Thanks to Ben D. Tall, Yi Chen, and Thomas Hammak from the U.S. Food and Drug Administration (FDA), Center for Food Safety and Applied Nutrition (CFSAN) for critically reviewing the manuscript. The authors also thank Hannah Lee (research internship program, Joint Institute for Food Safety and Applied Nutrition (JIFSAN), University of Maryland) for laboratory assistance and David Weingaertner (FDA, CFSAN) for preparing the figure of the schematic overview shown in the video.

<ol>
	<li>Zurek, L., Gorham, J. R., Voeller, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Wiley Handbook of Science and Technology for Homeland Security. , 1-16 (2008).</li><li>Olsen, A. R., Gecan, J. S., Ziobro, G. C., Bryce, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+action+criteria+for+filth+and+other+extraneous+materials+V.+Strategy+for+evaluating+hazardous+and+nonhazardous+filth.">Regulatory action criteria for filth and other extraneous materials V. Strategy for evaluating hazardous and nonhazardous filth.</a> Regulatory Toxicology and Pharmacology. 33 (3), 363-392 (2001).</li><li>Hald, B., Skovg&#229;rd, H., Pedersen, K., Bunkenborg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influxed+insects+as+vectors+for+Campylobacter+jejuni+and+Campylobacter+coli+in+Danish+broiler+houses.">Influxed insects as vectors for Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in Danish broiler houses.</a> Poultry Science. 87 (7), 1428-1434 (2008).</li><li>Kobayashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Houseflies:+Not+simple+mechanical+vectors+of+enterohemorrhagic+Escherichia+coli+O157:H7.">Houseflies: Not simple mechanical vectors of enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 61 (4), 625-629 (1999).</li><li>Pava-Ripoll, M., Pearson, R. E. G., Miller, A. K., Ziobro, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+relative+risk+of+Cronobacter+spp.,+Salmonella+spp.,+and+Listeria+monocytogenes+associated+with+the+body+surfaces+and+guts+of+individual+filth+flies.">Prevalence and relative risk of Cronobacter spp., Salmonella spp., and Listeria monocytogenes associated with the body surfaces and guts of individual filth flies.</a> Applied and Environmental Microbiology. 78 (22), 7891-7902 (2012).</li><li>Hewitt, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Houseflies and how they spread disease. , (1912).</li><li>Rochon, K., Lysyk, T. J., Selinger, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retention+of+Escherichia+coli+by+house+fly+and+stable+fly+(Diptera:Muscidae)+during+pupal+metamorphosis+and+eclosion.">Retention of Escherichia coli by house fly and stable fly (Diptera:Muscidae) during pupal metamorphosis and eclosion.</a> Journal of Medical Entomology. 42 (3), 397-403 (2005).</li><li>Greenberg, B., Kowalski, J. A., Klowden, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+the+transmission+of+Salmonella+by+flies:+natural+resistance+to+colonization+and+bacterial+interference.">Factors affecting the transmission of Salmonella by flies: natural resistance to colonization and bacterial interference.</a> Infection and Immunity. 2 (6), 800-809 (1970).</li><li>Mramba, F., Broce, A. B., Zurek, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+competence+of+stable+flies,+Stomoxys+calcitrans+L.+(Diptera:Muscidae),+for+Enterobacter+sakazakii.">Vector competence of stable flies, Stomoxys calcitrans L. (Diptera:Muscidae), for Enterobacter sakazakii.</a> Journal of Vector Ecology. 32 (1), 134-139 (2007).</li><li>Ekdahl, K., Normann, B., Andersson, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Could+flies+explain+the+elusive+epidemiology+of+campylobacteriosis.">Could flies explain the elusive epidemiology of campylobacteriosis.</a> Bmc Infectious Diseases. 5 (11), 11 (2005).</li><li>Nayduch, D., Noblet, G. P., Stutzenberger, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+potential+of+houseflies+for+the+bacterium+Aeromonas+caviae.">Vector potential of houseflies for the bacterium Aeromonas caviae.</a> Medical and Veterinary Entomology. 16 (2), 193-198 (2002).</li><li>Sievert, K., Messler, S., Klimpel, S., Feffer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+study+on+the+occurrence+and+distribution+of+pathogenic+microorganisms+carried+by+synanthropic+flies+caught+at+different+rural+locations+in+Germany.">Comprehensive study on the occurrence and distribution of pathogenic microorganisms carried by synanthropic flies caught at different rural locations in Germany.</a> Journal of Medical Entomology. 46 (5), 1164-1166 (2009).</li><li>Hern&#225;ndez-Escare&#241;o, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presence+of+Enterobacteriaceae,+Listeria+spp.,+Vibrio+spp.+and+Staphylococcus+spp.+in+house+fly+(Musca+domestica+L.),+collected+and+macerated+from+different+sites+in+contact+with+a+few+animals+species.">Presence of Enterobacteriaceae, Listeria spp., Vibrio spp. and Staphylococcus spp. in house fly (Musca domestica L.), collected and macerated from different sites in contact with a few animals species.</a> Revista Cientifica-Facultad De Ciencias Veterinarias. 22 (2), 128-134 (2012).</li><li>Mian, L. S., Maag, H., Tacal, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Salmonella+from+muscoid+flies+at+commercial+animal+establishments+in+San+Bernardino+county,+California.">Isolation of Salmonella from muscoid flies at commercial animal establishments in San Bernardino county, California.</a> Journal of Vector Ecology. 27 (1), 82-85 (2002).</li><li>Olsen, A. R., Hammack, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Salmonella+spp.+from+the+housefly,+Musca+domestica+L.,+and+the+dump+fly,+Hydrotaea+aenescens+(Wiedemann)+(Diptera:Muscidae),+at+caged-layer+houses.">Isolation of Salmonella spp. from the housefly, Musca domestica L., and the dump fly, Hydrotaea aenescens (Wiedemann) (Diptera:Muscidae), at caged-layer houses.</a> Journal of Food Protection. 63 (7), 958-960 (2000).</li><li>Holt, P. S., Geden, C. J., Moore, R. W., Gast, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Salmonella+enterica+serovar+Enteritidis+from+houseflies+(Musca+domestica)+found+in+rooms+containing+Salmonella+serovar+Enteritidis-challenged+hens.">Isolation of Salmonella enterica serovar Enteritidis from houseflies (Musca domestica) found in rooms containing Salmonella serovar Enteritidis-challenged hens.</a> Applied and Environmental Microbiology. 73 (19), 6030-6035 (2007).</li><li>Mramba, F., Broce, A., Zurek, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Enterobacter+sakazakii+from+stable+flies,+Stomoxys+calcitrans+L.+(Diptera:Muscidae).">Isolation of Enterobacter sakazakii from stable flies, Stomoxys calcitrans L. (Diptera:Muscidae).</a> Journal of Food Protection. 69 (3), 671-673 (2006).</li><li>Koyuncu, S., Andersson, M. G., Haggblom, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+and+Sensitivity+of+Commercial+PCR-Based+Methods+for+Detection+of+Salmonella+enterica+in+Feed.">Accuracy and Sensitivity of Commercial PCR-Based Methods for Detection of Salmonella enterica in Feed.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (9), 2815-2822 (2010).</li><li>Gagn&#233;, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+and+mite+pests+in+food,+an+illustrated.">Insect and mite pests in food, an illustrated.</a> 1, 269-296 (1991).</li><li>Greenberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Flies and disease, Vol I. Ecology, classification and biotic associations. , (1971).</li><li>Barro, N., Aly, S., Tidiane, O. C. A., Sababenedjo, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carriage+of+bacteria+by+proboscises,+legs,+and+feces+of+two+species+of+flies+in+street+food+vending+sites+in+Ouagadougou,+Burkina+Faso.">Carriage of bacteria by proboscises, legs, and feces of two species of flies in street food vending sites in Ouagadougou, Burkina Faso.</a> Journal of Food Protection. 69 (8), 2007-2010 (2006).</li><li>Ugbogu, O. C., Nwachukwu, N. C., Ogbuagu, U. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Salmonella+and+Shigella+species+from+house+flies+(Musca+domestica+L.)+in+Uturu,+Nigeria.">Isolation of Salmonella and Shigella species from house flies (Musca domestica L.) in Uturu, Nigeria.</a> African Journal of Biotechnology. 5 (11), 1090-1091 (2006).</li><li>Brownlie, J. C., Johnson, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symbiont-mediated+protection+in+insect+hosts.">Symbiont-mediated protection in insect hosts.</a> Trends in Microbiology. 17 (8), 348-354 (2009).</li><li>Feldhaar, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+symbionts+as+mediators+of+ecologically+important+traits+of+insect+hosts.">Bacterial symbionts as mediators of ecologically important traits of insect hosts.</a> Ecological Entomology. 36 (5), 533-543 (2011).</li><li>Wright, A. P., Gould, L. H., Mahon, B., Sotir, M. J., Tauxe, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+the+Impact+of+Epidemic-Assistance+Investigations+of+Foodborne+and+Other+Enteric+Disease+Outbreaks,+1946-2005.">Overview of the Impact of Epidemic-Assistance Investigations of Foodborne and Other Enteric Disease Outbreaks, 1946-2005.</a> American Journal of Epidemiology. 174, S23-S35 (2011).</li></ol>

