Method Article
This protocol provides a detailed description of the echocardiographic approach for comprehensive phenotyping of heart and heart valve function in mice.
The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in rodents, with detailed descriptions of the appropriate methods for anesthesia, the echocardiographic windows used, the imaging planes and probe orientations for image acquisition, the methods for data analysis, and the limitations of emerging technologies for the evaluation of cardiac and valvular function. Importantly, we also highlight several future areas of research in cardiac and heart valve imaging that may be leveraged to gain insights into the pathogenesis of valve disease in preclinical animal models. We propose that using a systematic approach to evaluating cardiac and heart valve function in mice can result in more robust and reproducible data, as well as facilitate the discovery of previously underappreciated phenotypes in genetically-altered and/or physiologically-stressed mice.
ويرتبط الشيخوخة مع الزيادة التدريجية في تكلس القلب والأوعية الدموية 1. يؤثر كبيرا الدورة الدموية الأبهري تضيق الصمام 3٪ من السكان فوق سن 65 2، والمرضى الذين يعانون حتى المعتدلين تضيق الصمام الأبهري (الذروة سرعة 3-4 م / ث) لديها البقاء على قيد الحياة خالية من الحدث لمدة 5 سنوات أقل من 40٪ 3. في الوقت الحاضر، لا توجد علاجات فعالة لإبطاء تطور تكلس الصمام الأبهري، والجراحة استبدال الصمام الأبهري هو العلاج الوحيد المتاح للمتقدم الصمام الأبهري تضيق 4.
الدراسات التي تهدف إلى اكتساب فهم أعمق للآليات التي تساهم في بدء وتطور تكلس الصمام الأبهري هي خطوة أولى أساسية في المضي قدما نحو طرق دوائية وغير الجراحية لإدارة الأبهري تضيق الصمام 5، 6. وراثيوقد لعبت الفئران غيرت لاي-دورا رئيسيا في تطوير فهمنا للآليات التي تسهم في مجموعة متنوعة من الأمراض، وتأتي الآن في صدارة الدراسات الميكانيكية التي تهدف إلى فهم بيولوجيا الصمام الأبهري تضيق 6، 7، 8. وخلافا لأمراض القلب والأوعية الدموية الأخرى مثل تصلب الشرايين وقصور القلب، حيث بروتوكولات موحدة لتقييم الأوعية الدموية والقلب البطيني وظيفة هي في معظمها راسخة، هناك تحديات فريدة من نوعها المرتبطة في الجسم الحي phenotyping وظيفة صمام القلب في الفئران. بينما استعراض الأخيرة وفرت مناقشات مستفيضة بشأن مزايا وعيوب عديدة التصوير وطرائق الغازية المستخدمة لتقييم وظيفة صمام في القوارض 9، 10، 11، إلى الآن، ونحن لسنا على علم منشور يوفر الضواغطهنسف، خطوة بخطوة بروتوكول من أجل وظيفة صمام phenotyping القلب في الفئران.
والغرض من هذا المخطوط هو وصف الطرق والبروتوكولات إلى النمط الظاهري القلب وظيفة صمام في الفئران. وقد تمت الموافقة على جميع الأساليب والإجراءات من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسية واستخدام مايو كلينيك. وتشمل المكونات الرئيسية لهذا البروتوكول عمق التخدير، وتقييم وظيفة القلب، وتقييم وظيفة صمام القلب. نأمل أن هذا التقرير لا تؤدي إلا إلى توجيه المحققين ترغب في متابعة البحث في مجال أمراض صمام القلب، ولكن سوف تبدأ أيضا الحوار الوطني والدولي المتعلقة توحيد بروتوكول لضمان استنساخ البيانات وصحتها في هذا المجال سريع النمو. الأهم من ذلك، تصوير ناجحة باستخدام أنظمة الموجات فوق الصوتية عالية الدقة يتطلب معرفة العمل من مبادئ التصوير فوق الصوتي (والمصطلحات التي يشيع استخدامها في التصوير فوق الصوتي)، فهم برينسيب الأساسيليه من علم وظائف الأعضاء القلب، وخبرة كبيرة مع بالموجات فوق الصوتية للسماح لتقييم دقيق وفعال الوقت من وظيفة القلب في القوارض.
1. إعداد المواد والمعدات (الجدول 1) والشكل (1)
2. إعداد الماوس للتصوير وتحريض التخدير
ملاحظة: هناك ثلاث طرائق الموجات فوق الصوتية المستخدمة في الحصول على الصور: B-وضع / 2-D، M واسطة، ودوبلر (الطيفي دوبلر موجة نابض وتدفق اللون التصوير دوبلر). هناك نوعان من المناصب محول الأساسية المستخدمة للحصول على الصور من القلب والقلب والصمامات: ومجاور للقص والنوافذ قمي (الشكل 2).
4. تقييم الأورطي صمام (AV) وظيفة
ملاحظة: تشمل تقييم وظيفة الصمام الأورطي التقييم النوعي للصمام (على سبيل المثال، ينظر سمك أعتاب، وزيادة echogenicity بسبب تكلس الصمامات، ووجود أو عدم وجود طائرات قلسية باستخدام دوبلر لون) والتدابير الكمية وظيفة صمام (على سبيل المثال، ذروة transvalvular السرعة والمسافة الفاصلة مغطية للحدبات).
5. تقييم صمام تاجي (MV) وظيفة
ملاحظة: تقييم وظيفة الصمام التاجي ويشمل التقييم النوعي للصمام (على سبيل المثال، فيسمك أعتاب ceived، وزيادة echogenicity بسبب تكلس صمامي، وجود أو عدم وجود طائرات قلسية باستخدام دوبلر لون) والتدابير الكمية وظيفة صمام.
