Bu prosedürün genel amacı Zebra balığının yumurtalık folikülerinde foliküler hücreleri ve Oositleri ayırmaktır. Foliküler, Oositler ve çevresindeki foliküler hücrelerden oluşan yumurtalığın temel birimidir. Foliküler hücrelerin birincil yakalanması ve gen ekspresyonu, tüm doygunluk ve in vitro döllenme üzerine yükselmeler de dahil olmak üzere iyi araştırma politikaları için hem foliküler hücreyi hem de dış bölmeleri ayırmak için geniş bir araçtır.
Son zamanlarda, Zebra balığı, zaten gelişimin kontrolünü inceleyen Nissan'ın güçlü bir modeli haline geldi. Burada, basit bir yöntem sunuyoruz, bu nedenle zebra balığında zaten gelişmenin araştırılmasını kolaylaştıracak foliküler hücreleri ve Zebra balığı foliküler oositlerini ayırır Ticari, hiçbir kütle veya iki ayrı foliküler hücreler ve spinlerin tüm tarafları labirentli, zaman alıcı ve dışarıya yüksek hasar veren bir post kullanıyorlar. Burada, saf bir resif altında Tamela oranını kullanarak veya kısmen gözlük kullanarak iki ayrı bölmeye basit bir yöntem belirledik.
Metro kapsamımız, hem dışarıda hem de foliküler hücreler, çekilen cam kılcal damarlar yazılarak kolayca imal edilebilir. İlk olarak, bir şair cam kılcal damar hazırlayın. Alkol yakıcıya cam kılcal damarların kafasına vur.
Cam kılcal damarı rave kart çapına germek için dört kenar kullanın. İkincisi, yetişkin dişi balıklardan aşırıya bulayan, yumurtalık köklerini yumurtalıktan izole edin. Son olarak foliküler hücre ve Oosit'i yumurtalık foliküllerinden ayırmak için yoklanmış bir cam kılcal damar kullanın.
Cam kılcal damarı, keskinlik kabını, geniş kesiciyi, alkol yakıcıyı ve bir tokmakla hazırlayın. Alkol yakıcıyı yasla, eve bir bardak kılcal damar götür ve cam kılcal damarın bir ucını alkol yakıcının ateşinde ısıtın. Cam kılcal damarların başka bir ucunun tutulması için bir yabanayı kullanın, cam kılcal damarı hızlı ve hafifçe strese sokun.
Cam atıkları keskinlik kabına koyun. Havuzdaki geniş kesici Gretch'i camla birlikte kullanın. Daha sonra port bakışının düzgün bir şekilde açılmasını sağlamak için kanatçıklardan yavaşça ayrılın, cam kılcal damarın ucunu birkaç kez alkol brülörüne yakın ve açık ucunu geniş kesici ile dikkatlice ovalayın.
Ekili su sisteminden balık tankının nasıl olduğunu alın. Ve şimdi yetişkin dişileri, balık gill hareketini durdurana kadar en az iki ila beş dakika boyunca buzlu suya balık yerleştirerek bağlar. Balıkları buz kutusundan çıkarın ve kalan su balığı gövdesini havlu ile çıkarın, D bölüm tabağına dört setli bir balık yerleştirin.
Balıklar, ölümü sağlamak için keskin makaslarını kullanarak Spang akoru servis atederek kafaları kesildi. Aşağıdaki gibi kesmek için kesme makası kullanın. Chloe'den karın orta çizgisi boyunca solungaçlara kadar kesiği kesin, Chloe'nin bankasından kesilmiş, ön ucundan sırt tarafına kesilmiş.
Vücudun bir tarafındaki cildi ve kasları nazikçe çıkardı, iç organları ortaya çıkardı ve dört adımla tüm yumurtalığı sağlıklı bir şekilde aldı. Yumurtalıklar kültürde 100 milimetrelik, bulaşık kabı % 60 L 50 ortancaya hemen yerleştirildi. Farklı aşamalardaki yumurtalık köklerinin büyüklüğüne ve morfolojilerine göre iletilen ışık optikleri ile bir diseksiyon mikroskobu gönderdi.
Bu yumurtalık köklerini dört setlik bir bira kullanarak manuel olarak izole edin. İzole yumurtalık köklerini toplayın ve% 60 L 50 orta içeren başka bir kültürlü yemeğe koyun, foliküler hücreleri ve Oositleri ayırmak için güzel izole yumurtalık folikülleri kullanılacaktır. Ardından ayırma için bir cihaz ayarlayın.
30 santimetrelik plastik bir tüp kullanın. Bir uç, filtre elemanı olan bir mililitre pipet ucu ile bağlanır. Başka bir uç 200 mikroliter pipet ucu ile bağlanır.
Diseksiyon mikroskobu altında, hatalının cam kılcal damarla havuza taşınmasına izin vermek için hava akışını kontrol etmek için ağız kullanın, ardından foly'yi cam kılcal damardan dışarı üfleyin. Bu işlem sırasında foliküler hücre ve yumurtalık foliküllerinin Oositleri ayrılabilir. Bu olgun bir evre folikül için bir ayırma işlemidir.
Soluma işlemi sırasında foliküler hücre tabakası Oosit'ten ayrılır, foliküler hücreyi üfledikten sonra yapar ve Oosit ayrılabilir. Bu tam bir zemin evresi foliküldür. Foliküler hücre tabakasının Oosit'ten ayrıldığını görebiliyoruz.
Bu yöntem erken evre yumurtalık foliküllerinde de uygulanabilir. Bu, Latella Genesis aşamasında bir foliküldür. Bu erken vatella Genesis aşamasında bir foliküldür.
Bu vatalla öncesi Genesis aşamasında bir foliküldür. Bu resimden, ayrılma sürecini görebilirsiniz. Panel 1, tam yetişkin sahne panelinde sağlam bir folikül gösterir.
Panel iki, bu folikülün çekilmiş cam kılcal damarlara yumurtlamasını gösterir. Panel 3, folikülerlerin çekilen cam kılcal damardan üflenerek çıkarıldığını gösteriyor. Panel 4, F denuded Oosit ve foliküler hücrenin başarılı ayrımını gösterir.
Bu yöntemde bile, Oosit'teki foliküler hücrenin ayrılması farklı evre foliküllerde yapılabilir. Foliküler hücrelerin sağlam foliküllerden ayrılıp ayrılmadığını araştırın. Sağlam bir folikül ve ayrılmış Oosit, foliküllerin farklı aşamalarından BV aşamasından FG aşamasına kadar DAPI ile boyanmıştır.
Foliküler hücrelerin çekirdeği DAPI ile lekelenebilir. DAPI'nın mavi sinyali bozulmamış foliküllerde gözlendi, ancak bu farklı evre foliküllerde oositler denuded değildi. Açık ayrımı daha da doğrulamak için, bozulmamış foliküller ve ayrılmış Oositler histolojik bölümlere kadar oluk döküyorlardı.
DAPI'nın sonuçları foliküler hücrelerin açıkça çıkarıldığını ve Oositleri denuded olduğunu göstermiştir. Bu yöntem kullanılarak, tam büyüyen evre foliküllerden ayrılan denuded Oositlerin spontan Oosit olgunlaşmasından geçtiği bulunmuştur. dört saatlik kuluçkadan sonra herhangi bir tedavi olmadan.
Su ile aktivasyondan sonra, bu olgunlaşmış Oositler tam korozyon genişlemesine tabi tutulabilir. Bu sonuç, bu yöntemi kullanarak Oosit'e verilen düşük hasarı gösterir. Böylece, bu hardal, Zebra balıklarının Oosit olgunlaşmış rasyonunu incelemek için denuded Oocyte'yi elde etmek için kullanılabilir.
Foliküllere malzemenin foliküler tabakası kılcal cam bir tüp ile çıkarılabilir. Bunlar döllenebilir ve kuluçka aşamasına devolve edilebilir. Sonuçlar, bu yöntemin Zebra balıklarında In Vitro döllenme için kullanılabileceğini göstermektedir.
Burada foliküler hücre ve Oosit'in Zebra balık yumurtalığı Foliküllerinden hızlı ve kolay ayrılması için yeni bir yöntem tarif ediyoruz. Bu yöntemin birkaç önemli avantajı vardır, ters çevrilmiş metodolojiler. Bunlar arasında birincil olan, sadece tek ve harici bir manipülasyon gerektiğinden ayrılma kolaylığını büyük ölçüde artırmaktır.
Artan ayırma kolaylığı, bu yöntemin mikrodiseksiyon konusunda yetenekli olmayan araştırmacılara kullanılabilirliğini arttırır. İkinci olarak, bu yöntem yumurtalık foliküllerinin foliküler hücresini ve Oositini ve PV, EBV MV aşaması da dahil olmak üzere erken gelişim evrelerini ayırmak için kullanılabilir, bu ayırma mevcut metodolojiler kullanılarak erken evre folikülde gerçekleştirilemez. Üçüncüsü, bu yeni yöntem Oositlere daha az zarar verir.
Bu yöntemle ayrılan denuded Oositler Oosit olgunlaşmasına uğrayabilir ve döllenebilir. Ek olarak, bu yöntem diğer balıklarda da uygulanabilir.
