Yazarlar mali desteği ile University of Southern California, ulusal kalp, akciğer ve kan Enstitüsü (NHLBI), R00HL124279, Eli ve Edythe geniş inovasyon ödülü ve L.K. Whittier Vakfı sigara kanser kabul etmek istiyorum EJC için verilen translasyonel araştırma ödülü. Yazarlar Merkezi elektron mikroskobu ve Microanalysis, Center of Excellence NanoBiophysics içinde Center of Excellence için moleküler karakterizasyonu ve Translational görüntüleme Merkezi, University of Southern California için yardım için teşekkür ederiz enstrümantal kurulumları.

Not: MSDS reaktifler için okumak ve tüm kimyasal güvenlik önlemleri yerel kurum tarafından gerektiği gibi izleyin.
1. MCP-1 PAMs hazırlanması
<ol><li>
MCP-1 peptid hazırlanması
	<ol>
<li>Fmoc-L-Lys (Boc) 0,25 mmol tartmak-Wang bir reaksiyon gemi (RV) içinde. 5 mL dimethylforamide (DMF) ile RV tarafında kimyasal duman mahallede durulayın.</li>
		<li>RV bir otomatik benchtop peptid synthesizer üzerine yükleyin. Önceden paketlenmiş amino asit şişeleri, N '- CYNFTINRKISVQRLASYRRITSS - C', c N-terminus yükleyin. Vasıl belgili tanımlık son final deprotection adım için boş bir şişe içerir. Not: Şifreli bir peptit dizisi, N '- CNNSIIRSKQVLRSTRYFRSATYK - C', de sentezlenmiş aynı iletişim kuralını kullanarak.</li>
		<li>Sentezi bittiğinde, tüm reçineler transfer edilene kadar peptidler bağlı ölüm mercek şişe 2-3 mL metanol ile aktarın. Sonra reçine altına batırdı, metanol süpernatant çıkarın ve kuru kadar kalan buharlaşır. Vakum kuru bir ek 2 h için ya da gece, oda sıcaklığında.</li>
		<li>Trifluoracetic asit (TFA):ethanedithiol:water:triisopropylsilane 94:2.5:2.5:1 vol % kimyasal duman başlıklı içeren 12 mL bölünme çözüm olun. Eşit olarak karışık emin olmak için bölünme çözüm girdap. Dikkat: triisopropylsilane ve ethanedithiol hava duyarlı olduğundan, argon tasfiye triisopropylsilane ve ethanedithiol onları geri koyarak önce 1 dk. için hisse senedi şişeleri.</li>
		<li>Sentez taşıyıcıyı (SV) altına ZF yarısı sıkma tarafından bir kol shaker koyun. Tüm peptid reçineler transfer edilene kadar peptid-reçine SV 2 mL bölünme çözeltisi ile aktarın.</li>
		<li>Kenarlarına ZF 3 mL bölünme çözüm ile yıkayın. ZF kapağı kapatın ve 300 salınımlarını/dk 4 h için sallamak.</li>
		<li>Bir boş 50 mL santrifüj tüpü çıkarmak tartın. Kayıt kitle.</li>
		<li>4 h sonra 50 mL santrifüj tüpüne ZF i ciddi peptid çözümden drenaj. SV birkaç kez kalan bölünme çözüm ile yıkayın.</li>
		<li>Santrifüj tüpte kalan daha az 4 mL kadar i ciddi peptid çözüm ile azot buharlaşır.</li>
		<li>Buz gibi eter 36 mL peptid i ciddi ekleyin.</li>
		<li>Girdap bu kadar tamamen beyaz veya sarı bir çözümdür. 3000 x g 4 ° C'de 5 min için de santrifüj kapasitesi ve süpernatant dikkatle boşaltmak.</li>
		<li>40 mL buz gibi eter tüp ekleyin. Girdap ve tekrar solüsyon içeren temizleyicide. Santrifüjü işlemi yineleyin. Süpernatant dikkatle boşaltmak.</li>
		<li>Eter gözle görülür buharlaşan kadar azot gaz tasfiye ile ham PA Pelet kuru.</li>
		<li>20 mL çift distile ekleyin su, girdap ve peptid çözümde tamamen eriyene kadar solüsyon içeren temizleyicide.</li>
		<li>Don eriyik ve kuru kadar lyophilize.</li>
		<li>Bir kez peptid kurutulur, ham peptid içeren santrifüj tüpü kitle tartın. Ham peptid 5 mg/mL suda çözülür.</li>
		<li>Ham MCP-1 peptid toplam konsantrasyonu 5 mg/mL 5 mL çift distile su içinde 25 mg geçiyoruz. %0.1 TFA su (a solvent) ve % 0.1 kullanarak ham MCP-1 peptid yüksek performanslı sıvı Kromatografi (HPLC) tarafından arındırmak TFA Asetonitril (solvent B) bir C8 ters fazlı sütunda mobil aşamaları olarak. Peptid 5 mL HPLC enjekte. Not: A 9.0 mL/dak akış hızında azalma çözücü A yavaş yavaş %30 27 min için ve bu kompozisyon 3 dk. dönüş % 100 solvent degradeye tutmak % 100 solvent ilk mobil faz oluşan bir 3 dk ve bu kompozisyon için vermek 1 dk at tutun bir toplam çalışma-saat 34 dk. tutun sütun sıcaklığı 55 ° C'de Pozitif İyon kaynağı modu analizi için kullanın. TFA HPLC sütun için çok asittir formik asit TFA yerine kullanılabilir. Bu organik çözücü kompozisyon rampa hız 2%/min daha iyi ayrılması için aşmaması gerektiğini tavsiye edilir.</li>
		<li>Beklenen ürün m/z 2,890 adlı için matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaşma (maldı) kütle spektrometresi kullanılarak her fraksiyonu analiz. Not: α-cyano-4-hydroxycinnamic asit 1 mg/mL Asetonitril/su (50: 50 vol %), matris çözüm olarak geçiyoruz. Matris çözüm her kesir 0,75 µL tarafından takip maldı plaka üzerine 0,75 µL nokta. 500-5000 Da toplu bir mesafeden bir pozitif yansıtıcı iyon modu kullanılarak analiz gerçekleştirmek.</li>
		<li>Ürün kesirler birleştirmek, Asetonitril darbe donma ve arıtılmış peptidler kadar kuru lyophilize.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
MCP-1 PA hazırlanması
	<ol>
<li>1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000] DSPE-PEG (2000)-maleimide peptid ayrı mercek şişeleri için 1.1 molar fazlalığı hazırlayın. Her iki bileşikler yapmak için çift distile su içinde erimesi ~ 15 mg/mL. 15 dakika veya her iki çözüm de tamamen berraklaşana kadar solüsyon içeren temizleyicide. Not: Nerede çözüm pH 8,5 için ayarlanır DSPE-PEG (2000)-Amin ve N-hydroxysuccinimide (NHS) ester functionalized Cy5, adım 1.2.3, dışında aynı iletişim kuralını kullanarak DSPE-PEG (2000)-Cy5 sentezlenir.</li>
		<li>DSPE-PEG (2000)-maleimide çözüm peptid ekleyin. Girdap ve solüsyon içeren temizleyicide.</li>
		<li>1 ekleyin M NaOH dropwise (1 µL) çözüm pH 7 kadar bir zamanda.</li>
		<li>Azot tasfiye çözüm 5 dakika süreyle gecede çözüm karıştırın.</li>
		<li>Don eriyik ve kuru kadar lyophilize.</li>
		<li>Bir kez ham ürün kurutulur, katı 5 mg/mL suda çözülür.</li>
		<li>HPLC ile yukarıda açıklandığı gibi arındırmak. Not: Çekimsiz peptid ve DSPE-PEG(2000) arasında % 15-30 organik konsantrasyonu (vol %), DSPE-PEG elute (2000)-MCP-1 eşlenik % 40-50 arasında organik konsantrasyon elute.</li>
