Homarus Americanus فموي معدي تشريح الجهاز العصبي

وصفنا تشريح غرامة الجهاز العصبي فموي معدي من المعدة من جراد البحر الأميركية ( Homarus americanus).

بهدف فهم الكيفية التي تنتج نظم النشاط العصبي والاستجابة للبيئة وعلماء الأعصاب إلى أنظمة تشغيل النموذج الذي يحمل نشاط الفائدة ويسهل الوصول إليها وقابلة للطرق تجريبية. فموي معدي النظام العصبي (STNS) من اللوبستر الاميركية (

يجب قبل البدء في هذا البروتوكول يمكن إزالة المعدة من جراد البحر من الحيوان ، وأعدت على النحو المبين في المادة الرفيق إن الرب (بيرمان وتوبين ، 2009). الغالبية العظمى من الخطوات المذكورة أدناه هي التي يتعين القيام بها تحت مجهر تشريح.

الجزء الأول ، عزل العقد صواري

1. توجيه الطبق بحيث نهاية الأمامي (من قبل الشفة) هو بعيدا عنك ونهاية الخلفي (من قبل بواب) هو نحو لكم.
   
   
2. ضمان دبس المعدة بحيث انها تقع الشقة ممكن على طبق.
   1. دبوس أسفل المريء على كل جانب من الشفاه.
   2. إذا كان ذلك ضروريا ، إعادة ترتيب وضع الدبابيس الأخرى أثناء تشريح الإجمالي.
3. إزالة اللحمة.
   1. الاستيلاء على اللحمة بالقرب من العضلات gm2/gm3 وسلخه من هذه العضلات وبرفق في الاتجاه الأمامي.
   2. فصل اللحمة من الدهون الأساسية عن طريق القص أية اتصالات. زيادة استخدام الرعاية حول الشريان المركزي الذي يرفق جزءا رئيسيا من الجهاز العصبي فموي معدي. ترك اللحمة سليمة داخل دائرة نصف قطرها حوالي 0.5 سم من العقدة فموي معدي ، والتي تقع بين عضلات gm1b.
   3. قطع اللحمة المشتتة.
4. فصل من أنسجة الدماغ الكامنة.
   1. التعرف على اثنين الأعصاب صواري كبيرة هذا المشروع ثنائي من الجزء الأمامي من الدماغ إلى العقد صواري في الجزء الأمامي من المعدة.
   2. ترك هذه الأعصاب سليمة ، ورفع بلطف الدماغ مع ملقط وقطع لفصل المخ عن باقي الأنسجة. كن حذرا كما كنت تفعل هذا ، كما هو العصب فموي معدي أسفل المخ ، ويجب الحفاظ عليه.
5. فصل من العقد صواري المحيطة الأنسجة.
   1. اتبع أحد الأعصاب صواري إلى واحدة من العقد صواري.
   2. تحديد ايون وابنه -- يجب أن تظل هذه الأعصاب سليمة. فإن العقدة صواري والعديد من الأعصاب التي تنبثق. قطع معظمها (باستثناء ايون والابن) ، ولكن ترك إحدى العصب اضافية ملحقة بعقد العقدة صواري في المكان في حين الانتهاء من التشريح.
   3. مع تكرار هذه العقدة صواري أخرى.
6. تنظيف ايون وابنه من الأفقي إلى وسطي. ترك العصب سليما شفوي لارساء النظام العصبي في المعدة. العقدة المريء ويجلس ليالي ايون تتقاطع. يمكنك مسح أسفله عن طريق الاستيلاء على العصب البطين السفلية وسحب ما يصل الى قطع تحتها.

الجزء الثاني ، عزل العقدة فموي معدي (STG) ، والأعصاب المتبقية.