6. تقييم وظيفة صمام القلب في الجانب الأيمن
ملاحظة: ثلاثي الشرف وصمامات رئوية تتألف من جانب والحق في صمامات القلب. صمام ثلاثي الشرف يمكن تصور بسهولة في رأي محور طويل قمي، في حين أن الصمام الرئوي يمكن تصور في وجهات النظر على حد سواء منذ فترة طويلة مجاور للقص ومحور القصير.
7. تقييم وظيفة القلب
معشوقة = "jove_content"> ملاحظة: تقييم وظيفة القلب وتشمل التقييمات النوعية من الأيسر انقباض البطين (على سبيل المثال، وتقدير المرئي للجزء قذف، وشذوذ جدار الحركة الإقليمي، وسمك ينظر إليها من الجدران) والتدابير الكمية من البطين الأيسر وظيفة (على سبيل المثال، جزء قذف، اليسرى كتلة البطين، اليسرى الوظيفة الانبساطية البطين، ومؤشرات أداء عضلة القلب).
8. الخطوات النهائية
يتم تضمين الأمثلة من الصور التي يتم الحصول عليها بشكل روتيني من الحيوان التصوير بالموجات فوق الصوتية القلب في هذه المخطوطة. وتقدم توضيحا لوضع محول على صدر الحيوان لإعطاء القارئ على فهم واضح حيث تم وضع محول للحصول على الصور كما هو موضح. يتم تضمين صورة الموجات فوق الصوتية مختبر مجموعة المتابعة أيضا التأكيد على أهمية المعدات المناسبة، ولا سيما في محول بالموجات فوق الصوتية ليتم استخدامها وطريقة التخدير. وصفت 2D / B واسطة، M واسطة، واللون ودوبلر يعرض للصمامات العادية وغير العادية، البطينين الأيمن والأيسر، وجذر الأبهر بشكل صحيح. على الرغم من أن يتم تنفيذ التصوير معدل سلالة بشكل روتيني، كما يتم تضمين مثال على ذلك.
يتميز قلس التاجي من قبل، عادة غير الصفحي سرعة عالية تدفق الدم (التلوين الفسيفساء) عبر الصمام خلال الصورةystole (الشكل 5). إن وجود مثل هذه الفسيفساء اللون نمط تدفق دوبلر من البطين الأيسر إلى الأذين الأيسر عبر MV، والتي تحدث بعد مجمع QRS في تعقب تخطيط القلب، ويسمح لتشخيص القاطع MR. عندما يحدث هذا في غياب قلس الصمام الأبهري و / أو اختلال البطين الأيسر، وهذا يمكن أن توصف بأنها معزولة هبوط الصمام التاجي. إذا كان هناك اتساع كبير من البطين الأيسر (بسبب يسببها تجريبيا-قصور القلب أو عمق المفرط للتخدير)، وهذا يمكن أن توصف بأنها ارتجاع الصمام الميترالي الدماغية (أو قلس الثانوي إلى خلل وظيفي في القلب). A-موجة نابض عرض دوبلر الطيفي يمكن استخدامها لتأكيد وجود وتوقيت طائرة قلسي من تدفق الدم.
صمام الأورطي العادي له ثلاثة رقيقة، والشرفات طيعة أن تفتح وتغلق بشكل كاف خلال كل دورة القلب. يتم قياس الأبهر الفصل صمام أعتاب في 2D الموجهة M-وضع الصمام الأبهري في رأي محور طويل. يتم استخدام الفرجار الالكترونية لقياس من الحافة الأمامية للأعتاب الأبهر الحق في الحصول على الحافة الأمامية للأعتاب الأبهري الأيسر (الشكل 3). الأورطي صمام المسافة أعتاب-الفصل في الفئران العادية هي 0،9-1،3 مم. يظهر لون دوبلر تدفق الصفحي عبر الصمام وفي جذر الأبهر أثناء انقباض. تدفق المضطرب يمكن تقديره في ظروف زيادة تدفق، مثل قلس الصمام الأبهري، أو زيادة الضغط، كما في تضيق الصمام الأبهري. ويتجلى هذا الأمر التلوين الفسيفساء في الجهاز التدفق. حتى كميات صغيرة من قلس الصمام الأبهري يمكن أن يؤدي إلى زيادة كبيرة في سرعة transvalvular الذروة بسبب وظيفة القلب مفرط الديناميكية وزادت البطين الأيسر التحميل المسبق. سرعة الأورطي الذروة في نطاقات الفئران العادية من 0.90 م / ث إلى 1.50 م / ث. ذروة سرعة الصمام الأورطي لل> 5 م / ث تم تسجيله في الفئران الذين يعانون من تضيق الصمام الأبهري.
ther.within الصفحات = "1"> إن موجة نابض اقتفاء أثر دوبلر الطيفي يمكن أن تستخدم أيضا لتوفير مؤشر ديناميكا الدم الشريان الرئوي 12 (الشكل 8). الرئوي تسارع الوقت الشريان هو الفاصل الزمني من بداية تدفق الدم الرئوي الانقباضي لسرعة تدفق الذروة. الصحيح الوقت طرد البطيني هو الفاصل بين بداية طرد البطين الأيمن إلى النقطة التي لا يوجد وقف تدفق الدم الانقباضي الشريان الرئوي الانقباضي. مزيج من تقصير الشريان الرئوي تسارع الوقت مع انخفاض في نسبة الرئوي تسارع الوقت الشريان إلى اليمين مرة البطين طرد يوحي بوجود ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي (والتي يمكن تأكيد استخدام تدابير الغازية أو مباشرة من الشريان الرئوي أو ضغط البطين الأيمن) .
الشكل 1: الحيوان Cمختبر الموجات فوق الصوتية ardiac. تم تجهيز المختبر مع جهاز الموجات فوق الصوتية مخصص صغير الحيوان مع محولات (MS 400 و MS 550D) عالية التردد (30 ميغاهيرتز و 40 ميغاهيرتز)، الناشر الأيزوفلورين، منصة الحيوان ودرجة الحرارة ورصد معدل ضربات القلب، 1٪ إلى 1.5٪ الأيزوفلورين مختلطة مع 1 لتر / دقيقة 100٪ O 2، مخروط الأنف وأنابيب متصلة الناشر الأيزوفلورين و 100٪ O 2، حلاقة الشعر، والموجات فوق الصوتية هلام، هلام الكهربائي، أشرطة لاصقة، ومناشف ورقية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: مواقف محول بسيطة. (A) القص النافذة. يتم وضع رأس محول في الحدود القص الأيسر، مع علامة مؤشر صورة محول موجهة caudally. الابام هذا الموقف، وعرض محور طويل من البطين الأيسر، الصمام الأبهري، وجذر الأبهر وعرض محور قصيرة من الصمام الرئوي ويمكن الحصول على. (ب) من نافذة القص، واستدارة الرأس محول عكس اتجاه عقارب الساعة، مع الشق موجهة الخلف. من هذا الموقف، وعرض محور قصيرة من البطين الأيسر والصمام الأبهري وجهة نظر المحور الطويل للصمام الرئوي ويمكن الحصول على. (C) قمي النافذة. يتم وضع رأس محول في ذروة القلب. من هذا الموقف، وعرض محور طويل من البطينين الأيمن والأيسر والتاجي وثلاثي الشرف الصمامات ويمكن الحصول على. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل (3): تقييم الأورطي صمام وظيفة في نورمآل ماوس مقابل وظيفة الأورطي صمام في الفأرة مع الأورطي مرض صمام المكلس. صورة (A) 2D من الصمام الأبهري العادي في رأي محور طويل. لاحظ أن يفتح الصمام الأبهري جيدا خلال الانقباض. صورة (B) M-وضع تصور وظيفة عادية صمام الأورطي (مربع يشبه مظهر). لاحظ أنه يتم قياس المسافة أعتاب-الفصل عند 1.12 مم. وقد meaured عرض (C) الطيفي دوبلر من الذروة السرعة عبر الصمام الأبهري العادي في 1.3 م / ث. صورة (D) 2D من الصمام الأبهري متكلسة في رأي محور طويل من البروتين الدهني منخفض الكثافة مستقبلات ناقصة (LDLR - / -) وئي B100 فقط (apoB 100/100) الماوس تتغذى على النظام الغذائي الغربي. وسميكة على الشرفات، وزادت echogenicity، مما يؤدي في افتتاح مقيد أثناء الانقباض. (E) صورة M-وضع تصور نفسه صمام الأبهري تضيقي يظهر قياس المسافة أعتاب-الفصل بين 0.7 مم. (F </ قوي>) تم meaured العرض دوبلر الطيفي للذروة سرعة عبر الصمام الأبهري تضيقي على 4.6 م / ث. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: M-وضع لصمام تاجي عادي. من نافذة قمي، يتم الحصول على رأي محور طويل للصمام التاجي. يتم تطبيق خط M-طريقة الاستجواب عبر النشرة الصمام التاجي. في حين التاجي سمك النشرة يمكن نظريا أن تقاس باستخدام الفرجار الإلكترونية، وهذا يمكن أن تكون صعبة للغاية نظرا للرقيق، مولد للصدى سيئة، وبسرعة التحرك منشورات للصمام التاجي العادي. تشير الأسهم إلى M-طريقة النشرة صمام تاجي في انقباض. يرجى CLICK هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 5: دليل على وجود صمام تاجي قلسية جيت باستخدام لون دوبلر التصوير. من نافذة القص، يتم الحصول على رأي محور طويل المعدلة للصمام التاجي. يظهر لون دوبلر الاستجواب طائرة فسيفساء الألوان في الصمام التاجي أثناء انقباض (أبرزها سهم). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 6: محور طويل عرض من الشريان الرئوي الرئيسي وفروعه الرئيسية. ويمكن الحصول على وجهة محور طويلة من الشريان الرئوي الرئيسي (MPA) والحق (الجيش الوطني الرواندي) وترك الفروع (LPA) من paraste نافذة rnal. وينظر إلى الحق والجهاز البطيني تدفق (RVOT)، الصمام الرئوي (PV)، والشريان الأورطي (AO) جزئيا. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 7: M-وضع صورة ورسم إطار الرئوي صمام عادي. من نافذة القص، وجهتي النظر القصيرة والمحور الطويل للصمام الرئوي يمكن الحصول عليها. يتم تطبيق خط M-طريقة الاستجواب عبر الصمام الرئوي. ويمكن قياس المسافة الرئوي صمام أعتاب-فصل (الأسهم) من وجهة النظر هذه. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
10fig8.jpg "/>
الرقم 8: موجة نابض دوبلر التحقيق مع التدفق عبر الصمام الرئوي. الساعة التسارع الشريان الرئوي (PAAT) هو الفاصل الزمني من بداية تدفق الشرياني الرئوي الانقباضي لسرعة تدفق الذروة. الصحيح الوقت طرد البطيني (RVET) هو الفاصل بين بداية طرد البطين الأيمن إلى النقطة التي لا يوجد وقف التدفق. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 9: M-وضع صورة ورسم إطار محور قصير عرض من البطين الأيسر. من نافذة القص، يتم الحصول على رأي المحور قصيرة من البطين الأيسر عن طريق تناوب رئيس محول عكس اتجاه عقارب الساعة بحيث يشير علامة مؤشر صورة الخلف أو ظهريا. وM-وزارة الدفاعيتم تطبيق خط (ه) من الاستجواب عبر البطين الأيسر على مستوى العضلات الحليمية. غادر البعد البطين نهاية الانبساط (LVEDD)، البطين الأيسر في نهاية الانقباضي البعد (LVESD)، والجدار الأمامي (AW) والخلفي الجدران (PW) سمك يمكن قياسها بسهولة. يجب الحرص على عدم تشمل العضلات الحليمية (*) في أي القياسات. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 10: لون دوبلر التقييم ونابض موجة دوبلر الطيفي العرض من صمام تاجي الداخلة. (أ) صورة تظهر تقييم لون دوبلر تدفق صمام تاجي في رأي محور طويل قمي. لاحظ أن 2D صورة ملونة دوبلر يمكن أن يكون أداة حاسمة لزuiding موقف حجم العينة المناسب لشراء اقتفاء أثر دوبلر موجة نابض (يصور في لوحة B). (ب) عرض الطيفي للتدفق صمام التاجي باستخدام الموجات النبضية دوبلر. يتم تنفيذ تقييم دوبلر موجة نابض تدفق الدم عبر الصمام التاجي (من وجهة محور طويل قمي) لتقييم وظيفة البطين الأيسر الانبساطي. يتم وضع حجم العينة على نصائح من شرفات الصمام التاجي. الوقت isovolumic الاسترخاء (IVRT)، isovolumic وقت الانكماش (IVCT)، البطين الأيسر مرة طرد (LVET)، وذروة سرعة تدفق التاجي (E) يمكن لجميع المستمدة من العرض الطيفي للسرعات دوبلر موجة نابض عبر الصمام التاجي. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
فايجوري 11: الأنسجة دوبلر التصوير من الحاجزي تاجي بالطوق. من نافذة قمي، يتم الحصول على رأي محور طويل للصمام التاجي. يتم وضع حجم العينة دوبلر الأنسجة في منطقة الحاجز من الحلقة التاجية. النسبة بين ذروة سرعة تدفق التاجية (E متغير في الشكل 10B) والذروة تاجي سرعة الأنسجة بالطوق (ه 'يستخدم، الرمز بواسطة السهام البيضاء) لتقييم البطين الأيسر وظيفة الانبساطي (يشار إلى E / ه'). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل رقم 12: تقييم الإجهاد والانفعال أسعار اليسار البطيني عضلة القلب. هناك حزم برمجيات تحليل المتخصصة المتاحة تجاريا، ويمكن للمتغيرات سلالة ومعدل سلالة يكونتم الحصول عليها تدابير من التغييرات في وقت مبكر أو دون السريرية في خصائص مقلص عضلة القلب الجوهرية. الأمثلة المبينة أعلاه تصور سلالة شعاعي ومعدل الضغط في الطائرات التصوير اكتسبت عادة في الفئران. لاحظ أن هذه الطائرات التصوير (وشكل لاحقة من اقتفاء أثر السلالة) يمكن أن تختلف من الصور في البشر، والتي كثيرا ما المكتسبة في قمية محور طويل أو عرض 4-غرفة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
التخدير
الاستقراء الصحيح وصيانة التخدير هو أمر حاسم لتقييم دقيق للتغيرات في صمام القلب وظيفة القلب في الفئران. ونظرا للتحريض السريع التخدير التي تسببها الأيزوفلورين والوقت غسل خارج طويلة نسبيا من هذه مخدر التالية التخدير العميق، ونحن لا نستخدم غرفة التخدير مستقل لتحريض. بدلا من ذلك، كما جاء في التفاصيل أعلاه، وتسترشد الحيوانات مباشرة إلى مخروط التخدير، والذي يسمح لتحريض السريع ويسيطر التخدير في تركيزات منخفضة نسبيا من تأثير المخدر.
لا تزال معظم سلالات من الفئران مخدرا بما فيه الكفاية في أقل من 1.5٪ الأيزوفلورين. الآثار التراكمية للالأيزوفلورين على وظيفة القلب يجب مراقبتها عن كثب، ومع ذلك، وربما تكون هناك حاجة انخفاضات صغيرة في تركيز مخدر مع مرور الوقت. على أساس المعاملة بالمثل، قد تكون أيضا زيادات صغيرة في تركيز مخدر نيeded. ترصد بدقة الحيوان لأي حركة (موح من عمق كاف من التخدير) والزيادة أو النقصان في الموارد البشرية. وهذا يسمح لإدارة سريعة وفعالة من عمق التخدير.
وعلى النقيض من البشر، الأيزوفلورين يتسبب انخفاض في الموارد البشرية في الفئران. وفي حين يمكن أن تصان وظيفة البطين الأيسر أثناء فترات إدارة مخدر زائدة، وتقريبا تليها تخفيضات في الموارد البشرية بتواجد مطلق من قبل الأيسر اتساع البطين الثانوية لقمع انقباض القلب. وبالتالي، يقلل من نسبة طرد، transvalvular (الصمام الأبهري والصمام التاجي) سرعات تدفق الذروة تسقط، يحدث الأبهر إغلاق صمام في وقت مبكر، وانخفاض السرعات دوبلر الأنسجة. ولذلك فمن الضروري للرصد المستمر للدولة الفسيولوجية للحيوان للتأكد من أن الموارد البشرية لا تزال أعلى بكثير من 450 نبضة في الدقيقة. وبالنسبة للأفراد الذين ليسوا من ذوي الخبرة في الفئران التصوير، وهو نهج يتضمن السونار والمخلصين ووأوصى محقق الثاني مخصص لرصد عمق التخدير.
تحليل وظيفة AV
سريريا، والجمعية الأمريكية للمبادئ التوجيهية ضربات القلب 13 توصية شراء اليسار قطر المسالك البطين تدفق والبطين الأيسر تدفق المسالك سرعة باستخدام الموجات النبضية دوبلر. shuld يقاس ذروة سرعة صمام عبر الأورطي باستخدام مخصص دوبلر موجة مستمرة لحساب مساحة الصمام الأورطي باستخدام معادلة الاستمرارية: أفا = (CSA LVOT س VTI LVOT) / VTI AV. في غياب هذه البيانات دوبلر، ينصح التشريحية (هندسية) منطقة مستعرضة من فتحة الصمام الأورطي مقاسا 2D أو 3D. على الرغم من أن محول لديها القرار المكانية والزمانية عالية، والشرفات الصمام الأورطي لا يمكن أن يرسم على الدوام في وجهة النظر محور القصير. وهكذا، فإن منطقة AV فتحة لا يمكن تتبعت بدقة. Furthermore، وربما الأهم من ذلك، لا يتم التجهيز متاح حاليا عالية التردد صغير مخصص والحيوان الموجات فوق الصوتية مع قدرة مخصصة موجة دوبلر مستمرة. وهكذا، وتحديد سرعة transvalvular "الحقيقية" الذروة للاستخدام مع معادلة الاستمرارية يمثل تحديا استثنائيا (ولن تكون مقبولة سريريا). وبالمثل، قد لا يكون غيرها من تحقيقات بالموجات فوق الصوتية المتاحة تجاريا القدرة على تسجيل سرعات عالية جدا، وبالتالي فهي تقتصر على السرعات المنخفضة. ونظرا لهذه القيود الرئيسية، بروتوكولات التصوير السريرية باستخدام أنظمة موجهة نحو التصوير ذات الدقة العالية في الحيوانات الصغيرة لا يمكن أن تعكسها بشكل كامل.
تحليل وظيفة MV
عموما، والفئران هي مقاومة جدا لتطوير هبوط الصمام التاجي. تصور طائرة قلسي عبر الصمام التاجي في الإعداد لHR السريع يمكن أن تكون صعبة للغاية. وعلاوة على ذلك، في تخطيط صدى القلب البشري، وanteriأو والخلفية شرفات الصمام التاجي وينظر بشكل واضح وهابط أو سائب النشرة هو محل تقدير بسهولة. ومع ذلك، في الفئران، منشورات صمام تاجي لا يمكن أن توضح جيدا في الأمامي والخلفي، وإيجاد سائب أو النشرة هابط يمثل تحديا للغاية، نظرا لانخفاض مستوى echogenicity من الأنسجة غير متكلسة، رقيقة. وهكذا، فإن استخدام دوبلر اللون لإظهار طائرة قلسي هو أنجع السبل لتقييم وظيفة الصمام التاجي في الفئران. وينبغي بذل تشخيص معزولة قلس الصمام التاجي إلا بعد تقييم بعناية وظيفة البطين الأيسر، وظيفة الصمام الأورطي، وظيفة الصمام التاجي.
حتى الآن، لا توجد نماذج الماوس قوية من تضيق الصمام التاجي. زيادة كثافة الصدى للصمام التاجي يمكن أن تشير إلى تكلس، ولكن التعريب إما الأمامي أو الخلفي النشرة أمر صعب. سريريا، ويتم تشخيص تضيق الصمام التاجي في وضع سميكة، منشورات متكلسة مع تقييدإد الحركة. ويمكن أن يتم قياس سمك النشرة من قبل M-وضع (الشكل 4). باستخدام دوبلر، وسرعة ذروة E عادة ما زادت ويرتبط مع امتدادات في الشوط الأول ضغط. وهكذا، يسترد هذه الميزات سوف تكون حاسمة في تقييم نماذج جديدة للتضيق الصمام التاجي. في حين توصي الجمعية الأمريكية للتخطيط صدى القلب أن تقدير مساحة الصمام التاجي ويتم استخدام نصف الوقت الضغط (MV المساحة = 220 / ضغط نهاية الشوط الأول)، لم يتم التحقق من صحة هذه الحسابات في الفئران (13).
تحليل ثلاثي الشرف وظيفة الصمامات الرئوي
ويتم تقييم صمام ثلاثي الشرف للتنقل النشرة، تضيق صمامي، وقلس صمامي. عادة، يتم التعبير عن هذه البيانات النوعية وبطريقة ثنائية (أي وجود أو عدم وجود خلل وظيفي). يستخدم ذروة سرعة وثلاثي الشرف طائرة صمام قلسي إلى estimatالبريد البطين الأيمن للضغط الانقباضي. بالإضافة إلى ذلك، قلس ثلاثي الشرف ليس من غير المألوف في العادية والفئران بهيج.
وظيفة صمام الرئوي يمكن تقييمها من قبل 2D / B واسطة، M واسطة، والتصوير اللون تدفق (أرقام 6 و 7). وتستخدم هذه الطرائق لتقييم سمك الصمام الرئوي (على سبيل المثال، الرؤية أو echogenicity مع 2D)، وقياس الرئوي فتح صمام فتحة (المسافة أعتاب-الفصل)، وتقييم التنقل الرئوي صمام وتلئيم (2D و دوبلر لون). الرئوي قلس الصمام يمكن تقدير بسهولة مع دوبلر اللون، كما هو موضح أعلاه. شدة قلس الصمام الرئوي يمكن تقييم باستخدام تدفق الذروة إلى الوراء في الدم (قياس مع موجة نابض دوبلر) عبر الصمام الرئوي أثناء انبساط.
تحليل وظائف القلب
2D / B وضع التصوير من البطين الأيسر في وجهات النظر القصيرة ومحور طويل يوفر VIS تقييم تركيزا على وظيفة القلب. بينما تسمح هذه الطريقة التصوير لتقييم الخشنة وظيفة البطين الأيسر، M-وضع التصوير يوفر القرار الزماني المكاني أعلى بكثير، مما يجعلها تقنية متفوقة بالمقارنة مع 2D / B وضع التصوير. وهذا أمر مهم جدا، بالنظر إلى حقيقة أن الفئران العادية يمكن أن يكون الحقوقي تتراوح 450-700 نبضة في الدقيقة. علينا أن نحافظ على الموارد البشرية فوق 450 نبضة في الدقيقة بحيث البيانات هو ممثل بالقرب من علم وظائف الأعضاء وديناميكا الدم القلب غير تخدير. إذا ما سمح للموارد البشرية في الانخفاض بسبب التخدير المفرط و / أو الإفراط في التخدير، يسار توسع البطين، تخفيضات في تقديرات انقباض القلب، والتغييرات الهائلة في السرعات الدم transvalvular وغيرها من الأوصاف النوعية من وظيفة الصمامات (على سبيل المثال، والتغيرات في ارتجاع الصمام الميترالي الثانوية إلى اليسار توسع البطين، تخفيضات في الذروة الأورطي سرعة تدفق صمام، وتخفيضات في التاجي سرعة تدفق الدم) غالبا ما يتم ملاحظتها.
خيمة "> وفي غياب تشوهات قطعي جدار الحركة، الكسر القذفي (EF) وتقصير كسور (FS) هي تدابير استنساخه للغاية من اليسار وظيفة البطين الانقباضي. عن طريق التصوير M واسطة، ويتم الحصول على ضغط الدم الانبساطي الأقصى وأبعاد الانقباضي واستخدامها لحساب EF، FS، والوقف الشامل 14 و 15.كل من هذه القياسات يمكن حسابها تلقائيا في حزمة البرامج المرتبطة جهاز الموجات فوق الصوتية. في حين تقييم وظيفة القلب والصمامات يمكن تنفيذها باستخدام أنظمة الموجات فوق الصوتية السريرية "المعيار"، ومستويات منخفضة نسبيا من القرار (على سبيل المثال، 12-15 ميغاهيرتز تحقيقات) يمكن أن تجعل من تقييمات دقيقة من وظيفة القلب والصمامات في الفئران التحدي.
وظيفة الانبساطي هو جزء لا يتجزأ من تقييم وظيفة البطين الأيسر. في الدراسات السريرية، وقد تم العثور على قصور القلب الانبساطي أن تكون غاية جorrelated مع معدلات الاعتلال والوفيات. ويتم تقييم الوظيفة الانبساطية التي كتبها موجة نابض تخطيط صدى القلب دوبلر والتصوير دوبلر الأنسجة. هاء / وهناك نسبة (النسبة بين أوائل ملء السريع الموجة، E، وفي وقت متأخر من ملء موجة نظرا لتقلص الأذين، A) وE الساعة تباطؤ معلمات غير مفيدة من الوظيفة الانبساطية في الفئران ويرجع ذلك إلى انصهار E و A الموجات الثانوية للالحقوقي عالية جدا تظهر في الفئران تخدير بشكل مناسب.
لتقييم البطين الأيسر وظيفة الانبساطي، ذروة سرعة تدفق التاجية، والوقت اارتخاء إسوي الحجم (IVRT)، الساعة انكماش isovolumic (IVCT)، البطين الأيسر مرة قذف، والأنسجة الحلقة التاجية، وتستخدم السرعات (ه). هذه المعايير دوبلر التي يمكن الحصول عليها بسهولة وقابلة للقياس، وقابلة للتكرار. سرعة الانبساطي المبكر (ه ') من الحلقة التاجية قياس مع التصوير دوبلر الأنسجة مؤشرا يعتد به من البطين الأيسر للاسترخاء عضلة القلب والنسبة بين ميل الذروةوقد ثبت ترال سرعة تدفق وأوائل تاجي سرعة الأنسجة بالطوق في الدراسات السريرية لربط بشكل جيد مع الشعيرات الرئوية إسفين ضغط 16.
وظيفة البطين الأيسر العالمية يمكن تقييم باستخدام مؤشر أداء عضلة القلب، والمعروف أيضا باسم مؤشر تيه. وهو يتضمن كلا فترات زمنية الانقباضي والانبساطي للسماح لتدبير المتكامل لحد سواء وظيفة البطين الأيسر الانقباضي والانبساطي. الخلل الانقباضي يطيل الوقت قبل طرد (IVCT) وتقصير الوقت طرد البطين الأيسر (ET). تشوهات في وظيفة الانبساطي أو الاسترخاء عضلة القلب يمكن أن يؤدي إلى إطالة كبير من IVRT. ويمكن حساب مؤشر أداء عضلة القلب البطيني الأيسر (MPI)، ومعهد ماكس بلانك = IVCT + IVRT / LVET 17. في هذا السياق، ترتبط تخفيضات في MPI مع تحسينات في وظائف القلب، في حين أن قيمة MPI أعلى هو موح من ضعف القلب.
التقنيات المستخدمة لتقييم القلب وظيفة الصمامات في الفئران الناشئة: الاتجاهات المستقبليةالأنسجة دوبلر
الأنسجة دوبلر يمكن استخدامها لتقييم وظيفة الانبساطي باستخدام البريد، والبريد، وE / ه 'المتغيرات، ولكن لا يتم استخدام هذه الطريقة حاليا على نطاق واسع. على هذا النحو، وتقلب واستنساخ القياسات في مجموعة متنوعة من سلالات القوارض لم يتم اختبارها بدقة من قبل مجموعات بحثية متعددة. ومع ذلك، فإن استخدام E / ه 'وعلاقته مع الضغط الأذيني الأيسر في بيئات السريرية، وإمكانات للكشف المبكر عن ضعف القلب في الفئران، وتطبيق آليات المرض من المرجح أن يجعل هذا جزء لا يتجزأ من تقييم الآثار القلب من أمراض القلب صمامي في الأبحاث المترجمة.
التصوير معدل الضغط
لقد أثبتت النماذج الحيوانية الصغيرة ليكون ر لا تقدر بثمنOOL لفهم آليات التغيرات المرضية الكامنة في وظيفة القلب. في حين 2D و دوبلر ضربات القلب توفر تقييمات شاملة وغير الغازية من التشكل القلب، وظيفة، وديناميكا الدم في الجسم الحي، فإنها تفتقر إلى الحساسية للكشف عن تغيرات مبكرة في وظيفة عضلة القلب في استجابة للضغوط المزمنة أو حجم الزائد (اثنان من الضغوطات الأكثر شيوعا التي يسببها عن أمراض القلب صمامي).
ونتيجة لهذه القيود، هناك اهتمام متزايد في تطبيق مؤشرات المستخدمة سريريا من الوظائف مثل القلب كما سلالة عضلة القلب والضغط معدل التي لديها القدرة على الكشف عن أكثر دقة في وقت مبكر أو دون السريرية التغييرات في خصائص مقلص عضلة القلب الجوهرية . وقد استخدمت سلالة والتصوير معدل سلالة بنجاح في الدراسات القوارض على تطور قصور القلب 18 وأمراض القلب ارتفاع ضغط الدم 19، عكس dysynchrony القلبوضعف القلب 20، وظيفة طولية من القلب في الفئران الأحداث 21. فمن المستحسن أن التصوير معدل سلالة تعتبر تقنية التصوير تكميلية ل2D و الأنسجة تدابير شاملة المستمدة دوبلر من وظيفة القلب. للتأكد من أن المحققين لديهم فهم أساسي من المبادئ التي يقوم عليها قياس الضغط عضلة القلب ومعدل الضغط، وتهدف الأقسام اللاحقة لتقديم المبادئ والقيود الكامنة حساب سلالة والتصوير معدل سلالة الأساسية.
وتستمد سلالة ومعدل سلالة من التغير في طول الألياف عضلة القلب فيما يتعلق طوله الأصلي (في أمراض القلب، ويستخدم الفرق بين طول نهاية الانبساطي والانقباضي طول نهاية لهذا الحساب). معقد القياس الدقيق للتغيرات في طول الألياف عضلة القلب من العمارة دوامة من حزم ألياف عضلة القلب، مما أدى إلى multidirectionآل تشوه السلالة في جميع أنحاء انقباض (على سبيل المثال، سلالة في شعاعي، الطولي، ومحاور كفافي). وتشير الدراسات التي أجريت مؤخرا على الفئران أن derived- دوبلر الأنسجة وسلالة ومعدل سلالة المعلمات تشوه المستمدة تتبع البقع ذات صلة وثيقة وظيفة عضلة القلب الجوهرية 22. تتطلب كلا أساليب إضافة برامج التحليل المتخصص لأنظمة التصوير البحوث، والذي يسمح للجيل الآلي نسبيا من المتغيرات ذات الاهتمام (انظر الأمثلة في الشكل 12) 23.
على الرغم من أن التصوير سلالة يبشر بالخير، واقتناء الصور 2D عالية الجودة لتحليل تتبع البقع يمكن أن يكون تحديا. وعلاوة على ذلك، يدويا تتبع الحدود شغافية والنخابية لقياس الضغط هي صعبة ومتعبة. هناك قدر كبير من الممارسة والتقييم القوي للاستنساخ واتساق قياسات داخل محقق (بما في ذلك صورةجودة والطائرات التصوير متسقة، وتحليل خارج الخط) هي الحاسمة عند تنفيذ استخدام قياسات الضغط لتقييم وظيفة القلب. وبالتالي، ينبغي إجراء سلالة ومعدل سلالة التحليلات التي أعمى تماما والمحققين المدربين لضمان الجودة العالية والبيانات استنساخه.
بوابات ECG عالية الدقة التصوير بالموجات فوق الصوتية
الأنسجة دوبلر التصوير والتصوير معدل سلالة تسمح للقياس التشوهات القلبية أكثر من دورة القلب كاملة، ولكن نظرا لحلها الزمني (5 مللي ثانية في أحسن الأحوال)، فإنها لا تزال محدودة للحركة العالمية للقلب 24. لتحقيق ارتفاع معدل الإطار التصوير بالموجات فوق الصوتية، وقد اقترحت طريقة أخرى تقوم على استخدام الحصول على البيانات بوابات ECG-مؤخرا لتطبيقات القلب والأوعية الدموية. ويستند بوابات ECG الميكانيكية والكهربائية التصوير موجة من أنسجة القلب والأوعية الدموية على تصوير الأنسجة باستخدام الموجات فوق الصوتية في إطار عالاسعار، تصل إلى 8000 لقطة في الصورة (الثانية)، من خلال مزامنة الحصول على الصور 2D على إشارات تخطيط القلب 24 ساعة. هذا يفوق بشكل واضح في معدلات الإطار 2D / B-طريقة ~ 1000 إطارا في الثانية (توفير قدر أكبر من الدقة في ظل الظروف الفسيولوجية حيث معدل ضربات القلب هو ~ 500-650 نبضة في الدقيقة في الماوس)، وفي جدوى المجراة من هذا الأسلوب التصوير لتقييم وظيفة البطين لديها ثبت في الحيوانات تخدير (تقديم كشف متفوقة من تشوهات حركة جدار القلب في النماذج الحيوانية الصغيرة 25).
وظيفة القلب الناجم عن التوتر
في حين كثيرا ما يستخدم عملية الاختبار لتقييم استجابات القلب إلى زيادة التوتر العضوي في المرافق الصحية، والحاجة إلى التخدير الواعي و / أو التخدير في القوارض يجعل التقييم بعد ممارسة فوري من وظيفة القلب صعبة للغاية. وبالتالي، فمن المرجح أن يكون سريريا الدوائية اختبار التحملبالتوازي -relevant لتقييم العواقب القلب من مرض صمامي القلب (تضيق الأبهر الشديد، تضيق تاجي متوسطة إلى حادة، وشديد قلس التاجي الرئيسي). وستكون هذه المنطقة أهمية خاصة الناشئة من الأبحاث، نظرا المبادئ التوجيهية السريرية الأخيرة التي تؤكد على دور اختبار التحمل لتوضيح الوضع أعراض، وتقييم عناصر دينامية من تشوهات الصمامات، وكشف ضعف عضلة القلب تحت الإكلينيكي الذي من المرجح أن تضيع في راحة 26.
كما لوحظ في الأجزاء السابقة، والفئران هي غاية المقاومة للضعف القلب الناجم عن بعد التحميل. وبالتالي، قد يكون بالدوبوتامين الإجهاد تخطيط صدى القلب أداة مفيدة جدا للكشف عن انخفاض في وقت مبكر في البطين الأيسر والتي قد لا تكون واضحة في الفئران مع مستويات مختلفة من أمراض صمامات القلب. حتى الفئران مع شديد المكلس تضيق الصمام الأبهري يمكن أن يكون الحفاظ عليها جيدا نسبيا وظيفة الانقباضي، ومن المرجح أن توفر منبرا مفيدا لتطبيق ورقةication من ضربات القلب الإجهاد بالدوبوتامين للتنبؤ توقيت (وغالبا ما تكون سريعة جدا) بداية من قصور في القلب في هذه الحيوانات. حتى الآن، نحن لسنا على علم بأي الدراسات التحقيق في استخدام بالدوبوتامين الإجهاد تخطيط صدى القلب في الفئران بأي درجة من أمراض صمامات القلب.
تخطيط صدى القلب 3D
سريريا، 3D تصوير القلب هو أداة قوية بشكل خاص التي تمكن قياسات دقيقة لضغط الدم الانبساطي والانقباضي مجلدات، حجم المخ، والنتاج القلبي. أصبح 3D ضربات القلب على مستوى السريري الجديد في تقييم شدة ضيق الصمامات عن طريق قياس دقيق منطقة صمام، وتسمح بتحديد دقيق وتقدير من هبوط شرائح الفردية في مرض الصمام التاجي.
أنظمة الموجات فوق الصوتية بحث مع محولات عالية التردد تسمح لاقتناء الصور بوابات القلب ولreconstruc حاليا لاحقانشوئها من الصور 3D باستخدام حزم البرمجيات المخصصة. في حين أنه من الممكن الحصول على صور 3D من البطين الأيسر باستخدام هذه الأجهزة والبرمجيات الجمع، وهذا غالبا ما تجري تحت مستويات عميقة نسبيا من التخدير (الذي خفض الموارد البشرية والحد من القطع الأثرية الجهاز التنفسي)، مما يجعل استقراء أهمية الفسيولوجية للتغييرات في وظيفة القلب الصعب.
وفيما يتعلق باستخدام التصوير 3D لتقييم القلب وظيفة صمام في الفئران، وهذا هو اقتراح صعبة للغاية نظرا لصغر حجمها، ومنخفضة نسبيا echogenicity، وسرعة عالية للصمامات القلب في ظل الظروف الفسيولوجية الطبيعية. حتى التقدم التكنولوجي في الحصول على الصور ومعالجتها تسمح للتمييز واضح للصمامات القلب في ظل هذه الظروف، كانت تجربتنا أن 3D التصوير هو من فائدة محدودة في توصيف دقيق وشامل وظيفة صمام القلب في الفئران.
بشكل جماعي، والتكنولوجياالتقدم nological في التصوير الحيوانات الصغيرة تجعل هذا وقت مثير للغاية للحصول على نظرة ثاقبة الآليات المرضية الكامنة وراء أمراض صمامات القلب وعواقبها القلب. فإننا نؤكد بقوة أن تقييم شامل لحد سواء وظيفة صمام القلب وظيفة القلب هو ضروري لفهم آثار التلاعب الجيني، الدوائية، أو الميكانيكية وظيفة صمام القلب في الفئران. ونحن نأمل ان يكون هذا المخطوط لن يخدم إلا بوصفها مصدرا مفيدا للمحققين متابعة البحث في التسبب في مرض صمام القلب، ولكن سيحفز أيضا مناقشة حول أفضل الطرق لتقييم صمامي وظيفة القلب في مثل هذه الدراسات في إطار المجتمع بحثنا.
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by NIH grants HL111121 (JDM) and TR000954 (JDM).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
High resolution ultrasound machine | VisualSonics, Fujifilm | Vevo 2100 | |
Isoflurane diffuser (capable of delivering 1 % to 1.5 % isoflurane mixed with 1 L/min 100% O2 | VisualSonics, Fujifilm | N/A | |
Transducers for small mice (550D) or larger mice (400) | MicroScan, VisualSonics, Fujifilm | MS 550D, MS 400 | |
Animal platform | VisualSonics, Fujifilm | 11503 | |
Advanced physiological monitoring unit | VisualSonics, Fujifilm | N/A | |
Isoflurane | Terrell | NDC 66794-019-10 | |
Nose cone and tubing connected to isoflurane diffuser and 100% O2 | Custom Engineered in-house | -- | |
Hair razor | Andis Super AGR+ vet pack clipper | AD65340 | |
Ultrasound gel | Parker Laboratories | REF 01-08 | |
Electrode gel | Parker Laboratories | REF 15-25 | |
Adhesive tapes | Fisher Laboratories | 1590120B | |
Paper towels |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved