+mitochondrial+dysfunction+the+key+players+in+the+neurodegenerative+diseases.">Are oxidative stress and mitochondrial dysfunction the key players in the neurodegenerative diseases.</a> Free Radic Res. 46, 1327-1338 (2012).</li><li>Gandhi, S., Abramov, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+oxidative+stress+in+neurodegeneration.">Mechanism of oxidative stress in neurodegeneration.</a> Oxid Med Cell Longev. 2012, 428010 (2012).</li><li>Trushina, E., McMurray, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+mitochondrial+dysfunction+in+neurodegenerative+diseases.">Oxidative stress and mitochondrial dysfunction in neurodegenerative diseases.</a> Neuroscience. 145, 1233-1248 (2007).</li><li>Touyz, R. M., Briones, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+vascular+biology:+implications+in+human+hypertension.">Reactive oxygen species and vascular biology: implications in human hypertension.</a> Hypertens Res. 34, 5-14 (2011).</li><li>Gorrini, C., Harris, I. S., Mak, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+oxidative+stress+as+an+anticancer+strategy.">Modulation of oxidative stress as an anticancer strategy.</a> Nat Rev Drug Discov. 12, 931-947 (2013).</li><li>Sosa, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+cancer:+an+overview.">Oxidative stress and cancer: an overview.</a> Ageing research reviews. 12, 376-390 (2013).</li><li>Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+Oxygen+Species+and+Aging+in+Caenorhabditis+elegans:+Causal+or+Casual+Relationship.">Reactive Oxygen Species and Aging in Caenorhabditis elegans: Causal or Casual Relationship.</a> Antioxid Redox Signal. 13, 1911-1953 (2010).</li><li>Baumeister, R., Schaffitzel, E., Hertweck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine+signaling+in+Caenorhabditis+elegans+controls+stress+response+and+longevity.">Endocrine signaling in Caenorhabditis elegans controls stress response and longevity.</a> J Endocrinol. 190, 191-202 (2006).</li><li>Markaki, M., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+diseases+in+Caenorhabditis+elegans.">Modeling human diseases in Caenorhabditis elegans.</a> Biotechnol J. 5, 1261-1276 (2010).</li><li>Rodriguez, M., Snoek, L. B., De Bono, M., Kammenga, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worms+under+stress:+C.+elegans+stress+response+and+its+relevance+to+complex+human+disease+and+aging.">Worms under stress: C. elegans stress response and its relevance to complex human disease and aging.</a> Trends Genet. 29, 367-374 (2013).</li><li>Hope, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Practical approach series. , 282 (1999).</li><li>C. elegans Sequencing Consortium. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+sequence+of+the+nematode+C.+elegans:+a+platform+for+investigating+biology.">Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology.</a> Science. 282, 2012-2018 (1998).</li><li>Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turn+to+the+worm!.">Turn to the worm!.</a> Current opinion in genetics &amp; development. 7, 410-415 (1997).</li><li>Wheelan, S. J., Boguski, M. S., Duret, L., Makalowski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+and+nematode+orthologs--lessons+from+the+analysis+of+1800+human+genes+and+the+proteome+of+Caenorhabditis+elegans.">Human and nematode orthologs--lessons from the analysis of 1800 human genes and the proteome of Caenorhabditis elegans.</a> Gene. 238, 163-170 (1999).</li><li>Culetto, E., Sattelle, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Caenorhabditis+elegans+in+understanding+the+function+and+interactions+of+human+disease+genes.">A role for Caenorhabditis elegans in understanding the function and interactions of human disease genes.</a> Hum Mol Genet. 9, 869-877 (2000).</li><li>Fire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li><li>Lamitina, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomic+approaches+in+C.+elegans.">Functional genomic approaches in C. elegans.</a> Methods Mol Biol. 351, 127-138 (2006).</li><li>Poulin, G., Nandakumar, R., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+RNAi+screens+in+Caenorhabditis+elegans:+impact+on+cancer+research.">Genome-wide RNAi screens in Caenorhabditis elegans: impact on cancer research.</a> Oncogene. 23, 8340-8345 (2004).</li><li>Moreno-Arriola, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans:+A+Useful+Model+for+Studying+Metabolic+Disorders+in+Which+Oxidative+Stress+Is+a+Contributing+Factor.">Caenorhabditis elegans: A Useful Model for Studying Metabolic Disorders in Which Oxidative Stress Is a Contributing Factor.</a> Oxid Med Cell Longev. , 705253 (2014).</li><li>Possik, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folliculin+regulates+ampk-dependent+autophagy+and+metabolic+stress+survival.">Folliculin regulates ampk-dependent autophagy and metabolic stress survival.</a> PLoS Genet. 10, e1004273 (2014).</li><li>Fukushima, T., Tanaka, K., Lim, H., Moriyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+cytotoxicity+of+paraquat.">Mechanism of cytotoxicity of paraquat.</a> Environ Health Prev Med. 7, 89-94 (2002).</li><li>Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+dismutase+is+dispensable+for+normal+animal+lifespan.">Superoxide dismutase is dispensable for normal animal lifespan.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 5785-5790 (2012).</li><li>Schulz, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+restriction+extends+Caenorhabditis+elegans+life+span+by+inducing+mitochondrial+respiration+and+increasing+oxidative+stress.">Glucose restriction extends Caenorhabditis elegans life span by inducing mitochondrial respiration and increasing oxidative stress.</a> Cell Metab. 6, 280-293 (2007).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li><li>Timmons, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+methods+for+RNA+interference+in.">Delivery methods for RNA interference in.</a> C. elegans. Methods Mol Biol. 351, 119-125 (2006).</li><li>Wang, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+Eyes+Absent+Ortholog+EYA-1+Is+Required+for+Stress+Resistance.">Caenorhabditis elegans Eyes Absent Ortholog EYA-1 Is Required for Stress Resistance.</a> Biochemistry (Mosc). 79, 653-662 (2014).</li><li>Paz-Gomez, D., Villanueva-Chimal, E., Navarro, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DEAD+Box+RNA+helicase+VBH-1+is+a+new+player+in+the+stress+response+in+C.+elegans.">The DEAD Box RNA helicase VBH-1 is a new player in the stress response in C. elegans.</a> PLoS One. 9, 97924 (2014).</li><li>Ward, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defects+in+the+C.+elegans+acyl-CoA+synthase,+acs-3,+and+nuclear+hormone+receptor,+nhr-25,+cause+sensitivity+to+distinct,+but+overlapping+stresses.">Defects in the C. elegans acyl-CoA synthase, acs-3, and nuclear hormone receptor, nhr-25, cause sensitivity to distinct, but overlapping stresses.</a> PLoS One. 9, 92552 (2014).</li><li>Staab, T. A., Evgrafov, O., Knowles, J. A., Sieburth, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+synaptic+nlg-1/neuroligin+abundance+by+the+skn-1/Nrf+stress+response+pathway+protects+against+oxidative+stress.">Regulation of synaptic nlg-1/neuroligin abundance by the skn-1/Nrf stress response pathway protects against oxidative stress.</a> PLoS Genet. 10, e1004100 (2014).</li><li>Greer, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+AMPK-FOXO+pathway+mediates+longevity+induced+by+a+novel+method+of+dietary+restriction+in.">An AMPK-FOXO pathway mediates longevity induced by a novel method of dietary restriction in.</a> C. elegans. Curr Biol. 17, 1646-1656 (2007).</li><li>Allen, E., Walters, I. B., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brivanib,+a+dual+FGF/VEGF+inhibitor,+is+active+both+first+and+second+line+against+mouse+pancreatic+neuroendocrine+tumors+developing+adaptive/evasive+resistance+to+VEGF+inhibition.">Brivanib, a dual FGF/VEGF inhibitor, is active both first and second line against mouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance to VEGF inhibition.</a> Clin Cancer Res. 17, 5299-5310 (2011).</li><li>Apfeld, J., O'Connor, G., McDonagh, T., DiStefano, P. S., Curtis, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+AMP-activated+protein+kinase+AAK-2+links+energy+levels+and+insulin-like+signals+to+lifespan+in+C.+elegans.">The AMP-activated protein kinase AAK-2 links energy levels and insulin-like signals to lifespan in C. elegans.</a> Genes Dev. 18, 3004-3009 (2004).</li><li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+AMP-activated+protein+kinase+AAK-2+is+phosphorylated+by+LKB1+and+is+required+for+resistance+to+oxidative+stress+and+for+normal+motility+and+foraging+behavior.">The Caenorhabditis elegans AMP-activated protein kinase AAK-2 is phosphorylated by LKB1 and is required for resistance to oxidative stress and for normal motility and foraging behavior.</a> J Biol Chem. 283, 14988-14993 (2008).</li><li>Honda, Y., Honda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+daf-2+gene+network+for+longevity+regulates+oxidative+stress+resistance+and+Mn-superoxide+dismutase+gene+expression+in+Caenorhabditis+elegans.">The daf-2 gene network for longevity regulates oxidative stress resistance and Mn-superoxide dismutase gene expression in Caenorhabditis elegans.</a> FASEB J. 13, 1385-1393 (1999).</li><li>Restif, C., Metaxas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+swimming+motions+of+C.+elegans+worms+with+applications+in+aging+studies.">Tracking the swimming motions of C. elegans worms with applications in aging studies.</a> Med Image Comput Comput Assist Interv. 11, 35-42 (2008).</li><li>Buckingham, S. D., Sattelle, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast,+automated+measurement+of+nematode+swimming+(thrashing)+without+morphometry.">Fast, automated measurement of nematode swimming (thrashing) without morphometry.</a> BMC Neurosci. 10, 84 (2009).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

C. ايليجانس هو كائن نموذجا جذابا لدراسة مقاومة الاكسدة في الجسم الحي وراثيا لأنه يمكن أن يكون مثقف بسهولة، ويؤدي إلى عدد كبير من نسل متطابقة وراثيا بسرعة. أساليب متعددة لقياس مقاومة الاكسدة وقد وصفت في وقت سابق، وأنها تستند إلى مكملات لوحات الثقافة مع مختلف مصادر ROS مثل PQ، روتينون، H 2 O 2، وجغلون 25،26،29-32. نحن هنا وصف البروتوكول الذي يقيس الأكسدة المقاومة الضغط في السائل في 96 لوحات جيدة باستخدام 100 ملي PQ. وقد أجريت فحص مماثل من قبل جرير وآخرون. 33. هذا الاختبار يمكن زيادة تكييفها لدراسة الاكسدة في السائل باستخدام مصادر ROS الأخرى. على سبيل المثال، لقد أظهرنا أن فقدان flcn-1 زيادة المقاومة للعديد من H 2 O 2 تركيزات وكذلك 23. هذا الاختبار يمكن أن تكون الفنيلاي تحدي لبعض السلالات التي تعرض عيوب الحركة أو السباحة التي يسببها الظواهر الشلل مثل سلالات يحمل طفرة في نقل الدوبامين دات-1 34. في هذه الحالة، وعدم القدرة على تحريك مربكة لأنه لا يعني بالضرورة انخفاض المقاومة الاكسدة بل عيب الحركة. وعلاوة على ذلك، عد الحيوانات النافقة ينبغي أن يستكمل بعناية ولها الباحثون أن تولي اهتماما لC. ايليجانس تفاصيل السلوكية مثل حركات الذيل، وحركات الرأس، أو حركات الجسم حتى بطيئة. إذا كان تركيز PQ مرتفع جدا، وحركية الموت من الحيوانات سريعة جدا، يمكن للمرء أن ينظر في خفض تركيز PQ من أجل الحصول على معدلات الوفاة أبطأ. بعض الحيوانات حساسة للغاية للالاكسدة مثل AAK-2 الحيوانات متحولة 26،33،35،36 حين أن البعض الآخر شديدة المقاومة مثل داف 2 الحيوانات متحولة 37. في هذه الحالة، البقاء على قيد الحياة مع زملاء مختلف يعايروينبغي النظر ncentrations من PQ. للتجارب رني، يمكن أن تكون نتائج سلبية يرجع إلى عدم فعالية العلاج رني. في هذه الحالة، وقياس مستويات مرنا ضروري لتحديد ما إذا كانت الجينات ضربة قاضية ناجحا. هذا البروتوكول يمكن تكييفها كذلك لارتفاع الفرز الإنتاجية للمقاومة الاكسدة باستخدام كاشف أن يقيس السلوك السباحة C. ايليجانس في السائل 38،39. وهذا من شأنه تمكين يحتمل رصد التحمل من C. ايليجانس وسلوك السباحة مثل تواتر الجسم الانحناء تحت الاكسدة. ارتفاع معدلات حركة الجسم يمكن أن تشير إلى ارتفاع اللياقة البدنية دودة تحت الضغط. يتم حفظها الممرات التي تؤدي إلى الأكسدة المقاومة التوتر في حقيقيات النوى أقل غاية في جميع أنحاء التطور وترتبط بالأمراض المرتبطة الاكسدة والشيخوخة لدى البشر. Mitohormesis وgeneratio متوازنن من ROS ضرورية لإطالة عمر وتحسين القدرة على الصحة. ومع ذلك، والإفراط ROS غير ضارة جدا للخلايا والأنسجة / أجهزة والكائنات الحية. إيجاد مسارات، أنه إذا غيرت، وتوفير التوازن الأمثل ROS بالتالي من الضروري وشاشات للأدوية التي تعدل المقاومة للإجهاد التأكسدي يمكن أن يساعد في تطوير علاجات لأمراض متعددة مع قاسم مشترك: الاكسدة. تنفيذ هذه العروض في C. ايليجانس هو وسيلة سريعة وغير مكلفة، ويمكن الاعتماد عليها من المفيد أن لديها امكانات كبيرة وقيمة لفهم وعلاج الأمراض التي تصيب الإنسان مرتبطة الاكسدة.

A reference was corrected in the publication of <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/video/52746">Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates</a>. There was an error with reference 34 in the Citations section. It has been updated from:
Allen, E., Walters, I.B., Hanahan, D. Brivanib a dual FGF/VEGF inhibitor,is active both first and second line againstmouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance toVEGF inhibition. Clin Cancer Res. 17, (16) 5299-310 (2011).
to:
Allen, A. T., Maher, K. N., Wani, K. A., Betts, K. E., &#38; Chase, D. L. Coexpressed D1- and D2-like dopamine receptors antagonistically modulate acetylcholine release in Caenorhabditis elegans. Genetics. 188, 579-590 (2011).

Erratum: Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

في حقيقيات النوى، الفسفرة المؤكسدة التي تجري في سلسلة نقل الإلكترون من الميتوكوندريا هي المحرك الرئيسي لإنتاج الطاقة في شكل ATP. أنواع الاكسجين التفاعلية (ROS) هي نتاج طبيعي لهذه العملية. على الرغم من الدور الهام الذي يقومون به كما يشير الجزيئات، يمكن أن الإفراط ROS تؤدي إلى تلف الحمض النووي والبروتينات كربنلة، وأكسدة الدهون. اختلال التوازن بين الإنتاج ROS وإزالة السموم يسبب الإجهاد التأكسدي، الأمر الذي يؤدي إلى استنزاف الطاقة، وتلف الخلايا، ويؤدي موت الخلايا 1،2. يساهم الإجهاد التأكسدي الشيخوخة وتطوير العديد من الأمراض التي تهدد الحياة بما في ذلك السرطان والسكري والقلب والأوعية الدموية والأمراض العصبية 3-9. وقد تطورت الخلايا استراتيجيات الدفاع الأنزيمية وغير الأنزيمية للحفاظ على مستويات ROS المناسبة وحماية ناخبيهم من التلف التأكسدي 1،2. الفائق (الاحمق) الانزيمات تعمل أول من conveRT الفائق إلى H 2 O 2، والتي يتم تحويلها لاحقا إلى المياه عن طريق الكاتلاز أو الانزيمات البيروكسيديز. وتشمل استراتيجيات الدفاع غير الأنزيمية معظمهم من الجزيئات التي تتفاعل بشكل أسرع مع ROS بالمقارنة مع الجزيئات الخلوية، وحماية المكونات الخلوية الأساسية. على الرغم من الدور الوقائي للROS إزالة السموم والإنزيمات، وبعض الجزيئات ROS هربا من آليات الدفاع المضادة للأكسدة، وتؤدي إلى الضرر التأكسدي. كشف وإصلاح، وتدهور المكونات الخلوية التالفة واستراتيجيات الدفاع الأساسية خلال الاكسدة 1،2. مسارات إشارات تشارك في مقاومة التوتر والإجهاد التأكسدي على وجه التحديد هي موضع الحفظ تطويريا 10،11. على عكس تجارب زراعة الخلية حيث ترد إلا بصورة جزئية الظروف عضوي، ودراسة الاكسدة في الكائنات النموذج 12،13 لها أهمية كبيرة. C. ايليجانس هو الخيطية حرة المعيشة التي يمكن أن تكون بسهولة وبتكلفة زهيدة طريق مسدودبناءه من جديد على العشب البكتيرية على وسائل الإعلام أجار. انها صغيرة في الحجم (حوالي 1 ملم في الطول) وعادة ينمو باعتباره خنثى-التسميد الذاتي، مما يسهل التلاعب الجيني. أنه يحتوي على دورة الحياة السريعة والقدرة على الإنجاب عالية، تنتج نحو 300 ذرية في جيل، مما يجعلها أداة قوية لأداء شاشات الوراثية على نطاق واسع (14). وC. والتسلسل ايليجانس الجينوم بالكامل وتوقع 40-50٪ من الجينات لتكون المتماثلات من الأمراض المرتبطة الجينات البشرية 15-18. ضربة قاضية للجينات ذات الاهتمام باستخدام رني هي سريعة وسهلة في C. ايليجانس. الجيني أسفل اللائحة يمكن أن يتحقق عن طريق تغذية الحيوانات E. البكتيريا القولونية التي تأوي البلازميد معربا عن RNA المزدوج تقطعت بهم السبل التي تستهدف مرنا من الفائدة 19. لذلك، وتحديد وظيفة الجين باستخدام شاشات رني على نطاق واسع له تأثير كبير على فهم الأمراض التي تصيب الإنسان بما في ذلك السرطان 20،21. دراسات سمقاومة الإجهاد xidative في C. أدت ايليجانس إلى تحديد آليات الحفظ لمقاومة الاكسدة 13،22. بعض المسارات التي تم تحديدها هي مسارات المشتركة التي تعدل طول العمر ومقاومة للضغوط أخرى أيضا مثل نقص الأكسجين والحرارة والضغط الاسموزي. وتشمل هذه المسارات إشارات الأنسولين، TOR الإشارات، والالتهام الذاتي. وتشمل مسارات رئيسية أخرى إزالة السموم من ROS مثل الانزيمات الفائق الفائق والإنزيمات الكاتلاز، أو في إصلاح الأضرار مثل الصدمة الحرارية والبروتينات كوصي 11،13،22. يصف هذا البروتوكول كيفية تحديد مقاومة الاكسدة من C. ايليجانس في السائل. كنا flcn-1 (ok975) والبرية من نوع الحيوانات للتدليل على البروتوكول منذ أظهرنا سابقا زيادة مقاومة الاكسدة عند فقدان flcn-1 (ok975) في C. ايليجانس 23. لقد أظهرنا أيضا أن هذه المقاومة تعتمد زيادةعلى AMPK والالتهام الذاتي، محور الإشارات التي تعمل على تحسين الطاقة الحيوية الخلوية ويعزز مقاومة الإجهاد 23. PQ هو الإجهاد التأكسدي الذي يتداخل مع سلسلة نقل الإلكترون لإنتاج أنواع الاكسجين التفاعلية 24. ويمكن أن تتكيف نفس الفحص ويمكن استخدام مصادر ROS أخرى أو ROS المركبات توليد مثل H 2 O 2 و روتينون. وقد وضعت فحوصات مماثلة على لوحات التي تستخدم فيها تركيزات منخفضة من PQ 25،26. الاستفادة من هذا الاختبار هو أنه سريع جدا، ويمكن الحصول على النتائج في يوم واحد. بالإضافة إلى ذلك، إجمالي حجم السائل المستخدم لأداء المقاومة الاكسدة فحص في 96 لوحات جيدة منخفضة بالمقارنة مع حجم المستخدمة في إعداد PQ التي تحتوي على لوحات. ولذلك، فإن كمية PQ المستخدمة في فحص السائل منخفضة، مما يجعل فحص غير مكلف ويحد من إنتاج النفايات السامة. ومع ذلك، القيود المفروضة على هذا الاختبار بالمقارنة مع المقايسات لوحة تشمل لاالمسيخ الطعام في فحص السائل وأقل تركيز الأوكسجين في السائل بالمقارنة مع الهواء. هذه هي العوامل الهامة التي في بعض الحالات، قد تؤثر على النتائج. لذلك، مؤكدا استنساخ باستخدام وسائل أخرى للمقاومة الاكسدة ويوصى لدعم النتائج التي تم الحصول عليها في هذا الاختبار.

<table><tbody><tr><td>Agar bacteriological grade</td><td>Multicell</td><td>800-010-LG</td><td></td></tr><tr><td>Bacteriological peptone</td><td>Oxoid</td><td>LP0037</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride biotechnology grade</td><td>Bioshop</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma</td><td>C8503-25G</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure tris hydrochloride</td><td>Invitrogen</td><td>15506-017</td><td></td></tr><tr><td>Tris aminomethane</td><td>Bio Basic Canada Inc</td><td>77-86-1</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-202185A</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Bioshop</td><td>69-52-3</td><td></td></tr><tr><td>Yeast extract</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>8013-01-2</td><td></td></tr><tr><td>Methyl viologen dichloride hydrate</td><td>Aldrich chemistry</td><td>856177-1G</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 60 x15 mm</td><td>Fisher</td><td>FB0875713A</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 10 ml</td><td>Fisher</td><td>1367520</td><td></td></tr><tr><td>Potassium phosphate monobasic</td><td>G-Biosciences</td><td>RC-084</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium sulfate heptahydrate</td><td>Sigma</td><td>M-5921</td><td></td></tr><tr><td>Sodium phosphate dibasic</td><td>Bioshop</td><td>7558-79-4</td><td></td></tr><tr><td>Discovery v8 stereo zeiss microscope</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>96 well clear microtiter plate</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;flcn-1&lt;/em&gt; RNAi source</td><td>Ahringer Library</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

measuring oxidative stress resistance of caenorhabditis elegans in 96-well microtiter plates

الاكسدة، الذي هو نتيجة لاختلال التوازن بين الإنتاج وإزالة السموم من أنواع الاكسجين التفاعلية، هو المساهم الرئيسي في اضطرابات البشرية المزمنة، بما في ذلك القلب والأوعية الدموية والأمراض العصبية، ومرض السكري، والشيخوخة، والسرطان. وبالتالي، فمن المهم دراسة الاكسدة ليس فقط في الأنظمة الخلية ولكن أيضا باستخدام الكائنات كلها. C. ايليجانس هو كائن نموذجا جذابا لدراسة علم الوراثة من المؤكسدة مسارات نقل الإشارة الإجهاد، والتي يتم حفظها للغاية من الناحية التطورية. هنا، ونحن نقدم بروتوكول لقياس مقاومة الاكسدة في C. ايليجانس في السائل. تذاب لفترة وجيزة، ROS الذي يحفز الكواشف مثل الباراكوات (PQ) وH 2 O 2 في المخزن M9، وaliquoted الحلول في الآبار لوحة microtiter 96 أيضا. L4 متزامنة / الشباب البالغين C. يتم نقل الحيوانات ايليجانس إلى الآبار (5-8 الحيوانات / جيد) ويتم قياس البقاء على قيد الحياةكل ساعة حتى معظم الديدان قد لقوا حتفهم. عند إجراء مقاومة الاكسدة فحص باستخدام تركيز منخفض من الضغوطات في لوحات، والشيخوخة قد تؤثر على سلوك الحيوانات على الاكسدة، والتي يمكن أن تؤدي إلى تفسير غير صحيح من البيانات. ومع ذلك، في مقايسة الموصوفة هنا، هذه المشكلة غير المحتمل أن يحدث منذ تستخدم فقط L4 / حيوانات الشباب البالغين. وعلاوة على ذلك، وهذا البروتوكول هو غير مكلف ويتم الحصول على نتائج في يوم واحد، مما يجعل هذه التقنية جذابة للشاشات الوراثية. عموما، هذا سوف يساعد على فهم الأكسدة مسارات إشارة التوتر تنبيغ، التي يمكن ترجمتها إلى توصيف أفضل للأكسدة اضطرابات البشرية المرتبطة الإجهاد.

مقارنة البرية من نوع C. ايليجانس إلى flcn-1 (ok975) الحيوانات متحولة نحن هنا تستخدم 100 ملي PQ لتحديد المقاومة البرية من نوع C. ايليجانس الحيوانات مقارنة flcn-1 (ok975) وهو ما ثبت لمقاومة الاكسدة، والحرارة، ونقص الأكسجين 23. بعد 4 ساعات من العلاج، 48.3٪ من النوع البري على قيد الحياة بالمقارنة مع٪ 77.8 البقاء على قيد الحياة في 1 flcn (ok975) الحيوانات. كما هو متوقع، flcn-1 (ok975) كانت الحيوانات متحولة أكثر مقاومة إلى 100 ​​ملي PQ مقارنة البرية من نوع (الشكل 2 والجدول 1). مقارنة البرية من نوع الحيوانات التي تتغذى على السيطرة EV أو البكتيريا رني 1-flcn وعلى غرار النتيجة المعروضة في القسم السابق، بانخفاض تنظيم flcn-1 باستخدام رني زيادة المقاومة إلى 100 ​​ملي PQ. هذه النتيجة توضح أن التنظيم أسفل وظيفة الجينات باستخدام يقلد رني الخسارة من وظيفة م<html> utation (الشكل 2 والجدول 1). <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/52746/52746fig1.jpg" /> الشكل 1. الشكل التخطيطي لطريقة الأكسدة تقرير مقاومة الإجهاد في 96 لوحات جيدة في C. ايليجانس. يتم نقل متزامنة L4 / الشباب الحيوانات الكبار نمت على لوحات MYOB وتتغذى على البكتيريا القولونية E. OP50 إلى الآبار لوحة microtiter 96 جيدا تحتوي على 100 ​​ملي PQ ويقاس بقاء كل ساعة حتى عدد كبير من الديدان قد لقوا حتفهم. في حالة knockdowns رني، ويتبع نفس الإجراء إلا أن الحيوانات متزامنة تزرع على لوحات تستكمل مع IPTG، ويتم تغذية مع E. البكتيريا القولونية HT115 إيواء البلازميد التي من شأنها أن ضربة قاضية الجينات المستهدفة على التعبير. الملفات / ftp_upload / 52746 / 52746fig2.jpg &quot;/&gt; الشكل 2. فقدان المقاومة FLCN-1 الزيادات الاكسدة في C. ايليجانس. (A - B) نسبة البقاء على قيد الحياة إلى 100 ​​ملي PQ من (A) WT وflcn-1 (ok975) الحيوانات متحولة و (B) وزن الحيوانات تعامل مع سيطرة أو flcn-1 رني. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td colspan="5"> البقاء على قيد الحياة في المئة الى 100 ​​ملي PQ </td></tr><tr><td> 1 ساعة </td><td> سلالة، رني </td><td> البقاء على قيد الحياة في المئة (± SD) </td><td> P القيمة </td><td> عدد من التجارب </td><td> إجمالي عدد الديدان </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن </td><td> 82.38 ± 1.31 </td><td align="right"> 0.0002 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </td><td> 99.03 ± 1.67 </td><td></td><td align="right"> 3 </td&gt; <td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ مراقبة </td><td> 91.70 ± 0.55 </td><td align="right"> 0.0462 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ flcn-1 (رني) </td><td> 95.93 ± 2.48 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2 ساعة </td><td> سلالة، رني </td><td> البقاء على قيد الحياة في المئة (± SD) </td><td> P القيمة </td><td> عدد من التجارب </td><td> إجمالي عدد الديدان </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن </td><td> 72.13 ± 7.13 </td><td align="right"> 0.005 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </td><td> 96.33 ± 2.28 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ مراقبة </td><td> 80.27 ± 5.34 </td><td align="right"> 0.0261 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ flcn-1 (رني) </td><td> 91.23 ± 1.42 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 ساعة </td><td> سلالة، رني </td><td> البقاء على قيد الحياة في المئة (± SD) </td><td> P القيمة </td><td> عدد من التجارب </td><td> إجمالي عدد الديدان </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن </td><td> 55.37 ± 4.72 </td><td align="right"> 0.0004 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </eم&gt; </td><td> 87.00 ± 1.36 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ مراقبة </td><td> 70.77 ± 3.50 </td><td align="right"> 0.0027 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ flcn-1 (رني) </td><td> 87.63 ± 2.67 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4 ساعة </td><td> سلالة، رني </td><td> البقاء على قيد الحياة في المئة (± SD) </td><td> P القيمة </td><td> عدد من التجارب </td><td> إجمالي عدد الديدان </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن </td><td> 48.30 ± 6.39 </td><td align="right"> 0.002 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </td><td> 77.80 ± 3.12 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ مراقبة </td><td> 63.77 ± 0.66 </td><td align="right"> 0.0122 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ flcn-1 (رني) </td><td> 80.57 ± 6.68 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 5 ساعة </td><td> سلالة، رني </td><td> البقاء على قيد الحياة في المئة (± SD) </td><td> P القيمة </td><td> عدد من التجارب </td><td> إجمالي عدد الديدان </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن </td><td> 41.60 ± 8.33 </td><td align="right"> 0.0062 </td><td align="right"> 3 </td><td align = &quot;الحق&quot;&gt; 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </td><td> 67.43 ± 1.42 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ مراقبة </td><td> 60.53 ± 2.58 </td><td align="right"> 0.0313 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ flcn-1 (رني) </td><td> 71.53 ± 5.24 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 ساعة </td><td> سلالة، رني </td><td> البقاء على قيد الحياة في المئة (± SD) </td><td> P القيمة </td><td> عدد من التجارب </td><td> إجمالي عدد الديدان </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن </td><td> 34.86 ± 5.88 </td><td align="right"> 0.0021 </tد&gt; <td align="right"> 3 </td><td align="right"> 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </td><td> 60.34 ± 2.05 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ مراقبة </td><td> 44.43 ± 3.93 </td><td align="right"> 0.0042 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> بالوزن؛ flcn-1 (رني) </td><td> 62.13 ± 3.44 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr></tbody></table> الجدول 1. ملخص النتائج والتحليل الإحصائي للمقاومة الاكسدة من الشكل 2.

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates at JoVE.com

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

C. elegans is an attractive model organism to study signal transduction pathways involved in oxidative stress resistance. Here we provide a protocol to measure oxidative stress resistance of C. elegans animals in liquid phase, using several oxidizing agents in 96 well plates.

قياس مقاومة الاكسدة من<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em&gt; في 96-جيدا لوحات عيار مكروي

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic ...

measuring-oxidative-stress-resistance-caenorhabditis-elegans-96-well

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

15.4K Views.  McGill University. C. elegans is an attractive model organism to study signal transduction pathways involved in oxidative stress resistance. Here we provide a protocol to measure oxidative stress resistance of C. elegans animals in liquid phase, using several oxidizing agents in 96 well plates. 

Video: Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages for identifying biologically active chemical structures that can modify complex phenotypes such as lifespan. Described here is a simple protocol for producing hundreds of 96-well culture plates with fairly consistent numbers of C. elegans in each well. Next, we specified how to use these cultures to screen thousands of chemicals for effects on the lifespan of the nematode C. elegans. This protocol makes use of temperature sensitive sterile strains, agar plate conditions, and simple animal handling to facilitate the rapid and high throughput production of synchronized animal cultures for screening.

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

Here we describe a simple protocol for rapidly producing hundreds of nematode growth media agar, 96-well culture plates with consistent numbers of Caenorhhabditis elegans per well. These cultures are useful for the phenotypic screening of whole organisms. We focus here on using these cultures to screen chemicals for pro-longevity effects.

طريقة بسيطة لفحص المواد الكيميائية عالية الإنتاجية في ايليجانس كاينورهابديتيس

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages ...

Biochemistry

Plate-based Large-scale Cultivation of Caenorhabditis elegans: Sample Preparation for the Study of Metabolic Alterations in Diabetes

Culturing Caenorhabditis elegans (C. elegans) in a large-scale manner on agar plates can be time-consuming and difficult. This protocol describes a simple and inexpensive method to obtain a large number of animals for the isolation of proteins to proceed with a western blot, mass spectrometry, or further proteomics analyses. Furthermore, an increase of nematode numbers for immunostainings and the integration of multiple analyses under the same culturing conditions can easily be achieved. Additionally, a transfer between plates with different experimental conditions is facilitated. Common techniques in plate culture involve the transfer of a single C. elegans using a platinum wire and the transfer of populated agar chunks using a scalpel. However, with increasing nematode numbers, these techniques become overly time-consuming. This protocol describes the large-scale culture of C. elegans including numerous steps to minimize the impact of the sample preparation on the physiology of the worm. Fluid and shear stress can alter the lifespan of and metabolic processes in C. elegans, thus requiring a detailed description of the critical steps in order to retrieve reliable and reproducible results. C. elegans is a model organism, consisting of neuronal cells for up to one-third, but lacking blood vessels, thus providing the possibility to investigate solely neuronal alterations independent of vascular control. Recently, early neurodegeneration in diabetic retinopathy was found prior to vascular alterations. Thus, C. elegans is of special interest for studying general mechanisms of diabetic complications. For example, an increased formation of advanced glycation end products (AGEs) and reactive oxygen species (ROS) is observed, which are reproducibly found in C. elegans. Protocols to handle samples of adequate size for a broader spectrum of investigations are presented here, exemplified by the study of diabetes-induced biochemical alterations. In general, this protocol can be useful for studies requiring large C. elegans numbers and in which liquid culture is not suitable.

Plate-based Large-scale Cultivation of Caenorhabditis elegans: Sample Preparation for the Study of Metabolic Alterations in Diabetes

This protocol describes a method for the large-scale cultivation of Caenorhabditis elegans on solid media. As an alternative to liquid culture, this protocol allows obtaining parameters of different scales under plate-based cultivation. This increases the comparability of results by omitting the morphological and metabolic differences between liquid and solid media culture.

زراعة الواسعة النطاق على أساس لوحة ايليجانس كاينورهابديتيس: "إعداد نموذج" "دراسة التعديلات الأيضي" في مرض السكري

Culturing Caenorhabditis elegans (C. elegans) in a large-scale manner on agar plates can be time-consuming and difficult. This protocol describes a simple ...

Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

The discovery and development of Caenorhabditis elegans as a model organism was influential in biology, particularly in the field of aging. Many historical and contemporary studies have identified thousands of lifespan-altering paradigms, including genetic mutations, transgenic gene expression, and hormesis, a beneficial, low-grade exposure to stress. With its many advantages, including a short lifespan, easy and low-cost maintenance, and fully sequenced genome with homology to almost two-thirds of all human genes, C. elegans has quickly been adopted as an outstanding model for stress and aging biology. Here, several standardized methods are surveyed for measuring lifespan and healthspan that can be easily adapted into almost any research environment, especially those with limited equipment and funds. The incredible utility of C. elegans is featured, highlighting the capacity to perform powerful genetic analyses in aging biology without the necessity of extensive infrastructure. Finally, the limitations of each analysis and alternative approaches are discussed for consideration.

Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans serve as an excellent model system with robust and low-cost methods for surveying healthspan, lifespan, and resilience to stress.

طرق المسح منخفضة التكلفة لقياس العمر الافتراضي والمدى الصحي في Caenorhabditis elegans

The discovery and development of Caenorhabditis elegans as a model organism was influential in biology, particularly in the field of aging. Many ...

Genetics

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans (C. elegans), a free-living nematode, has emerged as an attractive model to study host-pathogen interactions. The presented protocol uses this model to determine the pathogenicity caused by the mitis group streptococci via the production of H2O2. The mitis group streptococci are an emerging threat that cause many human diseases such as bacteremia, endocarditis, and orbital cellulitis. Described here is a protocol to determine the survival of these worms in response to H2O2 produced by this group of pathogens. Using the gene skn-1 encoding for an oxidative stress response transcription factor, it is shown that this model is important for identifying host genes that are essential against streptococcal infection. Furthermore, it is shown that activation of the oxidative stress response can be monitored in the presence of these pathogens using a transgenic reporter worm strain, in which SKN-1 is fused to green fluorescent protein (GFP). These assays provide the opportunity to study the oxidative stress response to H2O2 derived by a biological source as opposed to exogenously added reactive oxygen species (ROS) sources.

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

The nematode Caenorhabditis elegans is an excellent model to dissect host-pathogen interactions. Described here is a protocol to infect the worm with members of the mitis group streptococci and determine activation of the oxidative stress response against H2O2 produced by this group of organisms.

دراسة "عنصر مؤكسد الإجهاد الناجم عن العقديّات المجموعة ميتس" في ايليجانس كاينورهابديتيس

Caenorhabditis elegans (C. elegans), a free-living nematode, has emerged as an attractive model to study host-pathogen interactions. The presented ...

Developmental Biology

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor mutations in components of age-regulatory pathways. If these mutations perturb the function of the age-regulatory pathway and therefore alter the lifespan of the entire organism, they provide important mechanistic insights1-3.
Another strategy to investigate the regulation of lifespan is to use small molecules to perturb age-regulatory pathways. To date, a number of molecules are known to extend lifespan in various model organisms and are used as tools to study the biology of aging4-16. The number of molecules identified thus far is small compared to the genetic "toolset" that is available to study the biology of aging.
Caenorhabditis elegans is one of the principle models used to study aging because of its excellent genetics and short lifespan of three weeks. More recently, C.elegans has emerged as a model organism for phenotype based drug screens5,7,16-20 because of its small size and its ability to grow in microtiter plates.
Here we present an assay to measure C.elegans lifespan in 96 well microtiter plates. The assay was developed and successfully used to screen large libraries for molecules that extend C.elegans lifespan7. The reliability of the assay was evaluated in multiple tests: first, by measuring the lifespan of wild type animals grown at different temperatures; second, by measuring the lifespan of mutants with altered lifespans; third, by measuring changes in lifespan in response to different concentrations of the antidepressant Mirtazepine. Mirtazepine has previously been shown to extend lifespan in C.elegans7. The results of these tests show that the assay is able to replicate previous findings from other assays and is quantitative. The microtiter format also makes this lifespan assay compatible with automated liquid handling systems and allows integration into automated platforms.

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

In this protocol we present a method to measure Caenorhabditis elegans lifespan in 96 well microtiter plates.

قياس انواع معينة ايليجانس الحياة سبان في 96 لوحات Microtiter حسنا

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor ...

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous system and muscle. Consistent with this, mitochondrial dysfunction has been associated with a myriad of neurodegenerative diseases and aging in general. Caenorhabditis elegans have been a powerful model system for elucidating the many intricacies of mitochondrial function. Mitochondrial respiration is a strong indicator of mitochondrial function and recently developed respirometers offer a state-of-the-art platform to measure respiration in cells. In this protocol, we provide a technique to analyze live, intact C. elegans. This protocol spans a period of ~7 days and includes steps for (1) growing and synchronization of C. elegans, (2) preparation&#160;of compounds to be injected and hydration of probes, (3) drug loading and cartridge equilibration, (4) preparation of worm assay plate and assay run, and (5) post-experiment data analysis.

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Mitochondrial respiration is critical for organismal survival; therefore, oxygen consumption rate is an excellent indicator of mitochondrial health. In this protocol, we describe the use of a commercially available respirometer to measure basal and maximal oxygen consumption rates in live, intact, and freely-motile Caenorhabditis elegans.

قياس معدلات استهلاك الأوكسجين في سليمة ايليجانس كاينورهابديتيس

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous ...

Measurements of Physiological Stress Responses in C. Elegans

Organisms are often exposed to fluctuating environments and changes in intracellular homeostasis, which can have detrimental effects on their proteome and physiology. Thus, organisms have evolved targeted and specific stress responses dedicated to repair damage and maintain homeostasis. These mechanisms include the unfolded protein response of the endoplasmic reticulum (UPRER), the unfolded protein response of the mitochondria (UPRMT), the heat shock response (HSR), and the oxidative stress response (OxSR). The protocols presented here describe methods to detect and characterize the activation of these pathways and their physiological consequences in the nematode, C. elegans. First, the use of pathway-specific fluorescent transcriptional reporters is described for rapid cellular characterization, drug screening, or large-scale genetic screening (e.g., RNAi or mutant libraries). In addition, complementary, robust physiological assays are described, which can be used to directly assess sensitivity of animals to specific stressors, serving as functional validation of the transcriptional reporters. Together, these methods allow for rapid characterization of the cellular and physiological effects of internal and external proteotoxic perturbations.

Measurements of Physiological Stress Responses in C. Elegans

Here, we characterize cellular proteotoxic stress responses in the nematode C. elegans by measuring the activation of fluorescent transcriptional reporters and assaying sensitivity to physiological stress.

قياسات استجابات الإجهاد الفسيولوجي في C. Elegans

Organisms are often exposed to fluctuating environments and changes in intracellular homeostasis, which can have detrimental effects on their proteome and ...

Quantifying Tissue-Specific Proteostatic Decline in Caenorhabditis elegans

The ability to maintain proper function and folding of the proteome (protein homeostasis) declines during normal aging, facilitating the onset of a growing number of age-associated diseases. For instance, proteins with polyglutamine expansions are prone to aggregation, as exemplified with the huntingtin protein and concomitant onset of Huntington&#8217;s disease. The age-associated deterioration of the proteome has been widely studied through the use of transgenic Caenorhabditis elegans expressing polyQ repeats fused to a yellow fluorescent protein (YFP). This polyQ::YFP transgenic animal model facilitates the direct quantification of the age-associated decline of the proteome through imaging the progressive formation of fluorescent foci (i.e., protein aggregates) and subsequent onset of locomotion defects that develop as a result of the collapse of the proteome. Further, the expression of the polyQ::YFP transgene can be driven by tissue-specific promoters, allowing the assessment of proteostasis across tissues in the context of an intact multicellular organism. This model is highly amenable to genetic analysis, thus providing an approach to quantify aging that is complementary to lifespan assays. We describe how to accurately measure polyQ::YFP foci formation within either neurons or body wall muscle during aging, and the subsequent onset of behavioral defects. Next, we highlight how these approaches can be adapted for higher throughput, and potential future applications using other emerging strategies for C. elegans genetic analysis.

Quantifying Tissue-Specific Proteostatic Decline in Caenorhabditis elegans

Proteostatic decline is a hallmark of aging, facilitating the onset of neurodegenerative diseases. We outline a protocol to quantifiably measure proteostasis in two different Caenorhabditis elegans tissues through heterologous expression of polyglutamine repeats fused to a fluorescent reporter. This model allows rapid in vivo genetic analysis of proteostasis.

قياس الانخفاض البروتيني البروتيوستيكي الخاص بالأنسجة في إليجانات Caenorhabditis

The ability to maintain proper function and folding of the proteome (protein homeostasis) declines during normal aging, facilitating the onset of a ...

High-Throughput Screening of Microbial Isolates with Impact on Caenorhabditis elegans Health

With its small size, short lifespan, and easy genetics, Caenorhabditis elegans offers a convenient platform to study the impact of microbial isolates on host physiology. It also fluoresces in blue when dying, providing a convenient means of pinpointing death. This property has been exploited to develop high-throughput label-free C. elegans survival assays (LFASS). These involve time-lapse fluorescence recording of worm populations set in multiwell plates, from which population median time of death can be derived. The present study adopts the LFASS approach to screen multiple microbial isolates at once for the effects on C. elegans susceptibility to severe heat and oxidative stresses. Such microbial screening pipeline, which can notably be used to prescreen probiotics, using severe stress resistance as a proxy for host health is reported here. The protocol describes how to grow both C. elegans gut microbiota isolate collections and synchronous worm populations in multiwell arrays before combining them for the assays. The example provided covers the testing of 47 bacterial isolates and one control strain on two worm strains, in two stress assays in parallel. However, the approach pipeline is readily scalable and applicable to the screening of many other modalities. Thus, it provides a versatile setup to rapidly survey a multiparametric landscape of biological and biochemical conditions that impact C. elegans health.

High-Throughput Screening of Microbial Isolates with Impact on Caenorhabditis elegans Health

Gut microbes may positively or negatively impact the health of their host via specific or conserved mechanisms. Caenorhabditis elegans is a convenient platform to screen for such microbes. The present protocol describes high-throughput screening of 48 bacterial isolates for impact on nematode stress resistance, used as a proxy for worm health.

فحص عالي الإنتاجية للعزلات الميكروبية مع التأثير على صحة Caenorhabditis elegans

With its small size, short lifespan, and easy genetics, Caenorhabditis elegans offers a convenient platform to study the impact of microbial isolates on ...

C. elegans Survival Assay: A Short-Term Toxicity Test

Source: Possik, E. and Pause, A. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/video/2496/measuring-caenorhabditis-elegans-life-span-96-well-microtiter">Measuring Oxidative Stress Resistance of&#160;Caenorhabditis elegans&#160;in 96-well Microtiter Plates.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2015).
This video introduces a short-term survival assay that tests a treatment for acute toxicity or tests a genetic strain for resistance to a toxic condition.&#160; The example protocol shows an example survival assay in which worms are tested for their ability to&#160; resist oxidative stress induced by paraquat (PQ).

ج. ايليجانس اختبار البقاء على قيد الحياة: اختبار سمية قصير المدى

Source: Possik, E. and Pause, A. Measuring Oxidative Stress Resistance of&#160;Caenorhabditis elegans&#160;in 96-well Microtiter Plates.&#160;J. Vis. Exp. ...

قياس مقاومة الاكسدة من

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video