7. فصل من STG المحيطة الأنسجة.
   1. وSTG يجلس داخل الشريان الذي يمتد بين عضلات gm1b وصولا الى العضلات gm2a ب. ابحث عن نهاية قطع الشريان بالقرب من العضلات gm2a ب.
   2. سحب نهاية قطع الشريان صعودا والأمامية ، وفضح DVN. مواصلة سحب ما يصل حتى تصل إلى مستوى اللحمة المتبقية. مرة واحدة فصل ، يمكن قطع الشريان إلى مستوى حيث أنها تمس اللحمة المتبقية.
   3. قطع رفرف العضلات التي كانت تقع في المنصة من جراد البحر.
   4. ارفع اللحمة فوق الشريان ، ملاحظا أن يجعل الشريان نفق داخل الدهون فوق STG. وضعت شفرة واحدة من مقص الخاص داخل الشريان وقطع العضلات فوقه. تأكد من أن تستطيع أن ترى DVN كما كنت خفض للتأكد من أنك بأمان فوق STG. يستمر القطع الأمامية ، بعد الشريان. كما يمكنك خفض فوق STG ، سوف تكون قادرا على رؤية الأمامية STN المنبثقة من STG وهبوطا الغوص في العضلات. يستمر القطع الأمامية للفصل التام لعضلة فوق STG.
   5. أي نوع من الأنسجة واضحة بعيدا عن STN.
8. منفصلة ليالي AGN من الأنسجة المحيطة بها. (حتى لو كنت لا خطة لتسجيل من AGN ، ستحتاج جزء من العصب سليمة إلى دبوس أسفل العقدة للتسجيلات داخل الخلايا.)
   1. لرؤية أفضل ليالي AGN ، وإزالة ما تبقى اللحمة وطبقة رقيقة من العضلات الأساسية.
   2. الخلفي عادل لSTG ، وتحديد نفق مظلم في الدهون والعضلات على جانبي DVN.
   3. عصا شفرة واحدة مقصية داخل النفق وقطع النسيج فوق العصبية. يستمر القطع أفقيا ، وبعد عصب ، لعزلها. (A ملليمتر الزوجين كافية لتعلق على العقدة ، ولكن فضح لا يقل عن 5 ملم من AGN إذا كنت تخطط لتسجيل منه.)
   4. فصل AGN من يعصب العضلات ذلك عن طريق قطع الاتصالات.
   5. كرر على الجانب الآخر لعزل AGN الأخرى.
   6. مرة واحدة وقد تم تشريح كل من ليالي AGN ، وقطع جميع العضلات والأنسجة التي تربط STG إلى المعدة.
9. عزل mvn ثانية. هم زوجا من الأعصاب الثنائية المتفرعة الصغيرة قبالة lvn والعبور أفقيا تحت الدهون.
   1. إما استخدام مقص أو ملقط اثنين إلى قطع طريق الدهون على جانب واحد من DVN ، بالقرب من حيث فروع في S. lvn two هنا كنت بعيدا عن ليالي mvn ولن يجازف خفضها.
   2. ارفع طبقة الدهون ، وتحديد تحت mvn الصغيرة. هذه الأعصاب إلى تشغيل الإنسي الخلفي فقط أفقيا على مستوى العضلات gm1b.
   3. إزالة طبقة من الدهون فوق mvn ، وترك العصب سليما حتى الآن لأنها لن تصبح متشابكة. هذا سوف يقلل من نهايتها الوحشي قبالة المعدة في نهاية تشريح.
   4. كرر العملية على الجانب الآخر لعزل mvn الأخرى.
10. عزل ليالي lvn والأعصاب الخلفية.
    1. انطلاق حيث فرع lvn ق أفقيا قبالة DVN ، اتباع lvn عن طريق خفض الدهون فوقه. اعتمادا على الإعداد ، ويمكن في بعض الأحيان يتم سحب كامل طبقة الدهون فوق العصب قبالة.
    2. تواصل الكشف عن lvn حتى النقطة التي فروع PSN قبالة.
11. عزل PYN.
    1. تحديد موقع PYN ، بل هو العصب السفر الخلف على بوابة المعدة.
    2. إزالة غشاء رقيق يغطي هذه المنطقة.
    3. عزل PYN بقطع جزء صغير من بوابة المعدة ، التي تعلق على PYN.
    4. رفع البواب الباب برفق وقطع النسيج على جانبي PYN حتى تصل إلى الفرع الذي يعلقها على PDN.
12. عزل PDN.
    1. تحديد موقع PDN ، بل هو العصب السفر خلفي موسع لعضلة البواب.
    2. قطع جزء صغير من العضلات موسع البواب ، التي تعلق على PDN.
    3. رفع العضلات برفق موسع البواب الباب ، وقطع النسيج بعيدا عن جانبي PDN حتى تصل إلى الفرع الذي يعلقها على PYN.
13. عزل lvn بطني ، الذي يربط PYN وPDN إلى lvn.
    1. عند نقطة تفرع الثلاثي حيث PYN وPDN الاتصال lvn بطني ، عزل أي جزء صغير من فروع العصب الذي قبالة lvn بطني ، مثل vpln. وسيتم استخدام هذا بمثابة مؤشر إلى سحب على lvn البطني.
    2. رفع على المقبض وقطع النسيج على جانبي lvn بطني ، والعمل في الاتجاه الأمامي حتى تصل إلى النقطة التي فروع PSN قبالة.
14. كرر الخطوات 10-13 لعزل الأعصاب lvn الخلفي وعلى الجانب الآخر.
    
    
15. فصل النظام العصبي فموي معدي من المعدة.
    1. لفصل تماما lvn من المعدة ، وسحب على PSN وقطع جميع الأنسجة والأعصاب التي تعلق على وlvn lvn بطني ، باستثناء وPYN PDN. كرر هذه العملية على الجانب الآخر.
    2. قطع نهاية كل mvn الوحشي. رفع نهاية الوحشي وقطع أي مرفقات غريبة بين الأعصاب والأنسجة الكامنة في المعدة.
    3. في نهاية الأمامي ، وقطع أي مرفقات دخيلة على صواري العقد ، وقطع العصب شفوي على كل جانب.
    4. فحص البصر فموي معدي نظام الجهاز العصبي لتحديد وخفض ثم أي مرفقات إضافية لأنسجة المعدة.
    5. الاستيلاء على نهاية أمامية كل من الأعصاب صواري ، وفوق صواري العقد ، وقشر الجهاز العصبي فموي معدي قبالة المعدة ونقله إلى جانب الطبق. كما كنت تفعل هذا ، وقطع أي مرفقات المتبقية لتحرير الجهاز العصبي.
16. إعداد طبق Sylgard الصغيرة.
    1. فرك بعض أنسجة المعدة بدقة على سطح Sylgard في صحن صغير. وهذا الانخفاض في hydrophobicity من Sylgard ، بحيث المالحة ستوزع بالتساوي على طبق.
    2. شطف وملء الطبق مع Sylgard المالحة مبردة.
17. نقل الجهاز العصبي إلى الطبق الذي أعده Sylgard الاستيلاء على نهايات الأعصاب الأمامية لكل من صواري ، ورفع الجهاز العصبي للخروج من صحن كبير ، ووضع في طبق صغير.
    
    
18. دبوس STNS في صحن صغير باستخدام مزيج من الدبابيس الدبابيس minuten وأرق من قطع سلك التنجستن.
    1. تأكد من أن يتم إعداد الجانب الظهري من قبل التحقق من أن العصب البطين السفلي يشير بعيدا عن Sylgard.
    2. إزالة المخ والأعصاب دبوس صواري.
    3. برفق على الجهاز العصبي وضيق الشقة عن طريق سحب كل واحدة من ليالي PSN خلفي وأفقيا ، وتعلق عليهم.
    4. إزالة العضلات موسع البواب من ليالي PDN ، ويعلقون عليه PDN ثانية.
    5. إزالةالبواب الجزء من ليالي PYN ، ويعلقون عليه ثانية. PYN
    6. أحدد أي الأعصاب المتبقية معزولة مثل الأعصاب الشفرية ، ق mvn و s. AGN
19. Desheath والجنيه الاسترليني.
    1. ضمان STG مسطح ضد Sylgard مشدود وعقدت من قبل ليالي AGN الوحشي ، وSTN الأمامي والخلفي DVN.
    2. ترتيب الإضاءة لتمكين تصور من المحاور داخل DVN.
    3. باستخدام دبوس صغير أو غرامة إبرة التنغستن ، وجعل ثقب صغير في غمد الضحلة المحيطة DVN ، الخلفي عادل لSTG.
    4. سحب الإبرة عبر DVN ، الظهرية إلى محاور ، لإنشاء المسيل للدموع الأفقي في غمد العصب.
    5. الاستيلاء على رفرف من غمد العصب الخلفي للSTG وسحب الأمامية لإزالة غمد من الجانب الظهري من STG.

وقد تم تشريح المعدة وسرطان البحر وصفا جيدا STNS ^5،6 سابقا ، واستخدمت أشكال مختلفة من هذا الإجراء في تشريح العديد من الدراسات. نوصي تصبح مألوفة مع تشريح المعدة ^5-7 و ^5،8 STNS قبل بداية التشريح. ومثل هذه الألفة تقلل من خطر حدوث التلف العرضي إلى الأعصاب والأنسجة.

للحفاظ على صحة الإعداد ، فمن الأهمية بمكان للحفاظ على التحضير في درجة حرارة معتدلة. ويتم تحقيق ذلك بسهولة من خلال تبادل والمالحة كل 30 دقيقة مع 4 ˚ C المالحة يحتفظ بها في الثلاجة. عندما يغوص في المياه المالحة الباردة ، وإعداد STNS معزولة هي قابلة للتطبيق لعدة ساعات. وقد أظهرت التسجيلات في gammarus Homarus النشاط الإيقاعي مستقرة ذات الصلة من STG طوال 5 أيام في المختبر ⁹ ؛ فقد رأينا قوة مماثلة في H. americanus (pers. OBS).

مطلوب مدخلات Modulatory إلى STG من العقد صواري للحفاظ على أنماط السيارات الجارية. لذلك ، للحفاظ على النشاط العادي الايقاعي هذه العقد وايون ابنه ، ويجب أن تبقى الأعصاب STN سليمة. تشريح وصفنا يحفظ العديد من الأعصاب الحركية (التي تحتوي على محاور العصبون الحركي) : ليالي AGN (التي تحتوي على مطحنة المعدة (GM) المحاوير) ، ليالي mvn (التي تحتوي على المعدة الجانبي (LG) وأدنى المحاوير القلب (IC)) ، ليالي PYN (التي تحتوي على الخلايا العصبية البواب (PY) المحاوير) ، ليالي PDN (التي تحتوي على الموسع البواب (PD) المحاور) ، وق lvn (التي تحتوي على البواب الجانبي (LP) ، المعدة الإنسي (MG) ​​، المحاوير غاز البترول المسال وكذلك من جنرال موتورز ، PD وPY). بواسطة تشريح إضافية (أو مختلفة) الأعصاب ، قد يتم تسجيل السيارات الأخرى المحاور العصبية. قد يتم تسجيل كل نوع بعينه من العصبون الحركي محوار بشكل فردي عن طريق تشريح وتسجيل من العصبية التعصيب العضلات التي هذا النوع من المشاريع الخلايا العصبية.

ويمكن استخدام هذا المستحضر لمجموعة متنوعة من الدراسات التي تركز على وظيفة الجهاز العصبي. قد يتم تسجيل نشاط الخلايا العصبية إما باستخدام الخلايا ، والتسجيلات القطب حادة من somata أو المحاور العصبية ، أو عن طريق تسجيل النبضات الكهربائية خارج الخلية من الأعصاب. وقد تم العديد من القنوات الأيونية في الخلايا العصبية STG مستنسخ جزئيا ويمكن قياس مرنا من somata سحبت ^10،11 يدويا.

نود أن نعترف مستشار لدينا ، والدكتور حواء ماردر. وأيد هذا البحث من قبل المعهد الوطني للصحة منح NS17813 ماردر لحواء وNS059255 إلى T. AE