Method Article
نحن تصف طريقة بسيطة لإنتاج مجموعات بلازميدة قليلة القسيمات درجة عالية من الاستقرار من جزيئات الذهب عن طريق الحد من حمض chloroauric (HAuCl 4) مع ثيوسيانات الصوديوم (NaSCN). وoligoclusters يكون توزيع حجم الضيق ويمكن أن تنتج مجموعة واسعة من الأحجام والمعاطف السطح.
الحد تمييع مائي HAuCl 4 مع ثيوسيانات الصوديوم (NaSCN) تحت ظروف قلوية تنتج 2-3 النانوية قطرها نانومتر. وقد تم تجميع مستقرة مجموعات مثل العنب بلازميدة قليلة القسيمات من هذه الجسيمات النانوية الصفراء توزيع حجم الضيق في ظل الظروف المحيطة عبر طريقتين. يتحكم في طريقة تأخير الوقت وعدد من وحدات فرعية في oligoclusters من خلال تغيير الوقت بين إضافة HAuCl 4 إلى محلول قلوي وإضافة لاحقة من الحد من وكيل، NaSCN. وoligoclusters الأصفر تنتج تتراوح في حجمها من 3 ~ إلى ~ 25 نانومتر. هذا النطاق حجم يمكن تمديده لطريقة إضافة على الاستفادة الهيدروكسيلية كلوريد الذهب (نا + [الاتحاد الافريقي (OH 4-خ) الكلورين س] -) لصناعة السيارات في حفاز زيادة عدد وحدات فرعية في مثل توليفها-oligocluster النانوية، توفير مجموعة مجموعه 3 نانومتر إلى 70 نانومتر. الاستعدادات oligocluster الخام عرض حجم التوزيعات ضيق ولا تتطلب الفراءتجزئة ذر لمعظم الأغراض. وoligoclusters شكلت يمكن أن تتركز> 300 أضعاف دون تجميع وتبقى مخاليط رد فعل الخام مستقرة لمدة أسابيع دون مزيد من المعالجة. لأن هذه المجموعات بلازميدة قليلة القسيمات يمكن أن تتركز قبل اشتقاق أنها تسمح للعملاء derivatizing مكلفة لاستخدامها اقتصاديا. وبالإضافة إلى ذلك، فإننا نقدم نموذجين التي تنبؤات حجم الجسيمات يمكن أن تكون مصنوعة بدقة كبيرة.
وقد تزايد استخدام جزيئات الذهب كأدوات في كل من التطبيقات الطبية الحيوية والبحوث الأساسية بشكل كبير خلال العقود القليلة الماضية. طبقت قليلة المواد النانوية الحديثة إلى العديد من المجالات المختلفة، وإيجاد استخدامها في كل شيء بدءا من الألواح الشمسية لعلاج السرطان ضوئي؛ ضوحراري. من الكهرباء إلى أجهزة الاستشعار البيولوجية؛ من الحفز الكيميائي لنظم تسليم المخدرات 1-7. والدافع وراء المصالح في جزيئات الذهب كأدوات في هذه المجالات التي خصائص فريدة من نوعها النانوية الذهبية تمتلك التي تشمل الخصائص الهيكلية البصرية والإلكترونية الخاصة 8.
هناك استخدام متزايد من الذهب النانوية 9،10 في المقايسات البيولوجية والكيميائية. على الرغم من توفر العديد من المصادر لشراء جزيئات الذهب، وأنها تأتي بسعر كبير بالمقارنة مع تكلفة في التوليف المنزل. ارتفاع تكلفة النانوية المتاحة تجاريا يجعل في بيت التوليف ديsirable. ويشمل الإجراء لدينا تركيب nanoclusters بلازميدة قليلة القسيمات التي صغيرة 2-3 مفارز الذهب كروية نانومتر. وجود جميع المزايا من جزيئات الذهب الكلاسيكية، ويفضل nanoclusters بلازميدة قليلة القسيمات خيار عندما يتعلق الأمر قياسات النفاذية أو الترشيح معدلات لأن يقلد هيكل وحدات من بنية البروتينات.
