This protocol follows any and all animal care and use guidelines and regulations set by IACUC at the University of Cincinnati. This work is funded by NIH/NINDS NS07722 and the Gardner Family Center for Parkinson&#8217;s Disease and Movement Disorders.

جميع الخطوات للبروتوكول تتبع رعاية الحيوان واستخدام المبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها IACUC من جامعة سينسيناتي. 1. اعتبارات عامة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان ذلك ممكنا، اختبار الفئران خلال المرحلة النشطة في دورة الظلام. عادة، أداء اختبار تحت الإضاءة الخافتة و1 ساعة على الأقل في دورة الظلام. ومع ذلك، إذا الاختبار في دورة الظلام غير ممكن، أداء جميع الاختبارات الثلاثة خلال دورة الخفيفة. نضع في اعتبارنا أن استنشاق الأوقات قد يقلل عندما يتم اختبار الفئران خلال دورة نومهم. ملاحظة: على الرغم من أن الاختبارات يمكن أن يؤديها خلال دورة النوم الفئران قد تظهر أقل اهتمام في دفن بيليه، وكتل، أو خرطوشة المعطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل الحد من أي تأثير خارج العظة حاسة الشم، وارتداء زوج من القفازات قاعدة في جميع الأوقات طوال كل اختبار ومن ثم وضع على زوج من القفازات النظيفة على الزوج قاعدة لكل الماوس وكل محاكمة. كقاعدة عامة، عندما تكون في شك، وطرح على مجموعة من قفازات نظيفة. وقد علبة القفازات قراءةمتاح إيلي لأنها سوف تتغير بشكل متكرر. ملاحظة: نحن نستخدم قفازات النتريل للجميع التعامل مع الحيوانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف مواد الاختبار وأقفاص بين الموضوعات مع مطهر / وكيل تعقيم هو أيضا خطوة هامة في هذا من الاختبارات من أجل الحد من إمكانية انتشار المرض وكذلك إزالة العظة حاسة الشم غير مرغوب فيها. </li></ol> 2. دفن بيليه اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل يومين على الأقل الاختبار، وتسجيل وزن كل فأر ومن ثم تقييد الغذاء إلى 90٪ من وزن الجسم. قبل الاختبار وأثناء تقييد الغذاء، وإعطاء كل فأر 1-2 قطعة من الكريات لاستخدامها أثناء الاختبار (على سبيل المثال، قطعة من الحبوب المحلاة). لا تخطي هذه الخطوة لأن الفئران هي رهوب الجديد مع الغذاء وقد لا بالبحث عن بيليه أثناء الاختبار إن لم تكن قد أكلت الكريات سابقا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في جميع أيام الاختبار، روض الفئران لمدة 1 ساعة قبل الاختبار عن طريق وضع القفص في غرفة اختبار لا زجاجة المياه أو وحدة التغذية بفي. إيوائهم في قفص وطنهم مع مجرد غطاء رأس المرشح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال التعود، وملء قفص الماوس نظيفة ~ 3 سم ارتفاع مع أغطية فراش نظيف التأكد توزع بالتساوي في جميع أنحاء الفراش القفص. تحديد توقيت لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 1 ساعة من التعود، دفن 1 المحلاة بيليه الحبوب 0.5 سم تحت الفراش بحيث تكون غير مرئية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة اختبار الماوس من القفص وطنه، وضعه في مركز اختبار القفص، وضع غطاء رأس تصفية على القفص وبدء الموقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إيقاف الموقت عندما يكشف الماوس بيليه ويبدأ أكله. ملاحظة وقت لكشف بيليه دفن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا لم يجد الفأر بيليه ضمن 5 دقائق، في نهاية المحاكمة ونلاحظ على درجة من 300 ثانية لهذا الماوس. نقل بيليه إلى أعلى الفراش حتى الماوس الوصول إليها، والسماح الماوس لتناول الطعام بيليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد المحاكمة، والعودة الماوس لقفص وطنه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إفراغ الفراش من اختبار وتنظيف قفص جالعمر مع محلول تنظيف الغرفة الحيوانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 2،4-2،9 لكل الماوس، وتغيير القفازات قبل وبعد كل فأر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن يتم اختبار جميع الفئران، ومنحهم ما يكفي من الغذاء للحفاظ عليها في 90٪ من وزن الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء اختبار في أيام 2-5 بنفس طريقة اختبار يوم 1 مع استثناء واحد؛ دفن بيليه في بقعة مختلفة في القفص لكل محاكمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم الاختبار 6، نفذ المحاكمة بيليه السطح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لسطح بيليه محاكمة، اتبع نفس الإجراء لاختبار يوم 1 ولكن بدلا من دفن بيليه تحت الفراش مكان على رأس الفراش. تسجيل الوقت لالماوس لتجد والبدء في تناول بيليه. </li></ol> 3. بلوك اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إيواء فردي الفئران في أقفاص نظيفة ووضع 5 كتل في القفص (المسمى AE)، وتغيير القفازات قبل إعداد كل قفص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء اختبار 24 ساعة في وقت لاحق. الانتقال الفئران اختبار لمنطقة الاختبار، وإزالة زجاجة المياه المغذية وبن، ووضع آلل 5 بنات من القفص جنبا إلى جنب مع حفنة من الفراش في كيس من البلاستيك المسمى مع تحديد الحيوان. وضع كيس من البلاستيك مختوم على رأس قفص المنزل الفأر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> روض الحيوانات في قفص وطنهم دون زجاجة المياه، تغذية بن، وكتل لمدة 1 ساعة قبل الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير القفازات بين كل قفص بحيث لا يتم تبادل الروائح بين الحيوانات / كتل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يصطف أقفاص الماوس بجانب بعضها البعض على طاولة مع لا يقل عن 10 سم بين كل قفص. وضع كاميرا الفيديو بحيث الجزء الأمامي من القفص (وليس الجانب طويلة من القفص) هي في رؤية واضحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين جهاز ضبط الوقت لمدة 30 ثانية وتسمية البطاقة مع تفاصيل مهمة التجربة (التاريخ وID الماوس، والمحاكمة، وغيرها). شريط فيديو التسمية لمدة 2-3 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة كتل م من كيس من البلاستيك مع تحديد أن الماوس ووضعها في منتصف القفص بحيث تكون واضحة للعيان على كاميرا فيديو. تأكد من وجود ~ 1 سم سالفضاء و بين كل الكتل. وضع مرشح مرة أخرى على أعلى القفص. بدء موقت وشريط فيديو لمدة 30 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 30 ثانية، وإيقاف التسجيل وإزالة كتل من القفص ووضعها مرة أخرى في كيس من البلاستيك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير القفازات وبعد ذلك ننتقل إلى الماوس المقبل، وتكرار نفس الإجراء المتبع في المحاكمة الأولى. للقيام بذلك ما مجموعه 6 محاكمات لكل الماوس التأكد من وجود فاصل زمني بين المحاكمة من ~ 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على محاكمة ال 7، اتبع نفس الإجراء للمحاكمات 1-6 باستثناء بدلا من وضع كتلة D من قفص الماوس نفسه E إضافة كتلة من قفص الماوس آخر بحيث يتعرض الماوس لكتل A، B، C والتي من الخاصة قفص المنزل وكتلة E من قفص الماوس آخر. نلاحظ في الكتاب المختبر الذي يتعرض كل الماوس لوبالتناوب حيث يتم وضع كتلة E في كل قفص فأرة (على سبيل المثال، ABCE أو AEBC) E كتلة. تأخذ كتلة E من الماوس من نفس الجنس ولكن ليس من cagemate الأصلي. السادسdeotape لمدة 30 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 7 المحاكمات، والعودة إلى قفص الحيوانات نظيف جديد مع cagemates الأصلية. كتل النظيفة المستخدمة في الاختبار مع منظف معتدل والماء وتسمح للهواء الجاف لاستخدامها في اختبارات لاحقة. </li></ol> 4. التعويد / إزالة التعود <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء اختبار التعود / إزالة التعود بطريقة مشابهة لاختبار كتلة ولكن بدلا من استخدام الكتل التي لديها رائحة ماوس، استخدم خراطيش الأنسجة القطنية المعطرة عقد مع أزواج مختلفة من المقتطفات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع الخطوات من 3،1-3،4 باستخدام واحدة، خرطوشة الأنسجة نسكينتيد بدلا من كتل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> روض الفئران في غرفة الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد خراطيش الأنسجة المعطرة في غرفة منفصلة. وضع كرة من القطن صغيرة في خرطوشة نظيفة ثم قم بإضافة 5 ميكرولتر من استخراج (على سبيل المثال، واستخراج اللوز) في القطن. المفاجئة أعلى خرطوشة على القطن ومكان في مربع مخصصة أو كيس المسمى مع أن رائحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القيام بنفس الإجراء وأو رائحة الثانية (على سبيل المثال، مستخلص اليانسون). تغيير القفازات بين التعامل مع الروائح المختلفة. تأكد من القطن المغطى الكرة تماما في خرطوشة الأنسجة. ملاحظة: مكشوف من ألياف القطن الكرة قد يسبب الحيوان لديها مصلحة في القطن الكرة لأغراض التعشيش بدلا من رائحة نفسه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم اتبع الخطوات 3،6-3،10 باستخدام أحد خرطوشة الأنسجة المعطرة للمحاكمات الستة الأولى، وخرطوشة الأنسجة المعطرة الثانية لمحاكمة السابعة. </li></ol> 5. تحليل أشرطة الفيديو <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكتلة والاختبارات التعود / إزالة التعود، لديها أعمى المقيم إلى حالة تجريبية قياس الوقت الذي يقضيه استنشاق كل كتلة، مع استنشاق الأنف يعرف بانه على اتصال مع تلك الكتلة. إذا رغبت في ذلك، وقياس السلوكيات الأخرى مثل الوقت من الاقتراب من كتلة رواية (E) أثناء المحاكمة 7 والنشاط الإجمالي (عدد حركات جعلت على طول وعرض قفص المنزل) خلال كل محاكمة. يسجل الوقت الذي يقضيه استنشاق لالوقت د بالاقتراب من شريط الفيديو باستخدام ساعة توقيت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبالمثل، لاختبار التعود / إزالة التعود، لديها أعمى المقيم إلى حالة تجريبية قياس الوقت الذي يقضيه استنشاق خرطوشة، وقت الاقتراب من خرطوشة، والنشاط الحركي. </li></ol> 6. الاحصائيات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل اختبار بيليه دفن باستخدام الإحصاءات غير بارامترية لأن الكمون للعثور على بيليه عشرات تميل إلى إظهار عدم تجانس التباين. متوسط ​​الكمون لتحديد موقع بيليه في جميع أنحاء 3-5 أيام ثم قارن بين مجموعات من الفئران باستخدام مان ويتني U-الاختبار. وبالمثل، لبيليه سطح جزء من اختبار وتحليل الكمون للعثور على بيليه باستخدام مان ويتني U اختبار لمقارنة الأنماط الجينية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لاختبار كتلة، وتحليل البيانات من محاكمة 7 (مقدمة من كتلة المعطرة رواية). عادة، تستخدم التحليلات غير بارامترية لحساب تجانس التباين. من أجل تحليل الاختلافات في الوقت الذي يقضيه استنشاق عشرالبريد كتلة رواية فضلا عن الوقت الاقتراب من كتل لمجموعات تجريبية مختلفة، استخدم مان ويتني U-الاختبار. استخدام يلكوكسن توقيع الرتبة الاختبار لمقارنة الوقت الذي يقضيه استنشاق كتلة الرواية إلى الوقت الذي يقضيه استنشاق الكتل مألوفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لاختبار التعود / إزالة التعود وتحليل سلوك حدودي على المحاكمات 1 و 6 و 7، على غرار دراسات سابقة 20. إذا الفئران تظهر شيئا يذكر لولا استنشاق، واستخدام التحليلات غير بارامترية. </li></ol>

<ol>
	<li>Hawkes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfaction+in+neurodegenerative+disorder.">Olfaction in neurodegenerative disorder.</a> Adv. Otorhinolaryngol. 63, 133-151 (2006).</li><li>Ward, C., Hess, W., Calne, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+impairment+in+Parkinson's+disease.">Olfactory impairment in Parkinson's disease.</a> Neurology. 33, 943-946 (1983).</li><li>Doty, R., Stern, M., Pfeiffer, C., Gollomp, S., Hurtig, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bilateral+olfactory+dysfunction+in+early+stage+treated+and+untreated+idiopathic+Parkinson's+disease.">Bilateral olfactory dysfunction in early stage treated and untreated idiopathic Parkinson's disease.</a> J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 55, 138-142 (1992).</li><li>Doty, R., Deems, D., Stellar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+dysfunction+in+parkinsonism:+a+general+deficit+unrelated+to+neurologic+signs,+disease+stage,+or+disease+duration.">Olfactory dysfunction in parkinsonism: a general deficit unrelated to neurologic signs, disease stage, or disease duration.</a> Neurology. 38, 1237-1244 (1988).</li><li>Tissingh, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+olfaction+in+de+novo+and+treated+Parkinson's+disease:+possible+implications+for+early+diagnosis.">Loss of olfaction in de novo and treated Parkinson's disease: possible implications for early diagnosis.</a> Movement Disorders. 16 (1), 41-46 (2001).</li><li>Montgomery, E., Baker, K., Lyons, K., Koller, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+performance+on+the+PD+test+battery+by+asymptomatic+first-degree+relatives.">Abnormal performance on the PD test battery by asymptomatic first-degree relatives.</a> Neurology. 52, 757-762 (1999).</li><li>Berendse, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subclinical+dopaminergic+dysfunction+in+asymptomatic+Parkinson's+disease+patients'+relatives+with+a+decreased+sense+of+smell.">Subclinical dopaminergic dysfunction in asymptomatic Parkinson's disease patients' relatives with a decreased sense of smell.</a> Ann. Neurol. 50 (1), 34-41 (2001).</li><li>Ponsen, M., Stoffers, D., Booij, J., van Eck-Smit, B., Wolters, E., Berendse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+hyposmia+as+a+preclinical+sign+of+Parkinson's+disease.">Idiopathic hyposmia as a preclinical sign of Parkinson's disease.</a> Ann. Neurol. 56, 173-181 (2004).</li><li>Langston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Parkinson's+complex:+parkinsonism+is+just+the+tip+of+the+iceberg.">The Parkinson's complex: parkinsonism is just the tip of the iceberg.</a> Ann. Neurol. 59 (4), 591-596 (2006).</li><li>Ross, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+olfactory+dysfunction+with+risk+for+future+Parkinson's+disease.">Association of olfactory dysfunction with risk for future Parkinson's disease.</a> Ann. Neurol. 63, 167-173 (2008).</li><li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+progressive+sensorimotor+anomalies+in+mice+overexpressing+wild-type+human+alpha-synuclein.">Early and progressive sensorimotor anomalies in mice overexpressing wild-type human alpha-synuclein.</a> J. Neurosci. 24, 9434-9440 (2004).</li><li>Fleming, S., Ekhator, O., Ghisays, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+sensorimotor+function+in+mouse+models+of+Parkinson's+disease.">Assessment of sensorimotor function in mouse models of Parkinson's disease.</a> J. Vis. Exp. , e50303 (2013).</li><li>Schallert, T., Tillerson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intervention+strategies+for+degeneration+of+DA+neurons+in+parkinsonism:+Optimizing+behavioral+assessment+of+outcome.">Intervention strategies for degeneration of DA neurons in parkinsonism: Optimizing behavioral assessment of outcome.</a> Central Nervous System Diseases. , 131-151 (2000).</li><li>Whishaw, I., O'Connor, W., Dunnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contributions+of+motor+cortex,+nigrostriatal+dopamine+and+caudate-putamen+to+skilled+forelimb+use+in+the+rat.">The contributions of motor cortex, nigrostriatal dopamine and caudate-putamen to skilled forelimb use in the rat.</a> Brain. 109 (5), 805-843 (1986).</li><li>Schwarting, R., Huston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unilateral+6-hydroxydopamine+lesion+model+in+behavioral+brain+research.+Analysis+of+functional+deficits,+recovery+and+treatments.">The unilateral 6-hydroxydopamine lesion model in behavioral brain research. Analysis of functional deficits, recovery and treatments.</a> Prog Neurobiol. 49 (3), 215-266 (1996).</li><li>Glasl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pink1-deficiency+in+mice+impairs+gait,+olfaction+and+serotonergic+innervation+of+the+olfactory+bulb.">Pink1-deficiency in mice impairs gait, olfaction and serotonergic innervation of the olfactory bulb.</a> Experimental Neurology. 235, 214-227 (2012).</li><li>Kim, Y., Lussier, S., Rane, A., Choi, S., Andersen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+dopaminergic+glutathione+depletion+in+an+&#945;-synuclein+transgenic+mouse+model+results+in+age-related+olfactory+dysfunction.">Inducible dopaminergic glutathione depletion in an &#945;-synuclein transgenic mouse model results in age-related olfactory dysfunction.</a> Neuroscience. 172, 379-386 (2011).</li><li>Fleming, S., Tetreault, N., Mulligan, C., Huston, C., Masliah, E., Chesselet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+deficits+in+mice+overexpressing+human+wildtype+alpha-synuclein.">Olfactory deficits in mice overexpressing human wildtype alpha-synuclein.</a> The European Journal of Neuroscience. 28 (2), 247-256 (2008).</li><li>Nuber, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+progressive+dopaminergic+phenotype+associated+with+neurotoxic+conversion+of+&#945;-synuclein+in+BAC-transgenic+rats.">A progressive dopaminergic phenotype associated with neurotoxic conversion of &#945;-synuclein in BAC-transgenic rats.</a> Brain. 136 (2), 412-432 (2013).</li><li>Macknin, J., Higuchi, M., Lee, V., Trojanowski, J., Doty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+dysfunction+occurs+in+transgenic+mice+overexpressing+human+tau+protein.">Olfactory dysfunction occurs in transgenic mice overexpressing human tau protein.</a> Brain Res. 1000, 174-178 (2004).</li><li>Lazic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+abnormalities+in+Huntington's+disease:+decreased+plasticity+in+the+primary+olfactory+cortex+of+R6/1+transgenic+mice+and+reduced+olfactory+discrimination+in+patients.">Olfactory abnormalities in Huntington's disease: decreased plasticity in the primary olfactory cortex of R6/1 transgenic mice and reduced olfactory discrimination in patients.</a> Brain Res. 1151, 219-226 (2007).</li><li>Wesson, D., Wilson, D., Nixon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Should+olfactory+dysfunction+be+used+as+a+biomarker+of+Alzheimer's+disease?.">Should olfactory dysfunction be used as a biomarker of Alzheimer's disease?.</a> Expert Review of Neurotherapeutics. 10 (5), 633-635 (2010).</li><li>Taylor, T., Caudle, W., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VMAT2-deficient+mice+display+nigral+and+extranigral+pathology+and+motor+and+nonmotor+symptoms+of+Parkinson's+disease.">VMAT2-deficient mice display nigral and extranigral pathology and motor and nonmotor symptoms of Parkinson's disease.</a> Parkinsons Dis. 2011, 124-165 (2011).</li><li>Tillerson, J., Caudle, W., Parent, J., Gong, C., Schallert, T., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+discrimination+deficits+in+mice+lacking+the+dopamine+transporter+or+the+D2+dopamine+receptor.">Olfactory discrimination deficits in mice lacking the dopamine transporter or the D2 dopamine receptor.</a> Behav. Brain Res. 172, 97-105 (2006).</li><li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+trial+of+the+microtubule-interacting+peptide+(NAP)+in+mice+overexpressing+alpha-synuclein+shows+improvement+in+motor+function+and+reduction+of+alpha-synuclein+inclusions.">A pilot trial of the microtubule-interacting peptide (NAP) in mice overexpressing alpha-synuclein shows improvement in motor function and reduction of alpha-synuclein inclusions.</a> Mol. Cell. Neurosci. 4, 597-606 (2011).</li><li>Crawley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> What's Wrong with My Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice. , (2000).</li><li>Nathan, B., Yost, J., Litherland, M., Struble, R., Switzer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+function+in+apoE+knockout+mice.">Olfactory function in apoE knockout mice.</a> Behav. Brain Res. 150, 1-7 (2004).</li><li>Spinetta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol-induced+retrograde+memory+impairment+in+rats:+prevention+by+caffeine.">Alcohol-induced retrograde memory impairment in rats: prevention by caffeine.</a> Psychopharmacology. 201 (3), 361-371 (2008).</li><li>Bielsky, I., Hu, S., Szegda, K., Westphal, H., Young, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+impairment+in+social+recognition+and+reduction+in+anxiety-like+behavior+in+vasopressin+V1a+receptor+knockout+mice.">Profound impairment in social recognition and reduction in anxiety-like behavior in vasopressin V1a receptor knockout mice.</a> Neuropsychopharmacology. 29, 483-493 (2004).</li></ol>

We have no conflicts of interest.

كل من الاختبارات الموصوفة في هذه الدراسة قياس الجوانب المختلفة من وظيفة حاسة الشم في الفئران. يقيس الاختبار بيليه دفن الدافع الجانب الغذائي لالشم، واختبار قدرة جائع (الغذاء مقيدة، لا يحرم الطعام) الفئران للكشف عن قطعة قبولا من الحبوب المحلاة مدفونة تحت الفراش. يقيس اختبار كتلة أكثر من الجانب الاجتماعي من وظيفة حاسة الشم، واختبار قدرة الفئران على التمييز بين رائحة خاصة بهم وذلك من مناوع. اختبار التعود / إزالة التعود يقيم قدرة الماوس على التمييز بين الروائح المألوفة وغير ضارة الرواية،. باستخدام اختبارات متعددة المهم عندما تميز نموذج جديد لشذوذ في الدوافع الطعام أو الخوف يمكن أن يسهم في الاختلافات التي لوحظت في الفئران الطافرة مقارنة مع الضوابط. على سبيل المثال، إذا تم إجراء الاختبار فقط كتلة وانخفض استنشاق الكتلة التي لوحظ رائحة فأر آخر، فإنه من غير الواضح ما إذا كان هناك الرويحةأوري العجز أو تعزيز استجابة الخوف إلى مناوع التي قد تؤدي إلى تجنب تلك الكتلة. عندما يتم إجراء اختبارات متعددة والعجز ويلاحظ في جميع الاختبارات، وهو يدعم بقوة هذا التفسير من ضعف حاسة الشم. ومع ذلك، إذا لوحظت اختلافات في الاختبار ولكن ليس للآخرين واحد فقط ثم قد يكون هناك ضعف حاسة الشم أكثر دهاء ولكن سيكون من الضروري استبعاد التفسيرات الأخرى (أي، وتعزيز الخوف أو انخفاض الدافع الغذائي). وتشمل العوامل الهامة الإضافية أن نأخذ في الاعتبار عند اختبار الفئران وظيفة حاسة الشم سلالة الخلفية وجنس الفئران. سلالات خلفية وراثية مختلفة (أي C57BL / 6، DBA، وغيرها) يمكن أن يكون لها آثار عميقة على سلوك الماوس ولذلك فمن المستحسن أن تتكيف مع كل بروتوكول في الفئران wildtype من نفس الخلفية قبل تنفيذ التجربة بأكملها. ويوصى أيضا أن يتم اختبار الذكور وإناث الفئران بشكل منفصل عن بعضها البعض لأن النظام الشمي الذكور مرتفعلاي حساسية للإناث في الكشف ودقي وحاسة الشم من امرأة في ودقي يمكن أن تتداخل مع الأداء في جميع الاختبارات الثلاثة. بعض الخطوات هي في غاية الأهمية لمتابعة عند اختبار الشم في الفئران. من المهم أن ندرك الروائح المجرب هو إدخال للحيوانات. ارتداء القفازات لإجراءات غير مطلوب تغيير أساسي ومتكررة من القفازات بين الحيوانات. هو دائما ممارسة جيدة لالمجرب عدم ارتداء الكولونيا أو العطور في أيام الاختبار الشم. في حين أن بعض أجزاء من الإجراء غير مرنة، وهناك أجزاء أخرى التي يمكن تعديلها وتكييفها دون التقليل من صحة أو حساسية الاختبار. على سبيل المثال، عدد من التجارب التعود يمكن أن يزيد أو ينقص تبعا لسلالة من الفئران التي يجري اختبارها ومدى السرعة التي روض للمنبهات. الحد الأكبر من هذه الاختبارات هو أنها كلها مدفوعة من قبل بعض شكل من أشكال التحفيز، سواء كان ذلك الطعام أو اجتماعية، مما يجعلمن الصعب يستبعد تماما التشوهات في الدافع كتفسير عندما لاحظت استجابة تغييرها. هذا يمكن التقليل من خلال تحليل معلمات إضافية، مثل النشاط خلال اختبار والوقت لنقترب المحفزات. مرة واحدة يتقن، اختبارات يمكن استخدامها بسهولة في دراسة النمط الظاهري من نماذج الماوس جديدة من الأمراض العصبية التنكسية. بالإضافة إلى ذلك، يمكن تضمين الاختبارات التي لها أعلى سلطة في الدراسات قبل السريرية اختبار العلاجات المحتملة (للحصول على مثال انظر المرجع 25).

ويرتبط ضعف حاسة الشم لعدد من الاضطرابات العصبية بما في ذلك مرض باركنسون (PD)، مرض الزهايمر، ومرض هنتنغتون 1. في PD، وتشمل ضعف حاسة الشم العجز في التعرف على الرائحة، والكشف، والتمييز وتوجد في ما يصل الى 70-95٪ من المرضى 2-5. يمكن لهذه العجوزات تسبق أعراض الكاردينال السيارات من PD بنسبة تصل إلى 4 سنوات، مشيرا إلى أن ضعف حاسة الشم قد يشير إلى المراحل الأولى من PD 6-10. وقد أدى حدوث العجز المبكر لحاسة الشم في PD إلى اهتماما كبيرا في ضعف حاسة الشم والآليات الكامنة المعنية. في الدراسات قبل السريرية في القوارض، يمكن أن ضعف حاسة الشم يكون قياس النتيجة حساسة للتنبؤ الإمكانات العلاجية استراتيجيات علاجية جديدة. وقد تم تصميم العديد من الاختبارات وتستخدم على نطاق واسع لوصف العاهات الحسية في نماذج القوارض من PD وقسم التدريب والامتحاناتر الإمكانات العلاجية من العلاجات الجديدة 11-15. على الرغم من العجز في حاسة الشم هي موثقة جيدا في PD، وظيفة حاسة الشم لم يتم قياسها بشكل روتيني في كثير من النماذج. هذه النظرة تتغير ولكن مع اكتشاف أشكال الوراثية من PD وفكرة أكثر المقبولة التي PD هو اضطراب النظامية التي تؤثر أكثر من وظيفة الحسية فقط. حاليا، هناك العديد من الدراسات في نماذج الماوس الوراثية من PD والاضطرابات العصبية الأخرى التي تشمل الآن تحليل الشم في توصيف 16-24. ونظرا للاهتمام المتزايد من ضعف حاسة الشم في الاضطرابات العصبية، سعينا إلى تجميع مجموعة من الاختبارات حاسة الشم التي يمكن استخدامها لوصف نماذج جديدة من التنكس العصبي وكذلك اختبار العلاجات المعدلة للمرض المحتملة في الدراسات قبل السريرية. وقد استخدمت الاختبارات الموصوفة في هذه الدراسة في كل من توصيف والدراسات قبل السريرية 18،25. الاختبارات HIGHLighted في هذه الدراسة ثبت أن لديها حساسية في الكشف عن ضعف حاسة الشم في الاستفادة كثيرا ألفا synuclein نموذج الفأر overexpressing من مرض باركنسون 18. وهي تشمل اختبار دفن بيليه 26،27، وهو نسخة معدلة من اختبار كتلة 23،24،28،29، واختبار التعود / إزالة التعود 30. من المهم أن نلاحظ أن هناك عدة تعديلات من الاختبارات الموصوفة في هذه الدراسة التي هي التدابير الحساسة من وظيفة حاسة الشم في الفئران، ومنها إبرازها في هذه الدراسة هي الاختبارات المعملية لديه خبرة أكثر مع واستخدامها بشكل روتيني.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="352">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">Cap&#39;n Crunch</td>
			<td style="width:88px;">Quaker Oats</td>
			<td align="right" style="width:88px;">3E+10</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">Wooden Blocks</td>
			<td style="width:88px;">Lara&#8217;s Crafts</td>
			<td align="right" style="width:88px;">10144</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="379" rowspan="6" style="height:379px;width:88px;">Flavor Extracts</td>
			<td rowspan="6" style="width:88px;">Kroger</td>
			<td style="width:88px;">Almond: 011110664716</td>
			<td rowspan="6" style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Anise: 011110615619</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Banana: 011110669919</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Coconut: 011110669889</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Lemon: 011110669957</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:88px;">Orange: 0011110669964</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="59" rowspan="2" style="height:59px;width:88px;">Tissue Cartridges</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Z672122-500EA</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Manufactured by Simport no: M490-2</td>
		</tr>
		<tr height="18">
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Cotton Balls</td>
			<td style="width:88px;">Kroger</td>
			<td align="right" style="width:88px;">1.1111E+10</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">Mouse Cages</td>
			<td style="width:88px;">Ancare</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:88px;">19 x 29 x 12.7 cm</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Camcorder</td>
			<td style="width:88px;">Sony</td>
			<td style="width:88px;">&#160;HDR-HC9</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">MiniDV Tapes</td>
			<td style="width:88px;">Sony DVC premium</td>
			<td align="right" style="width:88px;">2.7243E+10</td>
			<td style="width:88px;">60 minute long play&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process and may be a useful behavioral marker for early detection. Earlier detection in neurodegenerative disease is a major goal in the field because this is when neuroprotective therapies have the best potential to be effective. Therefore, in preclinical studies testing novel neuroprotective strategies in rodent models of neurodegenerative disease, olfactory assessment could be highly useful in determining therapeutic potential of compounds and translation to the clinic. In the present study we describe a battery of olfactory assays that are useful in measuring olfactory function in mice. The tests presented in this study were chosen because they measure olfaction abilities in mice related to food odors, social odors, and non-social odors. These tests have proven useful in characterizing novel genetic mouse models of Parkinson&#8217;s disease as well as in testing potential disease-modifying therapies.

بيليه، كتلة، واختبارات التعود / إزالة التعود دفن كلها التقييمات مفيدة للغاية من الشم في الفئران. باستخدام هذه الاختبارات، وجدنا تغييرات كبيرة في الشم في نماذج الماوس الجيني متعددة من مرض باركنسون، بما في ذلك overexpressing ألفا synuclein (Thy1-aSyn) 18 وAtp13a2 الفئران خروج المغلوب. كلا Thy1-aSyn وAtp13a2 الفئران خروج المغلوب يستغرق وقتا أطول للعثور على بيليه دفن 18 من الضوابط. أرقام 1-3 تظهر البيانات التي تم جمعها من wildtype وAtp13a2 خروج المغلوب الفئران. في الاختبار بيليه دفن، تظهر Atp13a2 الفئران خروج المغلوب زيادة الكمون للعثور على بيليه دفن مقابل السيطرة على الفئران wildtype (الشكل 1). في اختبار كتلة كل من wildtype وAtp13a2 الفئران خروج المغلوب شم كتلة رواية من قفص الماوس أخرى لمقارنة كتل الخاصة بهم من قفص المنزل (الشكل 2). في فئران الاختبار التعود / إزالة التعود wildtype تظهر التعود على رائحة واحدة و<html> ثم ارتفعت عند استنشاق رائحة قدم رواية (الشكل 3). <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig1highres.jpg" width="500" /> الرقم 1. دفن بيليه الاختبار. الكمون للعثور على بيليه في wildtype (ن = 10) وAtp13a2 KO (ن = 14) في 20-27 م من العمر. * P &lt;0.05، مان ويتني U. <img alt="الشكل 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig2highres.jpg" width="500" /> الشكل 2. بلوك اختبار الزمن استنشاق كتلة رواية (E) في اختبار كتلة في wildtype (ن = 10) وAtp13a2 KO (ن = 12) إناث الفئران في 20 - 27m سجلت من العمر. ΔΔ يمثل P &lt;0.01 مقارنة مع كتل A، B، و C من نفس النمط الجيني. مان ويتني U. &quot;SRC =&quot; / الملفات / ftp_upload / 51804 / 51804fig3highres.jpg &quot;العرض =&quot; 500 &quot;/&gt; الرقم اختبار 3. التعويد / إزالة التعود. متوسط ​​الوقت استنشاق خرطوشة المعطرة في الفئران wildtype (سن 9 م، ن = 7) في 6 محاكمات وإدخال خرطوشة مع رائحة جديدة للمحاكمة 7.

Watch this Scientific Journal Video about Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease at JoVE.com

Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

Impairment in olfactory function is a common feature in many neurodegenerative disorders including Parkinson, Alzheimer, and Huntington diseases. In the present article, we describe a set of tests for assessing olfaction discrimination and detection in mice that can be used to measure olfactory abilities in mouse models of neurodegenerative diseases.

فحوصات حاسة الشم لنماذج من الماوس مرض الاعصاب

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process ...

olfactory-assays-for-mouse-models-of-neurodegenerative-disease

Nanyang Technological University

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

The Special Senses

SCIENTISTS IN ACTION

21.8K Views.  University of Cincinnati. Impairment in olfactory function is a common feature in many neurodegenerative disorders including Parkinson, Alzheimer, and Huntington diseases. In the present article, we describe a set of tests for assessing olfaction discrimination and detection in mice that can be used to measure olfactory abilities in mouse models of neurodegenerative diseases.

Video: Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

Mouse Models of Periventricular Leukomalacia

We describe a protocol for establishing mouse models of periventricular leukomalacia (PVL). PVL is the predominant form of brain injury in premature infants and the most common antecedent of cerebral palsy. PVL is characterized by periventricular white matter damage with prominent oligodendroglial injury. Hypoxia/ischemia with or without systemic infection/inflammation are the primary causes of PVL. We use P6 mice to create models of neonatal brain injury by the induction of hypoxia/ischemia with or without systemic infection/inflammation with unilateral carotid ligation followed by exposure to hypoxia with or without injection of the endotoxin lipopolysaccharide (LPS). Immunohistochemistry of myelin basic protein (MBP) or O1 and electron microscopic examination show prominent myelin loss in cerebral white matter with additional damage to the hippocampus and thalamus. Establishment of mouse models of PVL will greatly facilitate the study of disease pathogenesis using available transgenic mouse strains, conduction of drug trials in a relatively high throughput manner to identify candidate therapeutic agents, and testing of stem cell transplantation using immunodeficiency mouse strains.

We established mouse models of periventricular leukomalacia (PVL), the predominant brain injury in premature infants characterized by periventricular white matter lesions. Hypoxia/ischemia with/without systemic infection are the primary causes of PVL. Unilateral carotid ligation and hypoxia exposure with/without lipopolysaccharide injection creates PVL-like lesions in P6 mice.

نماذج من الماوس تلين بيضاء المحيطة بالبطين

We describe a protocol for establishing mouse models of periventricular leukomalacia (PVL). PVL is the predominant form of brain injury in premature ...

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. Here we present a visualized experimental and methodological protocol to directly visualize microregional tissue hypoxia and to infer perivascular oxygen gradients in the mouse cortex. It is based on the non-linear relationship between nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) endogenous fluorescence intensity and oxygen partial pressure in the tissue, where observed tissue NADH fluorescence abruptly increases at tissue oxygen levels below 10 mmHg1. We use two-photon excitation at 740 nm which allows for concurrent excitation of intrinsic NADH tissue fluorescence and blood plasma contrasted with Texas-Red dextran. The advantages of this method over existing approaches include the following: it takes advantage of an intrinsic tissue signal and can be performed using standard two-photon in vivo imaging equipment; it permits continuous monitoring in the whole field of view with a depth resolution of ~50 &mu;m. We demonstrate that brain tissue areas furthest from cerebral blood vessels correspond to vulnerable watershed areas which are the first to become functionally hypoxic following a decline in vascular oxygen supply. This method allows one to image microregional cortical oxygenation and is therefore useful for examining the role of inadequate or restricted tissue oxygen supply in neurovascular diseases and stroke.

Here we describe a method to directly visualize microregional tissue hypoxia in the mouse cortex in vivo. It is based on concurrent two-photon imaging of nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and the cortical microcirculation. This method is useful for high resolution analysis of tissue oxygen supply.

كشف عن نقص الأكسجة Microregional في اللحاء المخي الفأر بواسطة التصوير ثنائي الفوتون من الإسفار NADH الذاتية

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the fly as an experimental system include its genetic tractability, short life span and the possibility to observe and quantitatively analyze complex behaviors. The expression of disease-linked genes in specific neuronal populations of the Drosophila brain, can be used to model human neurodegenerative diseases such as Parkinson's and Alzheimer's 5.
Dopaminergic (DA) neurons are among the most vulnerable neuronal populations in the aging human brain. In Parkinson's disease (PD), the most common neurodegenerative movement disorder, the accelerated loss of DA neurons leads to a progressive and irreversible decline in locomotor function. In addition to age and exposure to environmental toxins, loss of DA neurons is exacerbated by specific mutations in the coding or promoter regions of several genes. The identification of such PD-associated alleles provides the experimental basis for the use of Drosophila as a model to study neurodegeneration of DA neurons in vivo. For example, the expression of the PD-linked human &alpha;-synuclein gene in Drosophila DA neurons recapitulates some features of the human disease, e.g. progressive loss of DA neurons and declining locomotor function 2. Accordingly, this model has been successfully used to identify potential therapeutic targets in PD 8.
Here we describe two assays that have commonly been used to study age-dependent neurodegeneration of DA neurons in Drosophila: a climbing assay based on the startle-induced negative geotaxis response and tyrosine hydroxylase immunostaining of whole adult brain mounts to monitor the number of DA neurons at different ages. In both cases, in vivo expression of UAS transgenes specifically in DA neurons can be achieved by using a tyrosine hydroxylase (TH) promoter-Gal4 driver line 3, 10.

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Here we describe two assays that have been established to study age-dependent neurodegeneration of dopaminergic (DA) neurons in Drosophila: the climbing/startle-induced negative geotaxis assay which allows to study the functional effects of DA neurons degeneration and the tyrosine hydroxylase immunostaining which is used to identify and count DA neurons in whole brain mounts.

تقييم الظواهر الاعصاب في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الخلايا العصبية الدوبامين عن طريق تسلق فحوصات والجامعة المناعية الدماغ

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult neural stem cells in vitro. These assays can be used to compare the precursor potential of cells isolated from genetically different or differentially treated animals&#160;to determine the effects of exogenous factors on neural precursor cell proliferation and differentiation and to generate neural precursor cell lines that can be assayed over continuous passages. The neurosphere assay is traditionally used for the post-hoc identification of stem cells, primarily due to the lack of definitive markers with which they can be isolated from primary tissue&#160;and has the major advantage of giving a quick estimate of precursor cell numbers in brain tissue derived from individual animals. Adherent monolayer cultures, in contrast, are not traditionally used to compare proliferation between individual animals, as each culture is generally initiated from the combined tissue of between 5-8 animals. However, they have the major advantage that, unlike neurospheres, they consist of a mostly homogeneous population of precursor cells and are useful for following the differentiation process in single cells. Here, we describe, in detail, the generation of neurosphere cultures and, for the first time, adherent cultures from individual animals. This has many important implications including paired analysis of proliferation and/or differentiation potential in both the subventricular zone (SVZ) and dentate gyrus (DG) of treated or genetically different mouse lines, as well as a significant reduction in animal usage.

Here we describe a detailed protocol for the simultaneous generation of neural precursor cell cultures, as either adherent monolayers or neurospheres, from the subventricular zone and dentate gyrus of individual adult mice.

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

كله من جبل Immunolabeling الشم مستقبلات الخلايا العصبية في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الهوائي

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene expression in the mouse brain. Here we describe a technique first introduced by Passini and Wolfe for direct intracranial delivery of virally-encoded transgenes into the neonatal mouse brain. In its most basic form, the procedure requires only an ice bucket and a microliter syringe. However, the protocol can also be adapted for use with stereotaxic frames to improve consistency for researchers new to the technique. The method relies on the ability of adeno-associated virus (AAV) to move freely from the cerebral ventricles into the brain parenchyma while the ependymal lining is still immature during the first 12-24 hr after birth. Intraventricular injection of AAV at this age results in widespread transduction of neurons throughout the brain. Expression begins within days of injection and persists for the lifetime of the animal. Viral titer can be adjusted to control the density of transduced neurons, while co-expression of a fluorescent protein provides a vital label of transduced cells. With the rising availability of viral core facilities to provide both off-the-shelf, pre-packaged reagents and custom viral preparation, this approach offers a timely method for manipulating gene expression in the mouse brain that is fast, easy, and far less expensive than traditional germline engineering.

Here we demonstrate a technique for widespread neuronal transduction by intraventricular injection of adeno-associated virus into the neonatal mouse brain. This method provides a rapid and easy way to attain lifelong expression of virally-delivered transgenes.

حقن الفيروسي Intracerebroventricular من حديثي الولادة ماوس الدماغ للاستمرار وانتشار تنبيغ العصبية

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at the synaptic level. The Active Zone (AZ) is the region at the presynaptic membrane that mediates neurotransmitter release and is composed of a dense collection of scaffold proteins. AZs of Drosophila melanogaster (Drosophila) photoreceptors undergo molecular remodeling after prolonged exposure to natural ambient light. Thus the level of neuronal activity can rearrange the molecular composition of the AZ and contribute to the regulation of the functional output.
Starting from the light exposure set-up preparation to the immunohistochemistry, this protocol details how to quantify the number, the spatial distribution, and the delocalization level of synaptic molecules at AZs in Drosophila photoreceptors. Using image analysis software, clusters of the GFP-fused AZ component Bruchpilot were identified for each R8 photoreceptor (R8) axon terminal. Detected Bruchpilot spots were automatically assigned to individual R8 axons. To calculate the distribution of spot frequency along the axon, we implemented a customized software plugin. Each axon&#39;s start-point and end-point were manually defined and the position of each Bruchpilot spot was projected onto the connecting line between start and end-point. Besides the number of Bruchpilot clusters, we also quantified the delocalization level of Bruchpilot-GFP within the clusters. These measurements reflect in detail the spatially resolved synaptic dynamics in a single neuron under different environmental conditions to stimuli.

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Here we show how to quantify the number and spatial distribution of synaptic active zones in Drosophila melanogaster&#160;photoreceptors, highlighted with a genetically encoded molecular marker, and their modulation after prolonged exposure to light.

تحليل متشابك التحوير من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; خلايا مستقبلة للضوء بعد التعرض للضوء لفترات طويلة

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...

Quadruple Immunostaining of the Olfactory Bulb for Visualization of Olfactory Sensory Axon Molecular Identity Codes

The mouse olfactory system is often used to study mechanisms of neural circuit formation&#12288;because of its simple anatomical structure. An Olfactory Sensory Neuron (OSN) is a bipolar cell with a single dendrite and a single unbranched axon. An OSN expresses only one Olfactory Receptor (OR) gene, OSNs expressing a given type of OR converge their axons to a few sets of invariant glomeruli in the Olfactory Bulb (OB). A remarkable feature of OSN projection is that the expressed ORs play instructive roles in axonal projection. ORs regulate the expression of multiple axon-sorting molecules and generate the combinatorial molecular code of axon-sorting molecules at the OSN axon termini. Thus, to understand the molecular mechanisms of OR-specific axon guidance mechanisms, it is vital to characterize their expression profiles at the OSN axon termini within the same glomerulus. The aim of this article was to introduce methods for collecting as many glomeruli as possible on a single OB section and for performing immunostaining using multiple antibodies. This would allow the comparison and analysis of the expression patterns of axon-sorting molecules without staining variation between OB sections.

Olfactory sensory neurons express a wide variety of axon-sorting molecules to establish proper neural circuitry. This protocol describes an immunohistochemical staining method to visualize combinatorial expressions of axon-sorting molecules at the axon termini of olfactory sensory neurons.

رباعية المناعية من لمبة الشمية لتصور رموز حسية أكسون الجزيئية الحسية

The mouse olfactory system is often used to study mechanisms of neural circuit formation&#12288;because of its simple anatomical structure. An Olfactory ...

Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay between perturbed BBB homeostasis and the pathogenesis of brain disorders needs further investigation, the development and validation of a reliable procedure to accurately detect BBB alterations may be crucial and represent a useful tool for potentially predicting disease progression and developing targeted therapeutic strategies.
Here, we present an easy and efficient procedure for evaluating BBB leakage in a neurodegenerative condition like that occurring in a preclinical mouse model of Huntington disease, in which defects in the permeability of BBB are clearly detectable precociously in the disease. Specifically, the high molecular weight fluorescein isothiocyanate labelled (FITC)-albumin, which is able to cross the BBB only when the latter is impaired, is acutely infused into a mouse jugular vein and its distribution in the vascular or parenchymal districts is then determined by fluorescence microscopy.
Accumulation of green fluorescent-albumin in the brain parenchyma functions as an index of aberrant BBB permeability and, when quantitated by using Image J processing software, is reported as Green Fluorescence Intensity.

In this study, we present an easy and efficient procedure for evaluating the disruption of the blood-brain barrier under neurodegenerative conditions. To achieve our objective, we infused high molecular weight fluorescein isothiocyanate labelled (FITC)-albumin into mouse jugular vein and evaluated its leakage into the brain parenchyma by fluorescence microscopy.

تقييم نفاذية حاجز الدم في الدماغ بالتسريب الوريدي الزلال المسمى فيتك في نموذج ماوس لأمراض الأعصاب

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay ...

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

An increasing number of super-resolution microscopy techniques are helping to uncover the mechanisms that govern the nanoscale cellular world. Single-molecule imaging is gaining momentum as it provides exceptional access to the visualization of individual molecules in living cells. Here, we describe a technique that we developed to perform single-particle tracking photo-activated localization microscopy (sptPALM) in Drosophila larvae. Synaptic communication relies on key presynaptic proteins that act by docking, priming, and promoting the fusion of neurotransmitter-containing vesicles with the plasma membrane. A range of protein-protein and protein-lipid interactions tightly regulates these processes and the presynaptic proteins therefore exhibit changes in mobility associated with each of these key events. Investigating how mobility of these proteins correlates with their physiological function in an intact live animal is essential to understanding their precise mechanism of action. Extracting protein mobility with high resolution in vivo requires overcoming limitations such as optical transparency, accessibility, and penetration depth. We describe how photoconvertible fluorescent proteins tagged to the presynaptic protein Syntaxin-1A can be visualized via slight oblique illumination and tracked at the motor nerve terminal or along the motor neuron axon of the third instar Drosophila larva.

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

Here we illustrate how single molecule photo-activated localization microscopy can be carried out on the motor nerve terminal of a live Drosophila melanogaster third instar larva.