Canlı Hücrelerde CRAF'ın 14-3-3 Proteinleri ile Etkileşimlerinin Ölçülmesi için Biyolüminesans Rezonans Enerji Transferi (BRET) Tabanlı Test

Araştırmamızın birincil odak noktası, içindeki nadir hastalıklarla ilişkili mutasyonların incelenmesi yoluyla Ras-MAPK kinaz yolundaki yeni güvenlik açıklarını ortaya çıkarmaktır. Yakın zamanda, canlı hücrelerde RAF kinazların otomatik inhibitör aktivitelerini ölçmek için başka bir BRET tabanlı test geliştirdik. Daha da önemlisi, bu test, BRAF sistein açısından zengin alandaki bir grup nadir germ hattı mutasyonunu karakterize etmek için gerekliydi ve bu alan, BRAF oto inhibisyonunu sürdürmek ve yapısal BRAF biyolojik aktivitesini önlemek için kritik önemini gösterdi.

Bu test, 1433 proteinin RAF kinaz CRAF ile etkileşimlerini ölçer ve bu etkileşimler hem gelişimde hem de hastalıkta RAF fonksiyonuna aracılık etmede önemli roller oynar. Ek olarak, bu tahlil, RAF oto inhibisyonunu ve RAF-RAF etkileşimini ölçmek için önceden kurulmuş tahlillerle birleştirildiğinde, canlı hücrelerde RAF kinazların düzenleyici mekanizmalarını incelemek için bir araç setinin temelini oluşturur.