Yazarlar Bayan Paulette McKenna ve sekreterlik desteği için bu çalışmada Lisa Pezzino ve Bay Phil Auerbach teknik destek için teşekkür ederiz. Yazarlar ayrıca Drs. Michael Ariel ve Michael S. Jones (Saint Louis Üniversitesi Tıp Fakültesi) izole vitro baş hazırlık için bize tanıtmak için teşekkür ederiz. Bu işbirliği destek için fon Biyoloji bölümü (Robert S. Chase Fonu), akademik araştırma komitesi ve Lafayette Koleji'nde sinirbilim programı tarafından sağlandı. Son olarak, bu eser 28 Eylül 2016 yılında vefat eden Bay Phil Auerbach adanmıştır; taramalı elektron mikroskobu hizmet dışı ve 5 eksenli sahne bu iletişim kuralını kullanmak için kullanışlılığı tanıdı. Onun dostluk ve güçlülük çok özleyeceğiz.

Not: Kırmızı kulaklı kaymak kaplumbağalar, erkek ve kadın, bir satıcıdan satın alındı. Kaplumbağalar, sıcak bir hayvan paketi 250 W kızılötesi ışıkları altında sunning için tuğla Adaları ile donatılmış iki 60 litrelik küvetleri içeren yer. Çevre su sıcaklığı 22 ° C'de ile 14/10-h açık/koyu döngüsü devam edildi Işıklar 6: 00'de açık ve 8:00 de devre dışı. Filtreleme sistemleri ile donatılmış tankları haftalık temizlenmiştir ve kaplumbağalar ad libitum her geçen gün beslenen edildi. Kırmızı kulaklı kaymak bakım kaplumbağaları ve tüm aşağıdaki deneysel prosedürler açıklanan burada32,33 kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Lafayette Koleji tarafından kabul edildi.
1. ekipman kurulumu
<ol><li>Kaplumbağa zil'ın çözüm hazırlamak. Bu sırada distile su için aşağıdakileri ekleyin: sodyum klorür 96.5 mM (58.44 g/mol), potasyum klorür 2.6 mM (74.56 g/mol), magnezyum klorür 2.0 mM (203.31 g/mol), sodyum bikarbonat 31.5 mM (84.01 g/mol), dekstroz 20,0 mM (180.16 g/mol), konsantre hidroklorik asit pH 7,51 ve kalsiyum klorür 4.0 mM (110.98 g/mol) ayarlamak için (bkz. Tablo malzeme). Çözüm süre her tuz ekleyerek karıştırın. Dikkat: Konsantre HCl tehlikeli (Cilt, gözleri, solunum ve sindirim tehlikeler) olduğunu.</li>
	<li>İpuçları üzerinden 5 cm uzunluğunda kılcal emme elektrotlar için make kranial sinirler değişen kalınlıkta ağırlama cam iç çapları farklı boyutlarda yangın parlatma tarafından (bkz. Tablo malzeme).<ol>
<li>Küçük bir dosya kapiller cam parçası arasında bir çizgi etch için kullanın. Doku sayfa yerleştirin ve ikiye böl.</li>
		<li>Yavaş yavaş kapiller cam ucuna birini Bunsen burner alevin içine at. Düzenli olarak incelemek boyutu, pürüzsüzlük ve simetri bir diseksiyon kullanma için belgili tanımlık uç kapsam ve fiber optik ışık kaynağı ( Malzeme tablobakınız). Not: kafa genişliği 20 ve 30 mm arasında olan kaplumbağaları için en uygun uygun iç çapı genellikle oculomotor sinir (nIII), için 0.8 mm ile 0,4 arasındadır trochlear sinir (NIV) için 0.3-0.6 mm ve abducens sinir (in) için 0,2-0,4 mm boyutlandırır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Temiz ve Rongeurs, bir künt diseksiyon sonda, microscissors, iyi forseps, Kıvrımlı pensler ve neşter kulpu ( Tablo malzemelerigörmek) kanatları diseksiyon ile organize edin. Not: Sterilizasyon aletleri seçime bağlıdır.</li>
</ol>2. anestezi ve ötenazi
<ol><li>Yer bir buz kaplumbağa kova cryoanesthetize için 60 dk için o.</li>
	<li>Kaplumbağayı kullanarak küçük bir hayvan Giyotin işten çıkarma tarafından ötenazi ( Tablo malzemelerigörmek).<ol>
<li>Böylece bir kanca takılı ve üst çene ucu altında uygun ortaya yavaşça küçük bir tartı spatula ile Hayvansal açık çene Gözetlemek.</li>
		<li>Hayvanın kafasını giyotin ile genişletmek için sabit basınç ile çek. Hızla hayvan başını kesmek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kaplumbağa kafasını bir diseksiyon tabak yerleştirin. Yandan doku sulamak için yeterli kaplumbağa zil'ın çözüm var. 95/5 O2Co2 çözümle oxygenize (bkz. Tablo malzeme).</li>
	<li>4 ° C'de doku çanak dış buz yerleştirerek korumak.</li>
</ol>3. diseksiyon
<ol><li>Diseksiyon kapsamlı bir fiber optik ışık kaynağı ile diseksiyon taşımak için kullanın.</li>
	<li>Alt çene kaldırın. Başın daha kolay kullanım sağlamak için ağız yoluyla bir künt diseksiyon sondası yerleştirin. Bir neşter ile kafatası dentary kemik bağlanma ortak kesti. Rongeurs kafatası uzak alt çene çekmek için kullanın. Rongeurs deri ve kaslar onların eklerinden kafatası dorsal ve yanal bölgeler koparmak için kullanın.</li>
	<li>Vertebral sütun kaldırmak.<ol>
<li>Kafatası kaudal sonundaki vertebral sütun tanımlayın. Spinal kord ventrally maruz vertebral sütunun viraj. Spinal kord makasla kesme için microscissors kullanın. Rongeurs vertebral sütunun ve diğer doku caudally çekerek kafatası kaldırmak için kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Beyin kranial sinirler kesme sonra kafatası kaldırın.<ol>
<li>Deliği magnum başlayarak, rongeurs iki insizyon dorsal kafatası üzerinde kesmek için kullanın. Kesikler yüzeysel altında beyin zarar görmesini önlemek için yapmak.</li>
		<li>Rongeurs dikkatli bir şekilde dorsal kafatası çekmek için kullanın. Microscissors beyin kalan ortaya çıkarmak için meninx kaldırmak için kullanın. Olfaktör ampuller anterior kranial boşluğunda belirlenebilir kadar yeterli meninx kaldırmak ( Şekil 1A' ya bakınız). Gerektiği gibi kaplumbağa zil'ın çözüm ile beyin sulamak devam edin.</li>
		<li>Kıvrımlı pensler yavaşça cerebrum caudally çekin ve kranial sinir hafif gerginlik üretmek için kullanın. Dikkatle kes gitsin ve olfaktör ampuller ve cerebrum eğri forseps ile kaldırın.</li>
		<li>Microscissors orta kranial sinirler ortaya çıkarmak için orta hat doğru yavaşça itin için kullanın; nIII, yaklaşık 0,6 mm, NIV önünde görülebilir ve NIV çapını biraz nIII daha az olacaktır. Kesilmiş nIII ve NIV nerede onlar için orta eklemek (bkz. Şekil 1B). Bunu diğer tarafta tekrarlayın.</li>
		<li>Sol ve sağ optik siniri (nII) microscissors ile kesti. O zaman beyin sapı bir tarafa eğin. İn pons ve medulla yakınındaki ventral yüzeyinden yükselen gözlemlemek (bkz. Şekil 1 c); İn çapı küçük ve yaklaşık 0.3 mm. hem sol ve sağ in kes.</li>
		<li>Beyin kalan bölümlerini kaplumbağa iyi forseps ve microscissors ile kaldırın. Kafatası boş olduğunda, kafatası boşluğu kat inceleyin. NIII, NIV ve in tanımlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Alt ve üst göz-göz kapakları ile iyi forseps ve microscissors kaldırmak.</li>
</ol>4. göz hareketleri kalibrasyonu
<ol><li>Katı bir tabloyu kullanın (gimbal ve diğer enstrümanlar yerleşimini desteklemek için Malzemeler tablobkz:). Kaplumbağa kafa baş sırt yüzeyine paralel olarak küçük bir kabarcık düzeyi arasında kafatası dinlenme kullanarak ufuk gimbal chuck yerleştirin. Kabaca gözleri gimbal'ın yatay ve dikey döndürme merkezinde getirin.</li>
	<li>Bir kızılötesi ışık yayan diyot (LED), video tabanlı göz izleme sistemi parçası olan ile donatılmış kızılötesi kamera yerleştirin (bkz. Tablo malzemeler), yaklaşık 12 cm kaplumbağanın göz görüş uzaklığı olarak.<ol>
<li>Kameranın göz yukarıda bakış açısı 45 derece açı. LED kamera objektifi bakıldığında 11: 00 konumda olmalıdır. Merkezi LED gözün optik eksen boyunca. Kamerayı biraz ekseni (göz yukarıdan bakıldığında) olacaktır.</li>
		<li>Kamera görünümü sonuna kadar gözü tarafından doldurulur göz fotoğraf makinesinin mesafeyi ayarlayın. Gözler (canthi) köşe yatay görünüm kenarlarında olduğundan emin olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kamera izleme sistemi verileri işlemek için video tabanlı göz bağlayın. Ham video yakalamak için bir DVD kaydedici için sinyal bölün. Gözün net bir görüntü elde etmek için kamera odaklama. Güzel pozisyonlu linear ayar (x, y, z) üç derece kullanarak kamera görünümü ortasındaki göz gimbal ile sağlanan için dikkat ediniz.</li>
	<li>Karanlık gözbebeği uygun takip sistemi video tabanlı göz ile sağlanan program kullanarak kontrast ve eşik ayarlayarak algılamak.<ol>
<li>Fareyi kullanarak, "Video" menüsünde'i tıklatın ve "Mode" altında "Yüksek hassasiyetli 30 Hz (kararlılık-in 640 piksel x 480 satırları) örnekleme hızında çekim" seçin. Ayrıca "Görüntü'nün altında", "Karanlık gözbebeği" "Öğrenci türü" ve "Elips (döndürülmüş elips)" için "öğrenci segmentasyon yöntemi için" seçin.</li>
		<li>"EyeCamera" penceresinde, "Öğrenci arama alanı ayarlama" simgesini (merkezi bir nokta ile küçük dikey dikdörtgen) tıklayın. Öğrenci bir çevresi sınırlar bir dikdörtgen dışarı sürüklemek için fareyi kullanın. Karışık karanlık bölgeler ile öğrenci kaçının.</li>
		<li>"Denetim" penceresinde, "Otomatik görüntü" ve "pozitif-kilidi eşik izleme" kutularını işaretli olduğundan emin olun. "Auto-tarama, yoğunluk en iyi duruma getirmek için üzerinde karanlık bir öğrencisi yeşil noktalar poliçelerinizin eşik" tıklayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yatay ekseni çevresinde ve (+/-) 10 ° dikey ekseni etrafında gimbal 12.5 ° (+/-) rotasyonları için programı izleme video tabanlı göz video görüntüsünü ayarlama.<ol>
<li>"Denetim" penceresinde, "Ekranda"'ı tıklatın. Kutuları "Gaze" ve "Stim" altında "Gaze Point", "Calib bölge" ve "Geometri kılavuz" için işaretleyin. "Geometri kılavuz" altındaki kutuları kontrol ettikten sonra bir penceresi açılır ve demek, "geometri kılavuz görüntülenebilir önce uyarıcı ekran geometri ölçülmesi gerekir. Sana bunu şimdi yapmak istiyor musunuz?" "Y" için Evet'i seçin.</li>
		<li>Fareyi kullanarak, "Windows" menüsünü tıklatın ve "Uyarıcı" seçin. Ekranın ortasındaki bir dikey ve yatay çizgi geçiş gösterilen "Uyarıcı" penceresi açılacaktır. En yakın mm. "Esc" tuşuna basın satırlarına uzunlukları "Uyarıcı" penceresinden çıkmak için klavyedeki ölçmek.</li>
		<li>Fareyi kullanarak, "Uyarıcı" menüsünde'i tıklatın ve "geometri" seçin. Sadece ölçüldü çizgi uzunlukları girdi. Derece/satır eşit yatay çizgi ve dikey çizgi için 20 ° 25 ° görüş uzaklığı ayarlayın. "Store" butonuna tıklayın ve pencereyi kapatın.</li>
		<li>"EyeSpace" penceresinde, kalibrasyon "Veri noktasını" "9" olarak sayısını seçin. Merkezde konumlandırılmış kaplumbağanın göz ile üstünde belgili tanımlık merkez veri üzerine gelin ve "burada yeniden" düğmesini tıklatın. Not: "Uyarıcı" pencere-ecek açık ve ekranın merkezinde "Hazır olsun" görünecektir. Bir kutu merkezi konumda görünür ve sonra kaybolur. Onun kayboluşu "Uyarıcı" penceresi kapatılacak. Merkezi konumu şimdi ayarlanması.</li>
		<li>Sağa/sola yalpa +12.5 ° / °-12.5, dönen tarafından ve yukarı/aşağı + 10 ° /-10 kalan veri noktaları ayarlamak için ° yordamı yineleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Burulma döndürmeyi ayarlamak için algoritma programı izleme video tabanlı göz ile sağlanan uygun şablonu kullanın. Algoritma üzerindeki iris işaretleri dayalı bir sıfır noktasını ayarlar ve işaretler öğrenci centroid ofset haline ne zaman bir dönüş açısını hesaplar.<ol>
<li>Fare işaretçisi, "Windows" menüsünü tıklatın ve "Burulma" seçin. "Burulma" penceresinde "Başlat" düğmesini tıklatın. "EyeCamera" penceresinde, bir yay göz görüntüleri üzerinde gösterilir.</li>
		<li>Yarıçapı, açı ve düzensiz işaretler iris mevcut nerede bir yerde kaydırıcıları kullanarak ark uzunluğu ayarlayın. "Gerçek zamanlı" grafik"ve"Auto-Set sonra ayarlama"için kutuları işaretleyin. Gerekirse, parlaklığı ayarlayın ve denetimleri pencere ve re-eşik karanlık gözbebeği kontrast (bkz. Adım 4). "Şablon ayarla" düğmesini tıklatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Aynı odak düzlemi öğrenci olarak bir cetvel yerleştirin ve tam Kamera görünümünün kaydedin. Değer daha sonra öğrenci gerçek genişliğini belirlemek için kullanılır.</li>
</ol>5. kranial sinir göz hareketleri uyandırmak için üzerinde emme elektrot konumlandırma
<ol><li>Dikkatli bir PIN referans elektrot kafasına kalan bağ veya kas dokusu içine koyun.</li>
	<li>Emme elektrot yerleştirin (bkz. Tablo reçetesi) kranial sinir micromanipulator ve diseksiyon kapsamı kullanan bir patlama monte edilmiş. Görüntülemek ve Yerleştirme Kılavuzu için bir fiber optik ışık kaynağı kullanın.<ol>
<li>Bir sinir kapiller cam bahşiş için uygun. Deneme yanılma bir sinir çapı çevresinde en iyi bir uyum elde etmek gereklidir (bkz. Adım 1.2 boyut önerileri için). Cam ucu emme elektrot üzerine yerleştirin. Emme elektrot zil'ın çözüm ile doldurun ve şırınga yaklaşık içinde ses seviyesini kapasitesini yarısı.</li>