		<li>Karşılık gelen m/z. DSPE-PEG (2000)-MCP-1-meli-si olmak geniş m/z tepe 5,760 maldı kütle spektrometresi kullanıyorum her fraksiyonu analiz. Not: 2,5-dihidroksibenzoik asit en iyi matris DSPE-PEG için (2000)-MCP-1 maldı ile kullanılır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
MCP-1 PAMs Meclisi
	<ol>
<li>Dağıtılması 1,75 mg 3 mL metanol içinde 1-Dramı şişe ile MCP-1 PAs. MCP-1 PA tamamen eriyene kadar solüsyon içeren temizleyicide. Not: Cy5 amphiphiles 10:90 MCP-1 PA görüntüleme uygulamaları için molar oranını, dahil edilebilir.</li>
		<li>Metanol azot dairesel bir hareketle altında tek tip bir film şişe dibinde oluşan kadar şişe yan kalan metanol durulama sırasında buharlaşır. Vakum-Kuru filmin gecede.</li>
		<li>Film 3 mL su veya fosfat tampon ile hidrat serum (PBS) MCP-1 PAMs bir 100 µM çözüm yapmak. Yavaşça girdap ve temiz kadar çözüm solüsyon içeren temizleyicide. 30 dk 80 ° C'de kuluçkaya. Not: Yüksek sıcaklık kendinden montajlı süreci hızlandırmak için gösterilmiştir ve kritik micelle konsantrasyonu (CMC)42,43düşürürken en istikrarlı ikincil yapı oluşturmak peptit bileşeni sağlar.</li>
		<li>Elde edilen dağılımı oda sıcaklığında için ne yapıyorsun?</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. MCP-1 PAMs karakterizasyonu
<ol><li>
Dinamik ışık saçılma (DL) ve zeta potansiyel
	<ol>
<li>Yer 100 µM MCP-1 PAM veya DLS veya zeta potansiyel enstrümanın talimatlara göre bir küvet içinde şifreli PAM. Not: DLS ve zeta potansiyel cuvettes gerecin yönergeler bağlı farklı olabilir.</li>
		<li>Oda sıcaklığına enstrüman equilibrate. PAM in yüzey fiyat istemek ve boyutu ölçmek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Transmisyon elektron mikroskobu (TEM)
	<ol>
<li>7 µL eklemek 50 µM MCP-1 PAM veya şifreli PAM TEM ızgara üzerine kendi kendine kapanan bir cımbız 5 dk. fitil uzakta içinde damlacık bir hassas görev bezle askıya alındı.</li>
		<li>7 µL kılavuz yıkamak için su ekleyin. Uzak damlacığı fitil.</li>
		<li>1 wt % phosphotungstic asit 2 dk. fitil uzakta için 7 µL damlacığı ekleyin. 2.2.2 arasındaki adımları yineleyin.</li>
		<li>TEM kılavuz TEM analiz önce kuru.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Dairesel dichroism (CD) spektroskopisi
	<ol>
<li>5-10dk için azot aracı kullanmak için önceden açın.</li>
		<li>Boş (su veya PBS) 300 µL küvet içinde yerleştirin.</li>
		<li>Spectra 190-265 nm, 0.2 mm yol-uzunluğu 1 s entegrasyon zaman ve oda sıcaklığında bir 1 nm bant genişliği ile ölçmek. 3 çoğaltır toplamak.</li>
		<li>Ölçü 100 µM MCP-1 peptid, MCP-1 PAM, peptid şifreli ve PAM 2.3.3. adımda açıklanan aynı koşul altında şifreli. Boş çıkarma.</li>
		<li>Polylysine temel spectra ürününün bir doğrusal ilişkilendirme kullanarak veri uygun.</li>
		<li>Araç dön. Azot açmadan önce 10 dakika bekleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. MCP-1 PAMs Vitro analiz
<ol><li>
Vitro Biyouyumluluk
	<ol>
<li>Kültür ve WEHI 274.1 Dulbecco'nın modifiye kartal % 10 fetal sığır serum ile (FBS), takıma orta fare monosit genişletin % 1 penisilin-streptomisin ve 37 ° c altında %5 0.05 mM 2-mercaptoethanol CO2 ' ye geçiş 5. Not: WEHI 274.1 hücreler süspansiyon. Ne zaman kültür, medya her 2-3 gün doldurulan.</li>
		<li>Damlalıklı monosit medya steril 50 mL santrifüj tüpü içine. 4 ° C'de 5 min için 300 x g, santrifüj</li>
		<li>Eski medya Aspire edin ve 10 mL taze medyada santrifüj tüpüne resuspend. Hücreler eşit şekilde medyada dağıtılır kadar yavaş yavaş karıştırın. Trypan mavi boyama ve bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak.</li>
		<li>Böyle medya iyi başına 90 µL başına 4.000 monosit hücreleri oranında seyreltin. Hücre 90 µL 96-şey plaka wells ekleyin. 24 saat kuluçkaya. Not: buharlaşma farklılıkları ve plaka ısı değişiklikleri önlemek için plaka dış kenarında kuyuları kullanmaktan kaçının. Dış kuyu 100 µL PBS ile doldurun.</li>
		<li>MCP-1 peptid, MCP-1 PAM, şifreli peptid veya 150 µL PBS ayrı, steril microcentrifuge tüpler şifreli PAM 0.15 µmol geçiyoruz. 1, 10 ve 100 µM her örneğinin 65 µL yapmak için seri seyreltme gerçekleştirin.</li>
		<li>10 µL PBS her konsantrasyon WEHI 274.1 içeren wells ekleyin (Toplam birim: şey, 6 satır, 96 toplam kuyu başına 100 µL). 72 h için kuluçkaya.</li>
		<li>Eklemek 10 µL (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium) (MTS) her şey içinde. 1s için kuluçkaya.</li>
		<li>490 bir plaka okuyucu kullanarak Absorbans analiz nm veya üreticinin yönergeleri dayalı.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Vitro micelle bağlama
	<ol>
<li>6-şey plaka 2 ml 100 µM Cy5 etiketli MCP-1 PAM (10:90 molar oranı DSPE-PEG (2000)-Cy5 ve MCP-1 PA) içeren medya her iyi tohum 500.000 monosit. 1s için kuluçkaya.</li>
		<li>Santrifüjü 300 x g 4 ° C'de 5 min için de tarafından WEHI 274.1 toplamak Medya Aspire edin.</li>
		<li>Resuspend ve 2 mL PBS hücrelerde yıkayın. 4 ° C'de 5 min için 300 x g, santrifüj PBS Aspire edin. 2 mL PBS ile yıkama işlemi tekrarlayın. PBS Aspire edin.</li>
		<li>Hücreleri düzeltmek için soğuk % 4 paraformaldehyde 2 mL ekleyin. 10 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
		<li>Damlalıklı steril cam coverslip 6-şey plaka kuyu içinde üzerine sabit hücreleri. 400 x g 5 min için de santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Paraformaldehyde kaldırın. Yıkama ve durulama 2 mL PBS ile bir kez. 1 mL PB ile resuspend Not: durulama, coverslip hücrelerdeyse engellemeden kaçının.</li>
		<li>% 90 gliserol 10 µL PBS içinde bir slayt koy. Bir iğne ve cımbız coverslip kadar almak için kullanın. Coverslip kenarına kuru. Yavaşça coverslip bir slayt üzerine yerleştirin yüzü koyun.</li>
		<li>Yavaşça kenarına açık oje ile coverslip kapatın. Görüntüleme için hazır kadar buzdolabında yerleştirin.</li>
		<li>Confocal bir lazer lazerler ile Cy5 için λuyarma yüklü mikroskop (CLSM) tarama kullanın = 650 nm.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

MCP-1 PAMs bir hidrofilik hedefleme peptid ve nanoparçacık kendi kendine monte doğası sürücüler hidrofobik kuyruk oluşan bir umut verici moleküler görüntüleme platformu vardır. Bu monosit hedefleme micelle basit sentez ve arıtma adımlardan MCP-1 peptid ve DSPE-PEG (2000)-MCP-1 tarafından hazırlanmış olabilir. PAMs vivo içinde gibi moleküler görüntüleme için birçok yararlı özelliklere sahip kendi kendinden montajlı altında hafif koşulları, iç biodegradability ve yapısal ve kimyasal çeşitlilik diğer görüntüleme moieties birleşme için izin veya peptidler seçmeli olarak faiz belirli bir siteye sunmak için hedefleme. Onların parçacık boyutu, şekli ve kompozisyon peptid, hidrofobik kuyruk veya uygulamaları22,33çeşitli için en uygun kimyasal ve fiziksel özellikleri sağlayan micelle konsantrasyon değiştirerek ayarlanabilir.
Bu protokol birkaç sınırlaması belirtilmelidir. İlk olarak, PAMs hidrofobik etkileşimler tarafından tahrik edilmektedir beri hidrofilik, böylece micelle yüzeyinde sunulmak üzere hedefleme yan izin hedefleme peptidler oluşturmak gereklidir. Peptit dizisi hidrofobik, bir ya da iki hidrofilik amino asitlerin C terminus adlı bir ek ağırladı ancak amino asit ilavesi micelle peptid ikincil bünyesinde etkileyebilir, böylece özelliklerini değiştirme peptid protein44,45, yerel durumunda içinde. Son derece CMC, PAs için bir micellar yapısı46oluşturmak gerekli en düşük konsantrasyon bağımlı oldukları gibi İkincisi, düşük konsantrasyonlarda PAMs zavallı istikrar sulu ortamlarda vardır. CMC, aşağıda micelle bireysel PA monomer için ayrıştırır ve bir taşıyıcı olarak hareket ve belirli site47bir uyuşturucu boşaltma micelle sınırlar. Bu dezavantajı hafifletmek için CMC hidrofobik kuyruk48,49zinciri uzunluğu artırarak Azaltılabilecek. Son olarak, PA ikincil yapısı zamanla, böylece micellar yapısı ve istikrar yanı26bağlama ligand verimliliği etkileyen değiştirebilirsiniz olarak PAMs uzun süreli depolama çözümü tavsiye edilmez.
Özetle, bu iletişim kuralını ateroskleroz görüntüleme için bir güçlü, kendinden montajlı peptid nanomedicine micelle tabanlı strateji gösterir. MCP-1 PAMs Biyouyumlu, biyolojik olarak parçalanabilen ve toksik olmayan şunlardır micelle bileşenlerinin öğelerden endojen vücut için ilham vardır. Daha da önemlisi, MCP-1 PAMs aterosklerotik plaklar aşamaları ayırt non-invaziv bir yaklaşım kolaylaştırmak orantılı olarak plak ilerleme artırmak, monosit tercihli bağlamaya var. Bu platform modülerlik nedeniyle, PAMs therapeutics, peptidler, görüntü moieties ve nükleik asitler hedefleme ek dahil edebilirsiniz. Bu nedenle, bu çok fonksiyonlu micelles böyle dinamik yetenekleri göz önüne alındığında, bu parçacıklar ateroskleroz ve diğer hastalıkları klinik çeviri için büyük sözü tutun inanıyoruz.

