Noninvaziv Mikrodiyaliz Tekniği ile Sıçan Kalbinden Dinamik Sürekli Kan Ekstraksiyonu

Bir sıçan kalbinden dinamik sürekli kan toplama tekniğimiz, kan bileşenlerini analiz etmek, kardiyovasküler hastalıkları ve bunlarla ilgili hastalıkları anlamaya katkıda bulunmak için çok önemlidir. Geleneksel örnekleme yöntemleriyle karşılaştırıldığında, bu teknik in vivo, gerçek zamanlı, dinamik avantajlara sahiptir ve yabancı bir test için biyolojik mikro moleküller ve titre numunesi ön işlemi olmadan invaziv değildir. Bu teknik sadece kardiyovasküler hastalıklar için geçerli değildir, aynı zamanda yüksek fazlı sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi ile birlikte kan biyobelirteçlerini tespit ederek hastalık tanı ve tedavisi için de çalışmalıdır.

Bu yöntem miyokard enfarktüsü, apne ve ateroskleroz gibi kardiyovasküler hastalıkları araştırmak için kullanılabilir. Ek olarak, kardiyojenik pulmoner ödem ve pulmoner ve serebral emboli için de geçerlidir. Deneysel hazırlığı yaptıktan sonra, diyaliz ünitesi probunun girişini şırınga iğnesi, boru adaptörü ve FEP tüpü ile takın.

Antikoagülan sitrat dekstroz çözeltisini boru sistemine perfüzyon ederek mikrodiyaliz boru sisteminin açıklığını kontrol edin. Yumuşak doku ve perivasküler fasyanın künt diseksiyonu ile sağ juguler veni açığa çıkarmak için bir kesi yapın. 4-0'lık bir cerrahi dikiş kullanarak, kan akışını geçici olarak engellemek için kalbin distal ucundaki sağ juguler damarda çıkarılabilir bir kayma düğümü yapın.

Daha sonra kalbin yakınındaki sağ juguler vende bir kesi yapın. Sıçan kalbinin proksimal ucuna doğru sağ juguler ven içine iğne şeklinde bir kateter stilit yerleştirin. Kan mikrodiyaliz probunu bir kateter içine yerleştirin ve probu kateter stiletinin eğik insizyonu boyunca oftalmik forseps ile implante edin.

Kılavuzlu kateter stilini çıkarın ve probun yarı geçirgen zarını sağ juguler damara tamamen daldırın. Sağ juguler vendeki kan akışını yeniden sağlamak için kalbin distal ucundaki ayrılabilir kayma düğümünü çözün. Daha sonra probu sağ juguler ven ile bağlamak için 4-0 cerrahi dikiş kullanın.

Uyanık sıçanı serbest hareket eden bir tanka yerleştirin ve probu mikrodiyaliz sistemine bağlayın. Daha sonra, prob diyaliz membranını dengelemek için antikoagülan sitrat dekstroz çözeltisini bir saat boyunca dakikada iki mikrolitre oranında sulayın. Mikrodiyaliz kan örneklerini toplayın ve geçici olarak dört santigrat derece fraksiyonel kapta saklayın.

Probun sağ juguler vende olduğunu tekrar doğrulamak için, sıçanı disseke edin. Mikrodiyaliz probunu sağ juguler damardan çıkarın ve ultra saf suya koyun. Probu boru hattına bağlayın ve boru ve probdaki kalan tuzu iyice yıkamak için gece boyunca ultra saf suyla durulayın.

Normal kan örnekleri parlak kırmızı görünürken, hipoksik örneklerde potansiyel kan pıhtıları gözlendi. Kan mikrodiyaliz tekniği ile elde edilen örnekler renksiz, berrak ve şeffaftı. Membranın tahrip olmasını ve kayma veya yer değiştirme probunu önlemek için, probu sıçan juguler damarına yerleştirirken ve daldırırken dikkat etmeliyiz.

Mikrodiyaliz tekniği ile elde edilen kan örnekleri, farklı hastalıkların biyobelirteçlerini ve ilaçların ve nadir metabolitlerin kan dağılımını analiz etmek için kullanılabilir.