		<li>Dikkatle micromanipulator kullanarak seçili sinir kesme uç yukarıda bir pozisyon elektrot cam ucu taşıyın. Zil'ın çözüm kafatası doldurur ve belgili tanımlık uç yüzeyi altında olduğundan emin olun. Gerekirse, modelleme kil nerede zil'ın çözüm kafatası dışarı sızdırıyor mekanlar baraj için kullanın.</li>
		<li>Şırınga pistonu üzerinde geri çek. Not: Vakum sinir kapiler uç uç çekecek. İyi bir uyum içinde ipucu uygulanan az veya hiç ek vakum ile kalan sinir simgesiyle gösterilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. kranial sinir ve göz hareketleri Analizi uyarılması
<ol><li>Genel amaçlı sinir/kas Stimülatörü geçerli bir yalıtım aygıtıyla kullanmak (kranial sinir emme elektrot ile uyarmak için Malzemeler tablobkz:).<ol>
<li>Emme elektrot bir kablo kullanarak geçerli yalıtım cihaza bağlayın. Müşteri adayının yalıtım aygıt toprağa bağlama PIN referans elektrot bağlayın.</li>
		<li>Parametreleri dials kullanarak akıntılarının seçin ve uyarıcı ve yalıtım aygıtta geçer. 10 Hz. Kullanım 1 veya 2 ms 100, 500 ya da 1000 ms süren tren bakliyat 400 sıklığı ile a sıra-in 100 µA 1 akımları kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Elektrodlar zamanlamasını kaydedin. Not: Transistör transistör mantığı (TTL) bakliyat akımları teslimatlar üzerinden uyarıcı ile eşitlenir ve iletişim kablo giriş kanalları izleme sistemi video tabanlı göz ile gerçek zamanlı. Bir yazılım modülü program denetimleri iletişim izleme video tabanlı göz ile sağlanan.<ol>
<li>Mevcut uygulamalar ve göz hareketleri onların etkisi zamanlaması görselleştirmek için "PenPlots" menüsünde tıklatın. "Seç X Gaze konum", "Y Gaze konumu", "Burulma" ve "Öğrenci genişliği" göz pozisyonları, burulma ve öğrenci Genişlik X ve Y için gerçek zamanlı ham veri araziler göstermek için. Ayrıca "Saniye & işaretleyicileri" bir zamanlama komplo 1 s aralıklarla görünür onay işaretleri ile göstermek için "PenPlots" menüsünden seçin. Not: Aynı anda geçerli uygulama ile meydana gelen TTL darbe başlangıcı işaretleme bir büyük harf "T" görünür.</li>
		<li>Göz hareketleri akımlar tarafından uyarılmış verileri depolamak için "Dosya" menüsünü tıklatın ve "Veri" altında "yeni veri dosyası" seçin. Bir dosya adı girin ve "Enter" tuşuna basın. Kaydetme veri duraklatılmış ve tuş komutları, "Ctrl" + "p" kullanarak yeniden başlatılır. Deneysel bir oturum tamamlandığında, "Yakın veri dosyası" "Dosya" menüsünden "Veri" altında kapalı seçeneğini belirleyin.</li>
		<li>Uygulanan akımları türünü izlemenize yardımcı olmak için "Windows" menüsünü tıklatın ve "Veri Pad" seçin. "Tuş takımı/DataMarker" pencere-ecek gözükmek. Tıkırtı üstünde bir mektup ya da sinir için teslim edilen geçerli elektrodlar parametrelerini tanımlamak için bir sayı. Not: Örneğin, "X" duramazdı 10 µA. için "X" üzerine tıklamak onun giriş içine veri dosyasının post hoc analizi için gerçek zamanlı depolar. Ayrıca "PenPlot" "Saniye & işaretleri" sürekli gözlem altında görünür.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Göz izci sistemi veri analiz.<ol>
<li>Verileri düzenlemek ve istatistiksel analizlerini seçtikleri bir forma levha programına ayrılmış metin biçimindedir, kaydedilen veri dosyasını açın.<ol>
<li>Gerçek boyutları mm dosyasında depolanan öğrenci genişlik değerleri dönüştürmek.</li>
			<li>X değerleri dönüştürmek ve Y konumları ve torsion birimlerine derecesi göz ve göz hareketleri tanımlamak için kuralları kullanın; Bu nedenle, rotasyonlar olumlu yönleri: intorsion, bakış açısını ve dıştan; ve negatif döndürme yönleri: extorsion, depresyon ve kaçırma.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Başlık bilgilerini yeni bir çalışma sayfası üzerine kopyalayın. Bu ekran boyutu (genişlik ve yükseklik) ve görüntüleme mesafe değerleri yer alacak. Sekiz 30 Hz oranında toplanan veri sütunlarının başlık bilgilerini takip eder.</li>
		<li>Ham verileri içeren çalışma sayfasına dön. A "bulmak" "" işareti nerede stimülasyon 10 µA. ile uygulanan "T" geçerli stimülasyon başlangıcı işaretleme, bul insidansı bulmak için"başlıklı X için" son sütun var. 15 satır kopyalamak (0,5 s) "T" ve 90 kare daha önce "T" sonra meydana gelen veri (3.0 s); yani, 3.5 s toplam. Verileri yeni çalışma sayfasının başlık bilgilerini aşağıda yapıştırın.</li>
		<li>"PupilWidth" sonra boş bir sütun ekleyin. Boş sütun, mm kalibre edilmiş boyut dönüştürmek: Yatay öğrenci çapı = "PupilWidth" × kamera görünümü Genişlik boyutunu</li>
		<li>2 boş sütun "X_Gaze" ve "Y_Gaze" sonra ekleyin. Görüntüleme ekran boyutları konumlara normalize: koordinatları (0, 0) üst sol ekran için uzanan (1, 1) sağ alt. İlk boş sütunda bir koordinat sistemi olan pozisyonlar çevirmek (0, 0) ekranın merkezinde. Ekran boyutları dönüştürmeye mm şunlardır: X = (0,5 × Genişlik) – ("X_Gaze" × Genişlik); Y = (0.5 x yükseklik) – ("Y_Gaze" x yükseklik) Not: Sol göz için işlem dizisidir. Sıra için sağ gözü kaçırma için negatif ve pozitif dıştan için Kongre izleyebilmek için tersine çevrilmesi gerekir.</li>
		<li>İkinci sütun, trigonometri işlevleri döndürme açıları (°) dönüştürmek için kullanın: Yatay döndürme arctan (X/viewing mesafe); = dikey döndürme arctan (Y/viewing mesafe) =</li>
		<li>Burulma zaten derece birimlerinde gösterilmiştir, ancak ölçüm sol göz kulak yapılır Eğer Kongre için intorsion, olumluluk uyması için -1 tarafından çarpın. Sağ gözü yok çarpma gereklidir. Program saat yönünde döndür olumlu olarak kodlar.</li>
		<li>Öğrenci çapı ve rotasyonlar bir fonksiyonu olarak arsa.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kikillus, K. H., Hare, K. M., Hartley, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimizing+false-negatives+when+predicting+the+potential+distribution+of+an+invasive+species:+A+bioclimatic+envelope+for+the+red-eared+slider+at+global+and+regional+scales.">Minimizing false-negatives when predicting the potential distribution of an invasive species: A bioclimatic envelope for the red-eared slider at global and regional scales.</a> Anim Conserv. 13, 5-15 (2010).</li><li>Lutz, P. L., Rosenthal, M., Sick, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+without+oxygen:+turtle+brain+as+a+model+of+anaerobic+metabolism.">Living without oxygen: turtle brain as a model of anaerobic metabolism.</a> Mol Physiol. 8, 411-425 (1985).</li><li>Lutz, P. L., Milton, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negotiating+brain+anoxia+survival+in+the+turtle.">Negotiating brain anoxia survival in the turtle.</a> J Exp Biol. 207, 3141-3147 (2004).</li><li>Storey, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoxia+tolerance+in+turtles:+Metabolic+regulation+and+gene+expression.">Anoxia tolerance in turtles: Metabolic regulation and gene expression.</a> Comp Biochem Physiol A-Mol Integr Physiol. 147 (2), 263-276 (2007).</li><li>Granda, A. M., Dearworth, J. R., Subramaniam, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balanced+interactions+in+ganglion-cell+receptive+fields.">Balanced interactions in ganglion-cell receptive fields.</a> Vis Neurosci. 16, 319-332 (1999).</li><li>Dearworth, J. R., Granda, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplied+functions+unify+shapes+of+ganglion-cell+receptive+fields+in+retina+of+turtle.">Multiplied functions unify shapes of ganglion-cell receptive fields in retina of turtle.</a> J Vis. 2 (3), 204-217 (2002).</li><li>Nesbit, S. C., Van Hoof, A. G., Le, C. C., Dearworth Jr, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+recording+of+light+responses+from+optic+nerve+fibers+and+the+caudal+photoreceptor+in+the+crayfish.">Extracellular recording of light responses from optic nerve fibers and the caudal photoreceptor in the crayfish.</a> J Undergrad Neurosci Educ. 14 (1), A29-A38 (2015).</li><li>McMahon, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+and+circulatory+compensation+to+hypoxia+in+crustaceans.">Respiratory and circulatory compensation to hypoxia in crustaceans.</a> Resp Phsiol. 128 (3), 349-364 (2001).</li><li>Leigh, R. J., Zee, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The neurology of eye movements. , (1999).</li><li>Robinson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+measuring+eye+movement+using+a+scleral+search+coil+in+a+magnetic+field.">A method of measuring eye movement using a scleral search coil in a magnetic field.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 10, 137-145 (1963).</li><li>Judge, S. J., Richmond, B. J., Chu, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+of+magnetic+search+coils+for+measurement+of+eye+position:+an+improved+method.">Implantation of magnetic search coils for measurement of eye position: an improved method.</a> Vis Res. 20, 535-538 (1980).</li><li>Ong, J. K. Y., Halswanter, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+torsional+eye+movements+by+tracking+stable+iris+features.">Measuring torsional eye movements by tracking stable iris features.</a> J Neurosci Meth. 192, 261-267 (2010).</li><li>Kimmel, D. L., Mammo, D., Newsome, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+eye+non-invasively:+simultaneous+comparison+of+the+scleral+search+coil+and+optical+tracking+techniques+in+the+macaque+monkey.">Tracking the eye non-invasively: simultaneous comparison of the scleral search coil and optical tracking techniques in the macaque monkey.</a> Front Behav Neurosci. 6 (49), 1-17 (2012).</li><li>Otero-Millan, J., Roberts, D. C., Lasker, A., Zee, D. S., Kheradmand, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knowing+what+the+brain+is+seeing+in+three+dimensions:+A+novel,+noninvasive,+sensitive,+accurate,+and+low-noise+technique+for+measuring+ocular+torsion.">Knowing what the brain is seeing in three dimensions: A novel, noninvasive, sensitive, accurate, and low-noise technique for measuring ocular torsion.</a> J Vis. 15 (14), 1-15 (2015).</li><li>Demski, L. S., Bauer, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eye+movements+evoked+by+electrical+stimulation+of+the+brain+in+anesthetized+fishes.">Eye movements evoked by electrical stimulation of the brain in anesthetized fishes.</a> Brain Behav Evol. 11, 109-129 (1975).</li><li>Gioanni, H., Bennis, M., Sansonetti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+and+vestibular+reflexes+that+stabilize+gaze+in+the+chameleon.">Visual and vestibular reflexes that stabilize gaze in the chameleon.</a> Vis Neurosci. 10, 947-956 (1993).</li><li>Straka, H., Dieringer, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+organization+principles+of+the+VOR:+lessons+from+frogs.">Basic organization principles of the VOR: lessons from frogs.</a> Prog Neurobio. 73 (4), 259-309 (2004).</li><li>Voss, J., Bischof, H. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eye+movements+of+laterally+eyed+birds+are+not+independent.">Eye movements of laterally eyed birds are not independent.</a> J Exp Biol. 212 (10), 1568-1575 (2009).</li><li>Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+eye+movements+in+the+turtle.">Independent eye movements in the turtle.</a> Vis Neurosci. 5, 29-41 (1990).</li><li>Ariel, M., Rosenberg, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+synaptic+drugs+on+turtle+optokinetic+nystagmus+and+the+spike+responses+of+the+basal+optic+nucleus.">Effects of synaptic drugs on turtle optokinetic nystagmus and the spike responses of the basal optic nucleus.</a> Vis Neurosci. 7, 431-440 (1991).</li><li>Balaban, C. D., Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+"beat-to-beat"+interval+generator+for+optokinetic+nystagmus.">A "beat-to-beat" interval generator for optokinetic nystagmus.</a> Biol Cybern. 66, 203-216 (1992).</li><li>Keifer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+eye-blink+reflex+model:+Role+of+excitatory+amino+acid+receptors+and+labeling+of+network+activity+with+sulforhodamine.">In vitro eye-blink reflex model: Role of excitatory amino acid receptors and labeling of network activity with sulforhodamine.