The use of specified instrumentation is not an endorsement by the U.S. Food and Drug Administration. The authors certify that there is no conflict of interest with any financial organization regarding the material discussed in this article.

الدراسات السابقة التي الكشف عن مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية من الحشرات البرية قد استخدمت مجموعة كبيرة ومتنوعة من البروتوكولات التي قد لا تتضمن المعلومات اللازمة لتقييم دقيق للمخاطر المرتبطة بالأغذية وجود ذبابة واحدة في الأطعمة أو البيئات ذات الصلة بالأغذية 13،15، 23،24. هنا، أثبتنا أن استخدام هذا بروتوكول موحد، فمن الممكن لكشف وعزل Cronobacter النيابة.، S. الملهبة، وL. المستوحدة من سطح الجسم والقناة الهضمية لذبابة واحدة اشتعلت في البرية. لأن الحشرات قد تحمل أرقام منخفضة من مسببات المرض تنتقل عن طريق الأغذية المستهدفة وأعداد كبيرة من الجراثيم الأخرى الأصلية 25،26، يتطلب هذا البروتوكول تخصيب الابتدائي (والثانوي في بعض الأحيان) من العينات في وسائل الإعلام ثقافة محددة لزيادة حساسية الكشف عن مسببات الأمراض المنقولة بالأغذية الهدف . وقد تم الحصول على النتائج من نظام الكشف القائم على PCR غضون ما يقرب من 30 ساعة (لDETEction من Cronobacter النيابة. وS. الملهبة) و 48 ساعة (للكشف عن المستوحدة L.) بعد تجهيز البداية العينات. وهكذا، وهذا البروتوكول هو موثوق بها وكذلك السريع وحساسة بما يكفي للكشف ذبابة واحدة لوجود مسببات الأمراض المنقولة بالغذاء. تأكيد النتائج PCR-الإيجابية وعزل البكتيريا قابلة للحياة هو جزء من إجراءات التشغيل القياسية من العديد من المختبرات. وبالإضافة إلى ذلك، لأغراض علم الأوبئة، ومطلوبة الثقافات البكتيرية نقية من عينات PCR إيجابية لزيادة تأكيد والنمط المصلي الممرض المنقولة عن طريق الأغذية باستخدام الكيمياء الحيوية، والمناعية، أو أساليب الوراثية. وعلى الرغم من عدم ملاحظة أي ايجابيات كاذبة عندما كشف S. الملهبة وL. اللستيريا من أجزاء الجسم من الذباب البرية اشتعلت واحدة، وذلك باستخدام هذا البروتوكول، وجدنا ما يصل إلى معدل 50٪ من ايجابيات كاذبة لCronobacter النيابة. وهذا يوحي بأن نظام الكشف القائم على PCR لCronobact جنسإيه قد تعبر تتفاعل مع غيرها من البكتيريا المعوية موجودة بين الجراثيم معقدة للغاية التي يحملها الذباب. وهكذا، والعزلة وتنقية مستعمرات نقية من Cronobacter جنس من عينات PCR إيجابية تتطلب الطلاء أكثر انتقائية من مسببات الأمراض الأخرى تقييمها. وقد تم في المقام الأول موحدة هذا البروتوكول لفحص الذباب اشتعلت البرية الفردية لوجود Cronobacter النيابة.، S. الملهبة، وL. اللستيريا باستخدام نظام كشف التجاري القائم PCR. ومع ذلك، تم أيضا تكييفها هذا البروتوكول بسهولة لفحص أجزاء الجسم من الذباب واحدة لوجود مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية الأخرى مثل كولاي O157 enterohemorrhagic: H7 (باستخدام إما كولاي O157: H7 MP عدة معايير الفحص أو E. القولونية O157: H7 في الوقت الحقيقي طقم الفحص) وE.-شيجا مولد للذيفان القولونية (STEC) مجموعة (باستخدام الوقت الحقيقي STEC جناح)، والحصول على الحساسيات&gt; 80٪ (إلغاء النشرالبيانات إد). أيضا، يمكن أن يحتمل هذا البروتوكول تكييفها للكشف عن مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية من الحشرات الأخرى التي هي معروفة الناقلة للأمراض (الصراصير والنمل)، ولكن هناك حاجة إلى مزيد من الأبحاث في هذا المجال. المنقولة عن طريق الأغذية التحقيقات اندلاع المرض هي ديناميكية للغاية وتشمل عملية متعددة الخطوات التي قد تختلف وفقا لحالة معينة والبيئة المحلية يجري التحقيق 12،27. هذه التحقيقات هي مهمة لأنها توفر حماية الصحة العامة الفورية عن طريق منع الأمراض المستقبلية. بالإضافة إلى ذلك، يمكن لهذه التحقيقات توضيح الآليات الجديدة التي تنتشر الكائنات الدقيقة التي تنقلها الأغذية، ويثير تساؤلات الهامة التي تؤدي إلى مجالات جديدة للبحث 28. أساليب التحري وكذلك بروتوكولات موحدة وسريعة، وحساسة ضرورية للكشف عن مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية من الحشرات الفردية. يفتح هذا بروتوكول موحد الفرصة لجمع جو معقم و مطهر الحشرات مثل الذباب، ثhich يمكن أن ناقلات الممرض البكتيرية المنقولة عن طريق الأغذية، وذلك كجزء من برنامج أخذ العينات البيئية. إن المعلومات الوبائية التي يمكن الحصول عليها من هذا أن تكون ذات فائدة في بناء صورة دقيقة لآليات انتقال مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية عن طريق الحشرات (أي طول وقت التعرض: ذبابة من قبل الهبوط مقابل الذباب الهبوط، التغوط، والتقيؤ). وأخيرا، على الرغم من أن نظام الكشف التجاري القائم PCR-الموصوفة هنا هو عملي الاستخدام ويبسط PCR التضخيم والتصور من amplicon على مستوى جنس، فإنه ليست بأي حال النظام المناسب الوحيد. بدلا من ذلك يمكن أن تستخدم المحللة من عينات المخصب للكشف عن وجود مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية باستخدام المتاحة علنا ​​أزواج التمهيدي أنواع محددة. ومع ذلك، ينبغي أن يظهر حساسية الكشف قبل استخدامها.