Kalp-damar hastalıkları önde gelen yaklaşık 17.3 milyon ölüm dünya çapında1ile tüm dünyada ölüm nedenleri olarak kalır. Kalp-damar hastalıkları ateroskleroz, hangi arterler, böylece inhibe kan ve oksijen akışı vücut2,3hücrelere plaklar inşa bir koşul tarafından katkıda bulunmuştur. Ateroskleroz ilerleme bir enflamatuar yanıt, düzensiz lipid metabolizması ve plak birikmesi, plak rüptürü ve miyokard infarktüsü4,5' e lider tarafından kalınlaşma ve damar sertliği içerir. Endotel hücreleri monosit6,7,8yüzeyinde bulunan C-C Kemokin reseptör (CCR2) bağlar MCP-1 dahil sitokinler ve adezyon molekülleri ifade. Oksitlenmiş kolesterolü monosit makrofaj için hangi bölgede inflamatuar yanıt güçlendirir ve doku yaralanması ve kararsız ya da kolay incinir plaklar9, oluşumuna yol açar plak oluşumu erken aşamasında dönüştürür 10.
Geleneksel olarak, ateroskleroz luminal stenoz anjiyografi veya ultrason11,12kullanarak anatomik görüntüleme tarafından değerlendirilmesi tarafından değerlendirilir. Ancak, bu yöntemler sadece ciddi daralma değil ateroskleroz, erken evre ve atardamar duvarının belirleyebilirsiniz arter arter büyüklüğünü korumak ve akış oranı12,13, kan remodeling ilk plak büyüme neden olur 14. Bu nedenle, Anjiyo ateroskleroz yaygınlık underrepresent. Ayrıca, noninvaziv görüntüleme teknikleri gibi tek foton emisyon tomografi, Pozitron emisyon tomografi ve manyetik rezonans görüntüleme son zamanlarda kullanılan ilk ayrıntıları sağlayabilir plak Morfoloji karakterize hesaplanan ve plaklar karakterizasyonu. Ancak, Bu modalities kez duyarlılık, Uzaysal çözünürlük, eksikliği nedeniyle sınırlıdır veya iyonizan radyasyon, görüntüleme plak ilerleme farklı aşamalarında15,16çok daha zorlu hale kullanımını gerektiren, 17. Özellikle plaklar ateroskleroz farklı aşamalarında tanımlamak görüntüleme bir dağıtım sistemi geliştirilecek kalmaya devam eder.
Nano tanecikleri vivo içinde plak hedefleme ve tanılama18,19,20,21için gelişmekte olan bir platform olmasını göstermiştir. Özellikle, PAMs onların kimyasal çeşitlilik ve moieties, besteleri, boyut, şekil ve yüzey functionalization22çeşitli uyum yeteneği nedeniyle avantajlı. "Bir hidrofobik kuyruğuna olan genellikle lipidler; bağlı bir hidrofilik, peptid headgroup" peptid amphiphiles (PAs) oluşur Bu amfifilik yapı kendi kendine montaj yetenekleri confers ve peptidler parçacık22,23,24yüzeyinde multivalent bir görünümünü sağlar. Peptid headgroups parçacık şekil katlama ve peptidler25arasında hidrojen ile etkileyebilir. β-yapraklık etkileşim yoluyla kat peptidler Helisel α onayı hem küresel ve uzun micelles22,23,24, oluşabilir iken uzun micelles, oluşturmak için gösterilmiştir 25,26,27. Hidrofilik peptid ve sistemik dolaşım28, nanopartikül kullanılabilirliği artırmanın PAMs, hidrofobik kuyruk arasında peptid yüzey ücretten kalkan polietilen glikol (PEG) halkalı yerleştirilebilir 29 , 30 , 31. Biyouyumlu ve çok çeşitli uygulamalar32,33için göstermiştir çünkü PAMs da avantajlı. Micelles su çözünürlük bazı polimerik nano tanecikleri suda çözünür olmayan ve solubilizers enjeksiyonları34için askıya zorunda gibi diğer nanoparçacık tabanlı sistemler üzerinde bir avantaj sunuyor. Ayrıca, belirli uyaranlara yanıt olarak sökmeye PAMs oluşturma yeteneği PAMs kontrollü hücre içi uyuşturucu teslim35için çekici bir aday yapar.
CCR2 reseptör bağlama ve aort içinde biriken, PAMs daha önce monosit aort9aterosklerotik lezyonların farklı aşamaları izlemek için hedefleme için geliştirilmiştir. ApoE- / - fareler monosit birikimi plak ilerleme36için orantılı olarak artar. Ayrıca, bu hastalarda rüptür eğilimli, son aşama plaklar monosit37daha yüksek miktarda içerir bulundu. Bu nedenle, PAMs MCP-1 dahil etmek için değişikliği daha fazla hedefleme özgüllük ve farklılaşma ve geç-aşamasındaki aterosklerotik lezyonları arasında izin veren bir yayın için yararlıdır. Bu kanıtı-of-concept çalışmalar Ayrıca PAMs pre-clinically kullanılmak üzere güvenli ve renally38temizlenir doğrulanmadı. Monosit ve inflamasyon karakteristik diğer hastalıklar için olduğundan, MCP-1 PAMs ateroskleroz8,39,40 ötesinde diğer hastalıkların tedavi ve teşhis uygulamalarında kullanılmak üzere potansiyel var , 41.
Burada, biz son derece ölçeklenebilir ve kendi kendine monte MCP-1 gösterdi parçacığın en uygun boyutu, yüzey ücret ve monosit ateroskleroz'Gelişmiş görüntüleme uygulamaları için seçici hedefleme PAMs imalatı raporu.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="834">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">1,2-ethanedithiol</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">E0032</td>
			<td style="width:259px;">for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">10 mL disposable serological pipets</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89130-898</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">15 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89401-566</td>
			<td>for various applications</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">2,5-dihydroxybenzoic acid, 99%</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td>AC165200050</td>
			<td>for MALDI</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">25 mL disposable serological pipets</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89130-900</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">2-Mercaptoethanol, 50 mM</td>
			<td style="width:147px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">31350010</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">5 mL disposable serological pipets</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89130-896</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">50 mL centrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-658</td>
			<td>for various applications</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">75 cm2 culture flask</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-680-65</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">75 mL reaction vessel</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td>3000005</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">96-wells cell culture plate</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td>40101-346</td>
			<td>for MTS assay</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Acetonitrile, HPLC grade</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td>A998SK-4</td>
			<td>for HPLC purification</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Borosilicate glass, 1 dram</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td>66011-041</td>
			<td>for PAM synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Borosillicate glass pipet, Long tips</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td>14673-043</td>
			<td>for various applications</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Coverslip, 0.16-0.19 mm, 22 x 22 mm</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12-542B</td>
			<td>for confocal microscopy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Cy5 amine</td>
			<td style="width:147px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab146463</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Diethyl ether, ACS grade</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">E138-1</td>
			<td>for peptide precipitation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Disposable syringes, 20 mL</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td>14-817-54</td>
			<td>for HPLC purification</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Double neubauer ruled hemocytometer</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td>63510-13</td>
			<td>for cell counting</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">DSPE-PEG(2000) amine</td>
			<td>Avanti</td>
			<td style="width:119px;">880128P</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">DSPE-PEG(2000) maleimide</td>
			<td>Avanti</td>
			<td style="width:119px;">880126P</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DSPE-PEG(2000)-NHS ester&#160;</td>
			<td>Nanocs</td>
			<td>PG2-DSNS-10K</td>
			<td>for conjugation to Cy5</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">Dulbecco&#39;s modified eagle medium-high glucose</td>
			<td style="width:147px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D5796-500ML</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal bovine serum, qualified, heat inactivated</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10438026</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Ala-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td>PS3-H5-A</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td style="width:119px;">PS3-H5-RBF</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Asn(Trt)-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td style="width:119px;">PS3-H5-NT</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Cys(Trt)-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td style="width:119px;">PS3-H5-CT</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Gln(Trt)-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td>PS3-H5-QT</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Ile-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td style="width:119px;">PS3-H5-I</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Leu-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td>PS3-H5-L</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Lys(Boc)-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td>PS3-H5-KBC</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Phe-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td style="width:119px;">PS3-H5-F</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Ser(tBu)-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td style="width:119px;">PS3-H5-SB</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Thr(tBu)-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td>PS3-H5-TB</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td>PS3-H5-YB</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fmoc-L-Val-OH /HBTU</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td>PS3-H5-V</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Fmoc-Lys(Boc)-wang resin, 100-200 mesh</td>
			<td>Novabiochem</td>
			<td style="width:119px;">856013</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Formic acid, optima LC/MS grade</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td>A117-50</td>
			<td>for HPLC purification</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Glycerol</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">M152-1L</td>
			<td>for confocal microscopy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hand tally counter</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td>S90189</td>
			<td>for cell counting</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Magnetic stir bars, egg-shaped</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td>58949-006</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Methanol, ACS certified</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td>A412-4</td>
			<td>for PAM synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MTS cell proliferation colorimetric assay kit</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">10191-104</td>
			<td>for MTS assay</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">N,N-Dimethylformamide, sequencing grade</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td>BP1160-4</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">N-Methylmorpholine</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td>S-1L-NMM</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AC416780250</td>
			<td>for fixing cells</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PBS, pH 7.4</td>
			<td style="width:147px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010049</td>
			<td>for various applications</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicillin/streptomycin, 10,000 U/mL</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Peptide synthesis vessel, 25 mL&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">CG186011</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Phosphotungstic acid&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A248-25</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Piperidine</td>
			<td>Spectrum</td>
			<td>P1146-2.5LTGL</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Plain glass microscope slide 75 x 25 mm</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-A3</td>
			<td>for confocal microscopy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Reagent reservoirs, sterile&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95128093</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Self-closing tweezer</td>
			<td style="width:147px;">TedPella</td>
			<td style="width:119px;">515</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TEM support film</td>
			<td style="width:147px;">TedPella</td>
			<td style="width:119px;">01814F</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trifluoroacetic acid&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td>BP618-500</td>
			<td>for peptide cleavage and HPLC purification</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Triisopropylsilane</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td>TCT1533-5ml</td>
			<td>for peptide cleavage</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypan blue solution, 0.4%</td>
			<td style="width:147px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15250061</td>
			<td>for cell counting</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tweezer, general purpose-serrated</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td>231-SA-SE</td>
			<td>for confocal microscopy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">WEHI-274.1</td>
			<td>ATCC</td>
			<td style="width:119px;">ATCC&#160;CRL-1679</td>
			<td>murine monocyte</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">automated benchtop peptide synthesizer</td>
			<td>Protein Technologies</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:259px;">PS3 Benchtop Peptide Synthesizer</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">&#945;- cyano- 4- hydroxycinnamic acid, 99%</td>
			<td style="width:147px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>476870-2G</td>
			<td>for MALDI</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synthesis of monocyte-targeting peptide amphiphile micelles for imaging of atherosclerosis

Ateroskleroz hangi 17.3 milyon kişinin hayatına her yıl kalp-damar hastalıkları, dünya çapında, ölüm önde gelen nedenidir için büyük bir katkıda bulunuyor. Ateroskleroz da miyokard infarktüsü, rüptürü ve damar uyarmadan tıkamanın kararsız plaklardan tarafından teşvik ve ani ölüm önde gelen nedenidir. Geçerli görüntüleme yöntemleri rüptürü istikrarlı ve kararsız plaklar arasında ayırt edemez. Özellikle hastalıklı doku için bağlamak moieties hedefleyen çeşitli ile değiştirilebilir gibi peptid amphiphiles micelles (PAMs) bu dezavantaj üstesinden gelebilir. Monosit monosit büyük birikimi rüptürü eğilimli plaklar ile ilişkili olmakla birlikte ateroskleroz, erken işaretler olduğu gösterilmiştir. Bu nedenle, monosit hedefleyebilirsiniz nano tanecikleri ateroskleroz farklı aşamalarında ayırımcılık için kullanılabilir. Bu amaçla, biz burada, monosit hedefleme-PAMs hazırlık için bir protokol tarif (monosit chemoattractant protein-1 (MCP-1) PAMs). MCP-1 PAMs kendinden 15 formu nano tanecikleri için hafif koşullarda sentez yoluyla monte nm ile çapı nötr yüzey şarj yakınındaki. Vitro, PAMs Biyouyumlu bulundu ve monosit için yüksek bağlama ilgi vardı. Burada açıklanan yöntemleri ateroskleroz yanı sıra diğer inflamatuar hastalıklar geniş bir uygulama yelpazesi için umut verici.

MCP-1 PAM hazırlanması MCP-1 protein [YNFTNRKISVQRLASYRRITSSK] veya şifreli peptid [YNSLVFRIRNSTQRKYRASIST] CCR2-bağlama motif (artıkları 13-35) N-terminus üzerinde bir sistein kalıntı ekleyerek güncellenmiştir. MCP-1 peptid bir Fmoc-aracılı katı faz yöntemiyle bir otomatik peptid synthesizer kullanarak sentez. Ham peptid ters fazlı HPLC C8 sütun kullanarak %0,1 50 ° C'de tarafından saflaştırıldı TFA Asetonitril/su karışımları ve maldı kütle spektrometresi (şekil 1) ile karakterizedir. Sistein içeren peptid DSPE-PEG (2000)-peptid conjugates bir thioether bağlantı üzerinden vermeye DSPE-PEG2000-maleimide üzerine Birleşik. Oda sıcaklığında 24 saat sonra ham ürün HPLC (Şekil 2) tarafından saflaştırıldı. DSPE-PEG (2000)-Cy5 NHS ester reaksiyon kullanarak sentez. (2000)-MCP-1 DSPE-PEG ile monte birlikte monosit PAMs hedefleme ve DSPE-PEG (2000)-Cy5 sonra N2tarafından buharlaşıp metanol çözülerek fabrikasyon ve elde edilen filmin kuru vakum altında gecede ve suda kendi kendine monte veya PBS gruplarının "kuyruk" formu MCP-1 PAMs hidrofobik etkileşimler yoluyla.
MCP-1 PAM karakterizasyonu DLS veri ve monosit hedefleme-PAMs TEM resimleri iyi dağınık, küresel nanopartikül 15,3 ± 2.0 nm çapı (şekil 3 ve Tablo 1) gösterdi. MCP-1 PAMs ve şifreli PAMs gösterdi bir hafif olumlu zeta potansiyel 12.1 ± 3.1 mV ve 13,7 ± 1.9 mV, sırasıyla (Tablo 1). CD gösterdi MCP-1 peptid micelle içinde birleşme ikincil yapı Gelişmiş (Tablo 2, MCP-1 PAMs: 46,2 ± % 0,9 β-sayfası, 53,1 ± % 1,4 rasgele bobin ve ücretsiz MCP1: 34,2 ± % 3,5 β-sac, 65.8 ± % 3,5 rasgele bobin).
Vitro MCP-1 PAM analizi MCP-1 PAMs in vitro Biyouyumluluk ve monosit bağlaması tarafından confocal mikroskobu gözlendi. Fare monosit MCP-1, MCP-1 PAM, şifreli peptid ve 72 h için şifreli PAM konsantrasyonları artan ile inkübe ve hücreleri kalıcı ve Biyouyumlu 100 µM (şekil 4) kadar bulundu. Ayrıca, confocal mikroskobu MCP-1 şifreli PAMs (şekil 5) karşılaştırıldığında PAMs monosit özel bağlayıcı gösterdi.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56625/56625fig1.jpg"> Resim 1 : HPLC Kromatografik vasıl 220 nm (dalga boyu peptid bağları) ile 254 nm (tirozin dalga boyları) MCP-1 peptid(a)ve şifreli peptid (B) (kutulu tepe 7.4 dk). MCP-1 peptid (C) ve şifreli peptid (D) 500-5000 Da zirve için [M + H]+ m/z 2,888 (beklenen 2,890) gösterilen bir mesafeden MALDI-TOF kütle spektrumu. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56625/56625fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56625/56625fig2.jpg"> Resim 2: HPLC Kromatografik vasıl 220 nm (dalga boyu peptid bağları) ile 254 nm (tirozin dalga boyları) DSPE-PEG (2000)-MCP-1(a)ve DSPE-PEG (2000)-(B) şifreli. (16,9 min kutulu zirve). (C) MALDI-TOF kütle spektrumu DSPE-PEG (2000)-MCP-1'de 1000-10,000 Da [M + H]+ için tepeler (beklenen 2,890) m/z 2,888, MCP-1 ve m/z 5,758 (beklenen 5,760) için DSPE-PEG için (2000)-MCP-1 gösteren bir dizi. (D) MALDI-TOF kütle spektrumu DSPE-PEG (2000)-1.000-10,000 Da [M + H]+ için tepeler (beklenen 5,760) m/z 2,887 (beklenen 2,890) için şifreli peptid ve m/z 5,761 gösteren bir mesafeden şifreli DSPE PEG şifreli. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56625/56625fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56625/56625fig3.jpg"> Şekil 3 : TEM görüntüleri MCP-1 PAM(a)ve (B) PAM şifreli. Ölçek çubuğu = 100 nm. MCP-1 PAM (C) numarası-ortalama boyutu dağılımı ve PAM DLS (D) üzerinden şifreli. Veri çoğu ortalama ± SD (n = 3). (E) MCP-1 ve şifreli peptidler ve PAMs CD analizi (n = 3). <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56625/56625fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56625/56625fig4.jpg"> Şekil 4 : In vitro MCP-1 peptid, MCP-1 PAM, şifreli peptid ve şifreli mısınız 72 h maruz kaldıktan sonra WEHI 274.1 fare monosit canlılık Veri çoğu ortalama ± SD (n = 6). <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56625/56625fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56625/56625fig5.jpg"> Şekil 5: MCP-1 PAM(a)CLSM görüntülerini ve şifreli PAM (B) 10 mol % Cy5 PA (kırmızı) ile dahil inkübe WEHI 274.1 için 1 h. ölçek çubuğu ile 20 µm. = <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56625/56625fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>PAMs</td>
			<td>Sayı-Ave çapı (nm)</td>
			<td>PDI</td>
			<td>Zeta potansiyeli (mV)</td>
		</tr>
<tr>
<td>MCP-1</td>
			<td>15,3 ± 2.0</td>
			<td>0,119 ± 0,006</td>
			<td>12.1 ± 3.1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Şifreli</td>
			<td>16.9 ± 1.4</td>
			<td>0.232 ± 0.019</td>
			<td>13,7 ± 1.9</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">PBS arabellekte ölçülür. Veri ± SD demek olarak ifade edilir</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Boyutu, polydispersity ve zeta potansiyel PAMs.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>a-Helix (%)</td>
			<td>b-levha (%)</td>
			<td>Rasgele bobin (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>MCP-1 peptid</td>
			<td>0.0 ± 0.0</td>
			<td>36.2 ± 2.2</td>
			<td>63.8 ± 1.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>MCP-1 PAM</td>
			<td>0.7 ± 0,6</td>
			<td>46,2 ± 0.9</td>
			<td>53,1 ± 1.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>Şifreli peptid</td>
			<td>0.0 ± 0.0</td>
			<td>43.7 ± 2.1</td>
			<td>56.3 ± 3.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>Şifreli PAM</td>
			<td>0.0 ± 0.0</td>
			<td>60,7 ± 0.2</td>
			<td>39.3 ± 0.2</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 2: İkincil yapı bileşimi peptidler ve PAMs.

Watch this Scientific Journal Video about Synthesis of Monocyte-targeting Peptide Amphiphile Micelles for Imaging of Atherosclerosis at JoVE.com

Synthesis of Monocyte-targeting Peptide Amphiphile Micelles for Imaging of Atherosclerosis

Bu kağıt malzemelerin ve monosit hedefleme peptid Amfifil micelles içeren bir yöntem sunar ve Biyouyumluluk ve monosit için bağlamak için micelle yeteneğini sınamak için ilgili deneyleri.

Monosit hedefleme peptid Amfifil Micelles için düşsel ateroskleroz sentezi

Atherosclerosis is a major contributor to cardiovascular disease, the leading cause of death worldwide, which claims 17.3 million lives annually. ...

synthesis-monocyte-targeting-peptide-amphiphile-micelles-for-imaging

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Bioengineering

7.2K Görüntüleme.  University of Southern California. Bu kağıt malzemelerin ve monosit hedefleme peptid Amfifil micelles içeren bir yöntem sunar ve Biyouyumluluk ve monosit için bağlamak için micelle yeteneğini sınamak için ilgili deneyleri.

Video: Synthesis of Monocyte-targeting Peptide Amphiphile Micelles for Imaging of Atherosclerosis

Cultivation of Human Neural Progenitor Cells in a 3-dimensional Self-assembling Peptide Hydrogel

The influence of 3-dimensional (3D) scaffolds on growth, proliferation and finally neuronal differentiation is of great interest in order to find new methods for cell-based and standardised therapies in neurological disorders or neurodegenerative diseases. 3D structures are expected to provide an environment much closer to the in vivo situation than 2D cultures. In the context of regenerative medicine, the combination of biomaterial scaffolds with neural stem and progenitor cells holds great promise as a therapeutic tool.1-5 Culture systems emulating a three dimensional environment have been shown to influence proliferation and differentiation in different types of stem and progenitor cells. Herein, the formation and functionalisation of the 3D-microenviroment is important to determine the survival and fate of the embedded cells.6-8 Here we used PuraMatrix9,10 (RADA16, PM), a peptide based hydrogel scaffold, which is well described and used to study the influence of a 3D-environment on different cell types.7,11-14 PuraMatrix can be customised easily and the synthetic fabrication of the nano-fibers provides a 3D-culture system of high reliability, which is in addition xeno-free.
Recently we have studied the influence of the PM-concentration on the formation of the scaffold.13 In this study the used concentrations of PM had a direct impact on the formation of the 3D-structure, which was demonstrated by atomic force microscopy. A subsequent analysis of the survival and differentiation of the hNPCs revealed an influence of the used concentrations of PM on the fate of the embedded cells. However, the analysis of survival or neuronal differentiation by means of immunofluorescence techniques posses some hurdles. To gain reliable data, one has to determine the total number of cells within a matrix to obtain the relative number of e.g. neuronal cells marked by &beta;III-tubulin. This prerequisites a technique to analyse the scaffolds in all 3-dimensions by a confocal microscope or a comparable technique like fluorescence microscopes able to take z-stacks of the specimen. Furthermore this kind of analysis is extremely time consuming. 
Here we demonstrate a method to release cells from the 3D-scaffolds for the later analysis e.g. by flow cytometry. In this protocol human neural progenitor cells (hNPCs) of the ReNcell VM cell line (Millipore USA) were cultured and differentiated in 3D-scaffolds consisting of PuraMatrix (PM) or PuraMatrix supplemented with laminin (PML). In our hands a PM-concentration of 0.25% was optimal for the cultivation of the cells13, however the concentration might be adapted to other cell types.12 The released cells can be used for e.g. immunocytochemical studies and subsequently analysed by flow cytometry. This speeds up the analysis and more over, the obtained data rest upon a wider base, improving the reliability of the data.

Here we describe the use of a self-assembling 3-dimensional scaffold to culture human neural progenitor cells. We present a protocol to release the cells from the scaffolds to be analysed subsequently e.g. by flow cytometry. This protocol might be adapted to other cell types to perform detailed mechanistically studies.

3 boyutlu montaj Self-Peptid Hidrojel İnsan Sinir Progenitör Hücreler Yetiştiriciliği

The  influence of 3-dimensional (3D) scaffolds on growth, proliferation and finally  neuronal differentiation is of great interest in order to find new ...

Biyomühendislik

Wideband Optical Detector of Ultrasound for Medical Imaging Applications

Optical sensors of ultrasound are a promising alternative to piezoelectric techniques, as has been recently demonstrated in the field of optoacoustic imaging. In medical applications, one of the major limitations of optical sensing technology is its susceptibility to environmental conditions, e.g. changes in pressure and temperature, which may saturate the detection. Additionally, the clinical environment often imposes stringent limits on the size and robustness of the sensor. In this work, the combination of pulse interferometry and fiber-based optical sensing is demonstrated for ultrasound detection. Pulse interferometry enables robust performance of the readout system in the presence of rapid variations in the environmental conditions, whereas the use of all-fiber technology leads to a mechanically flexible sensing element compatible with highly demanding medical applications such as intravascular imaging. In order to achieve a short sensor length, a pi-phase-shifted fiber Bragg grating is used, which acts as a resonator trapping light over an effective length of 350 &#181;m. To enable high bandwidth, the sensor is used for sideway detection of ultrasound, which is highly beneficial in circumferential imaging geometries such as intravascular imaging. An optoacoustic imaging setup is used to determine the response of the sensor for acoustic point sources at different positions.

Optical detection of ultrasound is impractical in many imaging scenarios because it often requires stable environmental conditions. We demonstrate an optical technique for ultrasound sensing in volatile environments with miniaturization and sensitivity levels appropriate for optoacoustic imaging in restrictive scenarios, e.g. intravascular applications.

Geniş bant Tıbbi Görüntüleme Uygulamaları Ultrason Optik Dedektörü

Optical sensors of ultrasound are a promising alternative to piezoelectric techniques, as has been recently demonstrated in the field of optoacoustic ...

Synthesis of Keratin-based Nanofiber for Biomedical Engineering

Electrospinning, due to its versatility and potential for applications in various fields, is being frequently used to fabricate nanofibers. Production of these porous nanofibers is of great interest due to their unique physiochemical properties. Here we elaborate on the fabrication of keratin containing poly (&#949;-caprolactone) (PCL) nanofibers (i.e., PCL/keratin composite fiber). Water soluble keratin was first extracted from human hair and mixed with PCL in different ratios. The blended solution of PCL/keratin was transformed into nanofibrous membranes using a laboratory designed electrospinning set up. Fiber morphology and mechanical properties of the obtained nanofiber were observed and measured using scanning electron microscopy and tensile tester. Furthermore, degradability and chemical properties of the nanofiber were studied by FTIR. SEM images showed uniform surface morphology for PCL/keratin fibers of different compositions. These PCL/keratin fibers also showed excellent mechanical properties such as Young&#39;s modulus and failure point. Fibroblast cells were able to attach and proliferate thus proving good cell viability. Based on the characteristics discussed above, we can strongly argue that the blended nanofibers of natural and synthetic polymers can represent an excellent development of composite materials that can be used for different biomedical applications.

Electrospun nanofibers have a high surface area to weight ratio, excellent mechanical integrity, and support cell growth and proliferation. These nanofibers have a wide range of biomedical applications. Here we fabricate keratin/ PCL nanofibers, using the electrospinning technique, and characterize the fibers for possible applications in tissue engineering.

Biyomedikal Mühendisliği için keratin bazlı nanofiber sentezi

Electrospinning, due to its versatility and potential for applications in various fields, is being frequently used to fabricate nanofibers. Production of ...

Microwave-driven Synthesis of Iron Oxide Nanoparticles for Fast Detection of Atherosclerosis

A fast and reproducible microwave-driven protocol has been developed for the synthesis of neridronate-functionalized nanoparticles. Starting from the synthesis of hydrophobic nanoparticles, our method is based on an adaptation from thermal decomposition method to microwave driven synthesis. The new methodology produces a decrease in the reaction times in comparison with traditional procedures. Moreover, the use of the microwave technology increases the reproducibility of the reactions, something important from the point of view of clinical applications. The novelty of this iron oxide nanoparticle is the attachment of Neridronate. The use of this molecule leads a bisphosphonate moiety towards the outside of the nanoparticle that provides Ca2+ binding properties in vitro and selective accumulation in vivo in the atheroma plaque. The protocol allows the synthesis and plaque detection in about 3 hr since the initial synthesis from organic precursors. Their accumulation in the atherosclerotic area in less than 1 hr provides a contrast agent particularly suitable for clinical applications.

Microwave technology enables extremely fast synthesis of iron oxide nanoparticles for atherosclerosis plaque characterization. The use of an aminobisphosphonate in the external side of the nanoparticle provides a fast accumulation in the atherosclerotic area.

Ateroskleroz Hızlı Algılama Demir Oksit Nanopartiküller Mikrodalga odaklı sentezi

A fast and reproducible microwave-driven protocol has been developed for the synthesis of neridronate-functionalized nanoparticles. Starting from the ...

Preparation and Characterization of Lipophilic Doxorubicin Pro-drug Micelles

Micelles have been successfully used for the delivery of anticancer drugs. Amphiphilic polymers form core-shell structured micelles in an aqueous environment through self-assembly. The hydrophobic core of micelles functions as a drug reservoir and encapsulates hydrophobic drugs. The hydrophilic shell prevents the aggregation of micelles and also prolongs their systemic circulation in vivo. In this protocol, we describe a method to synthesize a doxorubicin lipophilic pro-drug, doxorubicin-palmitic acid (DOX-PA), which will enhance drug loading into micelles. A pH-sensitive hydrazone linker was used to conjugate doxorubicin with the lipid, which facilitates the release of free doxorubicin inside cancer cells. Synthesized DOX-PA was purified with a silica gel column using dichloromethane/methanol as the eluent. Purified DOX-PA was analyzed with thin layer chromatography (TLC) and 1H-Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (1H-NMR). A film dispersion method was used to prepare DOX-PA loaded DSPE-PEG micelles. In addition, several methods for characterizing micelle formulations are described, including determination of DOX-PA concentration and encapsulation efficiency, measurement of particle size and distribution, and assessment of in vitro anticancer activities. This protocol provides useful information regarding the preparation and characterization of drug-loaded micelles and thus will facilitate the research and development of novel micelle-based cancer nanomedicines.

A protocol for the preparation and characterization of lipophilic doxorubicin pro-drug loaded 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000] (DSPE-PEG) micelles is described.

Lipofilik Doksorubisin Pro-ilaç misellerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu

Micelles have been successfully used for the delivery of anticancer drugs. Amphiphilic polymers form core-shell structured micelles in an aqueous ...

Synthesis of Cationized Magnetoferritin for Ultra-fast Magnetization of Cells

Many important biomedical applications, such as cell imaging and remote manipulation, can be achieved by labeling cells with superparamagnetic iron oxide nanoparticles (SPIONs). Achieving sufficient cellular uptake of SPIONs is a challenge that has traditionally been met by exposing cells to elevated concentrations of SPIONs or by prolonging exposure times (up to 72 hr). However, these strategies are likely to mediate toxicity. Here, we present the synthesis of the protein-based SPION magnetoferritin as well as a facile surface functionalization protocol that enables rapid cell magnetization using low exposure concentrations. The SPION core of magnetoferritin consists of cobalt-doped iron oxide with an average particle diameter of 8.2 nm mineralized inside the cavity of horse spleen apo-ferritin. Chemical cationization of magnetoferritin produced a novel, highly membrane-active SPION that magnetized human mesenchymal stem cells (hMSCs) using incubation times as short as one minute and iron concentrations as lows as 0.2 mM.

A protocol for the synthesis and cationization of cobalt-doped magnetoferritin is presented, as well as a method to rapidly magnetize stem cells with cationized magnetoferritin.

Hücrelerin ultra hızlı Mıknatıslanma için katyonize Magnetoferritin sentezi

Many important biomedical applications, such as cell imaging and remote manipulation, can be achieved by labeling cells with superparamagnetic iron oxide ...

Synthesis of Hydrogels with Antifouling Properties As Membranes for Water Purification

Hydrogels have been widely utilized to enhance the surface hydrophilicity of membranes for water purification, increasing the antifouling properties and thus achieving stable water permeability through membranes over time. Here, we report a facile method to prepare hydrogels based on zwitterions for membrane applications. Freestanding films can be prepared from sulfobetaine methacrylate (SBMA) with a crosslinker of poly(ethylene glycol) diacrylate (PEGDA) via photopolymerization. The hydrogels can also be prepared by impregnation into hydrophobic porous supports to enhance the mechanical strength. These films can be characterized by attenuated total reflection Fourier transform infrared spectroscopy (ATR-FTIR) to determine the degree of conversion of the (meth)acrylate groups, using goniometers for hydrophilicity and differential scanning calorimetry (DSC) for polymer chain dynamics. We also report protocols to determine the water permeability in dead-end filtration systems and the effect of foulants (bovine serum albumin, BSA) on membrane performance.

This paper reports practical methods to prepare hydrogels in freestanding films and impregnated membranes and to characterize their physical properties, including water transport properties.

Su Arıtma Membranlar olarak Zehirli Özelliklere Sahip Hidrojeller Sentezi

Hydrogels have been widely utilized to enhance the surface hydrophilicity of membranes for water purification, increasing the antifouling properties and ...

Design and Synthesis of a Reconfigurable DNA Accordion Rack

DNA nanostructure-based mechanical systems or DNA nanomachines, which produce complex nanoscale motion in 2D and 3D in the nanometer to &#229;ngstr&#246;m resolution, show great potential in various fields of nanotechnology such as the molecular reactors, drug delivery, and nanoplasmonic systems. The reconfigurable DNA accordion rack, which can collectively manipulate a 2D or 3D nanoscale network of elements, in multiple stages in response to the DNA inputs, is described. The platform has potential to increase the number of elements that DNA nanomachines can control from a few elements to a network scale with multiple stages of reconfiguration.
In this protocol, we describe the entire experimental process of the reconfigurable DNA accordion rack of 6 by 6 meshes. The protocol includes a design rule and simulation procedure of the structures and a wet-lab experiment for synthesis and reconfiguration. In addition, analysis of the structure using TEM (transmission electron microscopy) and FRET (fluorescence resonance energy transfer) is included in the protocol. The novel design and simulation methods covered in this protocol will assist researchers to use the DNA accordion rack for further applications.

We describe the detailed protocol for design, simulation, wet-lab experiments, and analysis for a reconfigurable DNA accordion rack of 6 by 6 meshes.

Tasarım ve Reconfigurable DNA akordeon raf sentezi

DNA nanostructure-based mechanical systems or DNA nanomachines, which produce complex nanoscale motion in 2D and 3D in the nanometer to &#229;ngstr&#246;m ...

In Vesiculo Synthesis of Peptide Membrane Precursors for Autonomous Vesicle Growth

Compartmentalization of biochemical reactions is a central aspect of synthetic cells. For this purpose, peptide-based reaction compartments serve as an attractive alternative to liposomes or fatty acid-based vesicles. Externally or within the vesicles, peptides can be easily expressed and simplify the synthesis of membrane precursors. Provided here is a protocol for the creation of vesicles with diameters of ~200 nm based on the amphiphilic elastin-like polypeptides (ELP) utilizing dehydration-rehydration from glass beads. Also presented are protocols for bacterial ELP expression and purification via inverse temperature cycling, as well as their covalent functionalization with fluorescent dyes. Furthermore, this report describes a protocol to enable the transcription of RNA aptamer dBroccoli inside ELP vesicles as a less complex example for a biochemical reaction. Finally, a protocol is provided, which allows in vesiculo expression of fluorescent proteins and the membrane peptide, whereas synthesis of the latter results in vesicle growth.

Presented here are protocols for the creation of peptide-based small unilamellar vesicles capable of growth. To facilitate in vesiculo production of the membrane peptide, these vesicles are equipped with a transcription-translation system and the peptide-encoding plasmid.

Vesiculo 'da otonom vezikül büyümesi için peptid membran öncülerinin sentezini

Compartmentalization of biochemical reactions is a central aspect of synthetic cells. For this purpose, peptide-based reaction compartments serve as an ...

Synthesis of Near-Infrared Emitting Gold Nanoclusters for Biological Applications

Over the past decade, fluorescent gold nanoclusters (AuNCs) have witnessed growing popularity in biological applications and enormous efforts have been devoted to their development. In this protocol, a recently developed, facile method for preparation of water soluble, biocompatible, and colloidally stable near-infrared emitting AuNCs have been described in detail. This room-temperature, bottom-up chemical synthesis provides easily functionalizable AuNCs capped with thioctic acid and thiol-modified polyethylene glycol in aqueous solution. The synthetic approach requires neither organic solvents or additional ligand exchange nor extensive knowledge of synthetic chemistry to reproduce. The resulting AuNCs offer free surface carboxylic acids, which can be functionalized with various biological molecules bearing a free amine group without adversely affecting the photoluminescent properties of the AuNCs. A quick, reliable procedure for flow cytometric quantification and confocal microscopic imaging of AuNC uptake by HeLa cells also been described. Due to the large Stokes shift, proper setting of filters in flow cytometry and confocal microscopy is necessary for efficient detection of near-infrared photoluminescence of AuNCs.

A reliable and easily reproducible method for preparation of functionalizable, near-infrared emitting photoluminescent gold nanoclusters and their direct detection inside HeLa cells by flow cytometry and confocal laser scanning microscopy is described.

Biyolojik Uygulamalar için Yakın Kızılötesi Yayan Altın Nanokümelerin Sentezi

Over the past decade, fluorescent gold nanoclusters (AuNCs) have witnessed growing popularity in biological applications and enormous efforts have been ...