</a> Exp Brain Res. 97, 239-253 (1993).</li><li>Keifer, J., Armstrong, K. E., Houk, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+classical+conditioning+of+abducens+nerve+discharge+in+turtles.">In vitro classical conditioning of abducens nerve discharge in turtles.</a> J Neurosci. 15, 5036-5048 (1995).</li><li>Rosenberg, A. F., Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+optokinetic+eye+movements+in+turtles+that+incorporates+properties+of+retinal+slip+neurons.">A model for optokinetic eye movements in turtles that incorporates properties of retinal slip neurons.</a> Vis Neurosci. 13, 375-383 (1996).</li><li>Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open-loop+optokinetic+responses+of+the+turtle.">Open-loop optokinetic responses of the turtle.</a> Vis Res. 37, 925-933 (1997).</li><li>Anderson, C. W., Keifer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+conditioned+abducens+nerve+responses+in+a+highly+reduced+in+vitro+brainstem+preparation+from+the+turtle.">Properties of conditioned abducens nerve responses in a highly reduced in vitro brainstem preparation from the turtle.</a> J Neurophysiol. 81, 1242-1250 (1999).</li><li>Keifer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+classical+conditioning+of+the+turtle+eyeblink+reflex:+Approaching+cellular+mechanisms+of+acquisition.">In vitro classical conditioning of the turtle eyeblink reflex: Approaching cellular mechanisms of acquisition.</a> Cerebell. 2, 55-61 (2003).</li><li>Zhu, D., Keifer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathways+controlling+trigeminal+and+auditory+nerve-evoked+abducens+eyeblink+reflexes+in+pond+turtles.">Pathways controlling trigeminal and auditory nerve-evoked abducens eyeblink reflexes in pond turtles.</a> Brain Behav Evol. 64, 207-222 (2004).</li><li>Jones, M. S., Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+unilateral+eighth+nerve+block+on+fictive+VOR+in+the+turtle.">The effects of unilateral eighth nerve block on fictive VOR in the turtle.</a> Br Res. 1094, 149-162 (2006).</li><li>Jones, M. S., Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology,+intrinsic+membrane+properties,+and+rotation-evoked+responses+of+trochlear+motoneurons+in+the+turtle.">Morphology, intrinsic membrane properties, and rotation-evoked responses of trochlear motoneurons in the turtle.</a> J Neurophysiol. 99 (3), 1187-1200 (2008).</li><li>Krenz, J. G., Naylor, G. J. P., Shaffer, H. B., Janzen, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+phylogenetics+and+evolution+of+turtles.">Molecular phylogenetics and evolution of turtles.</a> Mol Phylogenet Evol. 37 (1), 178-191 (2005).</li><li>Dearworth, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+trochlear+nerve+in+eye+abduction+and+frontal+vision+of+the+red-eared+slider+turtle+(Trachemys+scripta+elegans).">Role of the trochlear nerve in eye abduction and frontal vision of the red-eared slider turtle (Trachemys scripta elegans).</a> J Comp Neur. 52, 3464-3477 (2013).</li><li>Dearworth, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pupil+constriction+evoked+in+vitro+by+stimulation+of+the+oculomotor+nerve+in+the+turtle+(Trachemys+scripta+elegans).">Pupil constriction evoked in vitro by stimulation of the oculomotor nerve in the turtle (Trachemys scripta elegans).</a> Vis Neurosci. 26, 309-318 (2009).</li><li>Mead, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IFEL+TOUR:+a+description+of+the+introduction+to+FUN+electrophysiology+labs+workshop+at+Bowdoin+College,+July+27-30,+and+the+resultant+faculty+learning+community.">IFEL TOUR: a description of the introduction to FUN electrophysiology labs workshop at Bowdoin College, July 27-30, and the resultant faculty learning community.</a> J Undergrad Neurosci Educ. 5, A42-A48 (2007).</li><li>Jackson, D. C., Ultsch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+hibernation+under+the+ice+by+turtles+and+frogs.">Physiology of hibernation under the ice by turtles and frogs.</a> J Exp Zool A Ecol Genet Physiol. 313 (6), 311-327 (2010).</li><li>Romano, J. M., Dearworth, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pupil+constriction+evoked+by+stimulation+of+the+ciliary+nerve+in+the+red-eared+slider+turtle+(Trachemys+scripta+elegans).">Pupil constriction evoked by stimulation of the ciliary nerve in the red-eared slider turtle (Trachemys scripta elegans).</a> J Penns Acad Sci. 85, 4-8 (2011).</li><li>Miller, J. M., Robins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraocular-muscle+forces+in+alert+monkey.">Extraocular-muscle forces in alert monkey.</a> Vis Res. 32, 1099-1113 (1992).</li><li>Gamlin, P. D., Miller, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraocular+muscle+motor+units+characterized+by+spike-triggered+averaging+in+alert+monkey.">Extraocular muscle motor units characterized by spike-triggered averaging in alert monkey.</a> J Neurosci Meth. 204, 159-167 (2011).</li><li>Quaia, C., Ying, H. S., Optican, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Viscoelastic+properties+of+passive+eye+muscle+in+primates.+III:+Force+elicited+by+natural+elongations.">The Viscoelastic properties of passive eye muscle in primates. III: Force elicited by natural elongations.</a> PLOS ONE. 5, A236-A254 (2010).</li><li>Anderson, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+primate+oculomotor+plant+revealed+by+effects+of+abducens+microstimulation.">Dynamics of primate oculomotor plant revealed by effects of abducens microstimulation.</a> J Neurophys. 101, 2907-2923 (2009).</li><li>Maxwell, J. H., Harless, M., Morlock, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthesia+and+surgery.">Anesthesia and surgery.</a> Turtles: Perspective and Research. , 127-152 (1979).</li><li>AVMA Panel on Euthanasia. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Veterinary+Medical+Association.">American Veterinary Medical Association.</a> J Am Vet Med Assoc. 218 (5), 669-696 (2001).</li><li>Clarke, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shaping+the+pupil's+response+to+light+in+the+hooded+rat.">Shaping the pupil's response to light in the hooded rat.</a> Exp Br Res. 176, 641-651 (2007).</li><li>Bennett, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+anesthesia+and+chemical+restraint+in+reptiles.">A review of anesthesia and chemical restraint in reptiles.</a> J Zoo Wild Med. 22 (3), 282-303 (1991).</li><li>Bickler, P. E., Buck, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+Tolerance+in+Reptiles,+Amphibians,+and+Fishes:+Life+with+Variable+Oxygen+Availability.">Hypoxia Tolerance in Reptiles, Amphibians, and Fishes: Life with Variable Oxygen Availability.</a> Ann Rev Physiol. 69, 145-170 (2007).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Kritik adımlar:
Bu iletişim kuralı içinde önemli adımlar şunlardır: 1) diseksiyon ve transected sinirler; canlılığı korumak için alınan bakım 2) boyutları kranial sinirler tutarlı yanıtlar sağlamak için emme elektrotlar tarafından eşleşen; ve 3) dönmenin gözün yeterli kalibrasyon sağlamak için yalpa kafasından yerleşimini.
Sorun giderme:
Diseksiyon zor olabilir, ama bir kaç kez tamamladıktan sonra adımları nispeten düz ön olmak gerekir. Bunun en olası nedeni, sinirler vermiyor görünüyorsa, diseksiyon bir başarısızlıktır. Beyin temizleme sırasında sadece minimal gerginlikler ve baskıların sinirler için onların kesim sırasında uygulanması gerekir. Sinirler ile metalik cerrahi aletler dokunmadan de mümkün olduğunca kaçınılmalıdır ve34sorunları devam ederse çok cam kanca ve plastik forseps için metal araçları yerine kullanabilirsiniz. Kaplumbağa dokulara oksijen, kullanımı çeşitli düzeyleri hayatta kalmak için yetenek taze yapılmış olmasına rağmen kaplumbağa zil'ın çözüm O2Co2 ile % 95/5 bubbled ve soğutulmuş tavsiye edilir; Ancak, bu daha az önemlidir. Sonuçta, hazırlık kullanmanın avantajı Beka değişen oksijen düzeyleri ve sıcaklık dalgalanmaları2,3,4,35altında 's. Daha kaplumbağa hazırlıkla düzenli sulama zil'ın çözüm doku kurutma önlemek için önemlidir.
İpuçları bir deney taşıma öncesinde emme elektrot için farklı boyutlarda bir dizi yapmak uygun sinir olma olasılığını artıracaktır. Benzer şekilde diseksiyon, ateş ipuçları parlatma bazı pratik ister. Bir kafa sinir bir önceki deneme koruyarak ve İpuçları yapma yardımcı olurken bir referans olarak kullanarak. Büyük çaplı boyutu için küçük ipuçları düzenleme ve bunları bazı modelleme kil saklamak için bir deney sırasında hızlı montaj sağlar. Daha küçük ipuçları için ipuçları alevler içinde çalışırken daha fazla zaman gerek yoktur. İpuçları çatlaklar ücretsiz olmalı ve sinir üzerine iyi bir sızdırmazlık sağlamak için düzgün kenarlara sahip.
Yalpa kafasından yönünü yeterli olması gerekir. Eğer değilse, ölçümlerin eksen etkiye sahip. Örneğin, sağa sola, aynı artış daha büyük bir dönüş göz merkezi dengeleniyor ve sağa kaydırılır gerekiyor gösterir. Bazı sorunlar rotasyonlar sırasında öğrenci güvenilir bir sinyali korumada da oluşabilir. Öğrencinin aydınlatma LED biraz daha iyi sonuçlar elde yardımcı olabilir kızılötesi tarafından ayarlanıyor.
Sınırlamalar:
Bir eksiklik hazırlık eylemler kinematik belirli kas tarafından belirlenmesi zor olmasıdır. Bu, özellikle nIII ve in elektrodlar sonra ölçülen hareketleri için geçerlidir. Bireysel kas eylemleri çözümlemek için bir yol için belirli bir kas seyahat bir yol yalıtmak için sinir dallarının sistematik transections yapmaktır. Örneğin, biz kesme nIII distal silier gangliyon ve eylem sfinkter pupillae33,36yalıtmak için kısa silier sinir uyarıcı için başarılı olmuştur. Başka bir yaklaşım agonist ve antagonist kaslar üzerinde bir germe detektörler sistemi monte ve faaliyetler ile hareketleri belirli kas37,38 karşılık gelen etmektir. Bu yöntem için yalıtım için belirli bir kas seyahat bir yolu olarak gerekli olmaz.
Visko-elastik öğeleri (Örneğin, medial rektus kasları karşı lateral rektus veya sfinkter dilatör sfinkter pupillae karşı ilgili kasları üzerinde ters yönde hareket ile ilişkili pasif germe için hazırlık da sağlar )39. Visko-elastik öğeleri ayrıştırmak için burada açıklandığı gibi uyarıcı kopuk sinirlerin tarafından alınan yanıt-e doğru bu bir hazırlık içinde subcortical alanları ve beyincik tartıştım kullanılarak elde karşılaştırılabilir; Bu nedenle bu işlevsel sinir entegratörleri olduğu şekilde tutar ve sonra tek motoneuron alanları her kas40innerve beyin sapı içinde teşvik etmek mümkündür.
Önemi ile ilgili diğer omurgalı modelleri:
Cryoanesthesia kaplumbağaları için kabul edilebilir olsa da, bu yaklaşım ile sıcak kanlı hayvanlar41,42, eser onaylanamıyor. Bu nedenle, Fentobarbital veya ketamin gibi farmakolojik Ajan gereklidir. Ajanlar, ancak, göz hareketleri43yıkmak. Yine de, yaklaşım ve sürüngenler için yararlıdır bir izole efferent tarafından sinirsel oluşturulan davranışları karşılaştırılması verdiğinden diğer lateral gözlü sigara-mammalians, kurbağa ve balık44,45, gibi için uygulanabilir Bu sağlam hayvan32,33tarafından yapılan için yol.
Gelecekteki uygulamalar:
Hazırlık bir tahlil için sinir doku Beka olarak hizmet verebilir. Bir iletişim kuralı sistematik olarak göz hareketleri nasıl çeşitli faktörler etkiler gidermek üzere tasarlanabilir. Yaklaşımlar farklı sıcaklıklarda veya farmakolojik ajanlar ilaçlar da dahil olmak üzere test olarak basit olabilir. Hareketleri daha nIII ve in yorumlamak zor olduğundan, bunların kullanımı daha sınırlıdır. Bu nedenle, NIV manipülasyon için en iyi seçenek olabilir, muhtemelen.
Ancak, bireysel kas kinematik gidermek için uyarıcı nIII ve in, sonuç hazırlık modifikasyonu sistematik transeksiyon şube sinir yapma veya hedeflenen kas setleri üzerinde yük göstergeleri de dahil olmak üzere gibi gerekli olacaktır. Son olarak, yanıt nerede sinirsel entegratörleri sağlam tutulur bir hazırlık ölçme belirlenmesi sağlayacak nasıl visko-elastik unsurları muhtemelen kinematik quantifications sınırlama.

Gerekçe kaymak kırmızı kulaklı kaplumbağaların elektrofizyolojik deneylerde kullanmak için:
Kırmızı kulaklı kaymak kaplumbağaları (Trachemys scripta elegans), dünyanın en kötü istilacı türlerin1 biri olarak kabul edilir ve bir ekosistem dertte belirtebilirsiniz. Neden kaymak kırmızı kulaklı kaplumbağaların çok başarılı olduğunu neden kötü anlaşılmaktadır ama kısmen hoşgörülü fizyolojisi ve bulundurma hipoksik koşulları2,3altında,4 yaşayabilir gergin dokuların nedeniyle olabilir . Onları istimal o için deneme sayıları tehdit etmediğini ve en az çaba ile elektrofizyolojik hazırlıkları üzerinde genişletilmiş süreleri, 18 saat5,6sürece canlı kalabilir. Ayrıca oksijen8seviyesinin düşük dayanacak şekilde şifreleyebilirler kerevit7gibi omurgasız hayvanlar kullanmanın yararı için benzer bir şeydir.
Göz hareketleri Ölçme teknikleri:
Yaklaşımlar göz hareketleri içinde ön gözlü hayvan insan dışı primatlar kullanarak ölçmek için iyi gelişmiş9olmuştur. Göz yörüngede yaklaşık üç eksen döndürür: yatay, dikey ve burulma. Manyetik arama bobini yöntemi genellikle ölçüm rotasyonu için en güvenilir olarak kabul edilir, ancak invaziv, hayvanlar10,11scleras eklenecek küçük bobinleri gerektiren. Video tabanlı sistemler de rotasyonlar ölçebilir ve non-invaziv olma avantajına sahip. Yenilikçi görüntü işleme ile birlikte daha iyi fotoğraf makinesi gelişimi video tabanlı sistemler12,13,14düşünün için cazip bir alternatif yapmak işlevselliğini arttırmak.
Nonmammals göz hareketleri ölçmek için geliştirilmiş teknikleri daha az önemli olmuştur. Önlemler de düşük çözünürlükte ya da rotasyonlar15,16,17,18yalnızca bazıları açıklanmaktadır. Görsel hedefleri takip etmek eğitim nonmammals zorluk üzerinde geliştirme eksikliği kısmen sorumlu. Her ne kadar göz hareketleri de kırmızı kulaklı kaymak kaplumbağalar19,20,21,22,23,24,25 incelenmiştir ,26,27,28,29,30, hedefleri, izlemek için nedeniyle eğitim hayvanlarda göz hareketleri kesin kinematik mücadeledir kötü anladım.
Kaydırıcıyı kırmızı kulaklı kaplumbağaların genellikle lateral gözlü omurgalılar kabul, ama onlar tamamen kafalarının onların kabuk31geri çekmek, kabuğu tarafından yanal visual alanlarının önemli tıkanıklığı32oluşur. Onların görsel bakış açısı onları daha çok ön gözlü memeliler gibi çalışır hale önüne doğru zorlanır sonucudur. Bu nedenle, bunların kullanımı bir model olarak göz hareketleri ölçmek için yaklaşımlar geliştirmek için benzersiz bir evrimsel bakış açısı sunuyor.
Bu çalışmada açıklanan protokol bir izole vitro baş hazırlık kaymak kırmızı kulaklı kaplumbağaların göz hareketlerinde kinematik tanımlamak için kullanır. Beyin kranial sinirler dokunmadan kafatasları kesmiştim. Kafa göz hareketleri kalibre ve yanıt-e doğru anımsatmak için yalpa kranial sinirler göz kasları innerve elektriksel stimülasyon tarafından yerleştirilir. Önlemler dönmenin gözler tarafından karanlık bir öğrencisi ve iris işaretleri takip Yazılım algoritmaları kullanarak bir video tabanlı sistem tarafından yapılır. Hazırlık Gözdışı ikisinin kinematik (yani, yatay, dikey ve burulma rotasyonlar) ölçmek için fırsat sağlar32 ve göz içi (yani, öğrenci değişiklikleri)33 hareketleri.
Efferent sinirsel yollar analiz için sistem modeli:
Daha genel olarak, yaklaşım nasıl efferent sinir sinyalleri çalışma fırsatı oluşturmak göz hareketleri kaslar rahat durumlarına ve beyin32tarafındanişlenen entegre duyusal bilgi yokluğunda başlattığınızda müfettişler sağlar, 33. Bu nedenle, onlar sadece efferent sinir yolu bırakarak beyin ve kaslar synapsing tarafından işlenme bir modeli sistemi göz kinematik incelenebilir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Red-eared slider turtles</td>
			<td>Kons Scientific</td>
			<td>Trachemys scripta elegans</td>
			<td>Large size (carapace length 15-20 cm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium choride</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>M7304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>C5767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Concentrated hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>H7020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>C7902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Oakton</td>
			<td>pH 6+</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction stimulation electrode</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>573000</td>
			<td>Bipolar suction electrode. Note that 573000 has been replaced with 573050.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillary glass</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>626000</td>
			<td>Single-barrel borosilicate capillary glass without microfilament, length 10 cm, outside diameter 1.0 mm, inner diameter 0.50 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alternative suction stimulation electrode</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>573050</td>
			<td>Bipolar suction electrode. Requires larger diameter capillary glass: 627000, outside diameter 1.2 mm, inner diameter 0.68 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscope</td>
			<td>Lieca</td>
			<td>GZ7</td>
			<td>Magnification range, 10x &#8211; 70x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber optic light source</td>
			<td>Amscope</td>
			<td>HL250-A</td>
			<td>150W Fiber optical microscope illuminator light box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rongeurs</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>625654</td>
			<td>stainless steel, straight spring, 5.25&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt dissection probe</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>627405</td>
			<td>Huber mall probe, double-ended probe and seeker, 6&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscissors</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>623555</td>
			<td>Iris microdissecting scissors, stainless steel, 0.5&#34; blades, 4.75&#34; long</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>F6521</td>
			<td>Jewelers forceps, dumont No. 5, inox alloy, 4.25&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>Z168696</td>
			<td>Medium tip, curved forceps, stainless steel, 4&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>S2896</td>
			<td>Scalpel handles, No. 3, stainless steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blade</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>S2771</td>
			<td>Scalpel blades, No. 11, steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guillotine</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-1918</td>
			<td>Kleine guillotine type 7575</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z648299</td>
			<td>Micro spoon and spatula weighing set. Use small spatula: 5.9&#8221; long x 0.07&#8221; diameter handle with square end: 0.17&#8221; x 1.3&#8221; long, other end round: 0.17&#8221; x 1.27&#8221; long</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hook</td>
			<td>Autozone</td>
			<td>98069</td>
			<td>SureBilt hook and pick set. Use grinder to dull sharp points of hook to prevent injury to animals mouth.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95/5% O2/CO2</td>
			<td>Airgas, Inc.</td>
			<td>X02OX95C2003102</td>
			<td>5% Carbon dioxide balance oxygen certified standard gas mixture, size 200 Cylinder, CGA-296</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Regulator</td>
			<td>Airgas, Inc.</td>
			<td>Y11244D296-AG</td>
			<td>Single stage brass 0-100 psi analytical cylinder regulator CGA-296 with needle outlet. Use brass adjustable airline pipe valve to go from 3/8&#34;, inner diameter, vinyl airline tubing connected to regulator to a 3/16&#34;, inner diameter, airline connection going to airstone or glass pasteur pipette.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adjustable airline pipe valve</td>
			<td>Doctors Foster and Smith</td>
			<td>CD-12061</td>
			<td>Brass valve</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rigid table</td>
			<td>Unknown</td>
			<td>Unknown</td>
			<td>Auto-clave door laid on top of a sturdy table. Nine 5&#34; diameter tennis balls isolate vibrations from the top surface of the table.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#34; tennis ball</td>
			<td>Petco Animal Supplies, Inc.</td>
			<td>712868</td>
			<td>Petco Jumbo Pet Tennis Ball: balls are unsliced and held within an integrated frame on the underside part of the autoclave door.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alternative vibration isolation table</td>
			<td>Newport Corporation</td>
			<td>INT1-36-6-N</td>
			<td>Rigid vibration control system, integrity 1: Surface dimensions, 3&#39; x 6&#39;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gimbal</td>
			<td>ISI, International Scientific Instruments, Inc.</td>
			<td>Stage from SUPER III-A Scanning EM</td>
			<td>5-axis eucentric stage: X, Y, and Z linear movements, &#177;20 mm, 0.1 mm precision; Rotations, vertical, &#177;10&#176;, and horizontal, &#177;12.5&#176;, with 1.25&#176; precision. Note: from decommission instrument.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuck for gimbal</td>
			<td>Unknown</td>
			<td>Unknown</td>
			<td>Chuck from an old microtome of unknown manufacture was machined to fit the shaft of the specimen holder of the Scanning EM stage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alternative gimbal</td>
			<td>ThorLabs, Inc.</td>
			<td>GN2/M with MBT602/M</td>
			<td>Dual-axis goniometer (GN2/M) mounted on 3-axis microblock stage with thumbscrew adjusters (MBT602/M): design a chuck to hold turtle head with eye at 12.7 mm above top surface of goniometer (distance to point of rotation)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video-based eye tracking system</td>
			<td>Arrington Research, Inc.</td>
			<td>ViewPoint EyeTracker, PC-60</td>
			<td>Tracking method: Infrared video by dark pupil; Black and white camera (Item BC02): 30 Hz, 640 x 480; System requirements: Windows 2000, XP, 7, 8, 8.1, 10; Visual range: Horizontal +/- 44&#176;; vertical +/- 20&#176;; Accuracy ~0.5&#176;; Spatial resolution ~0.15&#176;; Pupil size resolution ~0.03 mm; Eye data: X, Y position of gaze, pupil height and width, torsion, delta time, total time, and regions of interest (ROI); Real-time communication (Item 0022): 4-Channel AnalogOut with eight TTL input channels to mark codes into the data file</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-position magnetic base</td>
			<td>Harbor Freight Tools</td>
			<td>Pittsburg, item #5645</td>
			<td>Magnetic holder reaches up to 12&#34; and produces 45 lbs. of magnetic pull. Use to position camera. Machine thread holes onto the end of the rod to mount cameras.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>900</td>
			<td>5 axis manipulation for mount of suction electrode: X, Y, Z linear travel, 2 axis of rotation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scope on boom</td>
			<td>Lieca</td>
			<td>GZ6</td>
			<td>Magnification range, 6.7x &#8211; 40x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nerve/muscle stimulator</td>
			<td>Astro-Med Grass Telefactor</td>
			<td>Grass S88</td>
			<td>Dual pulse voltage stimulator: two output channels that can be operated independently or synchronized to generate non-isolated constant voltage pulses (10 mv to 150 V). Pulses can be single (10 &#956;sec to 10 sec), repetitive (0.01 Hz to 1 KHz), and trains (1 ms to 10 s) and synchronized with TTL inputs and output. Send TTL outputs via the output channels of a DB25 connector to the TTL input channels of the ViewPoint EyeTracker. Note: Astro-Med Grass Telefactor is no longer in business.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Current isolation device</td>
			<td>Astro-Med Grass Telefactor</td>
			<td>PSIU6</td>
			<td>Current stimulus isolation unit: enables safe delivery of constant currents by the S88 to the preparation. The PSIU6 connects by a BNC cable to one of the output channels of the S88. Multiplier switches on the PSIU6 allow the S88 to generate a wide array of current amplitudes ranging from 0.1 &#181;A to 15 mA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alternative nerve/muscle stimulator with isolation</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>2100</td>
			<td>Isolated Pulse Stimulator: Unit has built-in isolator to produce constant currents.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ocular kinematics measured by in vitro stimulation of the cranial nerves in the turtle

Hayvan are euthanized sonra onların dokular ölmeye başlar. Kaplumbağaları özellikle sıcak kanlı omurgalılar için karşılaştırıldığında onların dokular, bir daha uzun yaşam süresi nedeniyle bir avantaj sunuyor. Bu nedenle, uzun bir süre sinir sinyalleri araştırmaya ve hakim olmak-in onların hedef eylemler için kaplumbağaları vitro deneyler yapılabilir. İzole bir baş hazırlık kullanarak, kaplumbağalar göz hareketleri kinematik şiddetindeydi ve onların modülasyon tarafından elektrikle ilgili sinyal kranial sinirler tarafından taşınan. Kranial sinirler dokunmadan beyin kafatasından kaldırdıktan sonra disseke kafa göz hareketleri ayarlamak için bir yalpa yerleştirildi. Cam elektrotlar kranial sinirler için bağlı (oculomotor, trochlear ve abducens) ve göz hareketleri yaratamayacak akımların ile uyarılmış. Kızılötesi bir video izleme sistemi ve gözlerin quantified rotasyonlar ile göz hareketleri izlenir. Geçerli genlikleri, frekansları, bir dizi ile bakliyat ve tren süreleri yanıt üzerindeki etkileri gözlemlemek için kullanıldı. Hazırlık beyinden ayrılır çünkü sinir merkezi olarak işlenmiş duyusal bilginin yokluğunda sinyal araştırmak için izole kas hedefe gidiş efferent yol incelenebilir.

Şekil 1 fotoğraf diseksiyon açıklayan bir videodan alınan görüntülerin gösterir. Görüntüler sinir kesme beyin üzerinden önce tipik mekanlar sunar.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56864/56864fig1.jpg"> Şekil 1: optik sinir (nII), oculomotor sinir (nIII), trochlear sinir (NIV) ve abducens sinir (in) konumları göstermek için fotoğraf diseksiyon videodan çekilen görüntülerin. (A)etiketli meninx çıkarıldıktan sonra beyin bölgelerinde görüntüsüyle. Beyaz ölçek bar nerede onlar bağlamak orta sağ tarafına (Olfaktör ampuller ve cerebrum çıkarıldıktan sonra) 10 mm. (B) görüntü gösterir nII, nIII ve NIV = konumu. (C) görüntü in nerede (orta çıkarıldıktan sonra) beyin sol tarafına bağlayan konumunu gösterir. Beyaz kesik çizgiler sinirler çizilir. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56864/56864fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Şekil 2 öğrenci çapı sonra meydana gelen içinde ortalama değişiklik gösterir nIII uyarıcı. Ekstrensek göz hareketleri de, hangi öğrenci konumunu değiştirmek gözlenir rağmen sfinkter pupillae tarafından eylem iris ölçüsü güvenilir kalır. Önlemler bir hazırlık ve yanıt tekrarlanan geçerli elektrodlar için tipik değişkenlik göstermektedir. Öğrenci çapı için 1.60 ± 1,95 ± 0,01 mm azaltılmış demek 0,01 mm. Dar standart sapma sinir elektrot başarılı bir uyum gösterir. Ne zaman farklı ürünleri arasında ölçme (N = 5), tipik değişkenlik olduğunu ± 0.08 mm. Her ne kadar hala nispeten dar, yaklaşık sekiz kat daha fazla--dan tek bir hazırlık gözlenen değişkenliğin değerdir.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56864/56864fig2.jpg"> Şekil 2: bütün kafalı hazırlık oculomotor sinir (nIII) uyararak uyarılmış öğrenci daralma örneği. Siyah izleme bir hazırlık altı elektrodlar üzerinden ortalama öğrenci çapı (PD), ve kesik çizgiler ± standart sapma (SD) göstermek. X ekseni üzerinde dikdörtgen dalga formu başlangıçlı ve 1-ms bakliyat 100 Hz tren 50 µA bir genliği ile uzaklığı gösterir. Sol alt kroki stimülasyon önce göz iris satırında yönünü gösterir ve alt resimleri göster hala sırasında (B),(a)önce mahkeme temsilcisi çerçevelerden ve stimülasyon (C) sonra. Beyaz ölçek çubuk 1 mm =. Bu rakam izni33ile yeniden basıldı. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56864/56864fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Öğrenci yanıt-e doğru ölçü göz dönmenin kalibrasyon gerektirmez; Ancak, dışsal hareketleri ölçme, bir yalpa kafasından yerleşimini dikkatle hazırlıkları (Şekil 3) arasındaki karşılaştırmaları izin vermek için yapmanız gerekir. Baş gimbal kafatası dorsal yüzeye sahip olarak horizon ile paralel yerleştirildiğinde, Iris satırı doğru burun ufuk dengeleniyor. Şekil 3D tipik Ofset (28,6 °) bir hazırlık olarak gösterir. Üç farklı hazırlıkları ortalama uzaklığı 30.1 ± 9.0° yapıldı. Standart sapma içinde ofset açısı kabul edilebilir gimbal içinde uyum gösterir.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56864/56864fig3.jpg"> Resim 3: bir izole kaplumbağa kafa gimbal içinde konumlandırılmış hazırlık. (A)bölge beyaz dikdörtgen ekipman kurulumu bir fotoğrafta kaplumbağa kafa konumunu gösterir. (B) Magnified (7 kere) Beyaz dikdörtgenin görüntüleyin. Noktalı beyaz çizgi resmin üzerine öğrenci merkezine burun deliği çizilir ve ufuk seviyesidir. Düz beyaz çizgi üst üste ve Iris hattına paralel. (C) karikatür başın sol tarafında. (D) görüntü izleme sistemi video tabanlı göz kamera tarafından çekilen göz. Siyah ölçek çubuğu: 5 mm B; d1 mm. Bu rakam izni32ile değiştirildi. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56864/56864fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Şekil 4 on hazırlıklar superior oblik kas için gidiş NIV uyarılması tarafından uyarılmış gözlerinden ortalama rotasyonları gösterir. İntorsion, yükseklik ve kaçırma (yanıtındaki 70 µA, turuncu izleme) için tipik tepe rotasyonlar vardır 10.0 ± 5.7°, 2.8 ± 1.2° ve 3.0 ± 2.1° anılan sıraya göre. Büyüklükleri rotasyonlar tekrarlanan elektrodlar için tek müstahzarları benzer ancak daha az değişkenlik ile ölçülür (Örneğin, N = 5), 14,8 ± 1.0 ° intorsion, 3,2 ± 0.2 ° yükselme ve 2.4 ± 0.2 ° kaçırma için. Variabilities için tek bir hazırlık karşılaştırıldığında farklı ürünleri arasında (bir logaritmik birim içinde) karşılaştırılabilir kalıptır için ne için öğrenci değişiklikleri önlemleri görülmektedir: 6 kat daha fazla intorsion ve yükseklik, 11 kat daha fazla için için kaçırma.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56864/56864fig4.jpg"> Şekil 4: 500 ms 100 Hz Tren 2 ms bakliyat 10 müstahzarları (altı sol ve sağ tarafa, beş denemeler her için ölçülen uygulanan dört uygulanan) ile göz rotasyonlar sol trochlear sinir (NIV) uyarıcı sonra uyarılmış demek. Alt Arsa ekseninde dikdörtgen dalga uyarıcı zamanlamasını gösterir. Yanıt-e doğru sol ve sağ gözlerinden birbirinden önemli ölçüde farklı değildi. Intorsion bakış açısını ve kaçırma (bkz: çizgi film olan okları göz hareketleri bileşenlerinin özetlemek Kaplumbağa baş görünümünün örten) tarafından eşlik etti. Göz hareketi genlik kabaca NIV için uygulanan yedi geçerli genlikleri karşılık gelir (bkz: efsane kutusunda kodu). Bu rakam ile izni32yeniden basıldı. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56864/56864fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Hareketlerinin yorumlamak daha zor olan, bu yüzden sadece superior oblik kas için gider, NIV aksine birden fazla kas nIII ve in innervate. Sonuç göz hareketleri bağlıdır ne motor üniteleri işe (Şekil 5) (bkz: tartışma). Sonuç olarak, hazırlık için hazırlık üzerinden değişkenlik önemli hale gelebilir. Örneğin, intorsion, yükseklik ve kaçırma (Şekil 5C) in çağrıştırır. Kaçırma motor birimlerinden lateral rektus eylem teşvik muhtemeldir; intorsion ve yükseklik yerine hedefleri Retraktörü bulbi veya nictitating membran gibi olacak diğer motor üniteleri neden.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56864/56864fig5.jpg"> Şekil 5: demek göz hareketi yanıt üç kranial sinirler 10-, ile 50-, 100-400 Hz trenler dört müstahzarları uyararak uyarılmış. Tüm uyarıcı trenler süresi içinde 2 ms darbeleri 70 µA, bir değer eşiğin genliği ile oluşan 500 ms vardı. Göz hareketleri içeren sütunlar bir-nIII, NIV ve in, uyarılması için yanıt sırasıyla gösterilenC daha önce olduğu gibi görüntülenir. Bu rakam ile izni32yeniden basıldı. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56864/56864fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Birden çok hedef (superior rektus, inferior rektus, inferior oblik, medial rektus ve sfinkter pupillae) nIII innervates, uyarılmış hareketlerinin analiz olduklarından en karmaşık. Şekil 5A' gösterilen örnek için extorsion, dıştan ve yükseklik oluşur. Buna göre makul bir yorumu Eylemler çoğunlukla inferior oblik medial rektus olası katkısı ile vardır. Superior rektus ve inferior rektus birbirlerini iptal edebilirsiniz. NIII büyük olasılıkla için eylemleri daha yüksek bir değişkenliği daha fazla sinir ve elektrotlar montaj için kesme konumunu dallanma dan kaynaklanıyor.

Watch this Scientific Journal Video about Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle at JoVE.com

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Bu iletişim kuralı bir vitro izole kaplumbağa kafa hazırlık onların göz hareketleri kinematik ölçmek için nasıl kullanılacağını açıklar. Kafatası beyin kaldırıldıktan sonra kranial sinirler rotasyonlar göz ve öğrenci boyutlarda değişiklikleri ölçmek için akımları ile uyarılmış.

Oküler kinematik Vitro uyarılması kaplumbağa kranial sinirler tarafından ölçülen

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

ocular-kinematics-measured-vitro-stimulation-cranial-nerves

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

8.4K Görüntüleme.  Lafayette College. Bu iletişim kuralı bir vitro izole kaplumbağa kafa hazırlık onların göz hareketleri kinematik ölçmek için nasıl kullanılacağını açıklar. Kafatası beyin kaldırıldıktan sonra kranial sinirler rotasyonlar göz ve öğrenci boyutlarda değişiklikleri ölçmek için akımları ile uyarılmış.

Video: Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

TMS: Using the Theta-Burst Protocol to Explore Mechanism of Plasticity in Individuals with Fragile X Syndrome and Autism

Fragile X Syndrome (FXS), also known as Martin-Bell Syndrome, is a genetic abnormality found on the X chromosome.1,2 Individuals suffering from FXS display abnormalities in the expression of FMR1 - a protein required for typical, healthy neural development.3 Recent data has suggested that the loss of this protein can cause the cortex to be hyperexcitable thereby affecting overall patterns of neural plasticity.4,5
In addition, Fragile X shows a strong comorbidity with autism: in fact, 30% of children with FXS are diagnosed with autism, and 2 - 5% of autistic children suffer from FXS.6
Transcranial Magnetic Stimulation (a non-invasive neurostimulatory and neuromodulatory technique that can transiently or lastingly modulate cortical excitability via the application of localized magnetic field pulses 7,8) represents a unique method of exploring plasticity and the manifestations of FXS within affected individuals. More specifically, Theta-Burst Stimulation (TBS), a specific stimulatory protocol shown to modulate cortical plasticity for a duration up to 30 minutes after stimulation cessation in healthy populations, has already proven an efficacious tool in the exploration of abnormal plasticity.9,10 
Recent studies have shown the effects of TBS last considerably longer in individuals on the autistic spectrum - up to 90 minutes.11 This extended effect-duration suggests an underlying abnormality in the brain's natural plasticity state in autistic individuals - similar to the hyperexcitability induced by Fragile X Syndrome.
In this experiment, utilizing single-pulse motor-evoked potentials (MEPs) as our benchmark, we will explore the effects of both intermittent and continuous TBS on cortical plasticity in individuals suffering from FXS and individuals on the Autistic Spectrum.

In this article, we examine the effects of Theta-Burst TMS stimulation on cortical plasticity in individuals suffering from Fragile X syndrome and individuals on the autistic spectrum.

TMS: Fragile X Sendromu ve Otizm Bireylerde Plastisite, Mechasnism keşfedin Theta-Burst Protokolü kullanma

Fragile X Syndrome (FXS), also known as Martin-Bell Syndrome, is a genetic abnormality found on the X chromosome.1,2 Individuals suffering from FXS ...

Nörobilim

The NeuroStar TMS Device: Conducting the FDA Approved Protocol for Treatment of Depression

The Neuronetics NeuroStar Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) System is a class II medical device that produces brief duration, pulsed magnetic fields. These rapidly alternating fields induce electrical currents within localized, targeted regions of the cortex which are associated with various physiological and functional brain changes.1,2,3
In 2007, O'Reardon et al., utilizing the NeuroStar device, published the results of an industry-sponsored, multisite, randomized, sham-stimulation controlled clinical trial in which 301 patients with major depression, who had previously failed to respond to at least one adequate antidepressant treatment trial, underwent either active or sham TMS over the left dorsolateral prefrontal cortex (DLPFC). The patients, who were medication-free at the time of the study, received TMS five times per week over 4-6 weeks.4
The results demonstrated that a sub-population of patients (those who were relatively less resistant to medication, having failed not more than two good pharmacologic trials) showed a statistically significant improvement on the Montgomery-Asberg Depression Scale (MADRS), the Hamilton Depression Rating Scale (HAMD), and various other outcome measures. In October 2008, supported by these and other similar results5,6,7, Neuronetics obtained the first and only Food and Drug Administration (FDA) approval for the clinical treatment of a specific form of medication-refractory depression using a TMS Therapy device (FDA approval K061053).
In this paper, we will explore the specified FDA approved NeuroStar depression treatment protocol (to be administered only under prescription and by a licensed medical profession in either an in- or outpatient setting).

In this article, we examine the methodology and considerations relevant to the FDA approved depression treatment protocol using the Neuronetics NeuroStar TMS device.

NeuroStar TMS Aygıt: FDA yürütülmesi Depresyon Tedavisinde Protokolü Onaylandı

The Neuronetics NeuroStar Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) System is a class II medical device that produces brief duration, pulsed magnetic ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other insects proprioception is provided by specialized sensory organs termed chordotonal organs (ChOs) 2. Like many other organs in Drosophila, ChOs develop twice during the life cycle of the fly. First, the larval ChOs develop during embryogenesis. Then, the adult ChOs start to develop in the larval imaginal discs and continue to differentiate during metamorphosis.
The development of larval ChOs during embryogenesis has been studied extensively 10,11,13,15,16. The centerpiece of each ChO is a sensory unit composed of a neuron and a scolopale cell. The sensory unit is stretched between two types of accessory cells that attach to the cuticle via specialized epidermal attachment cells 1,9,14. When a fly larva moves, the relative displacement of the epidermal attachment cells leads to stretching of the sensory unit and consequent opening of specific transient receptor potential vanilloid (TRPV) channels at the outer segment of the dendrite 8,12. The elicited signal is then transferred to the locomotor central pattern generator circuit in the central nervous system.
Multiple ChOs have been described in the adult fly 7. These are located near the joints of the adult fly appendages (legs, wings and halters) and in the thorax and abdomen. In addition, several hundreds of ChOs collectively form the Johnston's organ in the adult antenna that transduce acoustic to mechanical energy 3,5,17,4.
In contrast to the extensive knowledge about the development of ChOs in embryonic stages, very little is known about the morphology of these organs during larval stages. Moreover, with the exception of femoral ChOs 18 and Johnston's organ, our knowledge about the development and structure of ChOs in the adult fly is very fragmentary.
Here we describe a method for staining and visualizing ChOs in third instar larvae and pupae. This method can be applied together with genetic tools to better characterize the morphology and understand the development of the various ChOs in the fly.

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

A method to immunostain and visualize chordotonal organs in larvae and pupae of Drosophila melanogaster is described.

Içinde proprioseptörlere Görselleştirmesi<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva ve Pupa

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Generation of Local CA1 &#947; Oscillations by Tetanic Stimulation

Neuronal network oscillations are important features of brain activity in health and disease and can be modulated by a range of clinically used drugs. A protocol is provided to generate a model for studying CA1 &#947; oscillations (20 - 80 Hz). These &#947; oscillations are stable for at least 30 min&#160;and depend upon excitatory and inhibitory synaptic activity in addition to activation of pacemaker currents. Tetanically stimulated oscillations have a number of reproducible and easily quantifiable characteristics including spike count, oscillation duration, latency and frequency that report upon the network state. The advantages of the electrically stimulated oscillations include stability, reproducibility and episodic acquisition enabling robust characterization of network function. This model of CA1 &#947; oscillations can be used to study cellular mechanisms and to systematically investigate how neuronal network activity is altered in disease and by drugs. Disease state pharmacology can be readily incorporated by the use of brain slices from genetically modified or interventional animal models to enable selection of drugs that specifically target disease mechanisms.

Oscillations are fundamental network properties and are modulated by disease and drugs. Studying brain-slice oscillations allows characterization of isolated networks under controlled conditions. Protocols are provided for the preparation of acute brain slices for evoking CA1 &#947; oscillations.

Tetanik Uyarım tarafından Yerel CA1 γ Titreşim Üretimi

Neuronal network oscillations are important features of brain activity in health and disease and can be modulated by a range of clinically used drugs. A ...

Caspase-3 Activity in the Rat Amygdala Measured by Spectrofluorometry After Myocardial Infarction

Myocardial infarction (MI) has dramatic mid- and long-term consequences at the physiological and behavioral levels, but the mechanisms involved are still unclear. Our laboratory has developed a rat model of post-MI syndrome that displays impaired cardiac functions, neuronal loss in the limbic system, cognitive deficits and behavioral signs of depression. At the neuronal level, caspase-3 activation mediates post-MI apoptosis in different limbic regions, such as the amygdala &#8211; peaking at 3 days post-MI. Cognitive and behavioral impairments appear 2-3 weeks post-MI and these correlate statistically with measures of caspase-3 activity. The protocol described here is used to induce MI, collect amygdala tissue and measure caspase-3 activity using spectrofluorometry. To induce MI, the descending coronary artery is occluded for 40 min. The protocol for evaluation of caspase-3 activation starts 3 days after MI: the rats are sacrificed and the amygdala isolated rapidly from the brain. Samples are quickly frozen in liquid nitrogen and kept at -80 &#176;C until actual analysis. The technique performed to assess caspase-3 activation is based on cleavage of a substrate (DEVD-AMC) by caspase-3, which releases a fluorogenic compound that can be measured by spectrofluorometry. The methodology is quantitative and reproducible but the equipment required is expensive and the procedure for quantifying the samples is time-consuming. This technique can be applied to other tissues, such as the heart and kidneys. DEVD-AMC can be replaced by other substrates to measure the activity of other caspases.

Myocardial infarction (MI) is not only followed by impaired cardiac function but also by apoptosis in the amygdala, a brain region involved in the behavioral consequences of MI. This protocol describes how to induce MI, collect amygdala tissue and measure caspase-3 activity, a marker of apoptosis, therein.

Miyokard İnfarktüsü Sonrası Spectrofluorometry tarafından ölçülen Sıçan amigdala kaspaz-3 Etkinlik

Myocardial infarction (MI) has dramatic mid- and long-term consequences at the physiological and behavioral levels, but the mechanisms involved are still ...

Utilizing Combined Methodologies to Define the Role of Plasma Membrane Delivery During Axon Branching and Neuronal Morphogenesis

During neural development, growing axons extend to multiple synaptic partners by elaborating axonal branches. Axon branching is promoted by extracellular guidance cues like netrin-1 and results in dramatic increases to the surface area of the axonal plasma membrane. Netrin-1-dependent axon branching likely involves temporal and spatial control of plasma membrane expansion, the components of which are supplied through exocytic vesicle fusion. These fusion events are preceded by formation of SNARE complexes, comprising a v-SNARE, such as VAMP2 (vesicle-associated membrane protein 2), and plasma membrane t-SNAREs, syntaxin-1 and SNAP25 (synaptosomal-associated protein 25). Detailed herein isa multi-pronged approach used to examine the role of SNARE mediated exocytosis in axon branching. The strength of the combined approach is data acquisition at a range of spatial and temporal resolutions, spanning from the dynamics of single vesicle fusion events in individual neurons to SNARE complex formation and axon branching in populations of cultured neurons. This protocol takes advantage of established biochemical approaches to assay levels of endogenous SNARE complexes and Total Internal Reflection Fluorescence (TIRF) microscopy of cortical neurons expressing VAMP2 tagged with a pH-sensitive GFP (VAMP2-pHlourin) to identify netrin-1 dependent changes in exocytic activity in individual neurons. To elucidate the timing of netrin-1-dependent branching, time-lapse differential interference contrast (DIC) microscopy of single neurons over the order of hours is utilized. Fixed cell immunofluorescence paired with botulinum neurotoxins that cleave SNARE machinery and block exocytosis demonstrates that netrin-1 dependent axon branching requires SNARE-mediated exocytic activity.

Light microscopy techniques coupled with biochemical assays elucidate the involvement of SNARE-mediated exocytosis in netrin-dependent axon branching. This combination of techniques permits identification of molecular mechanisms controlling axon branching and cell shape change.

Kombine Metodolojileri kullanan Akson Dallanman ve Nöronal Morfogenez sırasında Plazma Membran Teslimat Rolü tanımlayın

During neural development, growing axons extend to multiple synaptic partners by elaborating axonal branches. Axon branching is promoted by extracellular ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in neurocognitive disorders. Despite the popularization of prepulse inhibition (PPI) in recent years, many current protocols promote using a percent of control measure, thereby precluding the assessment of temporal processing. The present study used cross-modal PPI and gap prepulse inhibition (gap-PPI) to demonstrate the benefits of employing a range of interstimulus intervals (ISIs) to delineate effects of sensory modality, psychostimulant exposure, and age. Assessment of sensory modality, psychostimulant exposure, and age reveals the utility of an approach varying the interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function, including increases (sharper curve inflections) or decreases (flattening of the response amplitude curve) in startle amplitude. Additionally, shifts in peak response inhibition, suggestive of a differential sensitivity to the manipulation of ISI, are often revealed. Thus, the systematic manipulation of ISI affords a critical opportunity to evaluate temporal processing, which may reveal the underlying neural mechanisms involved in neurocognitive disorders.

Temporal processing, a preattentive process, may underlie deficits in higher-level cognitive processes, including attention, commonly observed in neurocognitive disorders. Using prepulse inhibition as an exemplar paradigm, we present a protocol for manipulating interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function to provide an assessment of temporal processing.

Interstimulus Aralık kemirgenler zamansal işleme değerlendirilmesi için güç

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Assessing Pupil-linked Changes in Locus Coeruleus-mediated Arousal Elicited by Trigeminal Stimulation

Current scientific literature provides evidence that trigeminal sensorimotor activity associated with chewing may affect arousal, attention, and cognitive performance. These effects may be due to widespread connections of the trigeminal system to the ascending reticular activating system (ARAS), to which noradrenergic neurons of the locus coeruleus (LC) belongs. LC neurons contain projections to the whole brain, and it is known that their discharge co-varies with pupil size. LC activation is necessary for eliciting task-related mydriasis. If chewing effects on cognitive performance are mediated by the LC, it is reasonable to expect that changes in cognitive performance are correlated to changes in task-related mydriasis. Two novel protocols are presented here to verify this hypothesis and document that chewing effects are not attributable to aspecific motor activation. In both protocols, performance and pupil size changes observed during specific tasks are recorded before, soon after, and half an hour following a 2 min period of either: a) no activity, b) rhythmic, bilateral handgrip, c) bilateral chewing of soft pellet, and d) bilateral chewing of hard pellet. The first protocol measures level of performance in spotting target numbers displayed within numeric matrices. Since pupil size recordings are recorded by an appropriate pupillometer that impedes vision to ensure constant illumination levels, task-related mydriasis is evaluated during a haptic task. Results from this protocol reveal that 1) chewing-induced changes in performance and task-related mydriasis are correlated and 2) neither performance nor mydriasis are enhanced by handgrip. In the second protocol, use of a wearable pupillometer allows measurement of pupil size changes and performance during the same task, thus allowing even stronger evidence to be obtained regarding LC involvement in the trigeminal effects on cognitive activity. Both protocols have been run in the historical office of Prof. Giuseppe Moruzzi, the discoverer of ARAS, at the University of Pisa.

To verify whether trigeminal effects on cognitive performance involve locus coeruleus activity, two protocols are presented that aim to evaluate possible correlations between the performance and task-related pupil size changes induced by chewing. These protocols may be applied to conditions in which locus coeruleus contribution is suspected.

Trigeminal Stimülasyon tarafından Ortaya Çıkan Locus Coeruleus aracılı Uyarılma'da Gözbebeği Ile Bağlantılı Değişikliklerin Değerlendirilmesi

Current scientific literature provides evidence that trigeminal sensorimotor activity associated with chewing may affect arousal, attention, and cognitive ...

Wireless Electrophysiological Recording of Neurons by Movable Tetrodes in Freely Swimming Fish

The neural mechanisms governing fish behavior remain mostly unknown, although fish constitute the majority of all vertebrates. The ability to record brain activity from freely moving fish would advance research on the neural basis of fish behavior considerably. Moreover, precise control of the recording location in the brain is critical to studying coordinated neural activity across regions in fish brain. Here, we present a technique that records wirelessly from the brain of freely swimming fish while controlling for the depth of the recording location. The system is based on a neural logger associated with a novel water-compatible implant that can adjust the recording location by microdrive-controlled tetrodes. The capabilities of the system are illustrated through recordings from the telencephalon of goldfish.

A novel wireless technique for recording extracellular neural signals from the brain of freely swimming goldfish is presented. The recording device is composed of two tetrodes, a microdrive, a neural data logger, and a waterproof case. All parts are custom-made except for the data logger and its connector.

Serbest Yüzme Balık hareketli Tetrodes tarafından Nöronların Kablosuz Elektrofizyolojik Kayıt

The neural mechanisms governing fish behavior remain mostly unknown, although fish constitute the majority of all vertebrates. The ability to record brain ...

Assessing Early Stage Open-Angle Glaucoma in Patients by Isolated-Check Visual Evoked Potential

Recently, the isolated-check visual evoked potential (icVEP) technique was designed and has been reported to detect glaucomatous damage earlier and faster. It creates low spatial frequency/high temporal frequency bright stimuli and records cortical activity initiated primarily by afferents in the magnocellular ON pathway. This pathway contains neurons with larger volumes and axonal diameters, and it is preferentially damaged in early glaucoma, which can result in visual field loss. The study presented here uses standard operative procedures (SOP) of icVEP to obtain reliable results. It can detect visual function loss using a signal-to-noise ratio (SNR) corresponding to the defects of retinal nerve fiber layer (RNFL) in early stage open-angle glaucoma (OAG). A setting of 10 Hz and condition of 15% positive-contrast (bright) are selected to differentiate OAG patients and control subjects, with each check containing eight runs. Each run persists for 2 s (for 20 total cycles). A flowchart is constructed, which consists of pupil size and intraocular pressure over a 30 min rest period before each examination. Additionally, the testing order of eyes is performed to obtain reliable electroencephalographic signals. VEPs are recorded and analyzed automatically by software, and SNRs are derived based on a multivariate statistic. An SNR of &#8804; 1 is considered abnormal. A receiver-operating-characteristic (ROC) curve is applied to analyze the accuracy of group classification. Then, the SOP is applied in a cross-sectional study, showing that icVEP can detect glaucomatous visual function abnormality in the central visual field in the form of SNR. This value also correlates with the thickness thinning of RNFL and produces high classification accuracy for early stage OAG. Thus, it serves as a useful and objective diagnostic technology for the early detection of glaucoma.

The isolated-check visual evoked potential (icVEP) method is implemented here to assess the magnocellular ON pathway that is initially damaged in glaucoma. The study shows standard operative procedures using icVEP to obtain reliable results. It is proved to serve as a useful objective diagnosing technology for the early detection of glaucoma.

İzole-Check Görsel Uyarılmış Potansiyele Göre Hastalarda Erken Evre Açık Açılı Glokomun Değerlendirilmesi

Recently, the isolated-check visual evoked potential (icVEP) technique was designed and has been reported to detect glaucomatous damage earlier and ...