حاليا، والنهج الأكثر شيوعا لفي منزل تخليق جزيئات الذهب تنطوي على الحد من كلوريد الذهب (HAuCl 4) في ظل الظروف المائية 11،12. الحد من HAuCl 4 مع الكواشف الحد المشتركة، مثل بوروهيدريد الصوديوم (NaBH 4) أو سيترات الصوديوم، ويسمح لإنتاج الجسيمات النانوية كروية (13). تقتصر جزيئات الذهب توليفها من قبل هذه الأساليب في نطاق حجم مفيدة، لأنهم تصبح حساسة لوجود الأملاح في مخازن البيولوجية وزيادة أقطار الأساسية. وقد سبق وصفها وهناك طريقةلتوليف النانوية الصفراء 2-3 قطر نانومتر من الحد من HAuCl 4 مع ثيوسيانات الصوديوم تحت الظروف القلوية 14،15.
هنا، نحن تصف تعديل تلك الطريقة التي تنتج oligocluster مثل العنب من الجسيمات النانوية الصفراء دون الحاجة إلى وكلاء متوجا إضافية. ببساطة عن طريق متفاوتة الوقت بين إضافة HAuCl 4 إلى محلول قلوي وإضافة لاحقة من الحد من وكيل، ثيوسيانات الصوديوم، ونحن قادرون على تنويع حجم الناتج من جزيئات الذهب من ~ 3 نانومتر إلى ~ 25 نانومتر. لإنتاج جزيئات أكبر، وهو إجراء إضافة على بسيط يمكن أن تستخدم لزراعة هذه oligoclusters بإضافة الذهب الهيدروكسيلية (HG) إلى oligoclusters كما توليفها في وجود ثيوسيانات الصوديوم. استخدام هاتين الطريقتين، ونحن قادرون على إنتاج موثوق oligoclusters تغطي مجموعة واسعة من ~ 3 نانومتر إلى ~ 70 نانومتر. حقيقة أن هذا الأسلوب يسمح التوليف تسيطر عليها بشكل جيد من جودة عالية زoligoclusters القديم تحت المقعد العلوي الظروف بمعدات قياسية وعدد محدود من الكواشف يحتمل أن تمتد فوائد النانوية الذهب كأداة بحثية للباحثين من ذوي الخبرة قليلة أو معدومة في التركيب الكيميائي.
1. إعداد الكواشف
الحذر: دائما توخي الحذر عند التعامل مع المواد الكيميائية والحلول. اتباع ممارسات السلامة المناسبة وارتداء القفازات والنظارات ومعطف المختبر في جميع الأوقات. كن على علم أن المواد متناهية الصغر قد يكون أخطار إضافية بالمقارنة مع نظيرتها بالجملة.
ملاحظة: يتم إجراء جميع المحاليل الكيميائية كما مولالي (غرام الشامات لكل كيلوغرام من المذيبات) بدلا من الرحى (الشامات غرام لكل لتر من الحل).
2. تجميع Oligoclusters الذهب
3. GSH اشتقاق وتركيز Oligoclusters
4. التحليل والتحقق من Oligocluster التجميعي
وقد تم تحليل خلاصات oligoclusters الذهب من قبل الكهربائي للهلام (الشكل 1) وانتقال المجهر الإلكتروني (تيم) (الشكل 2). يمكن رصد حجم oligoclusters المغلفة GSH من قبل الكهربائي كما الجزيئات الكبيرة تهاجر أقل، وتبدو أغمق. وبالإضافة إلى ذلك، ونوعية من أي تحضير حجم معين يمكن الاستدلال على ذلك من اتساع الفرقة ينظر بعد الكهربائي (أي لحجم معين، والأعمال التحضيرية مع حجم التوزيعات أضيق سينتج العصابات أكثر إحكاما من الاستعدادات من نفس الحجم مع حجم التوزيعات على نطاق أوسع) ويصف الشكل 2 العلاقة بين تأخير الوقت (طريقة تأخير الوقت) أو HG: البذور (طريقة إضافة) إلى oligocluster الحجم. وتستخدم بأقطار يعني تحسب تيم لتحديد تأخير الوقت وHG: نمو الاعتماد بذرة oligoclusters لتأخير الوقت وإضافة على الطرق، على التوالي. والرسم البياني (الشكل 3) تحدد الإجراء لكل من التقىيتم عرض hods والجدول (الجدول 1) توفير المعلمات يتوقع أن تنتج oligoclusters من الحجم المطلوب.