الحشرات تلعب دورا هاما في انتقال الأمراض ذات الصلة بالأغذية لأنها يمكن أن تنتشر الجراثيم في الغذاء أو الملامسة للأغذية الأسطح والأدوات 1. بين الحشرات والذباب والصراصير والنمل وتظهر السلوكيات التي تساعد على انتشار مسببات الأمراض المنقولة بالغذاء. وتشمل هذه السلوكيات وجود علاقة مع مسألة المتحللة، ورفض والبراز، endophily (دخول المباني)، وsynanthropy (يعاشر البشر) 2. . مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية مثل السالمونيلا، الليستريا المستوحدة، العطيفة النيابة، الإشريكية القولونية O157: H7 تم الإبلاغ، وأعضاء من جنس Cronobacter (سابقا الأمعائية الساكازاكية) إلى أن تنتقل عن طريق الحشرات 3-5. القذارة Synanthropic الذباب ينتشر ميكانيكيا البكتيريا تنتقل عن طريق الأغذية عن طريق نقل مسببات الأمراض من الجسم السطوح الملوثة بها. ومع ذلك، فإن وجود مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية في القناة الهضمية من الذباب يمكن أن تصل إلى ثلاثة أضعافأكبر من تلك التي لوحظت على أسطح الجسم (الجسم والرأس والساقين، وأجنحة) 5. يمكن أن تبقى مسببات الأمراض المنقولة بالأغذية أيضا في القناة الهضمية الذبابة لفترة أكبر من الوقت من على سطح الجسم 6،7 و في بعض الحالات، فهي قادرة على التكاثر، استعمار الهضمي المسالك 4،8،9 الذبابة. وهذا يزيد من احتمال متجه من الذباب لأنها يمكن أن تزيد من انتشار مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية من خلال التغوط وقلس 10،11. في الوقت الحاضر، وهناك تحسن أنظمة المراقبة التي هي قادرة على الكشف عن حالات تفشي الأمراض التي تنقلها الأغذية بسرعة أكبر. حين إجراء تحقيقات اندلاع المنقولة عن طريق الأغذية، مسؤولي الصحة العامة يبحثون عن الطعام الذي قد يكون المصدر (ق) أو مركبة (ق) من العدوى. المحققون قد تؤدي أيضا تقييما البيئي للمنشأة (أو المرافق) المعنية لمعرفة كيفية تلوث الغذاء، ويمكن جمع عينات كجزء من التحقيق 12. DespITE الكم الهائل من المؤلفات العلمية المتعلقة الحشرات وناقلات مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية، وربط الحشرات وناقلات من مسببات المرض يسبب كان معين تفشي الأمراض المنقولة بالأغذية تحديا. ويرجع ذلك أساسا الحشرات لا يتم جمعها جو معقم و مطهر كجزء من برامج أخذ العينات البيئية أثناء التحقيقات اندلاع المنقولة عن طريق الأغذية. لتشمل الحشرات، وخاصة تلك التي تظهر السلوكيات التي تساعد على انتشار مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية، وذلك كجزء من إجراء أخذ العينات البيئية، بروتوكول موحد، السريع، حساسة وموثوق بها للكشف عن مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية من حشرة واحدة يجب أن يكون في المكان. تقنيات الطلاء التقليدية للكشف عن مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية من الحشرات هي شاقة وتعتمد على النمو التنافسي للبكتيريا المستهدفة في وسائل الإعلام ثقافة مختلفة للتغلب على النمو السريع لالجراثيم المتعايشة الفطرية من الحشرات. معظم الدراسات التي ترتبط مع الحشرات باوزادت مسببات الأمراض cterial حساسية طريقة عن طريق تجميع معا عدة الحشرات بدلا من تحديد وجود مسببات الأمراض على لكل أساس فردي. وهكذا، فإن تلك الدراسات لم تفرق الجزء جسم الحشرة التي عثر فيها على مسببات الأمراض 13-18. القدرة على تحديد ما إذا كانت مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية وتقع على سطح الجسم أو في القناة الهضمية لحشرة الفردية أمر مهم لأن هذا قد تكون له آثار وبائية وربما يؤدي إلى استراتيجيات التخفيف مختلفة. كما ناقلات الميكانيكية، والذباب تلك الأرض على الطعام لفترة قصيرة قد نقل فقط مستويات منخفضة من البكتيريا من سطح الجسم، في حين أن الذباب الذي اجتر والتبرز على الطعام يزيد من احتمال نقل مسببات الأمراض عند مستويات يحتمل أن تكون أعلى من العدوى. ونتيجة لذلك، من المهم لتقدير مدى انتشار الممرض المنقولة عن طريق الأغذية في حشرة الفردية والتفريق بين جزء من الجسم لتلك الحشرة حيث ص البكتيرية<html> يقع athogen. على الرغم من أن استخدام وسائل ثقافة مستقلة للكشف عن مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية بشكل متزايد التي يجري تنفيذها، فإنها لم تستخدم تجاريا للكشف عن مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية من حشرة واحدة. حاليا، يتم التحقق من صحة وجود بروتوكولات الجزيئية التي تتوفر للكشف السريع لمسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية من الأطعمة التي يتم استخدامها من قبل الصناعة والوكالات التنظيمية تجاريا. وتشمل هذه الأساليب النظم المعتمدة على الحمض النووي للكشف عن مسببات الأمراض في مجموعة متنوعة من العينات الغذائية. على الرغم من أن بروتوكولات الجزيئية هي أسرع من الطرق التقليدية الطلاء، ما زالت هناك حاجة لتخصيب العينة للحصول على مستوى حساسية 10 2 مستعمرة (كفو) من العوامل المسببة للأمراض البكتيرية اللازمة في تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) وسائل المستندة إلى 19. بالإضافة إلى ذلك، هناك حاجة إلى عزل المستعمرات البكتيرية نقية من عينات PCR إيجابية لتأكيد الممرض باستخدام الأساليب المناسبة. المحتوى &quot;&gt; والهدف من هذا البروتوكول هو توحيد نظام يقوم PCR-متاحة تجاريا تستخدم لكشف مسببات الأمراض من عينات المواد الغذائية والبيئية للكشف عن البكتيريا تنتقل عن طريق الأغذية من سطح الجسم والقناة الهضمية لذبابة واحدة وإلى زيادة عزلة تلك تم معايرة مسببات الأمراض من حساسية samples.The البروتوكول الموصوفة هنا لأول مرة مع الذباب منزل الكبار تربى مختبر (الذبابة المنزلية) التي تم تغذيتها تجريبيا مع التخفيفات المسلسل من كل العوامل المسببة للأمراض البكتيرية. تم استخدام بروتوكول موحد لاحقا لمسح 100 البرية وصيدها الذباب عن وجود مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية من السطوح أجسامهم و / أو القنوات الهضمية. وهذا بروتوكول موحد يسمح مختبرات الصحة العامة للكشف عن التهديدات الصحية التي يشكلها الحشرات، والسماح لإمكانية جمعها كجزء من برنامج أخذ العينات البيئية عند تنفيذ تنتقل عن طريق الأغذية التحقيقات تفشي المرض.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bismuth sulfite (BS) agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>R452402</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain heart infusion (BHI) broth</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>299070</td>
			<td>*Pre-warmed to 37&#176;C. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliance Listeria agar (BLA)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>CM1080B</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffered peptone water (BPW)</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>212367</td>
			<td>*Pre-warmed to 37&#176;C or 42&#176;C. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliance Cronobacter agar (Druggan-Forsythe-Iversen formulation/DFI)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>CM1055B</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chromID Sakazakii Agar</td>
			<td>bioM&#233;rieux</td>
			<td>43741</td>
			<td>*Call for information: 800.682.2666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R &#38; F Enterobacter sakazakii (Cronobacter) Chromogenic Plating Medium</td>
			<td>R &#38; F Laboratories</td>
			<td>Various</td>
			<td>*Call for information: +1.630.969.530</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R &#38; F Enterobacter sakazakiii Enrichment Broth and supplement</td>
			<td>R &#38; F Laboratories</td>
			<td>Various</td>
			<td>*Call for information: +1.630.969.530</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hektoen enteric (HE) agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>OXCM0419B</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Listeria enrichment broth (24LEB)</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>CM1107</td>
			<td>*Freshly prepared at room-temperature. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Listeria selective enrichment supplement</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>SR0243</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novobiocin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>OXSR0181E</td>
			<td>*Multiple suppliers. Store at 2-8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vancomycin hydrochloride hydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>861987</td>
			<td>Store at 2-8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefsulodin sodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C8145</td>
			<td>Store at 2-8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rappaport-Vassiliadis (RV) medium</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>CM0669B</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrathionate (TT) Broth</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>249120</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticase soy agar (TSA)</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>236930</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylose lysine desoxycholate (XLD) agar</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>221284</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>API Biochemical identification system</td>
			<td>bioM&#233;rieux</td>
			<td>Various</td>
			<td>*Call for information: +1.800.682.2666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VITEK 2: Product Safety</td>
			<td>bioM&#233;rieux</td>
			<td>Various</td>
			<td>*Call for information: +1.800.682.2667</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BAX System Q7</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BAX E. sakazakii Standard assay kit</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D11801836</td>
			<td>*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BAX L. monocytogenes 24E assay kit</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D13608125</td>
			<td>*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BAX Salmonella 2 Standard assay kit</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D14368501</td>
			<td>*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capping tool</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D11677028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decapping tool</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D11134095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR tube rack/holder</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D12701663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Featherweight forceps, wide tip</td>
			<td>BioQuip</td>
			<td>4750</td>
			<td>Sterilize before use. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine point, straight tip forceps</td>
			<td>BioQuip</td>
			<td>4731</td>
			<td>Sterilize before use. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia/silica beads, 0.5 mm</td>
			<td>Bio Spec Products, Inc.</td>
			<td>11079105z</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes - 60X15mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772B</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable inoculating loops, 10&#181;L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-606</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-shaped cell spreaders</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-665-230</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes, 2 ml</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Various</td>
			<td>Sterilize before use when needed. Secure lid is preferred. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cluster tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-500-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cluster tubes caps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-500-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hypochlorite (Liquid chlorine bleach)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>*Dilute to 0.05% with water. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile deionized water</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile distilled water</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl alcohol 190 proof</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>*Dilute to 70% with water when needed. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genie cell disruptor, 120V - for 1.5ml and 2.0ml microtubes</td>
			<td>Scientific Industries, Inc.</td>
			<td>SI-D238</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating block</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooling block</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recirculating water bath</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of foodborne bacterial pathogens from individual filth flies

There is unanimous consensus that insects are important vectors of foodborne pathogens. However, linking insects as vectors of the pathogen causing a particular foodborne illness outbreak has been challenging. This is because insects are not being aseptically collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations and because there is not a standardized method to detect foodborne bacteria from individual insects. To take a step towards solving this problem, we adapted a protocol from a commercially available PCR-based system that detects foodborne pathogens from food and environmental samples, to detect foodborne pathogens from individual flies.Using this standardized protocol, we surveyed 100 wild-caught flies for the presence of Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes and demonstrated that it was possible to detect and further isolate these pathogens from the body surface and the alimentary canal of a single fly. Twenty-two percent of the alimentary canals and 8% of the body surfaces from collected wild flies were positive for at least one of the three foodborne pathogens. The prevalence of Cronobacter spp. on either body part of the flies was statistically higher (19%) than the prevalence of S. enterica (7%) and L.monocytogenes (4%). No false positives were observed when detecting S. enterica and L. monocytogenes using this PCR-based system because pure bacterial cultures were obtained from all PCR-positive results. However, pure Cronobacter colonies were not obtained from about 50% of PCR-positive samples, suggesting that the PCR-based detection system for this pathogen cross-reacts with other Enterobacteriaceae present among the highly complex microbiota carried by wild flies. The standardized protocol presented here will allow laboratories to detect bacterial foodborne pathogens from aseptically collected insects, thereby giving public health officials another line of evidence to find out how the food was contaminated when performing foodborne outbreak investigations.

تم معايرة هذا البروتوكول الأول على مجموعة من الذباب منزل تربى المختبر التي تم تغذيتها بشكل تجريبي لمدة 24 ساعة مع الغذاء السائل ذبابة (2٪ مسحوق الحليب) التي تحتوي على التخفيفات التسلسلية (10 فبراير - 10 أغسطس كفو / مل) من C. الساكازاكية، S. الملهبة، L. اللستيريا، أو C. الصائمية (ن = 21 لكل ممرض بكتيري). تم تعديل وسائل الإعلام التخصيب وكذلك حضانة مرات ودرجات الحرارة لكل الممرض المنقولة بالأغذية حتى كان النظام القائم على PCR-قادرة على الكشف عن أدنى مستويات البكتيريا (10 2 كفو / مل) من سطح الجسم والقناة الهضمية لواحد تغذية تجريبيا يطير. استخدام وسائل الإعلام التخصيب والشروط الموضحة في قسم البروتوكول، الكشف عن نظام يقوم PCR-C. الساكازاكية، S. الملهبة، وL. اللستيريا من سطح الجسم بنسبة 100٪ من الذباب يتغذى مع البكتيرية قائح&gt; 10 3 كفو / مل (الشكل 1A). عندما تم تغذية الذباب مع 102 كفو / مل، والنسبة المئوية للكشف عن C. الساكازاكية، S. الملهبة، وL. وكانت المستوحدة من سطح الجسم 100٪، 66٪، و 33٪ على التوالي (الشكل 1A). الكشف عن نظام يقوم PCR-أيضا هذه مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية ثلاثة من القناة الهضمية لتغذية الذباب مع جميع التركيزات البكتيرية في النسب المئوية ≥33٪ (الشكل 1B). ومع ذلك، فإن الكشف عن C. وقد تحقق الصائمية فقط عندما تم تغذية الذباب تربى مختبر تجريبي مع المواد الغذائية السائلة التي تحتوي على أعلى اللقاح البكتيري (10 8 كفو / مل). وبالتالي، C. تم استبعاد الصائمية من مجموعة من مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية التي يمكن اختبارها من القذارة synanthropic الفردية الذباب باستخدام هذا النظام القائم على الكشف PCR. مع هذا بروتوكول موحد، كنا قادرين على تحديد مدى انتشار Cronobacter النيابة.، S. الملهبة، وL. اللستيريا من سطح الجسم و / أو عشرالبريد القناة الهضمية من 100 الذباب البرية التي كانت بشكل فردي وجو معقم و مطهر اشتعلت من منطقة القمامة من عشرة مطاعم حضرية تقع في منطقة العاصمة واشنطن، DC كانت 5 الذباب القذارة التي يتم جمعها ممثل لا يقل عن ستة أنواع بما في ذلك M. DOMESTICA (47٪)، الخشف النحاسي (33٪)، L. القزي (14٪)، المتحلزة macellaria (2٪)، المستلحمة الباسوري (2٪)، وOphyra leucostoma (1٪). وقد تم تحديد واحد فقط لذبابة مستوى الأسرة (ذباب الأزهار، 1٪). كان بروتوكول سطح تطهير فعال في تجنب التلوث المتبادل بين أجزاء الجسم من ذبابة لوحظ أي نمو البكتيريا على لوحات TSA للمياه من التطهير الماضي شطف كل ذبابة الفردية. وهكذا، يمكن التمييز بين البكتيريا تنتقل عن طريق الأغذية الحالية على أجزاء الجسم من كل الطاير. تم الكشف عن أي ايجابيات كاذبة من عينات من سطح الجسم والقناة الهضمية لالذباب الفردية عند استخدام هذا النظام التجاري القائم PCR-للكشف عن S. الملهبة وL. الليستريا، وتأكيدا لمسببات الأمراض القابلة للحياة على لوحات أجار كانت في اتفاق مع النتائج PCR إيجابية. ومع ذلك، لم يكن من الممكن لعزل ثقافات نقية من Cronobacter النيابة. من جميع العينات PCR إيجابية. وبالتالي، فإن الكشف عن هذا الممرض من قبل PCR المستندة إلى أظهر نظام ايجابيات كاذبة من سطح الجسم (50٪، 9/18) والقناة الهضمية (48٪، 16/33) من الذباب البرية اشتعلت واحدة. وأكدت عينات-PCR سلبي اختيارها عشوائيا التي كانت مطلية على وسائل الإعلام الخاصة، وعدم وجود مسببات الأمراض المنقولة بالغذاء. ولذلك، تم الكشف عن أي السلبيات كاذبة من أي من العينات عند استخدام هذا النظام القائم على PCR التجاري للكشف عن Cronobacter النيابة.، S. الملهبة، أو L. الليستريا. إلا اعتبرت تلك العينات PCR إيجابية حيث تم عزل العامل الممرض وأكد إيجابيوتضمن للتحليل الإحصائي. ان وجود العام لمسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية في القناة الهضمية من الذباب القذارة البرية اشتعلت أعلى بكثير من على سطح الجسم (χ 2 = 6.8772، DF = 1، ص = 0.0087). وكانت 22٪ من القنوات الهضمية و 8٪ من سطح الجسم من الذباب البرية التي تم جمعها إيجابية واحدة على الأقل من مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية الثلاثة (الشكل 2). وعموما، فإن انتشار Cronobacter النيابة. إما على أسطح الجسم أو القنوات الهضمية لالذباب التي تم جمعها كانت أعلى إحصائيا (19٪، فيشر الدقيق اختبار ع = 0.0165) من انتشار S. الملهبة لل(7٪) والمستوحدة L. (4٪). ومع ذلك، لم يلاحظ أي فروق ذات دلالة إحصائية عند إجراء مقارنات البشرى بين أجزاء الجسم من الذباب لكل ممرض بكتيري (الشكل 3؛ فيشر الدقيق اختبار ص = 0،1464، ص = 0.1184، و p = 0.6212 لCronobacterالنيابة.، S. الملهبة، وL. اللستيريا، على التوالي). ولم يكن أي من الذباب إيجابية لجميع مسببات الأمراض الثلاثة تقييمها. ومع ذلك، وثلاثة من الذباب (اثنان L. النحاسي واحدة L. القزي) قامت السالمونيلا. وL. المستوحدة على السطح أو في القناة الهضمية. <img alt="الشكل (1)" src="/files/ftp_upload/52372/52372fig1.jpg" /> الشكل 1. مستويات الكشف عن الساكازاكية Cronobacter، السالمونيلا الملهبة، Listeria monocytogenes، كما العطيفة الصائمية من (A) على سطح الجسم و(B) القناة الهضمية لالفردية الذباب منزل تربى مختبر تتغذى على المواد الغذائية السائلة التي تحتوي على قائح البكتيرية المختلفة (ن = 21 لكل ممرض بكتيري، ن = 3 في كل تركيز البكتيريا). <img alt="الشكل 2"SRC = &quot;/ الملفات / ftp_upload / 52372 / 52372fig2.jpg&quot; /&gt; الشكل 2. النسبة المئوية للسطوح الجسم والقنوات الهضمية لالذباب الفردية وجدت إيجابية لأي من مسببات الأمراض المنقولة بالأغذية الهدف. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/52372/52372fig3.jpg" /> الشكل 3. انتشار Cronobacter النيابة.، السالمونيلا الملهبة، والليستريا المستوحدة من سطح الجسم والقناة الهضمية من الذباب البرية اشتعلت synanthropic. القيم ص المبلغ عنها من مقارنات البشرى بين سطح الجسم والقناة الهضمية لكل ممرض بكتيري (اختبار فيشر الدقيق، قيمة P &lt;0.05 يدل دلالة إحصائية). حقوق التأليف والنشر © جمعية الأمريكية لعلم الأحياء الدقيقة، مجلة علم الأحياء الدقيقة التطبيقية والبيئة 78 (22): 7891-902، 2012. دوى: 10.1128 / AEM.02195-12.

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Foodborne Bacterial Pathogens from Individual Filth Flies at JoVE.com

Detection of Foodborne Bacterial Pathogens from Individual Filth Flies

A PCR-based protocol was adapted to detect Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes from body surfaces and alimentary canals of individual wild-caught flies. The goal of this protocol is to detect and isolate bacterial pathogens from individual insects collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations.

الكشف عن مسببات الأمراض البكتيرية المنقولة بالأغذية من الذباب الفردية القذارة

There is unanimous consensus that insects are important vectors of foodborne pathogens. However, linking insects as vectors of the pathogen causing a ...

detection-of-foodborne-bacterial-pathogens-from-individual-filth-flies

Nanyang Technological University

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Statistics

Environment

Unit 1

Biostatistics

SCIENTISTS IN ACTION

18.2K Views.  U.S. Food and Drug Administration. A PCR-based protocol was adapted to detect Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes from body surfaces and alimentary canals of individual wild-caught flies. The goal of this protocol is to detect and isolate bacterial pathogens from individual insects collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations.

Video: Detection of Foodborne Bacterial Pathogens from Individual Filth Flies

Colorimetric Paper-based Detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from Large Volumes of Agricultural Water

This protocol describes rapid colorimetric detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from large volumes (10 L) of agricultural waters. Here, water is filtered through sterile Modified Moore Swabs (MMS), which consist&#160;of a simple gauze filter enclosed in a plastic cartridge, to concentrate bacteria. Following filtration, non-selective or selective enrichments for the target bacteria are performed in the MMS. For colorimetric detection of the target bacteria, the enrichments are then assayed using paper-based analytical devices (&#181;PADs) embedded with bacteria-indicative substrates. Each substrate reacts with target-indicative bacterial enzymes, generating colored products that can be detected visually (qualitative detection) on the &#181;PAD. Alternatively, digital images of the reacted &#181;PADs can be generated with common scanning or photographic devices and analyzed using ImageJ software, allowing for more objective and standardized interpretation of results. Although the biochemical screening procedures are designed to identify the aforementioned bacterial pathogens, in some cases enzymes produced by background microbiota or the degradation of the colorimetric substrates may produce a false positive. Therefore, confirmation using a more discriminatory diagnostic is needed. Nonetheless, this bacterial concentration and detection platform is inexpensive, sensitive (0.1 CFU/ml detection limit), easy to perform, and rapid (concentration, enrichment, and detection are performed within approximately 24&#160;hr), justifying its use as an initial screening method for the microbiological quality of agricultural water.

Colorimetric Paper-based Detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from Large Volumes of Agricultural Water

A protocol involving integrated concentration, enrichment, and end-point colorimetric detection of foodborne pathogens in large volumes of agricultural water is presented here. Water is filtered through Modified Moore Swabs (MMS), enriched with selective or non-selective media, and detection is performed using paper-based analytical devices (&#181;PAD) imbedded with bacterial-indicative colorimetric substrates.

على الورق اللونية الكشف عن<em&gt; كولاي</em&gt;،<em&gt; السالمونيلا</em&gt; النيابة، و<em&gt; المستوحدة الليستيريا</em&gt; من كميات كبيرة من المياه الزراعية

This protocol describes rapid colorimetric detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from large volumes (10 L) of ...

Building Double-decker Traps for Early Detection of Emerald Ash Borer

Emerald ash borer (EAB) (Agrilus planipennis Fairmaire), the most destructive forest insect to have invaded North America, has killed hundreds of millions of forest and landscape ash (Fraxinus spp.) trees. Several artificial trap designs to attract and capture EAB beetles have been developed to detect, delineate, and monitor infestations. Double-decker (DD) traps consist of two corrugated plastic prisms, one green and one purple, attached to a 3 m tall polyvinyl chloride (PVC) pipe supported by a t-post. The green prism at the top of the PVC pipe is baited with cis-3-hexenol, a compound produced by ash foliage. Surfaces of both prisms are coated with sticky insect glue to capture adult EAB beetles. Double-decker traps should be placed near ash trees but in open areas, exposed to sun. Double-decker trap construction and placement are presented here, along with a summary of field experiments demonstrating the efficacy of DD traps in capturing EAB beetles. In a recent study in sites with relatively low EAB densities, double-decker traps captured significantly more EAB than green or purple prism traps or green funnel traps, all of which are designed to be suspended from a branch in the canopy of ash trees. A greater percentage of double decker traps were positive, i.e., captured at least one EAB, than the prism traps or funnel traps that were hung in ash tree canopies.

Effective traps to attract and capture the emerald ash borer (EAB) are a key element of detecting and managing this invasive pest. Double-decker traps, placed in full sun near ash trees, incorporate visual and olfactory cues and were more likely to capture EAB than other trap designs in field trials.

بناء طابقين الفخاخ للكشف المبكر عن حفار الرماد الزمرد

Emerald ash borer (EAB) (Agrilus planipennis Fairmaire), the most destructive forest insect to have invaded North America, has killed hundreds of millions ...

Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be brought back to the beehive after the bees have foraged on flowers that have been sprayed with pesticides. Pesticide contaminated food can be exchanged between workers which then feed larvae and therefore can potentially affect the development of honey bees. Thus, residual pesticides in the environment can become a chronic damaging factor to honey bee populations and gradually lead to colony collapse. In the presented protocol, honey bee feeding methods are described and applied to either an individual honey bee or to a colony. Here, the insect growth regulator (IGR) pyriproxyfen (PPN), which is widely used to control pest insects and is harmful to the development of honey bee larvae and pupae, is used as the pesticide. The presenting procedure can be applied to other potentially harmful chemicals or honeybee pathogens for further studies.

Herein we present a method to feed pesticide contaminated food to both an individual honey bee and a beehive colony. The procedure evaluates the pesticide effect on individual honey bees by in vivo feeding of basic larval diet and also on the natural condition of beehive colony.

تقييم تأثير المواد الكيميائية البيئية على عسل النحل التنمية من الفرد إلى مستعمرة مستوى

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be ...

Fluorescent Paper Strips for the Detection of Diesel Adulteration with Smartphone Read-out

Three fluorescent molecular rotors of 4-dimethylamino-4-nitrostilbene (4-DNS) were investigated for their potential use as viscosity probes to indicate the content of kerosene in diesel/kerosene blends, a wide-spread activity to adulterate fuel. In solvents with low viscosity, the dyes rapidly deactivate via a so-called twisted intramolecular charge transfer state, efficiently quenching the fluorescence. Measurements of diesel/kerosene blends revealed a good linear correlation between the decrease in fluorescence and the increase of the fraction of the less viscous kerosene in diesel/kerosene blends. Immobilization of the hydroxy derivative 4-DNS-OH in cellulose paper yielded test strips that preserve the fluorescent indicator&#39;s behavior. Combination of the strips with a reader based on a smartphone and a controlling app allowed to create a simple field test. The method can reliably detect the presence of kerosene in diesel from 7 to 100%, outperforming present standard methods for diesel adulteration.

Here, we present a protocol to detect the adulteration of diesel with kerosene using test strips coated with a fluorescent viscosity probe together with a smartphone-based analysis system.

شرائط ورق الفلورسنت للكشف عن غش الديزل مع القراءة الذكي

Three fluorescent molecular rotors of 4-dimethylamino-4-nitrostilbene (4-DNS) were investigated for their potential use as viscosity probes to indicate ...

Detection of Viruses from Bioaerosols Using Anion Exchange Resin

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid impingement-based air sampling devices for efficacious concentration of negatively-charged viruses from bioaerosols. Thus, the resin serves as an additional concentration step in the bioaerosol sampling workflow. Nucleic acid extraction of the viral particles is then performed directly from the anion exchange resin, with the resulting sample suitable for molecular analyses. Further, this protocol describes a custom-built bioaerosol chamber capable of generating virus-laden bioaerosols under a variety of environmental conditions and allowing for continuous monitoring of environmental variables such as temperature, humidity, wind speed, and aerosol mass concentration. The main advantage of using this protocol is increased sensitivity of viral detection, as assessed via direct comparison to an unmodified conventional liquid impinger. Other advantages include the potential to concentrate diverse negatively-charged viruses, the low cost of anion exchange resin (~$0.14 per sample), and ease of use. Disadvantages include the inability of this protocol to assess infectivity of resin-adsorbed viral particles, and potentially the need for the optimization of the liquid sampling buffer used within the impinger.

An anion exchange resin-based method, adapted to liquid impingement-based bioaerosol sampling of viruses is demonstrated. When coupled with downstream molecular detection, the method allows for facile and sensitive detection of viruses from bioaerosols.

الكشف عن الفيروسات من بيوايروسولس استخدام الراتنجات التبادل شاردة

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid ...

An Anaerobic Biosensor Assay for the Detection of Mercury and Cadmium

Mercury (Hg) bioavailability to microbes is a key step to toxic Hg biomagnification in food webs. Cadmium (Cd) transformations and bioavailability to bacteria control the amount that will accumulate in staple food crops. The bioavailability of these metals is dependent on their speciation in solution, but more particularly under anoxic conditions where Hg is methylated to toxic monomethylmercury (MeHg) and Cd persists in the rhizosphere. Whole-cell microbial biosensors give a quantifiable signal when a metal enters the cytosol and therefore are useful tools to assess metal bioavailability. Unfortunately, most biosensing efforts have so far been constrained to oxic environments due to the limited ability of existing reporter proteins to function in the absence of oxygen. In this study, we present our effort to develop and optimize a whole-cell biosensor assay capable of functioning anaerobically that can detect metals under anoxic condition in quasi-real time and within hours. We describe how the biosensor can help assess how chemical variables relevant to the environmental cycling of metals affect their bioavailability. The following protocol includes methods to (1) prepare Hg and Cd standards under anoxic conditions, (2) prepare the biosensor in the absence of oxygen, (3) design and execute an experiment to determine how a series of variable affects Hg or Cd bioavailability, and (4) to quantify and interpret biosensor data. We show the linear ranges of the biosensors and provide examples showing the method's ability to distinguish between metal bioavailability and toxicity by utilizing both metal-inducible and constitutive strains.

Here, we present a protocol to use an anaerobic whole-cell microbial biosensor to evaluate how different environmental variables affect the bioavailability of Hg and Cd to bacteria in anoxic environments.

مقايسة Biosensor اللاهوائية للكشف عن الزئبق والكادميوم

Mercury (Hg) bioavailability to microbes is a key step to toxic Hg biomagnification in food webs. Cadmium (Cd) transformations and bioavailability to ...

A Precise and Autonomous System for the Detection of Insect Emergence Patterns

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of emerging insects they can detect. In order to obtain precise measurement of insect emergence, it is necessary for systems to be semi-automated and able to measure large numbers of emerging insects. We addressed these issues by designing and building a system that is automated and can measure emergence of up to 1200 insects. We modified the existing &#34;falling-ball&#34; system using Arduino microcontrollers to automate data collection and expand the sample size through multiple data channels. Multiple data channels enable the user to not only increase their sample size, but also allows for multiple treatments to be run simultaneously in a single experiment. Furthermore, we created an R script to automatically visualize the data as a bubble plot, while also calculating the median day and time of emergence. The current system was designed using 3D printing so the user can modify the system to be adjusted for different species of insects. The goal of this protocol is to investigate important questions in chronobiology and stress physiology, using this precise and automated system to measure insect emergence patterns.

Measurement of insect emergence patterns requires precision. Existing systems are only semi-automated and sample size is limited. We addressed these issues by designing a system using microcontrollers to precisely measure the time of emergence of large numbers of emerging insects.

نظام دقيق ومستقل للكشف عن أنماط ظهور الحشرات

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of ...

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a potential mate to form a pair. While this phenomenon has attracted interest of researchers, methods for its analysis have not been well described. Here we describe procedures for: 1) individual culturing and staging of Tigriopus juveniles and adults, and 2) video-based analysis of their mate-guarding behavior. The culturing method enables experimental control of paring experience of animals as well as the ability to track their development before behavioral tests. The analysis method allows quantitative evaluation of several aspects of the mate-guarding behavior, including capturing attempts by males and swimming trajectory of mate-guarding pairs. Although these methods were originally established for ethological studies on Tigriopus, with proper modifications they can also be applied to studies of other zooplankton in different research fields, such as physiology, toxicology, and ecological genetics.

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Mate-guarding behavior plays an important role in reproduction of intertidal copepods of the genus Tigriopus. However, methods for studying this behavior have not been well described. Here we describe methods for: 1) individual culture of virgin Tigriopus animals, and 2) quantitative analysis of their mate-guarding behavior.

استزراع الفردية الكانفاس تيجريوبوس والتحليل الكمي لسلوكهم حراسة ماتي

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a ...

Detection of Tilapia Lake Virus Using Conventional RT-PCR and SYBR Green RT-qPCR

The aim of this method is to facilitate the fast, sensitive and specific detection of Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues. This protocol can be used as part of surveillance programs, biosecurity measures and in TiLV basic research laboratories. The gold standard of virus diagnostics typically involves virus isolation followed by complementary techniques such as reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for further verification. This can be cumbersome, time-consuming and typically requires tissue samples heavily infected with virus. The use of RT-quantitative (q)PCR in the detection of viruses is advantageous because of its quantitative nature, high sensitivity, specificity, scalability and its rapid time to result. Here, the entire method of PCR based approaches for TiLV detection is described, from tilapia organ sectioning, total ribonucleic acid (RNA) extraction using a guanidium thiocyanate-phenol-chloroform solution, RNA quantification, followed by a two-step PCR protocol entailing, complementary deoxyribonucleic acid (cDNA) synthesis and detection of TiLV by either conventional PCR or quantitative identification via qPCR using SYBR green I dye. Conventional PCR requires post-PCR steps and will simply inform about the presence of the virus. The latter approach will allow for absolute quantification of TiLV down to as little as 2 copies and thus is exceptionally useful for TiLV diagnosis in sub-clinical cases. A detailed description of the two PCR approaches, representative results from two laboratories and a thorough discussion of the critical parameters of both have been included to ensure that researchers and diagnosticians find their most suitable and applicable method of TiLV detection.

This protocol diagnoses Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues using RT-PCR methodologies. The entire method is described from tissue dissection to total RNA extraction, followed by cDNA synthesis and detection of TiLV by either conventional PCR or quantitative PCR using dsDNA binding a fluorescent binding dye.

كشف البلطي بحيرة الفيروسات باستخدام التقليدية RT-PCR وسيبر الأخضر RT-قبكر

The aim of this method is to facilitate the fast, sensitive and specific detection of Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues. This protocol can be ...

Reproducible dsRNA Microinjection and Oviposition Bioassay in Mosquitoes and House Flies

Synthetic dsRNAs, used to induce RNA interference, may have dose dependent phenotypic effects. These effects are difficult to define if the dsRNAs are delivered using a non-quantitative method. Accurate delivery of known quantities of nucleic acids or other chemicals is critical to measure the efficacy of the compound being tested and to allow reliable comparison between compounds.
Here we provide a reproducible, quantitative microinjection protocol that ensures accurate delivery of specific doses of dsRNA, reducing the mortality typically induced by injection injury. These modifications include the addition of Rhodamine B, a graduated injection needle, and an improved recovery method borrowed from Isoe and Collins. This method allows calculation of dose responses and facilitates comparisons between compounds. Versions of this method have been successfully used on three genera of mosquitoes as well as house flies to assess the reduction in fecundity resulting from gene silencing of ribosomal RNA transcripts.
This protocol provides strategies to reduce several challenges of small insect microinjection. Together, mechanical delivery of dsRNAs accompanied by visual verification, identification of effective locations for delivery, and inclusion of a post-injection recovery period ensure accurate dosing and low injury mortality. This protocol also describes an oviposition bioassay for uniform determination of effects on fecundity.

This protocol describes a microinjection methodology that we have standardized and used for several years to deliver specific quantities of nucleic acids directly to the hemolymph of mosquitoes and house flies. This protocol results in minimal injection mortality and allows dose correlated measurements of fecundity.

دسرنا استنساخه Microinjection و "الحشري أوفيبوسيتيون" في البعوض والذباب البيت

Synthetic dsRNAs, used to induce RNA interference, may have dose dependent phenotypic effects. These effects are difficult to define if the dsRNAs are ...