الشكل 1. بولي أكريلاميد هلام التدرج الكهربائي من oligoclusters التي شكلتها لمرة وتأخير وأضف على الطرق. Oligoclusters التي تنتجها تأخير الوقت وإضافة على حللت الأساليب على الكهربائي للهلام الانحدار. الممرات 2-4: oligoclusters تشكلت بعد تأخير مرات مختلفة (45، 135، و 405 ثانية) بين جعل قلوية HAuCl 4 وإضافة NaSCN الممرات 5-8: oligoclusters التي شكلتها طريقة إضافة على. تشكلت البذور من طريقة تأخير الوقت مع 405 تأخير ثانية، أشار ↓. واستخدمت كميات متفاوتة من HG عن الإضافة. نسب حل HG (1 ملم من الذهب) البذور حل (1 ملم من الذهب) المستخدمة لإعداد كل عينة هي إنديكاتيد، كما 4xHG، 6xHG، 12xHG، و24xHG. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.
الشكل 2. أقطار من oligoclusters الذهب التي شكلتها لمرة وتأخير وإضافة على الطرق. Oligoclusters من تأخير وقت إعداد وإضافة على حللت الأساليب التي تيم. أ) و (ب)) يتم تكييفها مع إذن من المرجع 16، حقوق الطبع والنشر 2014 الجمعية الكيميائية الأمريكية. (أ) جعل صور الممثل تيم من 50 نانومتر × 50 نانومتر المناطق من شبكات المحضرة من عينات باستخدام طريقة تأخير الوقت. يشار إلى قطر من الجسيمات (Y محور) والأوقات تأخير المستخدمة في إعداد (المحور X)، وكلا محور لوغاريتمي. خط أسود كثيف (R 2 = 0.973) هو الأنسب مع التجريبية 3-المعلمة المعادلة D تأخير الوقت = D 0 + من (1 - ه -bt )، حيث D تأخير الوقت هو متوسط قطر مجموعات في نانومتر، D 0 هو الحد الأدنى قطر من مجموعات (~ 3.5 نانومتر)؛ لذلك، يصبح الحد الأقصى للزيادة في حجم الأساسية الناجمة عن تمديد وقت التأخير (~ 20 نانومتر) وب = 0.0021 ثانية -1. (ب) أقطار من oligoclusters تشكلت بعد تأخير مرات مختلفة قبل أن يضيف NaSCN (طريقة تأخير الوقت) المعروضة على مقياس خطي. (ج) أقطار من oligoclusters تشكلت بعد إضافة (طريقة إضافة على) من كميات مختلفة من HG على البذور الذهب متشكلة التي شكلتها طريقة تأخير الوقت مع 405 ثانية تأخير الوقت. كما يتضح من خط أسود كثيف، يمكن أن ينظر إليه بسهولة أن قطر oligoclusters التي شكلتها طريقة إضافة على غير ، حيث ج HG وج البذور هي تركيزات حمض chloroauric تستخدم في صنع الحل من HG في طريقة إضافة على وفي صنع oligoc اللمعان من طريقة تأخير الوقت، على التوالي. وبالمثل V HG والخامس البذور هي الكميات المقابلة. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.
الشكل 3. جدار الرسم البياني لتأخير الوقت وأضف على طرق لجعل oligoclusters الذهب من مختلف الأحجام الرسم البياني. تدفق الرسم البياني تحدد الإجراءات لتوليف oligoclusters الذهب من مختلف الأحجام باستخدام إما بدوام تأخير أو طرق الإضافة. في محلول قلوي من حمض chloroauric باللون الأزرق. وHG حمراء. الذهب بذور جسيمات متناهية الصغر وoligoclusters سوداء. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.
إضافة على إجراء | |||||||||
قطر توقع (س.خ) | |||||||||
تأخير الوقت (ثانية) | تأخير الوقت (دقيقة) | قطر توقع (س.خ) | قياس قطرها ± التنمية المستدامة. (س.خ) | 4 × HG | 6 × HG | 12 × HG | 24 × HG | 100 × HG | 1000 × HG |
1 | 0.02 | 3.5 | |||||||
2 | 0.03 | 3.6 | 3.1 ± 1.3 | 6.1 | 6.9 | 8.4 | 10.5 | 16.7 | 36 |
3 | 0.05 | 3.6 | |||||||
4 | 0.07 | 3.7 | |||||||
5 | 0.08 | 3.7 | 2.6 ± 1.1 | 63 | 7.1 | 8.7 | 10.8 | 17.3 | 37 |
6 | 0.10 | 3.8 | |||||||
7 | 0.12 | 3.8 | |||||||
8 | 0.13 | 3.8 | |||||||
9 | 0.15 | 3.9 | |||||||
10 | 0.17 | 3.9 | 6.7 | 7.5 | 9.2 | 11.4 | 18 | 39 | |
11 | 0.18 | 4.0 | |||||||
12 | 0.20 | 4.0 | |||||||
13 | 0.22 | 4.0 | |||||||
14 | 0.23 | 4.1 | |||||||
15 | 0.25 | 4.1 | 3.3 ± 1.5 | 70.0 | 7.9 | 9.7 | 12.0 | 19 | 41 |
20 | 0.33 | 4.3 | |||||||
25 | 0.42 | 4.5 | |||||||
30 | 0.50 | 4.7 | |||||||
35 | 0.58 | 4.9 | |||||||
40 | 0.67 | 5.1 | |||||||
45 | 0.75 | 5.3 | 6.4 ± 2 | 9.1 | 10.1 | 12.5 | 15.5 | 25 | 53 |
60 | 1.0 | 5.9 | |||||||
75 | 1.3 | 6.4 | |||||||
90 | 15 | 6.9 | |||||||
105 | 1.8 | 7.5 | |||||||
120 | 2.0 | ثمانية | |||||||
135 | 2.3 | 8.4 | 11 ± 3 | 14.4 | 16.1 | 20 | 25 | 39 | 84 |
165 | 2.8 | 9.4 | |||||||
195 | 3.3 | 10 | |||||||
225 | 3.8 | 11 | |||||||
255 | 4.3 | 12 | |||||||
285 | 4.8 | 13 | |||||||
315 | 5.3 | 13 | |||||||
345 | 5.8 | 14 | |||||||
375 | 63 | 14 | |||||||
405 | 6.8 | 15 | 14 ± 5 | 26 | 29 | 35 | 44 | 70 | 150 |
435 | 7.3 | 15 | |||||||
465 | 7.8 | 16 | |||||||
495 | 8.3 | 16 | |||||||
525 | 8.8 | 17 | |||||||
555 | 9.3 | 17 | |||||||
585 | 9.8 | 18 | |||||||
615 | 10 | 18 | |||||||
900 | 15 | 20 | |||||||
1200 | 20 | 22 | 20 ± 11 | 37 | 42 | 51 | 64 | 102 | 219 |
3 م | 25 | 23 | |||||||
1800 | 30 | 23 | |||||||
2100 | 35 | 23 | |||||||
2400 | 40 | 23 | |||||||
2700 | 45 | 23 | |||||||
3000 | 50 | 23 | |||||||
3300 | 55 | 23 | |||||||
3600 | 60 | 23 | 25 ± 11 | 40 | 45 | 55 | 69 | 109 | 235 |
الجدول 1. Oligocluster الجدول التنبؤ الحجم. أقطار توقع من oligoclusters الذهب شكلت باستخدام إما بدوام تأخير أو إضافة على الطرق. يتم احتساب قطر توقع على طريقة تأخير الوقت باستخدام الصيغة التجريبية لمتوسط قطر oligocluster D تأخير الوقت = D 0 + من (1 - ه -bt)، حيث D هو متوسط قطر oligoclusters الذهب في نانومتر، D 0 غير الحد الأدنى لقطر (3.5 نانومتر)، وهو الحد الأقصى للزيادة في حجم الأساسية (20 نانومتر)، وب هو 0.0021 ثانية -1، كما هو موضح سابقا (16). يتم احتساب قطر توقع للأسلوب إضافة على الأخذ بعين الاعتبار أن الجسيمات النانوية جديدة لا يمكن أن تشكل من HG، بدلا من إيداعه بذور كروية بشكل موحد في جميع أنحاء متشكلة، مما يجعلها أكبر. لا الافتراض الآخر هو ضروري. ويمكن أن يرى بسهولة أن الالبريد قطر oligoclusters التي شكلتها طريقة إضافة على غير ، حيث ج HG وبذور ج هي تركيز حمض chloroauric تستخدم في صنع الحل من HG في طريقة إضافة على وفي صنع oligoclusters من طريقة تأخير الوقت، على التوالي. وبالمثل V HG والخامس البذور هي الكميات المقابلة.
توفر هذه المخطوطة بروتوكول مفصلة لتخليق مقاعد البدلاء أعلى oligoclusters الذهب monodisperse (الشكل 3). هذه الطريقة قادرة على إنتاج مجموعة واسعة من الأحجام من مجرد اختلاف الوقت بين إضافة HAuCl 4 إلى محلول قلوي وإضافة لاحقة للعامل مختزل، ثيوسيانات الصوديوم. إضافة HAuCl 4 إلى قلوية مخزنة النتائج الحل المائية في الهيدروكسيل يعتمد وقت HAuCl 4 إلى الذهب الهيدروكسيلية (نا + [الاتحاد الافريقي (OH 4-خ) الكلورين س] -). هذه النتائج الهيدروكسيل في أقل HAuCl 4 كونها متوفرة، على الرغم من أن الهيدروكسيل لا يذهب إلى استكمال بقدر ما هو رد فعل التوازن. التنوي وتشكيل دي نوفو أحادية الذهب لا يمكن إلا أن تبدأ من قبل HAuCl 4. الذهب الهيدروكسيلية قادر فقط إضافة إلى جزيئات الذهب الحالية، مما أدى إلى تشكيل oligoclusters الذهب. لدينا إضافة على يأخذ طريقة الاستفادة من هذا 16. Oligoclusters شكلت مع طريقة تأخير الوقت يمكن استخدام البذور التي تقوم عليها يترسب الذهب الهيدروكسيلية، وبالتالي زيادة حجم oligoclusters المصنف. يمكن السيطرة على نمو المصنف من خلال تغيير نسبة من الذهب الهيدروكسيلية (HG) مقابل كما توليفها oligocluster (الشكل 1). في كلتا الطريقتين يمكن بسهولة توقع حجم الجسيمات عن طريق اختيار الوقت المناسب للتأخير (الشكل 2A، B) أو عن طريق اختيار الحق ابتداء من البذور ونسبة حق من الذهب الهيدروكسيلية المضافة (HG) (الشكل 2C). وتعرض توقعات لأحجام الجسيمات مفيدة للغاية (الجدول 1). يمكن رصد زيادة حجم GSH oligoclusters derivatized قبل الكهربائي كما الجزيئات الكبيرة تهاجر أقل وتظهر خصوصا قتامة، وأدى في وقت لاحق من حقيقة أن معامل الانقراض من جزيئات الذهب زيادة في نسبة إلى حجم الجسيمات.
> طريقة إضافة على اثنين من القيود، وأولها وحدات التخزين رد الفعل الكبيرة المطلوبة في HG عالية: نسب البذور. والقيد الثاني لطريقة إضافة على تنبع من حقيقة المذكور أن الهيدروكسيل من HAuCl 4 هو رد فعل التوازن ولا يذهب إلى الانتهاء. والهيدروكسيل ناقصة من HAuCl 4 له تأثير ضئيل على رد فعل الإضافة عندما يبقى تركيز بذور oligocluster عالية. وعندما يكون تركيز البذور oligocluster منخفضة، كما هو الحال عند استخدام طويلة البذور وقت التأخير وارتفاع HG: نسب البذور، وتأثير HAuCl unhydroxylated 4 يمكن أن تصبح كبيرة. في ظل هذه الظروف HAuCl 4 غير قادرة على nucleate تركيب oligoclusters الجديدة، مما أدى إلى السكان غير متجانسة من oligoclusters.
وoligoclusters كما توليفها التي تنتجها تأخير الوقت أو طريقة إضافة على مستقرة لعدة أسابيع، إلا وضع كميات ضئيلة من راسب الذهب. حتى بعد أن يكونتتركز جي 300 أضعاف تبقى oligoclusters مستقرة ومقاومة التجميع. وoligoclusters الذهب هو موضح هنا أيضا فائدة إضافية تتمثل في أن تكون قادرة على أن تتركز دون اشتقاق مسبق، مما يسمح لعملاء derivatizing مكلفة لاستخدامها في حجم أصغر. بعد أن derivatized مع الجلوتاثيون (GSH)، وظلت مجموعات مستقرة حتى سنة واحدة. يوفر GSH-اشتقاق أيضا تهمة سلبي قوي 13 التي تجعلها مقاومة تجميع عند تعرضها للمخازن الفسيولوجية أو البلازما الحيوان، مما يجعلها مناسبة لإجراء التجارب في الجسم الحي. اشتقاق يمكن أن يتحقق مع مجموعة واسعة من المواد الكيميائية التي تحتوي على مجموعة ثيول.
وقابليته للoligoclusters لاشتقاق مع ثيول تحتوي على جزيئات أخرى 17،18 تسمح تعديل مريحة وسهلة للأحادي الطبقة السطحية، وبالتالي السيطرة الكيمياء السطحية والتفاعل من oligoclusters. غيرها من المواد الكيميائية المستخدمة في هذا كاليفورنيا بروتوكولن أن تكون بديلا بسهولة للمواد الكيميائية مماثلة دون المساس التوليف. ويشمل هذا الاستبدال من البوراكس مع مخازن قلوية أخرى (على سبيل المثال، كربونات) وثيوسيانات الصوديوم أملاح ثيوسيانات أخرى (على سبيل المثال، KSCN).
السمة الرئيسية لهذا البروتوكول هو بساطته، والتي يجب التأكيد عليها. مطلوب فقط مقياس الوزن مليغرام والنمام المغناطيسي لإنتاج oligoclusters جودة الذهب التجارية التي يمكن استخدامها لتطبيقات البيولوجية والمواد المتقدمة. وساعد تطبيق واسعة من قبل مجموعة واسعة من الأحجام مما يمكن أن تنتج وmonodispersity. بالإضافة إلى ذلك، في منزل إنتاج منخفضة التكلفة.
وoligoclusters هي قيمة خاصة للدراسات نفاذية الأغشية القاعدية والحواجز الدم. ويمكن تدار بسهولة مع المياه المالحة من خلال طرق مختلفة وتتبعها في الجسم الحي 19-21. عينات الأنسجة التي تم الحصول عليها يمكن فحص في وقت لاحق تحتالمجهر الالكتروني 16،22. إلى جانب النفاذية، ويوفر التوزيع الحيوي المعلومات الدوائية ذات قيمة عالية وإدارة خليط من oligoclusters من أحجام مختلفة تعطي معلومات قيمة عن توزيع يعتمد حجم الجزيئات داخل الجسم 23-25. وأخيرا، بسبب بنية فريدة من نوعها فشلوا في إظهار المترجمة الرنين مأكل السطح (LSPR) ربما يجعلها مثالية للمرشحين وضع العلامات الفلورية، والتي هي غير قابلة للتطبيق بسهولة في جزيئات الذهب بسبب التدخل بين LSPR وfluorophore النتائج في التبريد شبه كامل من مضان 26 .
The authors have nothing to disclose.
TK يعترف بدعم من وكالة أبحاث سلوفينيا (ARRS، يمنح BI-الولايات المتحدة / 13-14-040، وJ3-6803). يقر نظام التشغيل بدعم من المعهد الوطني للصحة (NIH) منحة RO1HL49277.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
125 ml Wheaton glass bottles | Fisher Scientific | SC-06-404F | |
Borax (Na2B4O7·10H2O) | Fisher Scientific | S25537 | |
Gold(III) Chloride trihydrate | Sigma Aldrich | G4022 | |
Sodium thiocyanate | Sigma Aldrich | 251410 | |
Sodium carbonate | Sigma Aldrich | S7795 | |
Glutathione | Sigma Aldrich | G4251 | |
Dulbecco's phosphate buffered saline (DPBS) | Corning | 21-031-CV | |
Centricon Plus - 70 | Millipore | UCF703008 | |
Sodium bicarbonate | Sigma Aldrich | S6014 | |
CF200-Cu Carbon film on 200 mesh copper grids | Electron Microscopy Sciences | 71150 | |
10x Tris/Glycine buffer | Bio-Rad | 161-0734 | |
Any kD Mini-PROTEAN TGX Gel | Bio-Rad | 456-9033 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved